结直肠癌早期肝转移的预测

目的研究CK20 mRNA、CD44v6、血管内皮生长因子（VEGF）与结直肠癌肝转移的关系,探讨临床预测结直肠癌早期肝转移的有效的客观指标。方法应用荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测50例结直肠癌患者回流门静脉血中CK20 mRNA,并同时应用免疫组织化学方法测定结直肠癌癌组织中CD44v6、VEGF的表达;并与良性病变对照组10例和正常组织对照组10例比较。结果结直肠癌患者门静脉血CK20 mRNA;癌组织中CD44v6、VEGF表达阳性率明显高于良性病变对照组（P〈0．01）和正常对照组（P〈0．01）;结直肠癌组织中CIM4v6及VEGF的表达与门静脉血中CK20 mRNA的表达有显著相关性（r．=0．933,r2=0．906,P〈0．05）;同时肝转移组CK20 mRNA、CD44v6、VEGF阳性表达率均高于非肝转移组（P〈0．05）。结论联合检测CD44v6、VEGF及CK20 mRNA预测结直肠癌肝转移,可提高预测的灵敏度及特异性,对于结直肠癌早期肝转移监测具有较高的临床价值。     

CK19/20检测对结直肠癌微转移的诊断意义

目的 探讨 CK19/20mRNART-PCR检测对结直肠癌微转移的诊断意义。方法 采用RT-PCR逆转录多聚酶链反应）方法检测42例结、直肠癌患者及对照组6例非恶性病变腹部手术患者骨髓血、门静脉血和外周血CK19mHNA及 CK20 mRNA的表达。结果 对照组6例患者无 CK19及 CK20阳性表达,CK19及CK20在42例结、直肠癌患者骨髓血、门静脉血及外周血中阳性表达分别为24/42、21/42、11/42及27/42、18/42、11/42,两间无显著差异（P>0.05）,骨髓和门静脉中表达比外周血高（P<0.01）,Dukes　C 期患者表达高于Dukes A、B期（P<0.05）。结论 CK19、CK20的RT-PCR检测是较敏感和特异的结、直肠癌微小转移指标,阳性表达患者有较高发生远处转移的危险。     

早中期结直肠癌患者外周血鸟苷酸环化酶mRNA和细胞角蛋白20mRNA检测及预后分析

目的探讨外周血鸟苷酸环化酶（GC．C）mRNA和细胞角蛋白20（CK20）mRNA水平与早中期结直肠癌患者肿瘤转移及预后的关系。方法应用荧光定量聚合酶链反应技术,检测74例早中期结直肠癌患者术前外周血GC．CmRNA以及CK20mRNA的表达．并结合临床和病理各项指标以及术后随访资料,对患者肿瘤转移危险因素和预后进行统计学分析和评价。结果74例结直肠癌患者外周血GC．CmRNA阳性率为33．8％（25／74）,CK20mRNA阳性率为31．1％（23／74）;1、2、3年无瘤生存率分别为94．6％、82．4％和78．4％。单因素预后分析发现,外周血GC．cmRNA、CK20mRNA、肿瘤分化类型、有无肠系膜根部淋巴结转移、有无脉管瘤栓和术后是否接受化疗6因素与本组患者3年无瘤生存有关（均P〈0．05）;有无肠系膜根部淋巴结转移和有无脉管瘤栓是预后的独立影响因素（P〈0．05）。按肿瘤分期分层分析,外周血CK20mRNA和有无脉管瘤栓是Ⅲ期结直肠癌患者3年无瘤生存率的独立影响因素（P〈O．05）。结论检测外周血CK20mRNA、GC—CmRNA对于早期发现早中期结直肠癌转移可能具有重要的临床意义。     

CK20检测散发性结直肠癌淋巴结微转移的临床意义

目的探讨通过细胞角蛋白（CK）20检测散发性结直肠癌淋巴结微转移的临床意义。方法应用RT—PCR方法检测60例结直肠癌根治术所清扫的782枚淋巴结组织中CK20mRNA的表达．从而对淋巴结微转移进行评估．并与常规病理的淋巴结转移情况进行比较。结果常规病理学检出34例（56．7％）患者有淋巴结转移,检出阳性淋巴结数为356枚（45．5％）;CK20法检出45例（75．0％）患者有淋巴结转移．阳性淋巴结总数为436枚（55．8％）;两组比较,差异具有统计学意义（χ^2=16．72,P〈0．05）。结论CK20法能提高散发性结直肠癌转移淋巴结的检出率．有助于术后临床精准分期。     

载脂蛋白M在结直肠癌组织中的表达及其临床病理相关性

目的探讨载脂蛋白M（apoM）在结直肠癌组织中表达水平的变化及其临床相关性。方法采用荧光定量PCR检测20例结直肠癌组织及其癌旁组织中apoM的mRNA表达：采用免疫组织化学方法检测7例正常肠黏膜、6例肠炎组织、10例肠息肉、20例结直肠癌及其癌旁组织中apoM的蛋白表达水平。结果apoMmRNA在结直肠癌组织和癌旁组织中均有表达．前者相对表达量显著低于后者（0．05±0．01比0．19±0．05,P〈0．05）。无淋巴结转移者apoMmRNA表达水平显著低于有淋巴结转移者（P〈0．01）。结直肠癌组织中apoM蛋白表达中位分值为5．50．显著低于癌旁组织（10．5,P〈0．05）、肠炎组织（9．75,P〈0．05）、肠息肉组织（11．0,P〈0．01）及正常黏膜组织（10．5,P〈0．05）。未见结肠癌组织中apoM蛋白水平与患者临床病理特征有关（P〉0．05）。结论载脂蛋白apoM在肠癌组织中的mRNA及蛋白水平较正常组织及良性病变组织显著降低。结直肠癌组织中apoMmRNA表达水平与淋巴结转移有关。     

腹腔镜结直肠癌根治术对肿瘤细胞微转移影响的研究

目的 探讨腹腔镜结直肠癌根治术对术后肿瘤微转移的影响。方法 以细胞角蛋白20（cytokeratin，CK-20）mRNA为靶基因，运用逆转录一聚合酶链反应方法（RT-PCR），检测48例结直肠癌患者手术前后外周血肿瘤细胞数鞋的变化。结果 腹腔镜手术组术后外周血肿瘤细胞增加数量高于传统开腹手术组（P〈0．05）。腹腔镜手术组术后外周血肿瘤细胞数量增加的程度与患者年龄无关（P〉0．05）而与增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）阳性率有明显的关系（P〈0．05）。结论 腹腔镜结直肠癌根治术有增加术后肿瘤血行转移的危险性；PCNA≥50％的患者如果行腹腔镜结直肠癌根治术，术后发生血行转移的危险性更大。     

p53及VEGF表达与结、直肠癌血道转移发生的关系

目的 研究p53及血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)表达与结、直肠癌血道转移发生的关系。方法 应用免疫组织化学ABC法检测79例结、直肠癌组织中p53及VEGF的表达。结果 p53和VEGF表达与结、直肠癌静脉侵犯、血道转移密切相关（P＜0．05），p53及VEGF阳性表达组血道转移发生率为66．7％，明显高于p53及VEGF阴性表达组和p53阳性表达、VEGF阴性表达组（P＜0．01）；p53及VEGF阴性表达病例中，无同时性或异时性血道转移发生。结论 结合分析p53肽VEGF表达状态，对预测结、直肠癌血道转移的发生有重要参考价值。     

抑癌基因KLF-6和APC在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 研究抑癌基因KLF-6和APC在结直肠癌中的表达规律及其临床意义。方法 应用RT-PCR和免疫组织化学法对32例结直肠癌组织和正常黏膜组织中KLF-6和APC基因mRNA及蛋白的表达进行检测和分析。结果 KLF-6与APC的mRNA阳性表达率在结直肠癌组织中分别为37、5％和34，3％，明显低于正常结直肠黏膜组织的96．9％和93．8％（P〈0．05）。KLF-6与APC的免疫组化染色阳性表达率在结直肠癌组织中分别为28．1％和25．0％，明显低于正常结直肠黏膜组织的81．3％和84．4％（P〈0．05）。KLF-6与APC在结直肠癌中的表达存在相关性（P〈0．05），并与肿瘤组织的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均有明显相关性（P〈0．05）。结论 抑癌基因KLF-6和APC的低表达可能与结直肠癌的发生、发展、转移及预后有关，且两者存在相关性。     

SNCG在结直肠癌肝转移中的表达及其临床意义

目的探讨SNCG在结直肠癌肝转移患者中的表达情况及其临床意义。方法收集1999年1月至2003年12月间中国医学科学院肿瘤医院收治的具有完整临床病理及随访资料的217例结直肠癌手术标本。其中113例伴肝转移,104例无肝转移。采用免疫组织化学染色检测SNCG在结直肠癌组织中的表达。分析SNCG表达与结直肠癌肝转移临床病理特征及预后的关系。结果肝转移组和无肝转移组患者结直肠癌组织中SNCG阳性表达率分别为68．1％（77／113）和27．9％（29／104）,差异有统计学意义（P〈0．05）。Logistic多因素分析显示,SNCG表达是判断结直肠癌是否伴有肝转移的独立因素（OR=8．29,95％CI：3．37～20．37,P〈0．01）。SNCG阳性表达与阴性表达的同时性肝转移患者术后中位生存时间分别为8．2个月和12．6个月．差异有统计学意义（P〈0．05）;Cox多因素分析显示,SNCG表达是结直肠癌同时性肝转移患者的独立预后因素（RR：1．97．95％CI：1．10—3．53,P〈0．05）。结论SNCG在肝转移患者的结直肠癌组织中高表达．SNCG表达不仅可以作为结直肠癌肝转移预示因子,也是同时性肝转移的重要预后因素。     

结直肠癌中抑癌基因ING1的表达研究

目的 探讨抑癌基因ING1及其蛋白p33／ING1在结直肠癌中的表达。方法 用RT-PCR检测35例散发性结直肠癌中ING1 mRNA的表达水平，并应用S-P法检测60例散发性结直肠癌及正常黏膜组织中p33／ING1蛋白的表达。结果 结直肠癌组织、正常黏膜组织中p33／ING1蛋白阳性表达率分别为43．3％（26／60）、100％（60／60），两者比较差异有统计学意义（P＜0．01）。p33／ING1在无淋巴结转移组及淋巴结转移组中的阳性表达率分别为57．6％（19／33）、25．9％（7／27），两者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。在Dukes A、B期和Dukes C、D期患者癌组织中p33／ING1的阳性表达率分别为56．7％（17／30）、30．0％（9／30），两者比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 ING1及p33／ING1蛋白的低表达与散发性结直肠癌发生、发展密切相关，临床分期越差者表达水平越低。     

大肠癌术中门静脉血CK20 mRNA检测临床意义的探讨

目的检测大肠癌患者门静脉和外周血中细胞角蛋白(CK20)mRNA,探讨它作为大肠癌肿瘤细胞血行播散标志的临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测63例大肠癌患者术中抽取的门静脉和外周血中CK20 mRNA和癌胚抗原(CEA)表达的阳性率,并对所测结果进行分析和比较。结果Ducks A,B期和Ducks C,D期患者门静脉血CK20 mRNA阳性表达均明显高于外周血,差异有统计学意义。随着病情进展,门静脉和外周血中CK20 mRNA表达均显著提高(65% vs 96%;33% vs 54%),但仅门静脉结果差异有统计学意义(P<0.005,χ2=8.65)。比较不同时期不同部位CK20 mRNA与CEA表达差异时,除Ducks A,B期患者门静脉血中CK20 mRNA阳性率较CEA阳性率为高且具有统计学意义外,Ducks C,D期门静脉组和各期外周血组中CK20 mRNA阳性率和CEA阳性率差异无统计学意义。结论大肠癌患者门静脉中CK20 mRNA含量高于外周血,门静脉和外周血中CK20 mRNA的阳性表达可随病情进展而增加,因此可作为大肠癌肿瘤细胞血行播散标志,应用于手术后预后判断。     

大肠癌术后血路播散的动态追踪监测

目的 研究大肠癌血路播散在监测大肠癌患者术后复发转移中的意义。方法 使用靶向ＣＫ２０的ＲＴ－ＰＣＲ技术,对５８例大肠癌患者外周血和骨髓微转移癌细胞在术前和术后不同时间进行了动态检测。结果 术后肿瘤无复发转移的大肠癌患者ＣＫ２０的阳性率（１６.３％）显著低于复发转移者（８８.９％）。血路播散有四种情况：①术后ＣＫ２０检测曾有一度转阴;②ＣＫ２０检测持续阳性;③ＣＫ２０在术后才转阳;④ＣＫ２０术后一直阴性。死亡的６例患者术前ＣＫ２０检测均为阳性。结论 大肠癌血路播散在术后复发转移中起重要作用,动态追踪检测大肠癌ＣＫ２０的变化有助于预测肿瘤的复发转移、术前存在血路播散者预后差。     

结直肠癌患者血液中CK20mRNA的表达

目的探讨结直肠癌患者血液中CK20 mRNA表达及其临床意义。方法采用RT-PCR法检测61例结直肠癌患者术前外周血和术中门静脉血以及20例健康自愿者与10例结直肠息肉患者外周血中CK20 mRNA表达。结果 61例结直肠癌患者术前外周血CK20 mRNA表达阳性率为41.0%(25/61),术中门静脉血中CK20mRNA表达阳性率为45.9%(28/61),两者差异无统计学意义(P>0.05)。结直肠癌患者外周血和门静脉血中CK20 mRNA表达均与肿瘤TNM分期?浸润深度?远处转移和区域淋巴结转移有关(P<0.05)。20例健康自愿者和10例结直肠息肉患者外周血中均无CK20 mRNA表达。结论 CK20是结直肠癌患者血液中反映微转移较为特异的肿瘤标志物,结直肠癌患者血液中CK20 mRNA表达与肿瘤的分期、浸润和转移有关。     

定量RT-PCR检测结肠癌患者门静脉血CK20 mRNA的表达

目的 检测结肠癌患者门静脉血中细胞角蛋白20（CK20）mRNA的表达水平,并探讨其临床价值。方法 采用实时荧光定量RT-PCR检测31例病理学确诊的结肠癌患者门静脉血和20例健康对照者外周血CK20mRNA的表达水平。结果 结肠癌患者中CK20mRNA阳性率为25.81%,而对照组阳性率为5%,两者相比差异有统计学意义（P〈0.025）。随着临床分期的具体化,患者门静脉血中CK20mRNA表达率随之提高,但各分期间阳性率相比无显著统计学意义（P〉0.05）。DukesLC期与D期患者中〉10拷贝/ml者高于A期与B期患者。结论 术中检测结肠癌患者门静脉血CK20mRNA表达水平,对判断肝脏微转移有一定的提示意义。     

检测膀胱癌患者外周血中CK-20mRNA的临床意义

目的 :探讨膀胱肿瘤患者外周血中CK 2 0mRNA表达的临床意义。方法 :采用RT PCR技术检测 32例膀胱癌患者手术前、10例手术后及 10例健康者外周血标本中CK 2 0mRNA的表达。结果 :在手术前外周血中CK 2 0mRNA表达阳性率为 15 .6 % (5 / 32 ) ;在手术后外周血中CK 2 0mRNA表达阳性率为 2 0 .0 % (2 / 10 ) ,其中 1例术前外周血CK 2 0mRNA表达阴性 ,手术后变为阳性 ;健康者外周血均无CK 2 0mRNA表达。膀胱癌患者外周血中CK 2 0mRNA表达阳性率与肿瘤大小、数目无显著关系 (P >0 .0 5 ) ,但随着肿瘤分级、分期的增加 ,CK 2 0的检出率似有增加的趋势。结论 :以RT PCR技术检测膀胱癌患者外周血中CK 2 0mRNA的表达 ,可早期诊断和监测膀胱肿瘤细胞血行微转移。     

MUC1 mRNA和CK19 mRNA在胃癌淋巴结表达的意义

目的 探讨胃癌淋巴结微转移的基因诊断方法,分析CK19 mRNA、MUC1 mRNA作为胃癌微转移检测分子标志物的可行性。方法 应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测52例胃癌462枚常规病理阴性淋巴结中黏蛋白1（MUC1）mRNA、细胞角蛋白19（CK19）mRNA表达;对照组为4例胃良性病变患者的38枚淋巴结。结果 胃良性病变患者38枚淋巴结中CK19 mRNA和MUC1 mRNA表达均为阴性;CK19、MUC1 mRNA在胃癌患者462枚常规病理阴性的淋巴结中223枚（48.3%）阳性表达,其中180枚（39.0%）淋巴结CK19 mRNA阳性表达,136枚（29.4%）MUC1 mRNA阳性表达,CK19 mRNA和MUC1 mRNA均为阳性者有125枚（27.0%）。不同组织类型淋巴结CK19、MUC1 mRNA阳性率差异无显著性（P〉0.05）,不同肿瘤浸润层次、原发肿瘤大小、肿瘤位置的阳性率差异有显著性（P〈0.05）。结论 MUC1、CK19基因均可作为RT-PCR法检测胃癌患者淋巴结微转移的分子标志物。     

乳腺癌微转移的CK19和CD44表达研究

目的探讨乳腺癌患者外周血中CK19和CD4 4mRNA的表达与术后乳腺癌微转移的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法 ,检测 10 7例乳腺癌患者 (腋窝淋巴结癌转移阳性者 4 5例 ,腋窝淋巴结癌转移阴性者 6 2例 )手术前 2 4h和手术后 12d血中CK19与CD4 4mRNA的表达 ,同时与 35例良性乳腺病患者及 6 0例健康献血员进行比较。结果手术前 2 4h患者血中CK19和CD4 4mRNA阳性表达率分别为 31 8% (34/10 7)和 32 7% (35 /10 7) ,与手术后 12d和对照组比较差异均有显著性 (χ2 值 :CK19分别为 10 74、2 1 0 4 ;CD4 4分别为 8 70、2 0 18;均P <0 0 5 )。CK19与CD4 4检测血中乳腺癌细胞特异度为 88 7% ,此二项指标联合应用敏感度为 10 0 %。CK19与CD4 4均表达者的 5年生存率为 5 7 80 % (11/19) ,均不表达者的 5年生存率为 90 4 7% (19/2 1)。二者比较差异有显著性 (χ2 =4 0 4 ,P <0 0 5 )。结论联合检测乳腺癌患者血中CK19、CD4 4mRNA的表达 ,可提高诊断乳腺癌微转移的敏感性和特异性。     

联合检测大肠癌组织中血管内皮生长因子与门静脉血细胞角蛋白20mRNA的临床意义

目的探讨大肠癌病人肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）蛋白和门静脉血细胞角蛋白20（cytokeratin,CK20）mRNA作为血行播散标志物的临床意义。方法RT-PCR技术检测63例大肠癌病人门静脉血CK20mRNA表达阳性率,免疫组织化学方法检测肿瘤标本VEGF蛋白的表达。结果随着病情由Dukes A、B期向Dukes C、D期进展,门静脉血CK20 mRNA表达的阳性率由64．9％升高到96．2％（P〈0．01）。高、中分化肿瘤组织VEGF蛋白阳性率为50．0％,低、未分化时升高到92．3％（P〈0．01）。CK20 mRNA与VEGF作为单项指标测定时,阳性率分别为77．8％和58．7％,联合检测时阳性率显著升高（92．1％）。结论大肠癌病人门静脉血中CK20 mRNA和肿瘤组织VEGF作为衡量大肠癌浸润能力的指标,二者表达分别与Dukes分期和肿瘤恶性程度的关系密切。联合检测二者时,敏感性显著提高,可弥补单项指标检测的不足,值得在临床上推广。     

巢式RT-PCR方法检测胃癌病人周围静脉血癌细胞及其意义

探讨胃癌患者外周血癌细胞的检测及其意义。方法：以CK19作指标,用巢式RT-PCR方法检测42例胃癌患者术前外周血中癌细胞。结果：健康人外周血中不能检测出CK19mRNA表达,用巢式RT-PCR方法检测外周血中胃癌细胞的敏感性可达1/106;42例胃癌病人外周血中检测出CK19mRNA阳性表达13例,阳性率30.9%,阳性结果与肿瘤大小、浸润深度和肿瘤分期密切相关。结论：巢式RT-PCR方法检测胃癌外周血癌细胞具有高度的特异性和敏感性,检测外周血癌细胞有助于判断肿瘤的进展程度。