肝细胞再生调控研究的现状与进展

肝脏是机体重要的器官之一，至少承担着5000种以上的生理与生化功能。最让人吃惊的是人和动物肝脏都具有极强再生能力。肝细胞在正常情况下很少分裂，但在肝损伤（外科切除、化学性或病毒性损伤）时会迅速表现出强大的增殖和自我调控能力。近年来在肝部分切除或化学性损伤动物模型中对于肝脏生长发育的调控机制进行了大量的研究，尤其是转基因和基因敲除小鼠动物模型的应用使肝再生的分子生物学研究取得突破性进展。     

人GM—CSF基因转移表达及抑制乙肝病毒的实验研究

为了探讨重组腺病毒为载体的人GM—CSF基囤转移表达及对HBV复制的影响，将携带人GM—CSF基因的重组腺病毒感染22．15HepG2细胞，观察了GM—CSF基因转染前后2.2.15 HepG2细胞上清中HBV—M的变化。     

黄芩苷对小鼠巨噬细胞CD36表达及肿瘤坏死因子-α分泌的影响

[目的]观察黄芩苷对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠巨噬细胞CD36表达及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的影响.[方法]分别用LPS(终浓度0.1μg/mL)或LPS加黄芩苷(终浓度分别为50、100 μmol/L)处理生长良好的小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用实时荧光定量PCR法和流式细胞术检测黄芩苷对巨噬细胞CD36分子表达的影响,然后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中TNF-α含量变化.[结果]LPS刺激可以诱导巨噬细胞CD36表达升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);不同浓度黄芩苷预处理组可显著抑制LPS诱导的CD36基因转录和蛋白表达,与LPS组比较差异有统计学意义(P＜0.01);黄芩苷还可显著减少巨噬细胞炎症因子TNF-α的分泌(P＜0.05).[结论]黄芩苷可通过抑制CD36表达,下调LPS诱导的巨噬细胞炎症因子TNF-α的生成从而发挥抗炎作用.     

细胞因子对女性生殖轴调控作用研究现状

女性正常生殖功能依赖于下丘脑 -垂体 -卵巢轴的相互作用 ,其中性甾体激素和促性腺激素释放激素 (ＧｎＲＨ)多年来一直被认为是主要的调节因子 ,通过反馈作用调节下丘脑 -垂体 -卵巢轴的功能。经典的调节形式如下图 1。图 1　经典的调节形式　　近 10年来 ,随着研究的深入和方法学的进步 ,对参与下丘脑 -腺垂体 -卵巢轴调控的其他因素及机理逐渐引起人们的极大兴趣 ,成为生殖内分泌学的热点。本文就参与下丘脑 -腺垂体 -卵巢轴调节的细胞因子的作用机理研究现状作以综述。通常认为 ,细胞因子是介导免疫系统的 ,而不属于神经肽家族。越来越多…     

放射诱导经Egr-1启动子调控的腺病毒介导CDglyTK基因的肿瘤靶向表达

目的：构建由Egr-1基因启动子驱动CDglyTK基因表达的腺病毒载体,通过放射诱导调控CDglyTK基因的肿瘤靶向表达,用于肝癌的基因－放射治疗,方法：利用细菌内高效同源重组法,制备腺病毒载体AdEger-CD/TK.MM45T.Li肝癌细胞感染AdEger-CD/TK后,体外观察γ射线照射诱导CDglyTK基因表达及在前药5－FC、GCV存在的条件下钉对存活率的变化。利用荷瘤小鼠肝癌模型观察不同处理的抑瘤效应。结果：体外实验结果显示,γ射线照射可诱导CDglyTK基因在MM45T.Li肿瘤细胞内的表达,并呈剂量依赖性;显著增强细胞对前药5－FC、GCV的敏感性（P＜0．01）;当5－FC和GCV同时存在时具有明显的协同效应。体内抗肿瘤实验结果提示,与单纯肿瘤局部照射（TLI）、瘤内注射AdEger-CD/TK＋腹腔注射5－FC＋GCVD土产且相比,瘤内注射AdEger-CD/TK＋腹腔注射5－FC＋GCV合并TLI组的抗瘤效果最好（P＜0．01）,并可使30％的肿瘤完全消退,且未见全身毒性反应的增加,结论：利用放射调控CDglyTK基因的肿瘤靶向表达,是一种安全、有效的肿瘤基因治疗新策略。     

SCF/c-kit系统对生精细胞发育的调控作用

干细胞因子及其受体原癌基因蛋白质(c-kit)之间相互作用对原始生殖细胞迁徙、存活和粘连及其他阶段生殖细胞增殖、分化、减数分裂和细胞凋亡的重要旁分泌调控作用,近年来一直是生殖医学研究的热点.本文作者就SCF/c-kit系统对生精细胞发育的调控作用、机制和影响因素的研究现状作以简要的综述.     

青藤碱抗炎作用机理研究

【目的】通过观察青藤碱对人环氧化酶(COX)、白介素-1β(IL-1β)基因表达的影响,探讨青藤碱的抗炎作用机理。【方法】分离正常人外周血单核细胞(PBMC),体外加药培养,提取细胞总核糖核酸(RNA),采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察青藤碱对脂多糖(LPS)刺激和非LPS刺激状态下环氧化酶及IL-1β基因表达的影响。【结果】青藤碱对COX-1基因表达无明显影响,对COX-2基因表达仅有轻微的抑制作用,而对IL-1β基因表达的抑制作用较强。【结论】青藤碱可能是通过抑制炎症性细胞因子的产生而发挥其抗炎作用。     

人类GM-CSF受体生物学特性的研究

为了探讨人类ＧＭＣＳＦ受体（ＧＭＲ）的功能特性,将编码人ＧＭＲα和βｃ亚单位的ｃＤＮＡ转染到无ＧＭＲ表达的小鼠前Ｂ细胞系ＢａＦ３中。阳性转染子功能检测表明,表达ＧＭＲα的ＢａＦ３克隆能与配体低亲和力结合（Ｋｄ＝３．４ｎｍｏｌ／Ｌ）,并仅在高浓度配体诱导后出现增殖反应;而共表达ＧＭ－Ｒα／β的ＢａＦ３克隆则能以高亲和力方式与配体结合（Ｋｄ＝９９ｐｍｏｌ／Ｌ）,并表现出配体依赖性细胞增殖;增殖信号的传导与配体通过诱导βｃ磷酸化而活化胞浆Ｊａｋ２、Ｓｈｃ及Ｓｈｃ相关蛋白Ｐ１４５（ＳＨＩＰ）有关。提示这些信号分子可能在连结造血生长因子受体与细胞有丝分裂及其它反应的“激酶瀑布”中发挥着关键作用。     

热毒清的体外抗炎作用机制研究

【目的】探讨中药热毒清注射液抗炎保护功效的分子机制。【方法】体外扩增互补脱氧核糖核酸(cDNA)探针,利用原位杂交检测体外培养的人急性早幼粒白血病细胞系(HL-60)在大肠杆菌内毒素(LPS)和热毒清分时相作用下,肿瘤坏死因子-α转换酶(tumour necrosis factor-α converting enzyme,TACE)金属蛋白酶区和解整合素区基因转录水平。【结果】HL-60细胞在LPS刺激0~12 h内金属蛋白酶区转录活性增加16.1%,解整合素区转录活性增加76.8%;热毒清能抑制LPS诱导的TACE mRNA的增加(P<0.01)。【结论】热毒清注射液的抗炎作用可能与抑制TACE转录活性有关。     

用寡核苷酸芯片研究血虚小鼠造血相关细胞因子基因表达谱

目的 应用细胞因子寡核苷酸表达谱芯片检测血虚小鼠不同脏器组织内造血相关细胞因子差异表达情况，寻找差异表达基因，为血虚证治疗药物机制研究及治疗药物筛选奠定基础。方法 采用5．5Gy^60Co-γ射线照射Balb／c小鼠，制备血虚模型。在不同时间点提取正常和血虚小鼠不同组织总RNA，反转录成不同荧光标记的cDNA探针，与表达谱芯片进行杂交，对扫描数据进行分析获得血虚小鼠造血相关细胞因子基因的差异表达情况。结果 在各组织中共发现21个差异表达的基因。这些基因的功能大致分为3类：促细胞生长或增殖，免疫调节，诱导血细胞形成或促造血祖细胞形成集落。结论 照射后上述细胞因子基因的下调，使机体的造血功能下降，造成血虚，证明细胞因子间形成造血调节网络，整体调节机体造血。这与中医的全局理论是一致的。实验证明应用芯片技术，从分子水平研究血虚形成的机制是可行的，可为进一步的血虚证治疗药物的筛选提供依据。     

反义核酸的研究及其应用

对反义核酸的概念、作用机制及反义核酸类药物必需符合的条件等有关分子生物学研究进展进行了综述。介绍了几种人工合成的反义核酸及其应用前景,并就研究中需要解决的问题做了探讨。     

生长素基因表达的调控

生长素基因表达的调控儿科学院儿保科王松艳综述黎海芪审校中图分类号Ｒ３９４１生长激素簇的组成与表达生长激素基因簇位于１７染色体长臂上（１７８２２－Ｈ），长５０ｋｂ，由５个基因组成［１，２］，即垂体生长激素结构基因（ｈＧＨ－Ｎ），绒毛膜催乳激素相关基因（...     

p53及其相关因素研究的进展

大约 5 0 %的肿瘤有 ｐ5 3基因缺失和 /或突变 ,可见它和癌症的关系非常密切 ,目前研究较多的几种 ｐ5 3相关因素与ｐ5 3存在着复杂的制约关系 ,这种制约关系在肿瘤研究中越来越受到重视。1　ｐ5 3基因突变与 ｐ5 3启动子甲基化ｐ5 3基因突变常为一个或多个点的突变 ,如在乳腺癌中 ,多数是第 5、6外显子的突变。Ｔｕｒｐｉｎ等[1] 发现 ,应激诱导的鼠ＴＳＧ10 1异常剪接与高 ｐ5 3突变率及高组织学分级呈正相关。Ｐｈｉｌｌｉｐｓ等[2 ] 报道 ,ＢＲＣＡ - 1相关性乳癌比散发性乳癌的ｐ5 3突变率高。Ｃｒｅｍｏｕｘ等[3 ] 调查 ,高ｐ5 3突变…     

分子生物学与营养研究

20世纪 50年代ＪＤＷａｔｓｏｎ和ＦＣｒｉｃｋ关于ＤＮＡ双螺旋模板学说的提出 ,60年代ＪＭｏｎａｄ和ＦＪａｃｏｄ关于基因调控操纵子学说的出现 ,以及 70年代初期ＤＮＡ限制性内切酶的发现和一整套ＤＮＡ体外重组技术———基因工程技术的发展 ,推动了分子生物学的迅猛发展。它使整个生命科学的研究上升到一个全新的阶段。分子微生物学、分子免疫学、分子生理学、分子病理学、分子药理学、分子心脏病学、分子神经病学、分子内分泌学 ,以及分子营养学等边缘学科应运而生。分子营养学可以理解为 :从分子水平研究营养学的一门学科。当今分子…     

含dMAR真核表达载体的构建及影响EGFP表达的研究

目的　研究dMAR对EGFP基因表达的调控作用。方法　用Kpn -I酶切pGFP/MAR,回收含MAR下游850bp的片段dMAR,与Kpn I酶切回收的pEGFP-C1 载体连接,Hind Ⅲ酶切鉴定方向,构建正向、反向连接的真核表达载体pEGFP/dMAR′和pEGFP/dMAR。将该表达载体转染COS7细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达并采用流式细胞术进行荧光定量。结果　pEGFP- C1,pEGFP/dMAR′和pEGFP/dMAR转染后48 h EGFP的表达量分别为45.1%、40.5%和11.3%。结论　pEGFP/dMAR显著抑制了EGFP的表达,pEGFP/dMAR′的增强表达作用不明显。     

反义寡核苷酸靶向肝细胞体外抗乙型肝炎病毒的实验研究

作者在对２．２．１５细胞中乙型肝炎病毒基因测序的基础上，设计合成了１段针对Ｕ５样序列区的１６－聚硫代磷酸反义寡核苷酸，并将其与直导向性载体－半乳糖化白蛋白和半乳糖化多聚赖氨酸连接，在２．２．１５细胞中观察了它们的抗病毒作用。     

主动脉瓣钙化患者基因表达与microRNA调控研究

目的 通过microRNA(miRNA)-基因表达的联合分析,寻找主动脉瓣钙化(calcific aortic valve disease,CAVD)的关键基因、分子通路和miRNA,寻找潜在的疾病发生机制.方法 本研究在GEO数据库上挖掘了CAVD相关的基因表达及miR-NA数据,筛选差异基因与miRNA.对差异表达...     

补肾强督治偻方对脂多糖刺激的小鼠RAW264.7细胞炎性细胞因子表达的影响

【目的】研究补肾强督治偻方及其不同萃取成分对脂多糖(LPS)诱导的细胞炎性模型的细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨其主要的抗炎有效成分。【方法】采用系统溶剂法萃取补肾强督治偻方各成分,体外培养RAW264.7细胞,以LPS(1μg/m L)诱导炎症模型,补肾强督治偻方总方及不同溶剂萃取成分干预24 h,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测细胞TNF-α、IL-1βm RNA的表达。【结果】LPS刺激的RAW264.7细胞的炎症细胞因子TNF-α、IL-1βm RNA表达均显著升高(P<0.05),水与正丁醇萃取的补肾强督治偻方成分均可显著抑制RAW264.7巨噬细胞炎症模型TNF-α、IL-1βm RNA的表达(P<0.05),且呈一定的剂量依赖关系。【结论】水提取与正丁醇提取的补肾强督治偻方成分可能是其主要的抗炎有效成分部位,抑制炎症细胞因子基因表达可能是补肾强督治偻方治疗强直性脊柱炎的机制之一。     

Survivin在胃癌组织中的表达及其与caspase-3、p53基因表达相关性的初步研究

目的　研究Survivin在胃癌组织中的表达及其与caspase 3、p5 3基因表达的相关性。方法　收集 32例胃癌组织标本及相应的癌旁组织 ,利用免疫组织化学法检测Survivin、caspase 3、p5 3基因的表达。结果　 6 2 5 % (2 0例 )的胃癌组织表达Survivin蛋白 ,而癌旁组织内无阳性表达。Survivin表达与胃癌组织的大小、分化程度、临床分期及淋巴结转移无明显相关关系。Caspase 3、p5 3蛋白与Survivin表达显著相关。结论　Survivin在胃癌组织中选择性表达 ,提示该基因在胃癌的发生发展中起重要作用。Caspase 3的失表达、p5 3的突变与Survivin基因的表达可能在胃癌发生中起协同作用。