江苏省部分地区淡水产品中弧菌菌群及其致病性分析

目的 了解江苏省市场上淡水产品中弧菌的菌群组成及其致病性。方法 对采集的江苏省部分地区淡水产品样本经TCBS培养基分离、纯化弧菌分离株,应用特异性基因tlh、HSP60以及16S rDNA PCR方法鉴定;并检测致病基因、溶血性和引起小鼠肠积水能力分析其致病性。结果 江苏省部分地区55份淡水产品中分离出细菌分离株256株,分别是副溶血弧菌占74.55%、溶藻弧菌占85.45%、哈维氏弧菌占9.1%、河口弧菌占3.6%、麦奇尼科夫弧菌占5.5%、天蓝色弧菌占3.6%株、产钠弧菌占1.8%和重氮养弧菌占1.8%。所有分离株均未检出致病相关基因tdh、trh;15.02%分离株有溶血性(KP⁺);大部分KP⁺分离株能引起小鼠肠积水。结论 江苏省淡水产品中弧菌菌群呈现多样性分布,副溶血弧菌和溶藻弧菌是主要菌群;不同地区和不同样品中的弧菌菌群和检出率有较大差异,沿海地区的检出率明显高于内陆地区,鱼、虾中弧菌的检出率和弧菌种类明显高于贝、蟹。致病性分析说明小部分分离菌株可能具有潜在的致病性     

济宁市淡水产品养殖链条中致病性弧菌分布调查

目的调查济宁市淡水产品养殖链条中致病性弧菌分布情况。方法 2016-2018年采集济宁市淡水产品及养殖链条环境样品488份,依据GB4789.7-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》、《国家食品微生物风险监测工作手册》和《淡水动物性水产品养殖环节中常见弧菌专项监测工作手册》等进行霍乱弧菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌和河流弧菌的检测。结果济宁市淡水产品及养殖链条环境产品霍乱弧菌、副溶血性弧菌和创伤弧菌总检出率分别为23.98%(117/488)、14.96%(73/488)和0.20%(1/488),未检出溶藻弧菌和河流弧菌;养殖链条中的鱼类、螃蟹类、环境(饲料、水藻、鱼苗、粪便、手)、水体、水底沉积物弧菌检出率分别为52.08%(75/144)、13.64%(6/44)、29.17%(7/24)、43.29%(71/164)和28.57%(32/112)。霍乱弧菌在鱼类样品中的检出率较高,为37.50%(54/144),117株霍乱弧菌血清型鉴定均为非O1/非O139型霍乱弧菌,均未检出ctxAB毒力基因。副溶血性弧菌在水体中的检出率较高,为21.95%(36/164),对73份样品分离的副溶血性弧菌进行tlh基因、tdh和trh毒力基因检测,tlh+tdh-trh+和tlh+tdh-trh-携带率较高,分别为46.58(34/73)、42.47%(31/73)。结论济宁市淡水产品养殖链条中致病性弧菌主要分布在水体及鱼类中,且均为非O1/非O139型霍乱弧菌,致病风险较低;副溶血性弧菌trh毒力基因携带率较高,有潜在的致病风险。     

电泳和免疫印迹分析副溶血弧菌和溶藻弧菌主要外膜蛋白和多糖抗原

目的　考察副溶血弧菌和溶藻弧菌的主要外膜蛋白 (MOMP)及其多糖抗原 (PSA)在不同菌株间的结构特征及其免疫学特性 ,从而进一步揭示其共同的保护性抗原。方法　一步超速离心法和蛋白酶K消化法分别制备 10株副溶血弧菌和7株溶藻弧菌的MOMP和PSA ,SDS -PAGE和免疫印迹分析其结构特点。结果　两种细菌的MOMP和PSA的结构和形态菌株间差别明显 ,但也有MOMP一致的菌株 ,免疫印迹显示 ,全部的 10株副溶血弧菌和 5株溶藻弧菌都具有分子量约为36kD的主要外膜蛋白 ,他们能够被副溶血弧菌全菌抗血清所识别 ,是两种细菌共同的具有强免疫原性的主要抗原。PSA分析未见经典LPS的O侧链结构。多糖成份在菌株间的交叉反应有限 ,可能受弧菌自身表面抗原复杂性的影响 ,凝集反应结果与免疫印迹试验结果不完全一致。此外 ,副溶血弧菌与溶藻弧菌的PSA也会产生免疫学上的交叉反应。结论　 36kD的MOMP是广泛存在于副溶血弧菌和溶藻弧菌的高丰度蛋白 ;与主要外膜蛋白相比 ,多糖抗原在菌株间具有更大的异质性 ;副溶血弧菌和溶藻弧菌的MOMP可能比PSA更具研制疫苗潜力。     

急性致病性新弧菌腹泻的临床及试验研究

目的探讨致病性新弧菌腹泻的临床特征及新弧菌的致病力。方法对47株非 O1群霍乱弧菌、13株拟态弧菌、19株河孤菌、4株霍利斯弧菌进行生长特性、生化反应和药物敏感试验,并对部分菌株进行豚鼠角膜侵袭力、ST 和 LT 肠毒素以及小白鼠毒力试验。结果除部分菌株对青霉素和氨苄青霉素耐药外,均对常用抗菌药物敏感。发病多见于青壮年,7～9月发病,急性起病、多有发热、腹痛,常致脱水。豚鼠角膜试验和 ST 肠毒素试验阴性,LT 肠毒素试验河弧菌和拟态弧菌阳性,均能致小白鼠死亡。结论致病性新弧菌分布广、种类繁多、产毒力强、致病机理多样化、临床表现复杂、易致误诊漏诊。     

溶藻弧菌热休克蛋白70基因的克隆及序列分析

目的通过测定溶藻弧菌热休克蛋白70(HSP70)基因序列,结合GenBank登录的其他弧菌HSP70核苷酸序列,分析溶藻弧菌HSP70特点以及与其他弧菌HSP70之间的同源性。方法根据GenBank中同类蛋白序列设计特异PCR引物,首次从溶藻弧菌中扩增热休克蛋白70ORF全长基因片段,并对该片段进行克隆、测序和分析。结果扩增的溶藻弧菌HSP70ORF全长基因片段长1914bp,与已登录的其他弧菌的同源性在90.4%～96.2%之间,包含完整的HSP70ORF,编码637个氨基酸。与GenBank中其他弧菌HSP70的氨基酸序列比较,溶藻弧菌HSP70含有Dnak特征基序DLGTT-S-V(8-16残基);整个分子的保守性N端最高,到C端保守性降低。结论溶藻弧菌与哈维弧菌(Vibrioharveyi)热休克蛋白70有较高同源性,该热休克蛋白70属于Dnak类型。     

海洋致病菌致病机制及其感染的治疗研究进展

海洋致病菌多为广泛分布于海洋的革兰氏阴性菌,是造成开放性伤口继发性感染、食用海产品发生食物中毒的主要致病菌,如治疗不及时病死率较高。海洋致病菌主要有弧菌属的创伤弧菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌及铜绿假单胞菌等。创伤弧菌分布于（亚）热带气候水域,可通过生物分型法、传统培养法和PCR法分型鉴定;致病机制研究集中在黏附相关蛋白、细胞毒性、宿主防御、摄铁系统、分泌系统和毒力调控等方面;全身性感染或开放伤口感染,通常用强力霉素和第三代头孢菌素进行抗生素治疗。副溶血性弧菌在亚洲、欧洲、美洲分布广泛,通过PCR法进行分型鉴定;致病机制与创伤弧菌相似;可引起急性肠胃炎及其他组织病变,轻症感染补充水分即可,重症感染使用强力霉素和第三代头孢菌素治疗。霍乱弧菌分布广泛,夏季浓度较高,通过玻片凝集试验、PCR法进行分型鉴定;致病机制与创伤弧菌相似;可引发霍乱,通过补液或抗生素治疗。铜绿假单胞菌分布于海水表层,通过玻片凝集实验、抗菌谱等进行分型鉴定;致病机制与弧菌属不同;可感染身体各处,早期治疗应用抗生素,重症患者应选择广谱的强力抗菌药。     

徐州地区感染性腹泻病人中致病性弧菌的分布研究

目的了解徐州地区感染性腹泻中致病性弧菌的分布情况,掌握其流行规律,为致病性弧菌引起的感染性腹泻提供科学的控制和防治依据。方法用常规分离培养方法检测感染性腹泻粪便或肛拭子标本2674例。结果共检出致病性弧菌10个种类,518株,总检出率为19.37%。结论致病性弧菌是引起本地区感染性腹泻的主要病原菌之一,种类分布繁多。应加强对致病性弧菌的动态监测。     

溶藻弧菌热休克蛋白70基因真核表达载体的构建及鉴定

目的构建溶藻弧菌热休克蛋白70(HSP70)真核表达载体pcDNA3.1。方法提取溶藻弧菌基因组DNA,PCR扩增HSP70基因片段,克隆至TA载体,通过PCR、酶切及测序鉴定后,将HSP70基因片段用限制性内切酶切下,克隆至真核表达载体pcDNA3.1,构建pcDNA3.1重组质粒,通过PCR、酶切及序列分析对HSP70基因pcDNA3.1重组质粒进行鉴定。结果扩增出1 914bp的溶藻弧菌HSP70基因片段,并成功构建溶藻弧菌HSP70真核表达载体pcDNA3.1。结论成功构建了溶藻弧菌HSP70真核表达载体pcDNA3.1,为HSP70基因疫苗研制奠定了基础。     

创伤弧菌基因组学研究进展

创伤弧菌是人类三大致病弧菌之一,能够通过食源性传播或者伤口感染导致发病,近年来全球发病率逐步升高。随着新一代测序技术的发展,已有上百株创伤弧菌全基因组序列在国际公共数据库公布。这些数据为创伤弧菌基因组学研究提供了重要基础,并促进了对该病原菌遗传多样性、传播和致病机制的认识。本文从基因分型、种群结构和重要毒力因子3个方面对创伤弧菌基因组学研究进展进行归纳总结,以期为创伤弧菌感染、进化和防控研究提供借鉴。     

《食品中致病菌限量》（GB29921—2013）标准的制定目的

致病菌是常见的致病性微生物，能够引起人或动物疾病。食品中的致病菌主要有沙门氏菌、副溶血性弧菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。据统计，我国每年由食品中致病菌引起的食源性疾病报告病例数约占全部报告的40％至50％。     

青岛市售养殖海水虾中副溶血性弧菌的分离及耐药性分析

目的 对青岛市售养殖海水虾中副溶血性弧菌进行分离鉴定,并对分离菌株进行耐药性分析。方法 以常规培养法分离,全自动细菌鉴定仪进行鉴定,PCR扩增法检测毒力基因,K-B法进行药敏试验。结果 样品的副溶血性弧菌检出率为78.1% (50/64),所有菌株均不含tdh基因,其中3株菌含trh基因,所有菌株对头孢拉啶耐受,96%菌株对氨苄西林和阿莫西林耐受,部分菌株对头孢呋新钠、链霉素、四环素、土霉素和复方新诺明耐受,少量菌株出现耐受3类抗生素以上的多重耐药性。结论 青岛市售养殖海水虾中副溶血性弧菌存在较严重的污染和一定程度的耐药情况。     

创伤弧菌基于基因组学的毒力因子及耐药基因的研究进展

创伤弧菌是一种致命的机会致病菌,在目前食源性疾病中致死率最高。创伤弧菌主要通过摄入未煮熟的海产品以及破损皮肤接触海水引起感染,病情恶化后导致危及生命的败血症。基因组学测序技术的发展迅速,在美国国家生物技术信息中心（NCBI）数据库中已公布的创伤弧菌基因组草图序列285株,完成图序列24株。创伤弧菌基因组学的研究,不仅有利于精确分型、进化关系和致病机制的研究,还利于对毒力因子、耐药基因进行预测,在创伤弧菌引起的食物中毒后进行快速检测、流行病学调查和预防发挥重要作用。目前针对创伤弧菌耐药性分析的研究较少,本文从创伤弧菌的基因组学角度出发,对重要毒力因子、抗生素耐药情况、耐药机制及耐药基因予以概述。     

新的致病性弧菌与感染性腹泻

新的致病性弧菌与感染性腹泻解放军第一医院传染科（兰州，７３００３０）聂青和解放军第三Ｏ二医院五科（北京，１０００３９）张开瑞目前，新发现的引起人类疾病的弧菌日趋增多。Ｄａｖｉｄ１９８４年曾报道，弧菌属里２５种就有１０种可致病。对弧菌属的研究进展较快，...     

细菌感染性腹泻2380例临床及病原学分析

目的 了解细菌感染性腹泻的临床及病原学特点.方法 回顾性分析1998年至2007年复大学附属金山医院感染性腹泻患者2380例的临床及细菌学特点.计数资料行X~2检验.结果 10年间因腹泻就诊的20 169例患者中,2380例粪细菌培养阳性,包括副溶血弧菌感染2247例,占94.4%,志贺菌属感染99例,占4.2%,沙门菌属感染29例,占1.2%,溶藻弧菌感染3例,致病性大肠埃希菌感染2例.因腹泻就诊者在每年6至10月多见,副溶血弧菌感染主要表现为腹痛、腹泻、恶心、呕吐,可伴有脱水,志贺菌属感染主要表现为发热、腹痛、腹泻.结论 上海市金山区细菌感染性腹泻患者粪细菌培养阳性率不高,仍以副溶血弧菌、志贺菌属为主要致病菌.     

首次从北京市腹泻病人粪便中检出致病性弧菌

本文报告1986年夏季从北京市腹泻病例中首次检出致病性弧菌。经形态、生长表现和生物学性状检查,确定一株为弗尼斯弧菌,它具有与河弧菌极为相似的特性,主要通过对葡萄糖产酸产气加以区别。另一株为麦契尼可夫弧菌,它对氧化酶和硝酸盐还原反应均阴性。两菌都不产生肠毒素,豚鼠眼角膜试验阴性,但对乳鼠有较强的致死作用,并对L929小鼠成纤维细胞有明显的粘附表现。对常用的抗菌药物均较敏感。     

分子生物学技术在大肠杆菌O157∶H7检测中的应用

多数大肠杆菌 (Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ,Ｅ ｃｏｌｉ)是人和动物肠道的正常寄殖菌 ,但也有部分对人和动物有害 ,病原性大肠埃希氏菌是最常见的致病性革兰氏阴性杆菌 ,几乎可累及全身任何部位与器官。根据毒力因子、致病机制和临床症状等不同 ,主要分为肠致病性 (ＥＰＥ     

猪链球菌病

猪链球菌是一种常见的引起猪感染的病原体,遍及全世界。在所报道的分离中,最常见的致病类型为血型2型。迄今为止,这种病原体不仅引起猪感染,也引起人类感染。引起人类感染的临床类型多种多样,包括脑膜炎、败血症休克、关节炎、心内膜炎、肺炎等。为此,对猪链球菌的细菌学特征和致病性以及猪链球菌感染的流行病学特点、临床表现、诊断和治疗方法作如下简要的复习。1猪链球菌病的定义猪链球菌病是由猪链球菌(Streptococcus suis)侵入机体引起的人畜共患急性感染性疾病。猪链球菌是猪的一种常见和重要病原体,也是人类动物源性脑膜炎的常见病因…     

慢性外耳道炎患者分离溶藻弧菌的鉴定及生物学特性分析

目的探讨溶藻弧菌的鉴定方法和生物学特性,为溶藻弧菌感染的诊断提供依据。方法对1例慢性外耳道炎患者耳部脓液标本分离的病原菌通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)、API细菌生化反应鉴定卡、Vitek 2 Compact鉴定仪和16S rRNA基因测序进行鉴定,采用抗菌药物敏感性试验检测耐药表型。结果该菌株鉴定为溶藻弧菌,药敏试验显示其对哌拉西林、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、庆大霉素、阿米卡星、左氧氟沙星、环丙沙星和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑敏感,对氨苄西林耐药,与患者的临床诊断及疾病预后相符合。结论 MALDI-TOF MS和16S rRNA基因测序对溶藻弧菌的鉴定准确可靠,对溶藻弧菌感染诊断具有重要价值,可供临床参考。     

拟态弧菌肠炎ll例

拟态弧菌隶属于弧菌属 ,在沿海地区的海水、淡水及海产品中分布比较广泛 ,其毒素的致病力较强 ,但临床病例报道较少 ,我们在 2 0 0 0年 8月至 2 0 0 0年 10月期间肠道门诊5 35例急性腹泻患者的粪便中检出拟态弧菌感染 11例 ,现分析报道如下。临床资料一、一般资料11例中男 6例 ,女 5例 ,年龄 2 3～ 79岁 ,平均 39.7岁。均为散发病例 ,上海市常住人口 ,发病前 5ｄ无外地旅游史 ,均无明确生食海产品史。所有患者均在发病后 3～ 10ｈ来院就诊。二、临床表现病情多数为中度 ,全部病例均有腹痛和腹泻 ,多为脐周隐痛 ,阵发性加剧 ,脐部压痛明显。…     

小鼠动物毒性试验、神奈川溶血试验以及tdh试验对副溶血性弧菌致病性检测有效性的研究

目的比较小鼠动物腹腔注射、灌胃、神奈川溶血实验以及荧光tdh基因PCR反应对副溶血性弧菌致病性检测的有效性。方法采用四种方法,对分离自腹泻者、水产品及自然水体中的菌株测定阳性率,以精确卡方统计比较结果。结果tdh反应可区分腹泻者来源菌株阳性率为90.0%,水产品来源阳性率为9.62%,自然水体来源阳性率为7.32%, P<0.001。结论荧光tdh 基因PCR反应可有效应用于致病性菌株检测。