近红外光谱法测定不同厂家银黄颗粒中黄芩苷含量

目的:采用近红外光谱法对不同厂家银黄颗粒中黄芩苷含量进行快速测定.方法:以HPLC分析值作为参照,采用近红外漫反射光谱技术采集银黄颗粒的近红外光谱,结合偏最小二乘法(PLS)建立黄芩苷含量的快速测定方法.结果:建立的黄芩苷校正模型相关系数(R~2)、内部交叉验证均方差(RMSECV)、校正均方差(RMSEC)分别为0.998 2,0.189 9,0.051 4.经外部验证,校正模型的预测均方差(RMSEP)、平均回收率分别为0.080 2,104.27%.结论:该方法准确、快速、简便,可实现大批量样品的快速分析.     

样本数据重复性对NIR校正模型的影响

目的:探讨样本数据重复采集对所构建近红外(NIR)定量校正模型稳健性的影响,初步阐释该影响产生的原因。方法:以银黄液为研究载体,采集样本的近红外光谱,并以高效液相测定值为参考值,采用偏最小二乘算法建立黄芩苷定量校正模型,对潜变量因子累积贡献曲线进行深入探讨,在潜变量空间阐述重复采样对所建立的定量校正模型的影响。结果:在对重复采集光谱平均后,以最优光谱预处理方法建立的定量预测模型达到理想预测结果(RMSECV=1.824)。该模型潜变量因子累计贡献率曲线下的面积,明显大于其他光谱建模方式,即所得的模型更加稳健。结论:多次测量取平均能够显著提高模型的预测性能,使所得的模型更加稳健。     

高效液相色谱法测定银黄喷雾剂中黄芩苷的含量

目的:建立高效液相色谱法测定银黄喷雾剂中黄芩苷的含量。方法:色谱柱为Hypersil BDS C18(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸(38:62)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为280nm。结果:黄芩苷的线性范围为0.025μg-0.79μg(r=0.9998),平均回收率为99.86%,RSD为1.80%(n=9)。结论:该方法简单、快速、准确,可为银黄喷雾剂的质量控制提供实验依据。     

NIRS结合TQ软件建立银黄颗粒中绿原酸定量模型

目的:利用近红外漫反射光谱(NIRS)结合TQ软件快速测定银黄颗粒中绿原酸含量。方法:采集不同厂家银黄颗粒样品的近红外漫反射光谱,采用HPLC法测定其绿原酸含量,结合TQ软件建立绿原酸定量校正模型,进而对待测样品进行分析。结果:所建绿原酸定量校正模型的相关系数(R2)、校正均方差(RMSEC)和内部交叉验证均方差(RMSECV)分别为0.995,0.123和0.412;经外部验证,模型的预测相关系数(r2)和预测均方差(RMSEP)分别为0.984,0.166。结论:该模型适用于不同厂家银黄颗粒中绿原酸含量的直接测定,操作简便,无污染,结果准确可靠,可实现大批量样品的快速分析。     

黄芩汤分煎液与合煎液中黄芩苷、芍药苷和甘草酸含量的比较

目的:比较黄芩汤(黄芩、芍药、甘草、大枣)分煎液与合煎液中黄芩苷、芍药苷、甘草酸的含量变化.方法:采用Hypersil BDS C18柱,流动相分别以甲醇-水-磷酸(47:53:0.2),在280 nm波长测定黄芩苷;乙腈-水-磷酸(18:82:0.1),在230 nm波长测定芍药苷;甲醇-水-磷酸盐缓冲液(70:29:1)为流动相,在250 nm波长测定甘草酸.结果:3种成分的线性范围分别为黄芩苷2.88～72.00μg/mL,芍药苷2.85～22.80μg/ml,甘草酸4.16～52.00 μg/mL,黄芩苷含量为合煎液明显高于分煎液,芍药苷、甘草酸含量为合煎液与分煎液无明显差别.结论:黄芩汤不同煎煮方法对有效成分的溶出有影响,应根据实际情况进行处理.     

不同制备工艺银黄方中有效成分分析

目的:应用梯度洗脱高效液相色谱法,对2种制备工艺的银黄方中有效成分及含量进行分析比较。方法:采用DiamonsilC18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.1%磷酸溶液作流动相梯度洗脱,以流速1.0 mL·min-1,在检测波长276 nm和328 nm处测定银黄方中有效成分绿原酸、黄芩苷和汉黄芩苷的含量。结果:绿原酸在0.011 8～0.059μg线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为98.30%;黄芩苷在0.19～9.5μg线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为102.87%;汉黄芩苷在0.010 4～0.52μg线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为104.33%。银黄方膜分离工艺得到3种成分固含量总和(>50%)高于银黄口服液(13.36%)。结论:本法可用于银黄方中上述3种成分的含量测定,膜分离工艺得到的有效部位含量占提取物的50%以上。     

HPLC法测定银黄滴丸中黄芩苷的含量

目的:建立一种简便、快速的高效液相色谱法测定银黄滴丸中的指标成分黄芩苷的含量.方法:采用色谱柱为Kromasil C18柱,乙腈-蒸馏水-四氢呋喃-磷酸(22:76:2:0.1)为流动相,检测波长为274nm,流速为1.0mL/min.结果:在浓度为5.0～150.0μg/mL范围内具有良好的线性关系,A=19054C-46154(r=0.9997,n=8),方法回收率为98.8%.结论:该方法简单,灵敏度高,可用于银黄滴丸中黄芩苷的含量测定.     

HPLC法同时测定灌胃黄芩水煎剂后大鼠血浆中黄芩苷和汉黄芩苷的质量浓度及药动学研究

目的建立大鼠ig黄芩水煎剂后血浆中黄芩苷和汉黄芩苷的HPLC测定方法及药动学研究。方法大鼠ig黄芩水煎剂后,不同时间眼底静脉丛取血,制备血浆。血浆样品经甲醇沉淀蛋白,HPLC-UV测定血药浓度。色谱柱为Shim-packODS(250mm×4.6mm,5μm);流动相采用梯度洗脱,体积流量:1.5mL/min;检测波长:276nm。结果黄芩苷的线性范围为0.156~10μg/mL,汉黄芩苷的线性范围为0.109~7μg/mL,定量下限(LLOQ)分别为0.156和0.109μg/mL,日内和日间精密度(RSD)均小于15%,准确度(RE)为-6.82%~3.26%。大鼠ig黄芩水煎剂后,血浆中黄芩苷和汉黄芩苷血药浓度-时间曲线均存在双峰:黄芩苷的tmax1和tmax2分别为(12.0±4.5)min和(7.2±1.79)h;Cmax1和Cmax2分别为(5.29±1.96)和(4.49±2.12)μg/mL,汉黄芩苷的tmax1和tmax2分别为(14.0±9.0)min和(6.8±1.1)h;Cmax1和Cmax2分别为(1.38±0.16)和(1.62±0.71)μg/mL;黄芩苷的CL/F为(4.72±1.68)L/h,汉黄芩苷的CL/F为(3.04±0.98)L/h。结论该方法经考察符合生物样品的测定要求,可应用于大鼠体内黄芩苷和汉黄芩苷血药浓度的测定和药动学研究。大鼠ig黄芩水煎剂后血浆中黄芩苷和汉黄芩苷质量浓度存在双峰现象,黄芩苷的口服清除率大于汉黄芩苷。     

复方银黄微型灌肠剂人体内药代动力学研究

目的:测定复方银黄微型灌肠剂的药代动力学参数,为临床合理用药提供科学依据。方法:采用高效液相色谱法测定黄芩苷和绿原酸在人体内的血药浓度,采用药动学程序3P97进行统计处理,确定药动学模型及相关药代动力学参数。结果:黄芩苷在人体内呈二室模型分布,其药代动力学参数是:T1/2α=0.325 h,T1/2β=2.370 h,AUC=6.236μg.h/mL,Tm=0.247h,Vd=2.314 L;绿原酸在人体内呈二室模型分布,其药代动力学参数是:T1/2α=0.106 h,T1/2β=1.641 h,AUC=15.138μg.h/mL,Tm=0.267 h,Vd=2.423 L。结论:复方银黄微型灌肠剂经直肠给药后其主要成分黄芩苷和绿原酸在人体内吸收迅速、完全。     

HPLC-MS/MS法测定银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷

目的建立HPLC-MS/MS检测银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的方法。方法应用超声提取和Agilent G6410B TripleQuad LC/MS检测。Agilent Eclipse Plus C18(100 mm×2.1 mm,3.5μm)分析柱,流动相为甲醇-0.1%醋酸水溶液(60∶40),体积流量0.2 mL/min,柱温25℃,进样量为20μL;以液相色谱分离、电喷雾离子化串联质谱进行检测。结果绿原酸和黄芩苷分别在50～800 ng/mL、125～2 000 ng/mL线性关系良好,银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的平均加样回收率分别为102.96%、100.69%。结论该方法快速简便、精密度好、灵敏度高,可用于银黄颗粒中绿原酸和黄芩苷的定量测定。     

双黄连口服液中黄芩苷含量近红外测定方法的建立与验证

目的:建立与验证快速分析双黄连口服液中黄芩苷含量的近红外光谱法。方法:采用透射模式采集样品近红外光谱数据,以偏最小二乘法建立光谱数据与HPLC法分析结果的定量校正模型,根据R、RMSEC、RMSEP等参数评价模型的定量性能;以准确性轮廓方法,验证近红外模型的准确度和精密度。结果:偏最小二乘定量校正模型R为0.9902,RMSEC为0.4223,RMSEP为0.4162;在β-期望容许误差极限为95%、容许极限为12%、风险极限为5%的约束下,模型验证结果表明分析方法准确度、精密度、不确定度满足要求,最低定量限为5.32 mg.mL-1。结论:双黄连口服液中黄芩苷近红外定量模型稳健可靠。此外,准确性轮廓作为一种新的验证方法,可运用于中药体系近红外分析模型验证。     

清开灵注射液中黄芩甙和绿原酸的稳定性研究

用紫外分光光度计测定清开灵注射液的吸收度。采用初均速法研究了其中主要成分黄芩甙和绿原酸的含量变化。将实验数据输入计算机处理，预测出该制剂中黄芩甙和绿原酸的稳定性。     

清开灵注射液配伍注射用头孢西丁钠的稳定性研究

目的研究清开灵注射液与注射用头孢西丁钠配伍的稳定性。方法在模拟临床用药浓度条件下,考察清开灵注射液与注射用头孢西丁钠配伍后4 h内溶液的外观、pH值、不溶性微粒的变化,并采用高效液相色谱法测定配伍液中黄芩苷和头孢西丁。结果 4 h内配伍液的外观、pH值无明显改变。随着时间的延长,配伍液中10μm、10μm以上的不溶性微粒数增多,1 h后超过《中国药典》2010年版标准。黄芩苷和头孢西丁的质量浓度均逐渐降低。结论清开灵注射液与注射用头孢西丁钠配伍后4 h内不稳定,不建议配伍使用。     

清开灵注射液中黄芩苷在大鼠体内代谢动力学的研究

目的：研究清开灵注射液中黄芩苷在大鼠体内的代谢动力学,为探索清开灵注射液的体内效应物质基础提供依据。方法：大鼠尾静脉注射清开灵粉针剂后,于不同时间点取血、肝、肺组织,采用高效液相质谱联用法测定样品中黄芩苷含量,并用3P87拟合求算药代动力学参数。结果：静脉给药后,黄芩苷在大鼠体内符合二室模型。45 min时肝组织中分布达峰值,接着肝中浓度急剧下降,120 min后开始缓慢回升,呈现双峰现象。肺组织中黄芩苷浓度远高于肝组织中浓度,且消除较肝脏慢,但达峰时间同肝脏。结论：静注清开灵后,黄芩苷迅速分布至效应器官肺、肝中,黄芩苷为清开灵注射液的肝肺效应物质基础之一。黄芩苷在大鼠体内可能存在一定程度的肝肠循环。     

清开灵滴丸质量控制方法的优化研究

目的优化并完善清开灵滴丸的质量控制方法。方法采用高效液相色谱法对清开灵滴丸中的黄芩苷进行鉴别;采用薄层色谱法对清开灵滴丸中金银花及其所含绿原酸、栀子所含栀子苷进行鉴别。采用高效液相色谱法-蒸发光检测器同时测定清开灵滴丸中胆酸和猪去氧胆酸的含量,色谱柱为Phenomenex Gemini 110 C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.1%甲酸(68:17:15),流速为1.0 mL·min^-1。采用高效液相色谱法测定清开灵滴丸中扼子苷的含量,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为乙腈-0.05%磷酸(10:90),流速为1.0 mL·min^-1;检测波长为238 nm。采用高效液相色谱法测定清开灵滴丸中黄芩苷的含量,色谱柱为同栀子苷含量测定;流动相为甲醇-水-鱗酸(47:53:0.2),流速为1.0 mL·min^-1;检测波长为Z75 nmD结果薄层色谱斑点清晰,重现性好。猪去氧胆酸、胆酸、栀子苷和黄芩苷进样量分别在0.5050?6.312μg、0.515?6.440μg、0.02912?0.5824μg和0.1092?1.092μg内与冷面积(或峰面积对数)呈良好线性关系,平均回收率分别为101.5%、101.6%、98.61%和99.77%,RSD分别为1.7%、1.5%、1.42%和0.79%。结论提高后的质量标准分析方法简便、快速、准确且毒性较小,能更全面有效控制清开灵滴丸的质量。     

复方清开灵注射液的效应物质探索

目的:以黄芩归经为指导,探索清开灵注射液(QKL)的效应物质.方法:取大鼠,给药后于不同时间点处死,取脑、肺、肝.另取大鼠,分为正常组和缺血再灌注组,各组大鼠按采样点随机分为5组,每组5只.正常组大鼠经尾静脉给予800 mg· kg-1QKL.脑缺血再灌注组采用改良的腔内线拴法通过阻闭大脑中动脉120 min后再灌注120 min复制局灶性脑缺血-再灌注病理模型,并于恢复再灌注120 min时给予800 mg· kg- QKL.给药后于不同时间点处死,取脑、肺、肝.HPLC-MS 法测定黄芩苷浓度.结果:正常大鼠注射清开灵后,大量黄芩苷很快分布至肺、肝中,脑中分布较少.脑缺血-再灌注大鼠脑中黄芩苷量较正常组明显升高.结论:黄芩苷为清开灵治疗肝、肺、脑缺血疾病的效应物质之一;以中药归经为指导,进行复方效应物质探索具有可行性.     

黄芩甙及其在清开灵注射液中的药代动力学研究

采用ＨＰＬＣ方法测定了家兔血浆中黄芩甙的浓度。结果表明黄芩甙４０ｍｇ／ｋｇ静脉给药后在兔体内符合三室开放模型。给与清开灵注射液后，黄芩甙的血药浓度经计算机自动拟合符合二室模型，黄芩甙单用和在复方中使用所发生的房室模型的转变认为是由于清开灵注射液中栀子、胆酸影响了黄芩甙的体内过程，但在两种条件下的统计矩参数无明显变化。     

Pharmacokinetic Study of Baicalein and Its Major Metabolites after iv Administration in Dogs

Objective To develop and validate a simple,rapid,sensitive,and reproducible HPLC method for simultaneous determination of baicalein and its metabolite baicalin in dog plasma and for the subsequent pharmacokinetic study after iv administration to dogs.Methods An accurate and reproducible HPLC-UV method was developed and validated for simultaneous determination of baicalein and baicalin in dog plasma,using luteolin as internal standard.The analytes were separated by an Agilent Zorbax SB-C18 column(250 mm × 4.6 mm,5 μm) and the column temperature was maintained at 40 ℃.The mobile phase was a binary mixture of acetonitrile and water(27:73) ,containing 0.05% phosphoric acid in water,with a flow rate of 1.0 mL/min.The UV detector was set at 276 nm.Results Linear relationships were validated over the range of 0.05-25 μg/mL for baicalein and 0.05-20 μg/mL for baicalin.The intra-and inter-day precision values for all samples were within 8.0%,using relative standard deviation.This method was successfully applied to the pharmacokinetic studies in dogs after iv administration of baicalein.Baicalein was converted to baicalin quickly.Cmax values were 21.13 μg/mL at 0.05 h for baicalein and 1.57 μg/mL at 0.5 h for baicalin,areas under the plasma concentration-time curve were 4.97 h·μg/mL for baicalein and 0.63 h·μg/mL for baicalin,and the elimination half-life is 0.50 h for baicalein and 0.75 h for baicalin,respectively.Conclusion The method is able and sufficient to be used in drug metabolism and pharmacokinetic studies of baicalein.     

Comparative pharmacokinetics of baicalin and geniposide in juvenile and adult rats after oral administration of Qingkailing Granules

Objective: To explore the effect of age on Qingkailing Granules disposition by comparing the pharmacokinetics of geniposide and baicalin in juvenile and adult rats. Methods: A simple and rapid LC-MS/MS method was developed and validated to simultaneously determine geniposide and baicalin in rat plasma after a simple protein precipitation. The analytes were separated on an Agilent ZORBAX Extend-C18 column. The mobile phase consisted of acetonitrile and water with 0.1% (volume percent) formic acid at a flow rate of 0.6 mL/min. The ionization was conducted using an ESI source in negative ion mode. Multiple reaction monitoring was used for quantification at transitions of m/z 445.0 → m/z 268.9 for baicalin, m/z 433.2 → m/z 225.0 for geniposide, m/z 431.0 → m/z 341.0 for vitexin (IS). Juvenile and adult rats were administrated Qingkailing Granules (3 g/kg) orally. Plasma concentrations of baicalin and geniposide were determined by LC-MS/MS. Results: The linear ranges of the analytes were 1–1000 ng/mL for baicalin and 2–2000 ng/mL for geniposide. The method was successfully applied to compare the pharmacokinetics of the analytes between juvenile and adult rats after oral administration of Qingkailing Granules. AUC was bigger in adult rats, while t1/2 was longer in juvenile rats. Conclusion: These results suggested that the absorption and elimination of baicalin and geniposide in juvenile rats was lower than that in adult rats. Additional attention should be paid to the pharmacokinetic difference when Qingkailing Granules were used in children.