缺氧诱导因子通过FOXC1促进脑胶质瘤细胞侵袭

目的:探究在缺氧情况下,缺氧诱导因子(HIF)能否改变胶质瘤细胞内叉头框蛋白C1(FOXC1)的表达水平,并对胶质瘤细胞的侵袭产生影响。方法:通过RT-qPCR和Western blot实验检测正常氧条件及缺氧条件下胶质瘤细胞系U87和U251中FOXC1的mRNA和蛋白表达水平以及HIF-1α和HIF-2α的蛋白水平变化。缺氧情况下,在胶质瘤U87和U251细胞系中分别转染HIF-1αsiRNA和HIF-2αsiRNA,通过Western blot检测转染HIF-1αsiRNA和HIF-2αsiRNA后U87和U251细胞中FOXC1的蛋白水平变化。体外Transwell实验比较正常氧条件和缺氧情况下U87细胞和U251细胞的侵袭能力,检测转染FOXC1 siRNA后胶质瘤细胞系U87和U251侵袭能力改变及与侵袭能力相关标志蛋白(N-cadherin、E-cadherin和vimentin)的表达水平。结果:缺氧条件下,FOXC1的mRNA和蛋白表达明显升高,HIF-1α和HIF-2α的蛋白水平也明显升高,并随缺氧程度的增加而升高(P0.05);缺氧情况下,将HIF-1αsiRNA转染至胶质瘤细胞系U87和U251后,发现细胞系中FOXC1的蛋白表达水平较阴性对照组无明显变化;转染HIF-2αsiRNA后,U87细胞系和U251细胞系中FOXC1的蛋白表达水平较阴性对照组明显降低(P0.05);缺氧条件下,胶质瘤细胞系U87和U251的侵袭能力较正常氧条件下强(P0.05)。但转染FOXC1 siRNA后,U87和U251细胞的侵袭能力较阴性对照组明显减弱,且侵袭相关标志蛋白N-cadherin和vimentin的表达降低,Ecadherin的表达升高(P0.05)。结论:缺氧情况下,HIF-2α通过升高FOXC1的表达,进而增强恶性胶质瘤细胞的侵袭能力。     

Raptor对胶质瘤细胞侵袭能力的影响

 目的：研究Raptor对于胶质瘤细胞侵袭能力的影响。方法：采用RNA干扰技术,向胶质瘤U87细胞转染Raptor限定性siRNA干扰质粒, Western blotting检测转染后细胞Raptor的表达水平以鉴定转染效果。体外侵袭实验检测Raptor表达降低后,U87细胞侵袭能力的变化;Western blotting检测细胞中ARK5的磷酸化情况和MMP-2、MMP-9的表达水平。免疫组织化学法检测低级别及高级别胶质瘤中Raptor的表达水平。结果：转染Raptor siRNA质粒的U87细胞命名为siRaptor/U87,转染对照组质粒的细胞命名为Scr/U87,转染成功的实验组细胞Raptor的表达降低。体外侵袭实验中siRaptor/U87较对照组穿透基质膜的细胞数少(P＜0.01)。Western blotting显示实验组细胞中磷酸化ARK5、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均较对照组低。胶质瘤组织中Raptor的表达与恶化程度存在相关性（P＜0.01）。结论：Raptor 表达降低可能通过磷酸化ARK5及增加MMP-2、MMP-9的表达促进胶质瘤细胞的侵袭力。     

ATAD2对人胶质瘤细胞系转移及上皮间质转换的影响

目的探讨三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)对人胶质瘤细胞的影响。方法用real-time PCR及Western blot检测ATAD2在人胶质瘤细胞系U87MG、U251和正常人星形胶质细胞的表达。U87MG和U251分为对照组(control)、脂质体对照组(mock)、ATAD2 siRNA(转染特异性siRNA)和ATAD2 overexpression(过表达ATAD2)4组,MTT法、Transwell实验观察细胞增殖和侵袭迁移。Western blot检测上皮间质转换标志蛋白上皮钙黏素、神经钙黏素和波形蛋白的表达。结果 U87MG和U251细胞ATAD2高表达。与对照相比,ATAD2 siRNA抑制U87MG和U251细胞增殖、侵袭、迁移、神经钙黏素及波形蛋白表达,促进上皮钙黏素表达(P0.05);ATAD2 overexpression促进细胞增殖、侵袭、迁移、神经钙黏素和波形蛋白表达,降低上皮钙黏素表达(P0.05)。结论 ATAD2可能通过调节上皮间充质转换进程参与人胶质瘤细胞转移。     

针对CD44的siRNA对脑胶质瘤细胞U87增殖与侵袭的抑制作用

目的:通过RNA干涉下调CD44在脑胶质瘤细胞U87中的表达,观察CD44的表达抑制对胶质瘤增殖、迁移和侵袭的影响。方法:根据CD44基因序列设计并合成的siRNA片段(CD44-siRNA)转染U87细胞,利用荧光实时定量qRT-PCR检测细胞中CD44基因mRNA水平的变化;Western blot检测CD44蛋白水平的变化;MTT法检测U87细胞增殖;单细胞划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验检测U87细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44-siRNA下调了U87细胞中CD44mRNA水平与蛋白水平的表达,转染细胞的增殖和迁移侵袭能力下降。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制U87脑胶质瘤细胞的增殖及其迁移侵袭力,为以CD44为靶点的脑胶质瘤基因治疗奠定基础。     

miR-335在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖及侵袭的影响

目的探讨miR-335在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖侵袭的影响。方法用实时荧光定量PCR方法检测39例胶质瘤组织及其对应癌旁组织miR-335的表达;利用Lipofect AMINETM2000将miR-335模拟物或抑制剂及其阴性对照转染至人U87胶质瘤细胞,分别应用CCK-8法和Transwell小室法检测人胶质瘤U87细胞的增殖及侵袭能力。结果胶质瘤组织中miR-335的相对表达量为0.93±0.09,癌旁组织的miR-335相对表达量为0.33±0.02,胶质瘤组织中miR-335的表达显著低于癌旁组织(P0.01)。与对照组相比,miR-335模拟物能够显著抑制胶质瘤U87细胞系的增殖以及侵袭能力(P0.01);miR-335抑制剂则能够显著上调胶质瘤U87细胞系的增殖以及侵袭能力(P0.01)。结论 miR-335在胶质瘤组织中是低表达的,在胶质瘤U87细胞中过表达miR-335能够抑制细胞的增殖及侵袭能力。     

miR-145在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖及侵袭的影响

目的探讨miR-145在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤增殖侵袭的影响。方法用实时荧光定量PCR方法检测39例胶质瘤组织及其对应癌旁组织miR-145的表达;利用LipofectA MINET M2000将miR-145模拟物或抑制剂及其阴性对照转染至人U87胶质瘤细胞,分别应用CCK-8法和Transwell小室法检测人胶质瘤U87细胞的增殖及侵袭能力。结果胶质瘤组织中miR-145的相对表达量为17.26±6.05,癌旁组织的miR-145相对表达量为53.58±21.26,胶质瘤组织中miR-145的表达显著低于癌旁组织(P0.01)。与对照组相比,miR-145模拟物能够显著抑制胶质瘤U87细胞系的增殖以及侵袭能力(P0.01);miR-145抑制剂则能够显著上调胶质瘤U87细胞系的增殖以及侵袭能力(P0.01)。结论miR-145在胶质瘤组织中是低表达的,在胶质瘤U87细胞中过表达miR-145能够抑制细胞的增殖及侵袭能力。     

Zeste基因增强子同源物2通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响脑胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨zeste基因增强子同源物2(EZH2)通过调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法:以RT-q PCR和Western blot检测胶质瘤U87、H4和U251细胞及正常人脑星形细胞(NHA)中EZH2的表达水平。在H4细胞中转染EZH2 siRNA和siRNA control,MTT测定细胞活力,流式细胞术测定细胞凋亡,分光光度计法检测caspase-3的活性,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白β-连环蛋白(β-catenin)和下游靶分子c-Myc的蛋白表达。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂处理转染EZH2 siRNA的H4细胞,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定β-catenin和c-Myc的表达。结果:胶质瘤U87、H4和U251细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平均明显高于NHA(P0.05),并且H4细胞中EZH2 mRNA和蛋白水平高于U87和U251细胞(P0.05)。EZH2 siRNA可以明显下调H4细胞中EZH2的mRNA和蛋白水平。EZH2表达下调后的H4细胞从48 h开始细胞活力降低,并且细胞凋亡率也明显升高,细胞中caspase-3活性也明显升高(P0.05),同时EZH2表达下调还可以抑制β-catenin和c-Myc的表达。Wnt/β-catenin信号通路的激活剂可以减少EZH2诱导的H4细胞凋亡,降低细胞中caspase-3的活性。结论:EZH2在脑胶质瘤细胞中过度表达,下调其表达可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活而诱导胶质瘤细胞凋亡。     

乙酰辅酶A羧化酶1对胶质瘤细胞系U87细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）对人胶质瘤细胞系U87细胞增殖、迁移及侵袭的作用。 方法 Western blotting检测人胶质瘤细胞系U87、U251及U373中ACC1的表达;构建ACC1过表达质粒载体,将过表达ACC1质粒载体瞬时转染至U87细胞中;Western blotting检测转染后U87细胞中ACC1表达情况;MTT实验检测过表达ACC1对U87细胞增殖的影响;Transwell迁移和侵袭实验分别检测过表达ACC1对U87细胞迁移和侵袭的影响;划痕实验检测过表达ACC1对U87细胞划痕愈合能力的影响;Western blotting检测相关蛋白表达变化。 结果 与人胶质瘤细胞系U251和U373相比,U87细胞中ACC1表达较低;ACC1过表达抑制U87细胞增殖（P<0.01）;ACC1过表达抑制U87细胞迁移、侵袭和划痕愈合能力（P<0.01）;ACC1过表达迁移和侵袭相关蛋白波形蛋白(vimentin)、纤维连接蛋白(fibronectin)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)表达下调（P<0.01）,凋亡抑制蛋白Bcl-2和细胞周期蛋白(cyclin) B、cyclin D表达下调（P<0.01）,p-STAT3蛋白表达下调（P<0.01）,细胞周期蛋白P21表达上调（P<0.01）。 结论 过表达ACC1可能通过抑制STAT3活性,抑制人胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

靶向干扰GPx1基因对人胶质母细胞瘤细胞生长和迁移的影响

目的:探讨靶向上调和下调谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)对人胶质母细胞瘤细胞株(U87MG、U118MG)增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:合成针对GPx1的siRNA和构建、鉴定pc DNA3.1-GPx1重组质粒,分别用LipofectamineTM2000脂质体瞬时转染人胶质母细胞瘤细胞株U87MG和U118MG。Real-time PCR检测U87MG和U118MG中GPx1 mRNA表达。Western blotting法检测转染后GPx1蛋白表达,用MTS检测法和Transwell实验分别检测转染后细胞的活力、迁移及侵袭能力的变化。结果:siRNA干扰U87MG细胞后在24 h、48 h和72 h对细胞活力的抑制率分别为25.9%、35.7%和34.8%,较对照组明显降低(P0.05);质粒转染U118MG细胞后在24 h、48 h和72 h对细胞活力的促进率分别为22.7%、45.8%和39.8%,较对照组明显增加(P0.05);Transwell结果显示经siRNA干扰,U87MG细胞迁移抑制率为41.6%±8.2%,细胞侵袭抑制率为40.4%±10.1%,经siRNA干扰的细胞迁移和侵袭能力明显下降(P0.05);质粒转染后细胞迁移促进率为55.8%±9.8%,细胞侵袭促进率为60.8%±9.2%,经质粒转染的细胞的迁移和侵袭能力显著增强(P0.05)。结论:siRNA下调GPx1表达可抑制人胶质母细胞瘤细胞株U87MG的生长、迁移和侵袭;相反,质粒上调GPx1表达可促进人胶质母细胞瘤细胞株U118MG的生长、迁移和侵袭。     

下调CENP-W对人脑胶质瘤U87细胞的影响

目的:研究下调着丝粒蛋白W(centromere protein W,CENP-W)的表达水平对人脑胶质瘤U87细胞的影响。方法:采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人脑胶质瘤U87细胞CENP-W的表达,采用RT-qPCR和Western blot法评价siRNA的干扰效果,采用MTT法、BrdU实验和平板集落形成实验测定细胞的增殖,Transwell小室检测细胞侵袭力的变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的改变。结果:MTT实验、平板集落形成实验和BrdU实验显示转染siRNA的实验组U87细胞的增殖能力、集落形成能力较空白对照组及阴性对照组明显降低;Transwell实验和划痕实验显示实验组细胞的迁移、侵袭能力较空白对照组及阴性对照组明显减弱;流式细胞术分析表明实验组细胞的细胞周期被阻滞在G_0/G_1期;实验组细胞凋亡比例较对照组增多(P0.05)。结论:下调CENP-W的表达可抑制人脑胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进细胞的凋亡,提示CENP-W有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。     

MiR-215-5p经AKT/GSK-3β/Snail信号通路抑制乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭

目的探究miR-215-5p对乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭能力的影响以及机制。方法乳头状甲状腺癌TPC1细胞体外转染miR-215-5p mimic后利用MTT实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化;预测并验证miR-215-5p的靶基因,并且在TPC1细胞过表达和低表达miR-215-5p的靶基因后,检测TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化;利用Western blot检测转染后靶基因的表达水平,AKT和GSK-3β的磷酸化水平,以及Snail的表达水平。结果 miR-215-5p mimic能够显著抑制TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力(P0.05);通过双荧光素酶报告实验验证了miR-215-5p的靶基因为ARFGEF1;低表达ARFGEF1的TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力被显著抑制(P0.05);miR-215-5p mimic可显著抑制过表达ARFGEF1引起的TPC1细胞增殖、迁移、侵袭能力的增加(P0.05);Western blot结果显示miR-215-5p mimic可引起ARFGEF1和Snail表达水平显著降低(P0.05),AKT和GSK-3β的磷酸化水平降低(P0.05),但是miR-215-5p inhibitor和过表达ARFGEF1均可恢复ARFGEF1和Snail表达水平以及AKT和GSK-3β的磷酸化水平。结论 MiR-215-5p通过AKT/GSK-3β/Snail信号通路以ARFGEF1为目标发出信号抑制乳头状甲状腺癌增殖、迁移和侵袭。     

SRSF9/SRp30c通过调控GRβ对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨富含丝氨酸-精氨酸剪切因子9/富含丝氨酸-精氨酸蛋白30c(SRSF9/SRp30c)和糖皮质激素受体β(GRβ)在胶质瘤细胞中的表达及两者之间的关系。方法:用小干扰RNA(siRNA)靶向干扰胶质瘤U87细胞中SRSF9的表达,同时用慢病毒将短发卡RNA(shRNA)转染细胞,构建SRSF9敲减的U87稳转细胞株,通过荧光显微镜观察并检测转染情况。通过RT-q PCR和Western blot法检测SRSF9/SRp30c和GRβ的表达水平,CCK-8和细胞集落形成实验检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力。结果:用2种方法敲减SRSF9后,SRSF9/SRp30c表达均降低,GRβ的表达水平也随之下降,差异有统计学意义(P0.05)。荧光显微镜观察结果表明,成功构建了稳转细胞株,转染效率超过80%。CCK-8实验和细胞集落形成实验的结果表明U87细胞在敲减SRSF9后,细胞活力和集落形成能力降低,差异有统计学意义(P0.05);划痕实验结果表明U87细胞在敲减SRSF9后,迁移能力明显减弱,差异有统计学意义(P0.05)。结论:SRSF9/SRp30c可通过调控GRβ促进胶质瘤细胞的增殖和迁移。     

siRNA 沉默NOK 基因抑制脑胶质瘤U251 细胞增殖与侵袭

目的:通过小干扰RNA(siRNA)沉默NOK基因的转录表达,研究NOK基因在人脑胶质瘤细胞U251增殖、凋亡及侵袭中的调控作用。方法:合成NOK siRNA(si-578和si-996),脂质体转染U251细胞,qRT-PCR、Western blot检测其对NOK基因转录及表达的抑制效果,MTS法及平板克隆形成实验研究其对细胞增殖的影响,Transwell试验检测细胞迁移能力,Annexin V-FITC/7-AAD双染法检测细胞凋亡,Western blot检测Cyclin D1及AKT的蛋白表达。结果:si-578和si-996可显著降低NOK基因转录和表达(P0.05)。抑制U251细胞NOK基因表达,可显著抑制细胞增殖和侵袭(P0.05),凋亡细胞数量明显增加(P0.05),G_1期U251细胞数量显著增加(P0.05),S期细胞明显减少(P0.05),Cyclin D1表达和AKT磷酸化水平明显降低。结论:NOK在脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭和凋亡过程中发挥重要调节作用。     

miR-379对胶质瘤U87MG细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的研究miR-379对胶质瘤U87MG细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法 Real-time PCR方法检测miR-379在胶质瘤U87MG细胞和正常星型胶质细胞中的表达水平。在胶质瘤U87MG细胞中瞬时转染miR-379 agomir并用real-time PCR方法验证其转染效率。CCK-8方法检测miR-379对胶质瘤U87MG细胞增殖能力的影响。划痕实验检测miR-379对胶质瘤U87MG细胞迁移能力的影响。Transwell侵袭实验检测miR-379对胶质瘤U87MG细胞侵袭能力的影响。结果 miR-379在胶质瘤U87MG细胞中的表达水平显著低于在正常星型胶质细胞中的表达。miR-379 agomir抑制胶质瘤U87MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 miR-379抑制胶质瘤U87MG细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-107抑制胶质瘤细胞的体外增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-107对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制。方法运用RT-qPCR检测人正常的星形胶质细胞系NHA、神经胶质瘤细胞系U87、A172、U251中miR-107和FOXK1的表达;将细胞分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-107组(转染miR-107 mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-FOXK1组(转染si-FOXK1)、miR-107+pcDNA3.1组(共转染miR-107 mimics和pcDNA3.1)和miR-107+pcDNA3.1-FOXK1组(共转染miR-107 mimics和pcDNA3.1-FOXK1);用脂质体法分别转染至U87细胞;CCK-8法检测细胞的增殖;Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭;Western blot检测细胞中FOXK1的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与正常的星形胶质细胞NHA相比,神经胶质瘤细胞U87、A172、U251中miR-107表达明显下调,FOXK1表达明显上调(P<0.05);过表达miR-107、敲减FOXK1均可抑制U87细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-107可抑制野生型FOXK1的细胞荧光活性,并负向调控FOXK1的表达;过表达FOXK1可逆转miR-107对U87细胞增殖迁移侵袭的抑制作用。结论 miR-107抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制可能与靶向负调控FOXK1有关,将可为胶质瘤的诊断和治疗提供靶向治疗的依据。     

miR-34a通过MMP2抑制脑胶质瘤细胞侵袭和转移

目的探讨miR-34a通过其靶基因基质金属蛋白酶2(MMP2)对脑胶质瘤细胞侵袭和转移的影响。方法选取U87和A172脑胶质瘤细胞,分组转染miR-34a摸拟物和抑制剂;利用RT-q PCR及Western blot观察脑胶质瘤细胞中miR-34a和MMP2的表达;经过microRNA数据库预测miR-34a与MMP2结合区域;构建MMP2 3'UTR野生型与突变型的荧光素酶质粒和miR-34a质粒,进行荧光素酶报告基因实验;Transwell侵袭和划痕实验观察U87细胞侵袭和迁移能力。结果经筛选选用MMP2高表达细胞株U87和A172,过表达miR-34a后发现MMP2表达水平降低(P0.05),降低miR-34a则MMP2表达升高(P0.05);miR-34a结合MMP2 mRNA 3'UTR的特定序列降低MMP2水平(P0.05);miR-34a通过MMP2抑制细胞侵袭和迁移(P0.05)。结论在胶质瘤细胞中miR-34a下调MMP2,进而抑制细胞侵袭和迁移能力。     

miR-26a靶向调节GSK-3β基因对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-26a对卵巢癌SKOV3细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为miR-26a抑制剂组、miR-26a模拟物组和对照组,分别将miR-26a抑制剂或miR-26a模拟物转染至miR-26a抑制剂组或miR-26a模拟物组细胞,对照组细胞转染无关序列,Real-time PCR法检测各组细胞miR-26a表达水平,分别用MTT方法与Transwell细胞侵袭实验检测转染后各组SKOV3细胞的增殖与侵袭能力变化。Real-time PCR与Western blot实验分别检测各组细胞GSK-3βm RNA和蛋白表达水平。结果与对照组相比,miR-26a抑制剂组SKOV3细胞miR-26a表达水平显著降低,miR-26a模拟物组则显著升高(P0.01)。与对照组相比,miR-26a抑制剂组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著降低,GSK-3βm RNA及蛋白表达水平显著升高,miR-26a模拟物组SKOV3细胞增殖与侵袭能力显著升高,GSK-3βm RNA及蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论 miR-26a促进卵巢癌SKOV3细胞的增殖和侵袭可能与下调GSK-3β的表达相关。     

miR-194 对乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移和Wnt / β-catenin 信号通路的影响

目的:探讨miR-194对乳腺癌细胞增殖、侵袭迁移和Wnt/β-catenin信号通路的影响及作用机制。方法:将MCF-7细胞分为空白对照组(Blank组)、阴性对照组(NC组)和miR-194组。miR-194组转染miR-125b mimic,NC组转染NC,Blank组不转染。RT-PCR测定细胞中miR-194水平,MTT法测定细胞增殖活性,Transwell小室测定细胞侵袭能力,划痕实验测定细胞迁移能力,Western blot测定细胞中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin-D1)、C-Myc、基质金属蛋白酶7(MMP-7)蛋白水平。结果:乳腺癌MCF-7细胞中miR-194水平低于正常乳腺Hs578Bst细胞(P0.05)。与Blank组和NC组相比,miR-194组miR-194水平升高(P0.05),OD值、侵袭细胞数减少、迁移距离缩短(P0.05),p-GSK-3β、β-catenin、cyclin-D1、C-Myc、MMP-7蛋白水平降低(P0.05),Blank组和NC组各指标差异无统计学意义(P0.05)。结论:乳腺癌细胞中miR-194水平降低,过表达miR-194可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭迁移。     

MiR-429通过CRKL靶向作用对U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的研究miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法培养人U87胶质瘤细胞,应用LipofectamineLTX试剂将pre-miR-429质粒载体以及anti-miR-429质粒载体分别稳定转染人U87胶质瘤细胞;应用Real-time-PCR验证转染效率;应用CCK-8试剂盒检测miR-429对人U87胶质瘤细胞增殖能力的影响;应用Real-time PCR和Western blot检测人U87胶质瘤细胞中接头蛋白CRKL(v-crk avian sarcoma virus CT10oncogene homolog-like,CRKL)的mRNA和蛋白表达含量变化;将CRKL分别转染至U87胶质瘤细胞和miR-429过表达的U87胶质瘤细胞,应用CCK-8试剂盒检测人U87胶质瘤细胞增殖,应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,应用Western blot法检测凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2的蛋白表达变化。结果与对照组相比,miR-429过表达显著抑制了人U87胶质瘤细胞增殖,明显诱导了凋亡发生,显著降低了CRKLmRNA和蛋白在人U87胶质瘤细胞的表达水平,caspase-3的表达水平显著上调,Bcl-2的表达水平显著降低。CRKL过表达显著增强了人U87胶质瘤细胞增殖能力并且抑制了细胞凋亡,caspase-3的表达水平显著下调,Bcl-2的表达水平显著增强;CRKL过表达有效阻断了miR-429上调caspase-3、降低Bcl-2的作用,有效阻断了miR-429抑制U87胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的作用。结论 MiR-429抑制CRKL从而降低人U87胶质瘤细胞的增殖能力,诱导细胞凋亡。     

siRNA沉默p75神经营养因子受体逆转胶质瘤恶性表型

目的 利用小干扰RNA(siRNA)技术沉默与胶质瘤细胞凋亡和侵袭密切相关的p75神经营养因子受体(p75NTR)基因,观察其逆转胶质瘤恶性表型的治疗效果.方法 设计靶向p75NTR基因的siRNA片段,脂质体转染人U251胶质瘤细胞系,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法 检测p75NTR的mRNA和蛋白表达;Transwell细胞侵袭实验检测U251细胞的侵袭力;软琼脂集落形成实验检测细胞集落形成能力;建立裸鼠颅内U251胶质瘤荷瘤模型,原位重复注射siRNA-p75NTR/脂质体复合物3次,MRI检测颅内瘤体积,免疫细胞化学SP法检测p75NTR、神经生长因子(NGF)和细胞周期蛋白(cyclin)D2表达,用TUNEL法做移植瘤细胞原位细胞凋亡检测.结果 转染siRNA基因片段的U251细胞p75NTR mRNA和蛋白质表达水平显著下降(P<0.05),细胞侵袭能力及软琼脂集落形成能力均显著降低(P<0.05);体内实验显示p75NTR的表达程度与NGF的表达呈正相关,与cyclin D2表达及原位细胞凋亡数量呈负相关,MRI示瘤体积增长缓慢,边界轮廓清晰,动物生存期明显延长(P<0.05).结论 靶向p75NTR的siRNA技术可有效降低胶质瘤细胞的侵袭及增殖能力,诱导肿瘤细胞凋亡.