地高辛标记的DNA探讨针用于嗜肺军团菌病的检测

本文利用嗜肺军团菌的种特异性扩增产物制成地高辛标记的探针。对Ｌ１－Ｌ１４的标准菌株和临床及环境分离的菌株进行检测，与血清检查结果相符，灵敏度达到１ｐｇＤＮＡ，对临床儿童炎患者的痰液进行检测，阳性率为２５％，９５％可信限为１３－４１％。基本可以认为该探我具有灵敏，特异、快速的特点。     

mip基因聚合酶链反应结合地高辛标记探针杂交鉴定嗜肺军团菌

目的对嗜肺军团菌国外参考菌株及国内分离菌株的巨噬细胞感染增强子（ｍｉｐ）基因分析，建立一种快速、敏感、特异的嗜肺军团菌基因检测鉴定方法。方法利用嗜肺军团菌种特异性ＤＮＡ片段ｍｉｐ基因通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增，对ＰＣＲ阳性产物进行地高辛标记的ｍｉｐ基因探针杂交，观察其反应结果。并对２６株环境和患者中分离的疑似嗜肺军团菌菌株进行分析。结果所有实验用嗜肺军团菌国外参考菌株及国内分离菌株的ｍｉｐ基因的ＰＣＲ扩增结果都为阳性，探针杂交结果也为阳性，而非嗜肺军团菌及与非军团菌对照菌株的ＰＣＲ扩增结果及探针杂交结果都为阴性，本实验其灵敏度和特异度均为１００％。另外２６株疑似嗜肺军团菌菌株有６株被鉴定为嗜肺军团菌。结论所建立嗜肺军团菌的快速初步鉴定方法具有很高的特异性和敏感性，并具有较高的应用价值     

嗜肺军团菌肺炎一例

患者男 ,6 5岁 ,因发热、咳嗽 1周余入院。患者受凉后出现发热 ,呈稽留热型 ,伴干咳 ,无畏寒、潮热及盗汗 ,体温最高达 39°Ｃ。脐周有阵发性绞痛 ,无放射 ,腹泻呈水样便 ,无黏液脓血 ,每日 4～ 5次 ,每次量约 5 0～ 10 0ｍｌ,无里急后重。门诊给予青霉素 80万单位肌肉注射 ,每日 2次 ,无效。胸片示“右下肺炎 ,右下胸膜炎 ,右下包裹性积液”。入院前半个月 ,患者曾到泰国旅游。既往有原发性高血压和胆石症。体检 :体温 39.8°Ｃ ,脉搏 10 0次 /ｍｉｎ ,呼吸 2 2次 /ｍｉｎ ,血压 15 0 / 80ｍｍＨｇ。急性热病容 ,浅表淋巴结不大。右下肺语…     

嗜肺军团菌肺炎的肺功能研究

嗜肺军团菌肺炎的肺功能研究姚婉贞，赵鸣武，韩荣藓我们对１９９０年９月～１９９２年１２月３１例嗜肺军团菌肺炎（ＬＰ）患者肺功能进行追踪观察，并与同期其它社会获得性细菌性肺炎（ＮＬＰ）的肺功能作对比分析，以便更全面地认识军团菌肺炎。研究对象：ＬＰ组３１例...     

嗜肺军团菌病31例临床分析

1982年宗定国等在新疆从后肢瘫痪羔羊脏器中分离出两株嗜肺军团菌。我院于1983-1997年为嗜肺肝菌Ⅰ型军团菌病例31例,报告如下。     

5株嗜肺军团菌的初步鉴定

本文检查了５株从国内分离的军团菌菌株。从培养特性、革兰氏染色镜检、生化反应、凝集试验、直接荧光抗体试验初步鉴定出３株为嗜肺军团菌血清１型，另２株为嗜肺军团菌血清５型。最后，通过扩增军团菌８７ｏｂｐＤＮＡ和１６ＳｒＲＮＡ基因的方法进一步证实这５株菌均为嗜肺军团菌种。     

云南省7县嗜肺军团菌抗体调查

云南省７县嗜肺军团菌抗体调查江华，杨慧，窦慧芬用微量凝集试验（ＭｉｃｒｏａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎＴｅｓｔ，ＭＡＴ）对云南省７县：呈贡、中甸、勐海、永善、丽江、沪水和景东的畜牧人员进行嗜肺军团菌（ＬｅｇｉｏｎｅｌｌａＰｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ，Ｌ．ｐ）１...     

嗜肺军团菌血清型1在肺炎中散发情况的调查

军团菌(Legionella)是引起军团菌病的病原体。1977年美国费城首次暴发了军团菌肺炎(Legionella pneumonia),军团菌作为散发和流行性肺炎的主要病原体,已经在学界获得了广泛的认同。目前已确认军团菌属有52个种,70个血清型,与人类疾病相关的有24个种,其中嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)是引起军团菌病的主要病原菌,     

军团菌分子生物学研究进展

本综述了应用分子克隆方法对嗜肺军团菌蛋白酶、外毒素、溶血素、ＭｉＰ基因、人工诱变技术的研究，以及核酸检测军团菌方面的新进展。     

一种改进的地高辛标记探针斑点杂交法检测血清

一种改进的地高辛标记探针斑点杂交法检测血清顾士民，蒋伟伦，傅龙亭，潘鹤翔以地高辛（ＤｉｇＲｏｘｉｇｅｎｉｎ，简写Ｄｉｇ）标记探针检测血清ＨＢＶＤＮＡ，具有需时短，无放射污染，探针易长期保存等优点。但血清直接点膜检测其灵敏度尚不及使用３２Ｐ标记探针，且...     

嗜肺军团菌flaA基因DNA疫苗的构建及其免疫保护性研究

目的构建flaA基因的DNA疫苗,观察其对嗜肺军团菌感染的免疫保护作用。方法用限制性核酸内切酶从重组质粒pET32a-flaA上切下flaA基因,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),重组子经限制性酶切分析、PCR鉴定正确后,命名为pcDNA3.1-flaA。将18只BALB/c雌性小鼠随机分为3组,pcDNA3.1-flaA实验组肌肉接种pcDNA3.1-flaA质粒100μg,2w后加强免疫一次,2个对照组分别肌肉注射等体积的生理盐水和100μg空质粒,加强免疫后3w小鼠鼻腔滴注嗜肺军团菌Lp1菌液进行攻击感染,感染4w后,检查小鼠肺组织带菌量,观察肺组织病理形态学改变。结果成功构建了真核表达重组质粒pcDNA3.1-flaA,攻击感染实验表明,pcDNA3.1-flaA免疫组肺组织带菌量显著少于生理盐水对照组和空质粒对照组(P<0.05),且肺组织病理变化症状较pcDNA3.1对照组和生理盐水对照组的肺轻微。结论由flaA基因构建的嗜肺军团菌DNA疫苗能诱导小鼠产生保护性免疫。     

Acute Pancreatitis Caused by Severe Legionella pneumophila Infection

Summary We report three cases of severe community-acquired Legionella pneumophila with acute pancreatitis. Pancreas involvement is unusual. The clinical presentations consisted of painless pancreatitis with only elevation of serum pancreatic enzymes (case 1), tender abdomen with edematous pancreas on computed tomography scan (case 2) and necrosis (case 3). We discuss the possible mechanisms of L. pneumophila associated acute pancreatitis for which the pathophysiology is still undertermined: infection, toxin release or cytokine secretion. Received: February 11, 2000 · Revision accepted: July 24, 2000     

嗜肺军团菌血清I型菌株随机扩增多态性DNA指纹图谱研究

目的采用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法研究我国58株嗜肺军团菌血清1型(Lp1)菌株的基因型特征。方法58株嗜肺军团菌血清1型菌株来自北京和深圳市的集中空调冷却塔水和温泉水,随机引物采用5’-CGGCGGCG-GCGG-3’序列,分析Lp1型军团菌RAPD基因型和温度、pH值的关系。结果58株Lp1型菌株共分为17个RAPD基因型。与集中空调冷却塔水Lp1型菌株相比,温泉水分离的菌株基因型具有较高的多态性。深圳市29株集中空调冷却塔水分离的Lp1菌株,共呈现出3个RAPD基因型,北京市24株来自温泉水的Lp1菌株分为12个RAPD型,5株来自集中空调冷却塔水的Lp1型菌株分为两个RAPD型。温泉水Lp1菌株的基因型差异和水温度和pH值无明显的关联。结论RAPD分型方法可用于我国Lp1菌株的基因分型,不同地区和来源的Lp1型军团菌菌株具有特征性的RAPD基因型,温泉水中分离的Lp1菌株较集中空调冷却塔水分离菌株基因型呈现较高的基因多态性。     

Legionella pneumophila aortitis in a heart transplant recipient

We describe the case of a patient with a culture-proven infection of the ascending aorta caused by Legionella pneumophila 16 months after cardiac transplantation. Serology follow-up and surveillance culture of the hospital water supply suggested a nosocomial acquisition of the infection during the post-transplantation period. The diagnosis was made after 5 months of recurrent unexplained febrile episodes. A Teflon ring implanted around the aortic suture line during the intervention may have contributed to the unusual localization of the infection. The patient was successfully treated with antibiotics and aortic reconstruction.     

Legionella pneumophila lung abscess associated with immune suppression

Legionella species are a common cause of community-acquired pneumonia, infrequently complicated by cavitary disease. We describe Legionella pneumophila pneumonia and abscess formation in an immunosuppressed patient receiving corticosteroid therapy for metastatic breast carcinoma. The predisposing role of corticosteroids is discussed and the management of this complication is reviewed.     

嗜肺军团菌血清1型基因检测及分子分型研究

目的了解南昌市宾馆业中央空调冷却塔水中分离的嗜肺军团菌菌株的基因特征。方法 6株分离嗜肺军团菌菌株分别经血清学凝集试验、胶乳凝集试验确定为Lp1型嗜肺军团菌后,利用PCR技术对军团菌属5SrRNA基因和嗜肺军团菌mip毒力基因的特异序列进行扩增,应用多位点测序(SBT)分析,获得相应的SBT型别。使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术,对菌株进行全染色体DNA酶切电泳分型,并用BioNumerics数据库软件进行分型分析。结果所有的菌株均带有属特异性5SrRNA基因及mip毒力基因,SBT分型6株菌均为ST1型,PFGE聚类分析结果显示菌株带型之间有差异,6株菌可分为4种带型。结论南昌市公共场所冷却塔水中分离的Lp1型嗜肺军团菌菌株基因呈多样性。     

嗜肺军团菌pilE基因的克隆及其原核表达

目的克隆嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛蛋白pilE基因,构建重组质粒pET-pilE,并在原核系统中表达。方法采用聚合酶链反应(PCR)从嗜肺军团菌基因组DNA中扩增军团菌Ⅳ型菌毛蛋白pilE基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a( ),构建原核表达重组质粒pET-pilE,经限制性内切酶鉴定、PCR及测序分析后,转化宿主菌大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳、免疫印迹分析鉴定。结果扩增出了429bp完整的pilE基因,构建的原核表达重组质粒pET-pilE表达出35.7 kDa的融合蛋白质。结论成功构建了军团菌pilE基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中得到了高效表达,为以后深入研究奠定了基础。     

嗜肺军团菌感染多噬棘阿米巴及其增殖的实验观察

目的　初步建立国内嗜肺军团菌感染原生动物自由生活阿米巴的实验感染模型。方法将多噬棘阿米巴和嗜肺军团菌进行实验室共同培养 ,于 8h、2 4h、4 8h、72h后将预置盖玻片上生长的虫体Giemsa染色后作油镜观察 ,各阶段的培养物作透射电镜观察 ,研究嗜肺军团菌感染多噬棘阿米巴后形态学的变化。结果　共同培养 2 4h后Giemsa染色显示阿米巴内出现明显的细菌菌体 ,后期菌体布满整个胞浆 ;透射电镜下阿米巴滋养体和囊胞中都充满健康完整的军团菌菌体 ,并观察到不同阶段的二分裂现象。结论　嗜肺军团菌能在自由生活阿米巴内生长并增殖 ,初步证实了阿米巴可能是军团菌在自然界的贮存宿主。     

大环内酯类和氟喹诺酮类药物对细胞内嗜肺军团菌的作用

目的 评估大环内酯类和氟喹诺酮类药物对巨噬细胞内嗜肺军团菌的作用.方法 采用琼脂稀释法测量大环内酯类和氟喹诺酮类药物对20株嗜肺军团菌血清1型(L.pneumophila serogroup 1,Lp-1)的MIC值.加入佛波酯诱导人类单核细胞系THP-1分化成巨噬细胞样细胞.将Lp-1与分化的THP-1细胞共培养,细胞吞噬细菌后,加入红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星及莫西沙星4种抗菌药物,在1×MIC、4×MIC、8×MIC浓度时培养24 h,平板计数法双份计数细胞内存活的军团菌数.结果 以细菌抑制率表示,不同抗菌药物作用的差别采用Mann-Whitney U检验分析.结果 4种抗菌药物在1×MIC、4×MIC、8×MIC浓度时作用24 h后的细菌抑制率分别为:红霉素:(50.18±27.29)%、(79.48±20.08)%及(91.46±8.70)%;阿奇霉素:(66.77±26.18)%、(91.73±8.72)%及 (97.10±3.37)%;左氧氟沙星:(99.84±0.25)%、(99.99±0.02)%及 (99.99±0.01)%;莫西沙星:(99.90±0.10)%、(99.99±0.03)%及(99.99±0.03)%.氟喹诺酮类药物在1×MIC、4×MIC、8×MIC时对细胞内Lp-1的抑制率高于大环内酯类药物(u值分别为1.0、2.0和5.0,均P＜0.05),左氧氟沙星和莫西沙星在上述3个浓度时对Lp-1的抑制率差异无统计学意义(u值分别为190、183和217,均P＞0.05),阿奇霉素对细胞内Lp-1的抑制率高于红霉素(u值分别为132、125和128,均P＜0.05).结论 氟喹诺酮类药物细胞内抗军团菌的作用优于大环内酯类药物,左氧氟沙星和莫西沙星细胞内抗军团菌的作用相似,阿奇霉素细胞内抗军团菌的作用优于红霉素.

Abstract：

Objective To evaluate the activity of macrolides and fluoroquinolones against Legionella pneumophila by intracellular susceptibility testing. Methods Minimum inhibitory concentration(MIC) was determined by standard agar dilution test according to the CLSI. For intracellular assays, legionella pneumonia was used to infect human monocytic cell line THP-1. Erythromycin, azithromycin, levofloxacin and moxifloxacin at 1×MIC, 4×MIC, 8×MIC were added following phagocytosis. Number of viable bacteria was enumerated at 24 h on BCYE (buffered charcoal yeast extract) agar in duplicates using standard plate count method. The result was expressed as percentage inhibition. Mann-Whitney U test was used to determine the significant differences in mean percentage inhibition between agents. Results Percentage inhibition at 24 h were as follows: Erythromycin 1×MIC (50.18±27.29)%, 4×MIC (79.48±20.08)%, 8×MIC (91.46±8.70)%; Azithromycin 1×MIC (66.77±26.18)%, 4×MIC (91.73±8.72)%, 8×MIC (97.10±3.37)%; Levofloxacin 1×MIC (99.84±0.25)%, 4×MIC (99.99±0.02)%, 8×MIC (99.99±0.01)%; Moxifloxacin 1×MIC (99.90±0.10)%, 4×MIC (99.99±0.03)%, 8×MIC (99.99±0.03)%. The fluoroquinolones showed greater inhibitory activity than macrolides against legionella pneumophila(u=1.0,2.0,5.0,P＜0.05). Levofloxacin and moxifloxacin had the same intracellular activity against legionella pneumophila (u=190, 183, 217,P＞0.05). Azithromycin was more effective than erythromycin in inhibiting intracellular legionella pneumophila (u=132,125,128,P＜0.05). Conclusions The fluoroquinolones were more active than macrolides against legionella pneumophila. The intracellular activity of levofloxacin against legionella pneumophila appeared to be similar to moxifloxacin. Azithromycin was demonstrated to have superior activity against legionella pneumophila compared with erythromycin.