急性髓系白血病患者SALL4基因的甲基化改变及其临床意义

目的: 探讨急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者婆罗双树样基因4（Sal-like 4,SALL4）启动子的甲基化状况和临床意义。方法： 分别应用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）技术和实时定量PCR（RQ-PCR）技术检测45例初发AML患者和20例缺铁性贫血患者骨髓标本的SALL4甲基化状态和SALL4表达水平;同时,对AML患者的SALL4甲基化改变与临床特征相关性进行分析。结果： 9例（20.0%）AML患者存在SALL4基因启动子低甲基化改变,而20例对照均无SALL4基因低甲基化,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。SALL4启动子低甲基化改变与AML患者年龄、性别、血红蛋白含量、血小板计数均无相关性（P>0.05）,但低甲基化患者的白细胞计数明显高于甲基化患者（P=0.027）。SALL4表达水平和SALL4低甲基化明显相关（P＜0.05）。按WHO分型,本研究中共有7类亚型,亚型间SALL4低甲基化频率差异无统计学意义（P＞0.05）。中危和高危组核型患者中SALL4低甲基化频率明显高于低危组患者（P＜0.05）。结论： SALL4低甲基化是AML患者中一个常见分子事件,可能与AML患者中高危核型相关。     

慢性髓系白血病PDLIM4基因表达与其启动子甲基化水平的关系

目的:分析慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者PDLIM4(PDZ and LIM domain 4)基因转录本表达状况、启动子高甲基化改变及临床相关性。方法:应用实时定量PCR(RQ-PCR)及实时定量甲基化特异性PCR(RQ-MSP)技术分别检测CML患者PDLIM4基因转录本及启动子甲基化水平。结果:8/36例(22%)CML患者存在PDLIM4低表达,低表达率与21例对照组间差异有统计学意义(P=0.021);PDLIM4表达水平和CML患者bcr/abl融合基因转录本正相关(r=0.434,P=0.043)。13/59例(22%)CML患者出现PDLIM4启动子高甲基化改变,而24例对照未显示高甲基化,两组差异有统计学意义(P=0.016)。PDLIM4高甲基化与患者血液学相关参数无明显相关性。PDLIM4启动子高甲基化频率随疾病进展而增高,在慢性期、加速期及急变期中分别为16%(7/44)、33%(2/6)及44%(4/9)。结论:PDLIM4基因启动子甲基化改变可能与CML的疾病发展有关。     

宫颈癌及宫颈上皮内瘤变MGMT基因甲基化及其相关性研究

目的：探讨宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（CIN）患者宫颈脱落细胞中O6-甲基鸟嘌呤- DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子区甲基化状态在宫颈癌临床早期诊断和筛查中的作用。方法选取对照组20例,CINI、CINII、CINIII期患者各50例和宫颈癌患者50例,采用甲基化特异性PCR检测宫颈脱落细胞中MGMT基因启动子区甲基化状态并进行比较。结果宫颈癌和CINI、II、III期患者MGMT基因启动子区甲基化阳性率分别为82.0%（41/50）、24.0%（12/50）、50.0%（25/50）和80.0%（40/50）,而对照组未检测到MGMT基因启动子区甲基化。与对照组比,宫颈癌组和CINI、II、III期组MGMT基因启动子区甲基化阳性率的差异均有统计学意义（均P＜0.05）。宫颈癌组中MGMT基因启动子甲基化与其临床分期及组织分化程度有显著相关性（均P＜0.05）。结论 MGMT基因启动子区甲基化可能参与宫颈癌的发生、发展,有助于宫颈癌的早期辅助诊断和筛查。     

慢性髓系白血病中let-7a-3甲基化态势及其临床意义

目的：探讨慢性髓系白血病（CM L ）患者中let‐7a‐3启动子的甲基化态势及其临床意义。方法建立实时定量甲基化特异性PCR （RQ‐MSP）分别检测25例对照者及52例CML患者骨髓单个核细胞中let‐7a‐3启动子未甲基化水平。结果52例CM L患者未甲基化let‐7a‐3启动子（59．6％）为阳性,而对照组仅1例（4％）阳性,两组比较差异有统计学意义（ P＜0．01）。ROC曲线分析表明,let‐7a‐3启动子未甲基化作为辅助诊断CM L有较好的特异性。未甲基化let‐7a‐3启动子水平与BCR／ABL融合基因转录水平呈显著正相关（ r＝0．641,P＝0．001）,但与患者的白细胞、血小板计数及血红蛋白水平无明显相关性（ P＞0．05）。在慢性期和加速期let‐7a‐3未甲基化水平显著高于急变期。结论 let‐7a‐3基因低甲基化水平随疾病进展而降低。     

喉鳞状细胞癌ESRRG基因启动子甲基化及临床意义研究

目的探讨雌激素相关受体γ（ESRRG）基因启动子在LSCC组织中的甲基化状态,分析其与临床病理特征及预后的关系,并评估其对LSCC的诊断价值。方法采用焦磷酸测序方法检测89例男性LSCC患者LSCC组织与癌旁正常组织的ESRRG基因启动子甲基化水平;分析ESRRG基因启动子甲基化水平与患者临床病理特征的关系;绘制ROC曲线评估ESRRG基因甲基化水平对LSCC的诊断价值;采用Kaplan-Meier法绘制患者生存曲线,并比较高甲基化组（甲基化水平＞26.41%）与低甲基化组（甲基化水平≤26.41%）5年生存率。结果LSCC组织ESRRG基因启动子甲基化水平高于癌旁正常组织（P＜0.05）。T3~4期患者LSCC组织ESRRG基因启动子甲基化水平高于T1~2期患者（P＜0.05）,临床分期Ⅲ、Ⅳ期患者LSCC组织ESRRG基因启动子甲基化水平高于Ⅰ、Ⅱ期患者（P＜0.05）。AUC为0.81,当ESRRG基因启动子甲基化水平为26.41%时,诊断LSCC的灵敏度、特异度分别为0.7079、0.7865。ESRRG基因启动子低甲基化组患者5年生存率高于高甲基化组患者（69.03%vs45.12%,P＜0.05）。结论ESRRG基因启动子在LSCC组织中呈高甲基化水平,且在T3~4期及Ⅲ、Ⅳ期患者LSCC组织中明显增高,高甲基化水平患者预后较差。     

非小细胞肺癌患者血清死亡相关蛋白激酶基因启动子甲基化的分析

目的：分析非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清中死亡相关蛋白激酶（DAPK）基因启动子区域甲基化的改变状况及其临床意义。方法：运用甲基化特异性PCR技术，检测65例NSCLC组患者血清DAPK基因启动子区域甲基化的改变情况，并分析与临床病理资料的关系。结果：NSCLC组患者血清DAPK基因甲基化检出率为30．8％（20／65），而对照组未检出，DAPK基因甲基化检出率与NSCLC病理类型、分期及转移状态无明显相关性。结论：DAPK基因启动子区域异常甲基化是NSCLC早期辅助诊断的分子标记物之一。     

膀胱移行细胞癌尿沉渣RASSF1A基因启动子的甲基化状况及意义

目的 探讨膀胱癌患者尿沉渣细胞中RASSF1A基因启动子CpG岛的甲基化状况及其临床意义.方法 选取病理确诊的39例膀胱癌标本,采用甲基化特异PCR方法检测膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣RASSF1A基因启动子CpG岛的甲基化异常频率,同时以45例非肿瘤性泌尿系疾病患者及14例健康志愿者的相关检测情况作为对照,分析膀胱肿瘤患者RASSF1A基因异常甲基化的情况.结果 膀胱癌组RASSF1A基因启动子甲基化阳性率（61.5%,24/39）显著高于非肿瘤组（4.4%,2/45）（P〈0.01）,非肿瘤组与志愿组间（阳性率为0）并无明显差异（P＞0.05）;尿沉渣RASSF1A基因甲基化对膀胱癌诊断的敏感性为61.5%（24/39）,特异性为95.6%（43/45）.性别、年龄、病理分级及临床分期与RASSF1A基因甲基化均无明显相关性（均P＞0.05）.膀胱癌肿瘤组织RASSF1A基因启动子甲基化阳性率为69.2%（27/39）.膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣同时出现RASSF1A基因甲基化为20例,同时仅出现非甲基化为8例,两者明显相关（P〈0.05）.结论 RASSF1A基因异常甲基化可能是膀胱癌的早期事件,其异常甲基化状态可能成为非侵入性诊断膀胱癌的分子标志物之一.     

诱导痰RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化在肺癌诊断中的价值

目的：探讨诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区异常甲基化及其联合检测在肺癌诊断中的价值。方法：采用甲基化特异性PCR（MSP）技术,检测82例肺癌患者诱导痰和对应肿瘤组织以及25例肺部良性病变组织中RASSF1A,p16和DAPK3种基因启动子区甲基化改变,并分析三者与临床病理资料的关系。结果：肺癌病理组织中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区甲基化检出率分别为63.4%,59.8%和58.5%,对应的诱导痰三者甲基化检出率分别为54.9%,48.8%和51.2%;肺部良性病变组织中甲基化检出率均为零,两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。RASSF1A基因甲基化检出率在中高分化和无淋巴结转移的肺癌中明显低于低分化和未分化及有淋巴结转移者（P〈0.05）,与年龄、性别、吸烟指数、临床分期及病理类型无关,而p16和DAPK基因甲基化检出率与上述因素均无明显相关性（P〉0.05）;联合检测3种基因甲基化的检出率为73.2%。结论：联合检测诱导痰中RASSF1A,p16和DAPK基因启动子区高甲基化有可能作为诊断肺癌及评估预后的简便有效的指标,并能提高检出率。     

膀胱癌尿沉渣RUNX3基因启动子区域CpG岛甲基化状况及意义

目的探讨膀胱癌患者尿沉渣细胞中RUNX3基因启动子CpG岛的甲基化状况及其临床意义。方法收集临床病理确诊39例膀胱癌,采用甲基化特异PCR(MSP)的方法,检测膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣RUNX3基因启动子CpG岛的甲基化异常频率,同时以45例非肿瘤性泌尿系疾病患者及14例健康志愿者作为对照。结果膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣RUNX3基因启动子甲基化阳性率分别为64.1%(25/39)和56.4%(22/39),二者密切相关(r=0.420,P=0.008)。膀胱癌组尿沉渣RUNX3基因启动子甲基化阳性率(64.1%,25/39)显著高于非肿瘤组(6.7%,3/45)(χ2=31.015,P=0.000),非肿瘤组与志愿组间(阳性率为0)并无明显差异(P>0.05);尿沉渣RUNX3基因甲基化对膀胱癌诊断的敏感性为64.1%(25/39),特异性为94.9%(56/59)。浸润性(≥pT2)和表浅性(≤pT1)膀胱癌RUNX3基因甲基化阳性率之间的差异有统计学意义(χ2=10.363,P=0.001)。性别、年龄、病理分级与RUNX3基因甲基化均无明显相关性(均P>0.05)。结论 RUNX3基因启动子异因异常甲基化可能是膀胱癌的早期事件,尿沉渣RUNX3基因启动子异常甲基化可作为非侵入性诊断膀胱癌并且判断其预后的分子标志物。     

结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化对其表达 水平的影响及其临床意义

目的:研究结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化状态对Kiss-1基因表达的影响,分析其与结直肠癌临床病理特性的关系及临床意义。方法:收集126例结直肠癌组织及其癌旁正常结直肠组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测Kiss-1基因启动子区甲基化状态,采用实时荧光定量 PCR和Western blotting法检测结直肠癌组织和正常结直肠组织中Kiss-1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果：结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化阳性率（83.33%）高于癌旁正常结直肠组织（30.16%）（P<0.05）。结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化阳性组Kiss-1基因mRNA和蛋白表达水平均低于Kiss-1基因启动子甲基化阴性组（P<0.05）。结直肠癌组织中T3+T4组Kiss-1基因启动子甲基化阳性率高于T1+T2组（P<0.05）,但Kiss-1基因mRNA和蛋白表达水平低于T1+T2组（P<0.05）;
中和低分化组Kiss-1基因启动子甲基化阳性率高于高分化组（P<0.05）,Kiss-1基因mRNA表达水平低于高分化组（P<0.05）;淋巴结转移组甲基化阳性率高于无淋巴结转移组（P<0.05）,但Kiss-1基因mRNA及蛋白表达水平低于无淋巴结转移组（P<0.05）;远处转移组Kiss-1基因启
动子甲基化阳性率显著高于无远处转移组（P<0.05）,但Kiss-1基因mRNA及蛋白表达水平低于无转移组（P<0.05）。Kiss-1基因启动子甲基化阳性率与患者的性别、年龄、肿瘤部位和大小无明显关联（P>0.05）。结论：结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化与Kiss-1基因表达
水平及结直肠癌的恶性转化特性（特别是转移）有关联,Kiss-1基因甲基化状态有望成为评估结直肠癌转移风险的重要指标。     

慢性粒细胞白血病骨髓细胞的SFRP2基因启动子高甲基化

目的 研究慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)骨髓细胞SFRP2基因启动子甲基化状态,探讨SFRP2基因启动子甲基化在CML发病机制中的作用.方法 分别采用RT-PCR、甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)方法检测CML细胞系K562细胞...     

MCF-7/Adr细胞mdr-1基因启动子甲基化和组蛋白乙酰化状态与多药耐药的关系

目的：分析MCF-7/Adr及MCF-7细胞mdr-1基因启动子甲基化和组蛋白乙酰化状态,初步探讨乳腺癌多药耐药的表观遗传机制。 方法：用甲基化敏感PCR技术检测两个细胞系mdr-1基因启动子甲基化状态。实时定量PCR技术检测DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases,DNMTs) mRNA及组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases,HDACs) mRNA的表达。光密度值法检测组蛋白H3和H4乙酰化水平。 结果：MCF-7细胞mdr-1基因启动子呈现高甲基化,MCF-7/Adr细胞mdr-1基因启动子呈现低甲基化。与MCF-7细胞比较,MCF-7/Adr细胞DNMT1,DNMT3a及DNMT3b mRNA表达显著下降(P＜0.05)。MCF-7/Adr细胞组蛋白H3和H4乙酰化水平较MCF-7细胞明显升高(P＜0.01)。与MCF-7细胞比较,MCF-7/Adr细胞HDAC1,HDAC2,HDAC7及SIRT1 mRNA的表达显著下降(P＜0.01)。 结论：mdr-1基因启动子低甲基化、组蛋白H3和H4高乙酰化、DNMTs mRNA及HDACs mRNA低表达可能是介导MCF-7/Adr细胞MDR形成的重要表观遗传学因素。     

PTTG、c-myc基因在慢性粒细胞白血病中的表达

目的:检测垂体瘤转化基因(PTTG)在慢性粒细胞白血病(CML)患者中不同临床阶段的基因表达,为阐明CML演变的可能机制提供依据。方法:采用RT-PCR方法检测34例CML患者(慢性期16例,加速期11例,急变期7例)及10例对照者骨髓单个核细胞(BMMNC)中PTTG和c-myc基因的表达。结果:10例对照者中未检测到PTTG和c-myc基因的表达,34例CML患者中PTTG和c-myc基因在慢性期、加速期、急性变期的表达明显高于对照者(P<0.05),PTTG在加速期和急变期的表达升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。c-myc基因在急变期的表达明显升高(P<0.05)。结论:PTTG和c-myc基因的过度表达可能和CML的发生发展有关。     

急性髓系白血病GLIPR1基因甲基化及其表达

目的：检测GLIPR1基因在急性髓系白血病（AML)细胞株和AML患者骨髓细胞中的甲基化状态和表达水平,探讨其表达水平与启动子甲基化的关系。 方法：以5株白血病细胞株, 以及54例治疗前AML患者骨髓、48例急性淋巴细胞胞白血病（ALL）患者骨髓、40例慢性粒细胞白血病（CML）患者骨髓、35例对照骨髓和8例治疗后完全缓解AML患者骨髓为样本,采用RT-PCR检测GLIPR1 mRNA表达水平,采用甲基化特异PCR（MS-PCR）方法检测GLIPR1基因甲基化状态,并对GLIPR1 mRNA表达水平与其甲基化状态进行相关性分析。 结果：GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平低于CML急性变细胞株和ALL细胞株,而前者甲基化水平高于后者。5-aza-2dC处理细胞后,GLIPR1基因在AML细胞株中的表达水平明显上调,而在CML急性变细胞株和ALL细胞株中的表达水平上调不明显。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平（0.38±0.20）明显低于ALL骨髓（0.76±0.18）、CML骨髓（0.80±0.14）和对照骨髓（0.85±0.12）,在完全缓解AML骨髓中的表达水平明显高于治疗前AML骨髓（0.78±0.13 vs. 0.36±0.20）;而ALL和CML骨髓中的表达水平与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓的甲基化阳性率(81.5%)明显高于ALL骨髓（37.5%)、CML骨髓（27.5%)和对照骨髓（14.3%),在完全缓解AML骨髓中的甲基化阳性率明显低于治疗前骨髓(12.5% vs. 75.0%);而在ALL和CML骨髓中的甲基化阳性率与对照骨髓比较无明显差异(P＞0.05）。GLIPR1基因在AML骨髓中的表达水平与其甲基化呈负相关。结论：GLIPR1基因在AML中表达下调或缺失及启动子甲基化可能是导致GLIPR1基因表达沉默的原因,GLIPR1基因表达和甲基化水平对判断AML患者的疗效有一定意义。     

PTOV1在I型子宫内膜癌表达的临床病理意义及分子机制研究

目的 探讨前列腺肿瘤过表达基因1(PTOV1)在I型子宫内膜癌组织中检测的意义及表达调控的分子机制。方法收集本院住院治疗的46例I型子宫内膜癌患者手术切除肿瘤组织及癌旁组织,免疫组化法检测组织中PTOV1蛋白的表达,比较瘤组织与癌旁组织的差异,亚硫酸氢盐测序法检测PTOV1启动子甲基化状态,比较瘤组织与癌旁组织的差异,统计分析PTOV1蛋白表达与I型子宫内膜癌患者临床参数的关系,PTOV1启动子甲基化与蛋白表达的关系及其与患者临床参数的关系。结果PTOV1在I型子宫内膜癌组织中高表达且启动子低甲基化;PTOV1高表达与I型子宫内膜癌患者年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结转移无关,与浸润深度呈正相关;PTOV1启动子低甲基化与I型子宫内膜癌组织中PTOV1表达呈正相关。结论PTOV1与I型子宫内膜癌浸润密切相关,其高表达的机制可能为启动子发生低甲基化。     

慢性白血病Id4甲基化研究

目的探讨Id4基因在慢性白血病患者中的甲基化情况。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MS—PCR）,对初发9例慢淋白血病（CLL）和18例慢粒白血病（CML）患者的骨髓进行Id4基因甲基化检测,以正常骨髓作为对照。结果Id4基因在正常骨髓中呈完全性非甲基化状态,在9例CLL患者中全部检测到Id4基因甲基化,而在18例CML患者中,检测到12例Id4基因甲基化。结论慢性白血病患者骨髓Id4基因发生了不同程度的甲基化改变,CLL和CML患者的甲基化发生比例不同。     

HpaⅡ—PCR检测慢性髓细胞白现降钙素基因甲基化

采用ＨｐａⅡ－ＰＣＲ检测３１例不同病期慢性髓细胞白血病降钙素基因甲基化。结果显示：降钙素基因的高甲基化与慢性髓细胞白血病恶性程度密切相关,加速期与夺始细胞危象期检出率远高于慢性期。提示检测降钙素基因甲基化水平期预测疾病转变和选择骨髓移植病例有参考价值。     

基于生物信息学分析哮喘患者鼻黏膜上皮细胞DNA及α肌动蛋白2甲基化差异性表达

目的: 研究哮喘患者鼻黏膜上皮细胞中全基因组甲基化水平及α肌动蛋白2(actin alpha 2, ACTA2)基因启动子区域甲基化水平改变。方法: 利用甲基化850K芯片法检测6例哮喘患者与5例健康者鼻黏膜上皮细胞中全基因组甲基化水平,进行生物功能分析后选择ACTA2为目的基因,以重亚硫酸盐测序法检测12例哮喘患者及12例健康者ACTA2启动子区域甲基化水平。结果： 850K芯片测序结果显示,哮喘患者所有常染色体均存在不同程度的甲基化修饰,大部分发生在基因体及基因间区,10%~20%发生在启动子区,且高甲基化和低甲基化改变可存在于同一染色体上;重亚硫酸盐法测序示与健康对照组相比,哮喘组ACTA2基因启动子区出现明显高甲基化改变(P=0.001)。结论： 哮喘患者鼻黏膜上皮细胞各染色体均出现广泛甲基化修饰,ACTA2基因启动子区域出现高甲基化改变。