抗人Ig轻链系列单克隆抗体的研制1．抗人λ轻链亚型／亚群单克隆抗体的制备及特性鉴定

采用ＤＥＡＥ５２提取的多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者尿本周蛋白为免疫原，应用鼠－鼠杂交瘤技术，建立４株能分泌抗人λ轻链单克隆抗体细胞株，经鉴定，为抗人游离λ轻链亚型／亚群抗原决定簇单克隆抗体细胞株。     

抗人肝癌细胞单克隆抗体的研制及鉴定

利用杂交瘤技术,以人肝癌细胞株HC_(108)免疫Balb/c小鼠,4周后取其脾与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经细胞抗原ELISA和间接酶桥法筛选,获得一株能稳定分泌抗人肝癌单克隆抗体的杂交瘤株,其染色体众数为96～110个,DNA指数为3.0。此单抗为IgM型,轻链为k链。免疫组化证实此单抗与2例胚胎肝脏组织、胚胎结肠组织呈现较弱的阳性反应;除与3例宫颈癌细胞有很弱的着色反应外,与5例肝癌组织和肝癌细胞株均呈明确的阳性反应,而与其他肿瘤细胞,胚胎组织,正常成人肝脏、心脏、肾脏、肺脏、结肠、胰腺等均未见反应。琼脂糖免疫双扩散和单抗吸收试验证实此肿瘤抗原与甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、铁蛋白(Ferritin)、癌糖蛋白(CA_(19-9))无免疫相关性。免疫酶电镜染色显示此肝癌相关抗原定位于细胞膜,Western Blot显示其分子量为38kD。是一株特异性良好,阳性反应率较高的抗人肝癌单克隆抗体。     

抗CD_3单克隆抗体HIT3aⅠ.制备和特异性鉴定

利用鼠—鼠杂交技术获得1个单克隆抗体(McAb)HIT3a。经免疫学、细胞化学和生物化学分析,证实HIT3a是抗入成熟T细胞表面CD_3抗原McAb,具有亲和力高、活性稳定、能激活T细胞、在补体存在下溶解T细胞等特性,是1个理想的可用于免疫学研究和临床治疗的CD_3类McAb。     

抗人胰腺癌单克隆抗体的制备和应用

本文报告应用杂交瘤技术，制备出鼠抗人胰腺癌单克隆抗体（ｍＡｂ）ＹＰＣ３。ＡＢＣ免疫组织化学检查结果表明，ＹＰＣ３ｍＡｂ与３２例被检胰腺癌组织中的２８例（２８／３２），８７．５％有反应，而与１１例正常胰腺组织全部无反应。ＹＰＣ３ｍＡｂ尚与１９种其它肿瘤中的５种（５／１９，２６．３％）和１７种非肿瘤组织中的５种（５／１７，２９．４％）有反应，但多数反应较弱。ＹＰＣ３ｍＡｂ结合抑制性ＥＬＩＳＡ法测定１３７例血清相应抗原含量结果表明，３１例胰腺癌中的１７例（１７／３１，５４．８％）结合抑制率大于６５％，其它各组分别为：良性消化系疾病（２／３５，５．７％）、非胰消化系癌肿（８／４０，２０．０％）、正常人（１／３１，３．２％）。对胰腺癌诊断的敏感性、特异性和准确性分别为５４．８％、８９．６％和８１．８％。结果提示ＹＰＣ３ｍＡｂ对胰腺癌的血清学诊断有一定价值，并可能适用于胰腺癌的导向定位和治疗。     

抗人粒细胞单克隆抗体的制备及其鉴定

目的制备抗人粒细胞单克隆抗体(McAb),并对其组织特异性及相关特性进行鉴定.方法采用分离的人全白细胞免疫Balb/c小鼠,按常规融合方法并经ELISA筛选后进行McAb特性研究.结果成功制备1株抗人粒细胞McAb,命名为SZ-102.ELISA法测定其腹水效价为5×10-5.琼脂糖双扩散鉴定均为IgG1类.流式细胞仪及SP免疫组化法测定表明SZ-102McAb与外周血液中的粒细胞、单核细胞呈强阳性反应,与淋巴细胞、红细胞、血小板不反应;SZ-102抗原在正常人肝、肺、胸腺、脾、淋巴结组织中也表达.免疫沉淀测定抗原分子量为20kD左右的蛋白多肽.结论抗人粒细胞McAb的研制将有助于临床肿瘤感染病灶和隐匿性炎症的放免显像诊断研究.     

分泌抗人早期T细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以胎儿胸腺细胞免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术产生了两种单克隆抗体，分别命名为ＳＭＵ１３、ＳＭＵ１４。初步鉴定的结果表明，（１）ＳＭＵ１３、ＳＭＵ１４是抗早期Ｔ淋巴细胞的单克隆抗体，但与浆细胞也发生反应；（２）两株单抗的特性、反应谱与ＣＤ３８抗原相似；（３）ＳＭＵ１３、ＳＭＵ１４在白血病免疫学分型中可以明确判断白血病细胞的来源，具有结合补体的能力，在急性Ｔ淋巴细胞白血病的治疗中可发挥重要作用     

抗人PDCD10单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人程序性细胞死亡分子10(programmed cell death 10, PDCD10)的单克隆抗体,探讨PDCD10蛋白的结构和功能.方法:利用重组PDCD10蛋白为免疫原,免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合, 通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗PDCD10蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过ELISA,Western blot和免疫荧光实验等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了3株稳定分泌抗PDCD10蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为5G1, 4F7和3H5.3株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类分别为IgG1(4F7和5G1)和IgG2b(3H5).ELISA检测的单克隆抗体腹水效价可达1:10⁷.3株单克隆抗体与重组PDCD10蛋白有较强的特异性反应,而与大肠杆菌细胞裂解液以及谷胱苷肽-S转移酶(glutathione S-transferase,GST)没有交叉反应.同时,5G1单克隆抗体也能特异性地结合真核细胞内源性和超表达的PDCD10蛋白,免疫荧光竞争结合实验以及Western blot的结果证明3株PDCD10的单克隆抗体能够识别不同的抗原表位,内源性以及超表达的PDCD10蛋白主要定位在细胞核.结论:获得了效价高、特异性好的PDCD10蛋白的单克隆抗体,为PDCD10的生物学功能研究奠定了基础.     

一组抗人T淋巴细胞表面抗原单克隆抗体的制备及鉴定

用鼠细胞融合杂交瘤技术,获得3株分泌抗人T淋巴细胞表面抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别为SMU_1、SMU_2、SMU_3,为IgG_1类,不与补体结合。间接免疫荧光法表明,SMU_1、SMU_3分别与50.3±6.42%和51.5±6.37%的周血单个核细胞反应,SMU_2与68.89±9.92%的周血半个核细胞及74.68±8.08%的成熟粒细胞反应,3株单抗的分子量为54～62kD(未还原)。调变试验及竞争抑制试验表明SMU_1、SMU_3与WuT_3识别相同的抗原分子,但为不同的表位。SMU_2为一非系限性单抗。本组单抗对研究T淋巴细胞分化及临床白血病免疫分型是有意义的。     

抗—BudR单克隆抗体制备及特性鉴定

用碘化还原法将溴脱氧尿嘧啶(BudR)与牛r—球蛋白(BGG)偶联作为抗原(BudR—BGG)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(653)进行融合,经放射免疫分析法(RIA)筛选和克隆化后,获得四株阳性杂交瘤Ⅱ_1B_7、Ⅱ_4B_4、Ⅰ_3F_(11)和Ⅱ_1H_7。杂交瘤细胞分别腹腔注射BALB/c小鼠,其中三株(Ⅱ_1B_7、Ⅱ_4B_4和Ⅱ_1H_7)获得腹水,纯化抗体并对其特性进行鉴定,三株单抗均可与BudR、IudR反应,而不与CdR、TdR及FudR反应,具有较高的特异性。     

抗人TPO单克隆抗体的制备

目的：制备抗人血小板生成素（hTPO）单克隆抗体，用于建立ELISA方法和检测TPO的表达。方法：用基因重组的hTPO免疫Balb／c小鼠，常规法做细胞融合，用ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株。结果：获得一杂交瘤细胞株（46-6），其免疫球蛋白亚类为IgG1经ELISA和免疫印迹技术证明，此单抗能特异识别TPO。结论：46－6单克隆抗体（McAb）特异性强。用其建立的夹心ELISA检测TPO的方法线性好，灵敏度可达50ng／L。     

三株抗人B淋巴细胞表面抗原单克隆抗体的研制及初步鉴定

用慢性Ｂ淋巴细胞白血病患者外周血白血病细胞免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术产生了三种单克隆抗体，分别命名为ＳＭＵ＿（１０）、ＳＭＵ＿（１１）ＳＭＵ＿（１２）。初步鉴定的结果表明，（１）ＳＭＵ＿（１０）、ＳＭＵ＿（１１）是抗成熟阶段Ｂ细胞及浆细胞的单抗，二者的特性及反应谱相类似；（２）ＳＭＵ＿（１２）是一非系限性单抗，与成熟Ｔ细胞、分化后期的Ｂ细胞及部分粒单细胞反应；（３）ＳＭＵ＿（１０）、ＳＭＵ＿（１１）、ＳＭＵ＿（１２）可较好地判明白血病细胞的来源及Ｂ细胞的分化阶段，在白血病的免疫学分型中具有实用价值；（４）三株单抗是新的抗Ｂ细胞特异性单抗。     

抗人A型红细胞ZMC_9单克隆抗体的纯化及理化性质

本文应用葡聚糖凝胶G-200柱层析和聚丙烯酰胺凝胶板状电泳,将细胞培养上清液及小鼠腹水中的单克隆抗体分离提纯,并对它的理化性质进行了研究.结果表明:①ZMC_9单克隆抗体(小鼠IgM)分子量为871000道尔顿.②纯化单克隆抗体在56℃加热5 min,即失去抗体活性,而未经纯化的单克隆抗体即使加热30min,抗体活性也毫无损失.③纯化单克隆抗体在pH 6～8环境中活性不变,pH超过8.0时活性有所下降,而未经纯化的单克隆抗体在pH 6～10范围内仍表现有活性.④将试剂冻干或加叠氮钠4℃保存,效价至少可维持一年以上.     

抗胃癌细胞单克隆抗体的制备

作者用新鲜胃癌组织匀浆免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备抗胃癌细胞单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。一次融合率为９２．８％，获得分泌特异性ＭｃＡｂ杂交瘤细胞１５株，阳性率１３．２％，三次克隆纯化后阳性率１００％，在体外培养１５０余天，分泌能力稳定。选择ＱＹ－１，ＱＹ－２，ＱＹ－３，ＱＹ－４４株ＭｃＡｂ进行鉴定。４株ＭｃＡｂ对正常纤维组织、红细胞等呈阴性反应，而对胚胎的消化道上皮均呈强阳性反应，ＱＹ－１～４ＭｃＡｂ的胃癌反应阳性率为９４．６～１００％，肝癌３３．３～６０．０％，大肠癌为５．０～３５．０％，萎缩性胃炎不伴肠化型为０％，伴肠化型为０～１５．０％。本文结果表明ＱＹ－１～４ＭｃＡｂ相应抗原为非ＣＥＡ、ＡＦＰ成份的消化道肿瘤抗原，ＱＹ－１～４ＭｃＡｂ具有较高的肿瘤特异性。     

分泌抗巨细胞病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立

用CMV-AD_(169)病毒株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP_(2/0)细胞融合,获得5株分泌抗CMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清液效价(ELISA)为1∶32～1∶128,腹水效价为10~4～10~5,经证实McAb为IgG2a或IgM,均具有HCMV种特异性,可作为特异、敏感的免疫试剂,用于巨细胞病毒感染的早期快速诊断。     

分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株(6B_4、7C_4)的建立

将经正常人的精子细胞免疫的 BALB/c 鼠脾脏取出,使此细胞与 NS1小鼠骨髓瘤细胞融合。用间接免疫荧光法等方法检测抗体,得到12个孔抗人精子阳性的杂交瘤。经过2～3次有限稀释法克隆化后建立了分泌抗人精子单克隆抗体的杂交瘤细胞株6B_4及7C_4。其染色体数目为86～88对,它对人精子有制动、凝集作用并有种间交叉反应,对人 LDH 活力有明显的消耗作用。证明该抗体有特异性。这些生物学特性对男性避孕有一定的实用价值。     

分泌抗破伤风类毒素人单克隆抗体的人鼠杂交瘤细胞系的建立

作者采用小鼠骨髓瘤细胞系与破伤风类毒素免疫的人外周血淋巴细胞进行融合,对影响人-鼠杂交瘤细胞制备人单抗成功的因素进行了探讨。按免疫时间(天)及体外刺激与否分为四组、其中以 PWM+TT 体外刺激 PBL(比体外不刺激)的细胞融合率高,且易建成稳定分泌抗体的细胞系。经5次克隆化后获得5株抗 TT 的人单抗杂交瘤细胞系。经双扩确定 IgG2株,IgM3株。冻存10个月后复苏,传代及适当的克隆化后仍为阳性。上清液中人 IgM 的分泌量为0.42～1.15μg/ml。经染色体鉴定确为人-鼠杂种细胞。     

抗人Hb单克隆抗体的制备与鉴定

用超声波快速乳化人Ｈｂ，作为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞经离心ＰＥＧ法融合，微波ＥＬＩＳＡ筛选阳性克隆，获得三株分泌针对人Ｈｂ不同抗原位点的单克隆抗体杂交瘤细胞系。分别命名为Ｈｂ２６４、Ｈｂ２１０和Ｈｂ２３８。其中Ｈｂ２６４能特异识别人Ｈｂ的β链而不与动物Ｈｂ交叉反应；解离常数Ｋｂ为１．６×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ，ＩｇＧ＿（２ａ）。Ｈｂ２１０能结合人Ｈｂ的α链，可被猪Ｈｂ抑制，但亲合力低１００倍；Ｋｄ（人Ｈｂ）为２．８×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ；Ｋｄ（猪Ｈｂ）为３．０×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ；ＩｇＧ＿（２ｂ）。Ｈｂ２３８是两个脾细胞与一个Ｓｐ２／０细胞融合而成的三体瘤（ｔｒｉｏｍａ）；染色体１３２条；Ｈｂ２３８单克隆抗体可同人Ｈｂ的α和β链结合，Ｋｄ（人Ｈｂ）为８．９×１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ；ＩｇＧ＿（２ａ）；经分析鉴定，Ｈｂ２３８是针对人Ｈｂα和β链的双特异性抗体。本方法对免疫学隐血检测、法医学鉴定和双特异抗体的研制有一定意义。     

霍乱弧菌单克隆抗体杂交瘤细胞株建立

本法获得了841C71、841C72两个分泌抗霍乱弧菌菌体抗原单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞株。其培养上清抗体滴度为1∶8～1∶64,小鼠腹水抗体滴度为1∶1280～1∶5120。与霍乱弧菌小川型的反应滴度在1∶80～1∶160之间,但不与水弧菌及大肠杆菌等肠道杆菌发生交叉反应。此二株细胞产生的MAb为IgG类。