聚合酶链反应技术用于缺失型α—地中海贫血的分子筛查和产前诊断

用血液学方法筛查育龄夫妇８４３２人，检出α－地中海贫血（α－地贫）６４６例，从中随机取出典型阳性样本１００例，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）直接分析法进行基因诊断，结果９６例“标准型”α－地贫和３例血红蛋白（Ｈｂ）Ｈ病的ＤＮＡ样品均可检测到（－－ＳＥＡＩ）突变，另１例α－地贫复合ＨｂＱ样品未检测到该突变。此外，采用本法完成了７个重症α－地贫高风险胎儿的产前诊断。     

GaP—PCR作为临床一线α—地中海贫血携带者筛查技术的应用评价

目的：评价检测中国人3种常见的缺失型α－地中海贫血（地贫）基因的gap-PCR作为临床一线α地喧者筛查技术的可行性。方法：以双盲试验对随机抽取的382份血样同时采用gap-PCR分子筛查技术和血液学分析法分别检测α－地贫基因型和α－地贫贱有型，并以Southern blot分析法作平行对照分析。结果：在382份样品中，用gap-PCR法检出3种常见的α－地贫基因－SEA，－α3．7和－α42分别为21，7和3例，据此该市人群中α－地贫的基因携带率为8．123，在这些阳性样品中，有7例和3例分别检出自血液学表型正常（7／10）和缺铁性贫血（3／10）样品，这些结果与Southern blot分析完全一致，血液学表型筛查法仅检出其中的21例（除2例－α地贫表型阳性未定型外），该法的假阴性率为32．3％。因血液学表型筛查漏检了7例静止型和3例轻型α－地贫样品，故此法总的漏检率为2．62％，结论：与血液学筛查法比较，gap-PCR分子筛查技术更具有特异性和可靠性。是临床上进行α－地贫基因携带者（尤其是静止型α－地贫）筛查的可选用的一线技术。     

人肺癌、胃癌及肝癌c－Ki－ras第12密码子点突变的研究

以３０例肺癌、４０例胃癌及２２例肝癌石蜡包埋组织提取的ＤＮＡ为模板，经两轮ＰＣＲ扩增一限制性内切酶酶切，用限制性酶切片段长度多态性方法（ＲＦＬＰ）检测ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１２密码子点突变。结果发现，肺癌组织中２０％（６／３０）有突变，其中４０％（４／１０）鳞癌和２０％（２／１０）腺癌有突变，小细胞肺癌（０／１０）无突变；４０例胃癌中仅１例（２．５％）有突变，２２例肝癌无１例突变。ＰＣＲ－ＲＦＬＰ是一种很敏感及快速检测基因突变的方法。     

新型重组人肿瘤坏死因子药代动力学的实验方法

目的 为探讨新型重组人肿瘤坏死因子（nrTNF α）药代动力学而建立生物样品中nrhTNFα的检测方法。方法 （1）方法Ⅰ（RA）：动物肌注^125 Ⅰ标记的nrhTNFα后，测定各生物样品中的总放射活性；（2）方法Ⅱ（HPLC－RA）；上述生物样品无经HPLC分离后，收集并测定其中^125Ⅰ－nrhTNFα部分的放射活性；（3）方法 ⅢELISA法。结果 RA，HPLC－RA法检测的nrhTNFα质量浓度与放射性呈直线相关（RA，r=0.999HPLC－RA,r=0.999)。ELISA法证明nrhTNFα的酶联免疫检测药盒适用于nrhTNFα的检测，nrhTNFα的标准曲线与nrhTNFα的标准曲线显正相关，r=0.994,这一检测系统与其他细胞因子包括IFNα，TNFβ，IL－2和IL－6无交叉反应。结论 RA，HPLC－RA和ELISA法均可作为nrhTNFα的药代动力学实验方法。     

用PCR方法对6例α－地贫家系进行产前检测

用ＰＣＲ方法检测东南亚缺失型α－地贫１－－ＳＥＡ／αα基因的方法对６例α－地贫家系进行胎儿产前检测，结果：１例为Ｂａｒｔ水肿胎儿（死胎），１例为东南亚缺失型α－地贫１基因携带者，其余４例为α－地贫２携带者或正常胎儿。该法简洁、易行、准确性高，为α－地贫早期胎儿诊断及α基因的检测提供一种新方法。     

成都地区β地中海贫血基因突变型及产前基因诊断初步分析

我们通过ＤＮＡ扩增和等位特异寡核苷酸探针杂交，检测了成都地区可疑β地中海贫血（简称地贫）患者３３个家系，９５人。共检出５８例、７３条染色体的β珠蛋白基因突变。其中，Ｃｏｄｏｎ１７（Ａ→Ｔ）突变２８例（３８．４％）ｌｃＯｄｏｎ４１－４２（－ＴＴＣＴ）突变２１例（２８．８％）；ＩＶＳ－Ⅱ－６５４（Ｃ→Ｔ）突变１４例（１９．０％）；ｎｔ－２８（Ａ→Ｇ）和ｎｔ－２９（Ａ→Ｇ）突变分别是６例（８．２％）和４例（５．５％）。在测知双亲β地贫突变类型的基础上，对两例β地贫风险胎儿采羊水细胞分离ＤＮＡ，用相同方法进行了产前基因诊断，获满意结果。     

PCR-ASO技术对苯丙氨酸羟化酶基因外显子突变的分析

目的：检测苯丙酮尿症（ＰＫＵ）可疑患者的苯丙氨酸羟化酶（ＰＡＨ）基因外显子７、１１、１２（Ｅ７、１１、１２）区域的点突变。方法：应用ＰＣＲ方法对６例可疑ＰＫＵ患者的ＰＡＨ基因Ｅ７、１１、１２区域进行扩增，再用γ－３２Ｐ－ＡＴＰ标记的寡核苷酸探针（ＡＳＯ）杂交技术对其进行分析。结果：其中３例仅与含有Ｒ２４３Ｑ突变的异常探针杂交，不与正常探针杂交，说明其为Ｒ２４３Ｑ突变纯合子。结论：ＰＣＲ－ＡＳＯ探针可以特异地与ＰＡＨ突变位点杂交，是诊断ＰＫＵ的一种准确、可行的方法。     

慢性乙型肝炎患者血清TNF_α及IL-6水平与HBV前C区基因变异关系的研究

目的：探讨细胞因子（ＴＮＦα及ＩＬ－６）水平与ＨＢＶ前Ｃ区变异之间的关系。方法：应用ＥＬＩＳＡ法及３′－碱基特异性聚合酶链反应法对４３例ＨＢＶＤＮＡ阳性慢性乙型肝炎患者进行血清ＴＮＦα、ＩＬ－６含量及ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变的检测。结果：ＨＢＶ前Ｃ区突变株，检出率为４８．８％（２１／４３），突变株感染组ＴＮＦα、ＩＬ－６水平明显高于野生株感染组。结论：慢性乙型肝炎患者血清ＴＮＦα及ＩＬ－６水平与ＨＢＶ前Ｃ区基因变异有密切关系，机体免疫压力的增高可能是导致ＨＢＶ前Ｃ区变异的重要原因之一     

一种罕见α-地贫基因突变HbH病（--SEA/α*92A>Gα）的家系分析与基因诊断

目的：鉴定中国南方人群中的一种罕见α-地贫基因突变,以及此突变所致HbH病的家系分析和基因诊断。方法采集家系成员外周全血,进行血液学表型分析和地贫基因常规检测,对常规检测基因型与表型不符的标本进一步DNA测序分析。结果该家系中检出罕见α-地贫基因*92A>G突变,确认先证者及先证者姐姐基因型为--SEA/α*92A>Gα的非缺失型HbH病,先证者哥哥基因型为-α3.7/α*92A>Gα的标准型α-地贫、父亲基因型为αα/α*92A>Gα的静止型α-地贫。结论首次鉴定报道了中国南方人群中罕见α-地贫基因*92A>G突变,以及携带此突变的静止型α-地贫、复合此突变非缺失型HbH病的基本表型特征,丰富了中国人群α-地贫基因突变谱,有助于指导α-地贫的人群筛查、临床基因诊断和遗传咨询。     

膀胱移行细胞癌ras,p53基因点突变检测及其临床病理学意义

为探讨基因的改变在膀胱移行细胞癌发生过程中的意义，应用聚合酶链反应——限制性片段长度多肽性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）法，检测５０例膀胱移行细胞癌ｒａｓ、ｐ５３基因突变。结果显示：正常膀胱粘膜未检测到基因突变，膀胱移行细胞癌Ｈａ－ｒａｓ基因第１２位密码子突变为１６例（３２％），ｐ５３基因突变为９例（１８％），均系２４８位点突变。Ｈａ－ｒａｓ－１２位点突变率随病理分级增高而增高，与膀胱移行细胞癌分级显著相关（Ｐ＜０．０５）。ｒａｓ基因、ｐ５３基因突变患者死亡率高于无突变患者。４例膀胱移行细胞癌存在ｒａｓ基因及ｐ５３基因共同突变。