依那普利对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞产生TGF-β1、LN及CTGF表达的影响

目的 观察依那普利(Enalapril,Ena)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)转化生长因子-β1(TGF-β1)、层黏连蛋白(LN)及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 大鼠GMCs分别培养于正常浓度葡萄糖(5.5 mmol/L)、高浓度葡萄糖(20 mmol/L)及高糖和不同浓度(10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L)的Ena中,同时设空白对照.分别采用放射免疫法、酶联免疫吸附实验(ELISA)检测不同时间(24、48、72 h)细胞培养上清液中TGF-β1、LN含量,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测72 h细胞CTGF mRNA的表达.结果 与空白对照组比较,正常糖组和高糖组TGF-β1分泌增加、LN合成增多、CTGF表达上调(P<0.001),高糖组更明显(P<0.001).与高糖组比较,高、中、低浓度的Ena干预均可逆转上述变化.结论 高糖可致GMCs分泌TGF-β1增加、合成LN增多、CTGF表达上调,Ena可减少细胞外基质(ECM)积聚,下调CTGF表达,从而有利于延缓糖尿病肾病肾小球硬化(GS)的进展.     

高糖对原代培养人系膜细胞表达TGF-β1的影响

目的了解高糖对原代培养的人肾小球系膜细胞表达TGF-β1的影响,并进一步探讨糖尿病肾病的发病机制。方法取自愿水囊引产的胎儿肾并解剖取肾皮质剪碎,应用肾皮质组织块法合优生选择法培养人肾小球系膜细胞。以ELISA方法检测TGF-β1的表达。结果与正常组相比较,高糖组TGF-β1在24、48、72h均显著升高(P0.05或P0.01)。结论高糖能够升高系膜细胞TGF-β1分泌,这可能与肾小球系膜细胞细胞外基质积聚和糖尿病肾病发病密切相关。     

扶肾降浊方剂对肾小球系膜增生性肾炎大鼠肾组织TGF-β1及CTGF表达的影响

目的观察扶肾降浊方剂对肾小球系膜增生性肾炎（MsPGN）大鼠肾组织转化生长因子B,（TGF-β1）及CTGF表达的影响。方法将40只Wister大鼠随机分为对照组10只及观察组30只。观察组构建MsPGN模型,随机分为观察1、2、3组。观察组于造模同时给予干预,观察1组每日以扶。肾降浊方剂灌胃,剂量为17．01g／kg,连续16周,观察2组每日以苯那普利灌胃,剂量为1．8mg/kg,连续16周,观察3组以等量生理盐水灌胃,连续16周;对照组不造模,以等量生理盐水灌胃,连续16周。16周后留尿检测24h尿白蛋白,取血测定血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）;处死大鼠,留取肾组织,免疫荧光法检测TGF-B,、CTCF表达;光镜下观察肾脏病理学变化。结果观察3组24h尿白蛋白、SCr、BUN均明显升高,与对照组、观察1组、观察2组比较,P均〈0．05。观察1组、观察2组24h尿白蛋白、SCr、BUN均明显降低,与对照组及观察3组比较,P均〈O．05。对照组、观察3组、观察2组、观察1组肾组织TGF-β1相对表达量分别为0．02±0．03、5．29±2．99、0．54±0．51、1．61±O．50,CTGF相对表达量分别为0．01±0．03、5．39±2．29、1．17±0．72、1．08±0．55,观察3组与另外三组比较,P均〈0．05。结论扶肾降浊方剂可明显降低MsPGN大鼠肾组织TGF-β1及CTGF表达。     

IL-10对TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞CTGF表达的影响

目的:探讨IL-10对大鼠肝星状细胞(hepaticstellate cells,HSC)表达CTGF的影响及其抗纤维化的可能机制.方法:体外培养大鼠肝星状细胞系rHSC-99,分别用不同浓度的IL-10、TGF-β1干预和两者共同干预48 h后,采用半定量RT-PCR法检测各组肝星状细胞中CTGF mRNA表达水平.结果:TGF-β1单独干预HSC,CTGF mRNA表达水平与对照组比较均明显增强(P<0.05);不同浓度的IL-10单独干预HSC,各目的基因表达与对照组比较无明显统计学意义;不同浓度的IL-10与TGFβ1共同干预HSC,CTGFmRNA表达水平与TGF-β1组比较均明显降低(P<0.05).结论:IL-10可显著抑制由TGF-β1诱导的CTGF mRNA的表达,这可能是其抗纤维化的机制之一.     

胡芦巴多糖A2对大鼠肾小球系膜细胞CTGF表达的影响

目的 探讨胡芦巴多糖A2含药血清对大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质(ECM)沉积及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 制备胡芦巴多糖A2含药血清,体外培养大鼠肾小球系膜细胞,观察胡芦巴多糖A2血清对大鼠肾小球系膜细胞分泌纤维连接蛋白(FN)、胶原(Col)Ⅳ、TGF-β1和CTGF的影响.结果 与高糖培养基组比较,A2组FN、ColⅣ含量明显下降;TGF-β1和CTGFmRNA表达明显下调.结论 胡芦巴多糖A2可通过下调CTGF表达,减少高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞FN、ColⅣ的分泌,从而抑制ECM积聚.     

螺内酯对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、FN分泌的影响

目的探讨螺内酯对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增殖的抑制作用及转化生长因子β1（TGF-β1）、纤维黏连蛋白（FN）分泌的影响。方法将大鼠GMCs置于低糖、高糖及高糖＋不同浓度螺内酯中传代培养,并以此分组。采用噻唑蓝法检测各组大鼠GMCs增殖情况,采用ELISA法检测各组TGF-β1、FN分泌情况。结果高糖培养组大鼠GMCs增殖明显高于低糖培养组（P〈0.05）。加入螺内酯后,GMCs增殖受到抑制,与低糖、高糖组比较P〈0.05或〈0.01,且随着螺内酯剂量增加细胞增殖抑制递增。螺内酯可明显减少TGF-β1、FN的分泌（P〈0.05或〈0.01）,并随浓度增高、时间延长抑制作用增强。结论高糖能刺激大鼠GMCs增殖;螺内酯能抑制大鼠GMCs增殖,并可抑制TGF-β1、FN分泌。     

人重组骨形成蛋白-7对高糖诱导的肾系膜细胞转化生长因子-β1及结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨人重组骨形成蛋白-7(rhBMP-7)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)基因表达及细胞外基质(ECM)成分Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维黏连蛋白(FN)分泌的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为四组:正常对照组(DMEM培养基含1 000 mg/L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖)、rhBMP-7低剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+50 nmol/L rhBMP-7)、rhBMP-7高剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+100 nmol/L rhBMP-7).RT-PCR技术检测TGF-β1和CTGF基因表达水平,ELISA技术检测上清液中TGFβ1、ColⅣ、FN含量.结果 高糖组系膜细胞TGF-β1和CTGF mRNA水平明显高于正常对照组(P<0.01),TGF-β1、ColⅣ和FN分泌增多,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与高糖组比较,rhBMP-7不同剂量(50、100 ng/ml)TGF-β1和CTGF mRNA表达明显降低,培养上清中TGF-β1、ColⅣ及FN分泌量亦明显减少,且差异显著(P<0.05).结论 RhBMP-7通过抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、CTGF基因表达和ECM的分泌可能起到抗纤维化作用.     

EGCG对肝纤维化大鼠TGF-β1和CTGF表达的影响

目的:研究表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)的抗肝纤维化作用及其机制.方法:运用腹腔注射CCl4构建大鼠肝纤维化模型,观察EGCG对大鼠肝纤维化的影响.运用HE染色、Massion三色染色检测肝纤维化的变化;生化检测血清丙氨酸转移酶(ALT)及天冬氨酸转移酶(AST);同时检测肝组织的羟脯氨酸、还原型谷胱甘肽(GSH)和硫代巴比妥酸反应底物(TBARS)含量.免疫组织化学法观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;分别运用RT-PCR和Western blot法检测转化生长因子β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白质表达.结果:EGCG对CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度具有显著的抑制作用.EGcG对肝细胞具有显著的保护作用,与纤维化模型组比较,EGCG干预组血清ALT、AST水平降低(138.4±45.8vs 234.6±63.2,96.4±20.5 vs 186.2±36.6,均P<0.05).EGCG显著抑制肝组织α-SMA的表达.EGCG通过抑制TBARS的形成和提高GSH含量,显著改善CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏的氧化状态.同时EGCG显著抑制肝组织TGF-β1及CTGF的mRNA和蛋白质的表达(均P<0.05).结论:EGCG能够显著抑制肝纤维化的进展,其机制与EGCG改善大鼠肝脏的氧化状态及抑制TGF-β1和CTGF的表达有关.     

转化生长因子β在高糖培养条件下系膜细胞生长抑制中的作用

观察了转化生长因子β（ＴＧＦβ）在高糖培养条件下系膜细胞生长抑制中的作用。结果显示，高糖浓度依赖性地抑制了系膜细胞的增殖；培养中加入抗－ＴＧＦβ抗体，则明显增强了正常及高糖培养条件下的系膜细胞的生长，拮抗了高糖导致的系膜细胞增殖的抑制；生物学方法检测高糖培养后系膜细胞产生的ＴＧＦβ，发现随着糖浓度增加，活性ＴＧＦβ占总ＴＧＦβ的百分比也明显上升。结果提示，ＴＧＦβ是系膜细胞产生的自分泌性生长调节因子，高糖条件下，内源性ＴＧＦβ参与并介导了高糖导致的系膜细胞增殖抑制。     

辛伐他汀和西拉普利对人肾小球系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ表达的影响

目的 探讨辛伐他汀和西拉普利对人肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)和胰岛素样生长因子Ⅰ(ICF-Ⅰ)表达的影响。方法 体外培养人胎肾小球系膜细胞，在低糖(5．6mmol／L)和高糖(30mmol／L)环境下，加入辛伐他汀(10μmol／L)、西拉普利(10μmol／L)及辛伐他汀 西拉普利培养48h后，分别测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原(酶免法和放免法)浓度及系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ mRNA表达水平(RT-PCR法)。结果 与低糖比较，高糖环境中系膜细胞过度增殖，TGF-β1和IGF-Ⅰ mRNA表达明显增高，细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原含量也显著升高。加入辛伐他汀和西拉普利后，高糖环境下系膜细胞TGF-β1和ICF-Ⅰ mRNA的表达明显降低，细胞上清液中TGF-β1和基质蛋白含量也亦显著下降。合用辛伐他汀和西拉普利对系膜细胞TGF-β1表达的抑制作用较单独用上述两药更强。结论 高糖可促进系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ的表达，辛伐他汀和西拉普利可一定程度逆转高糖环境中系膜细胞TGF-β1和IGF-Ⅰ的过度表达，并降低细胞上清液中TGF-β1和基质蛋白的含量。     

全反式维甲酸对TGF—β诱导肾小球系膜细胞CTGF及信号通路的影响

目的探讨全反式维甲酸（atRA）在转化生长因子β（TGF—β）／Smad信号通路中诱导系膜细胞表达结缔组织生长因子（CTGF）的作用。方法培养第4代大鼠。肾小球系膜细胞分组：对照组;TGF—β（5、10ng／ml）组;TGF—β＋Staurosporine组;药物组：atRA（10^-3、10^-6、10^-9mol/L）预处理24h后,再加TGF—β（10ng／ml）共培养。分别提取4、12、24h细胞总蛋白,用Western blot法测CTGF蛋白和Smad2蛋白的表达。结果在外源性TGF—β刺激下,CTGF、Smad2蛋白的表达明显增加（P〈0．05）。与TGF—β组比较,药物组CTGF、Smad2蛋白表达明显减少（P〈0．05）,呈时间和浓度依赖性;各组不同时间段内Smad2蛋白和CTGF蛋白表达呈正相关（P〈0．05）。结论TGF-β可刺激大鼠肾小球系膜细胞CTGF和Smad2蛋白的表达,atRA可以抑制其表达,且此作用可能与Smad2信号通路有关。     

高糖及血管紧张素Ⅱ对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

糖尿病肾病 (ＤＮ)是糖尿病常见而且严重的慢性并发症 ,高血糖和血管紧张素Ⅱ (ＡｎｇⅡ )是导致ＤＮ肾纤维化最主要的两种物质 ,它们通过共同的信号传导途径参与了肾纤维化的发生发展〔1,2〕。近年来 ,国外研究发现结缔组织生长因子 (ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ)对肾细胞增殖、表型改变及细胞外基质 (ＥＣＭ )具有较强调控作用 ,其异常表达在ＤＮ肾纤维化进程中起了重要作用。本研究拟用高糖和ＡｎｇⅡ刺激体外培养的系膜细胞 ,测定其ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达情况 ,以探讨高糖和ＡｎｇⅡ对系膜细胞…     

β-雌二醇及其纳米粒对肝星状细胞TGF-β1和CTGF的影响

目的本研究首先观察纳米化后的β-雌二醇纳米粒是否和普通β-雌二醇一样对HSC增殖仍具有抑制作用；再比较β-雌二醇和β-雌二醇纳米粒对TGF-β1和其下游信号CTGF mRNA和蛋白表达的影响；进一步探讨β-雌二醇和β-雌二醇纳米粒抗肝纤维化的机制。方法①用不同浓度的β-雌二醇、β-雌二醇纳米粒干预HSCs，噻唑蓝（MTT）法检测不同时间点β-雌二醇、β-雌二醇纳米粒对HSCs增殖的影响。②用逆转录．聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测分析其对HSCs的TGF-β1、CTGF的mRNA表达的影响。③用免疫细胞化学方法分析其对HSCs的TGF-β1、CTGF蛋白的表达的影响。结果MTT法发现β-雌二醇、β雌二醇纳米粒都能抑制HSCs的增殖，下调HSCs TGF-β1mRNA、CTGF mRNA的表达，减少HSCs TGF-β1、CTGF蛋白表达量，且β-雌二醇纳米粒作用更强。结论β-雌二醇纳米粒和β-雌二醇一样具有抑制HSC增殖的作用，其抗肝纤维化的机制可能是通过抑制TGF-β1及其下游信号CTGF的mRNA和蛋白表达有关。     

PPAR-γ激活对糖基化终末产物引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激活对糖基化终末产物(AGEs)引起的大鼠肾系膜细胞TGF-β及CTGF mRNA表达的影响.方法 体外培养正常大鼠肾系膜细胞,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测不同浓度AGEs(0～400 μg/ml-1)及不同浓度PPAP-γ)激活剂(罗格列酮)和PPAR-γ阻断剂(GW9662)对AGEs(100 μg/ml-1)引起的TGF-β及CTGF mRNA表达的影响.结果 给予PPAR-γ激活剂可明显减轻AGEs引起的大鼠系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA的表达.结论 PPAR-γ激活剂可以明显减轻AGEs对系膜细胞TGF-β、CTGF mRNA的表达影响,从而改善肾小球细胞外基质积聚,在糖尿病时起到肾脏保护作用.     

TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞纤维化蛋白及长链非编码RNA uc.412表达的影响

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肾小球系膜细胞纤维化蛋白的影响,并探讨其对长链非编码RNA uc.412(lncRNA uc.412)的调控作用.方法 体外培养肾小球系膜细胞,将细胞随机分为3组,对照组仅加入培养基,TGF-β1组加入TGF-β1,TGF-β1+SIS3组同时加入TGF-β1和TGF-β...     

高糖环境中血管紧张素Ⅱ影响肾小球系膜细胞促纤维化因子的表达及机制

目的:在高糖环境中,用不同浓度血管紧张素II(Ang II)刺激肾小球系膜细胞(GMC),观察不同时点细胞内磷酸化信号转导子与转录激活子3(p-STAT 3)、转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤维连接蛋白(FN)的表达变化及AG-A90对上述指标表达的影响,探讨高糖和Ang II共同作用对GMC分泌促纤维化因子及细胞外基质的影响. 方法:(1)GMC在高糖环境中培养48h后,加入Ang II(0.1 μmol/L)孵育不同时间,用免疫细胞化学及Western Blot方法检测p-STAT 3的表达,RT-PCR检测GMC TGF-β1、CTGF、FN mRNA的表达.(2)用JAK 2/STAT 3通路特异性阻断剂AG-490(10 μmol/L)对GMC进行预处理后再加入Ang II,RT-PCR方法检测大鼠GMC TGF-β1、CTGF、FN mRNA的表达变化. 结果:(1)外源性Ang II显著增加了GMC p-STAT 3表达,刺激5 min后p-STAT 3表达即开始增多,并向细胞核积聚,30 min达高峰,90 min后逐渐恢复到刺激前水平.(2)Ang II刺激后GMC的 TGF-β1、CTGF、FN mRNA表达明显上调,而AG-490预处理显著降低了TGF-β1、CTGF、FN mRNA的高表达. 结论:Ang II可一过性激活大鼠GMC JAK 2/STAT 3信号转导通路,并上调TGF-β1、CTGF及FN mRNA表达,而阻断JAK 2/STAT 3信号转导通路可明显降低Ang II诱导的大鼠GMC TGF-β1、CTGF、FN mRNA的高表达.     

ET-1、TGF-β_1对大鼠肺成纤维细胞CTGF表达及细胞增殖的影响

目的探讨ET-1、TGF-β1对大鼠肺成纤维细胞结缔组织生长因子（CTGF）表达及细胞增殖的影响。方法体外培养大鼠肺成纤维细胞株,分为ET-1干预组、TGF-β1干预组、对照组,ET-1干预组加入含ET-1 10ng/mL的肺成纤维细胞专用培养基（FM培养基）1mL,TGF-β1干预组加入含TGF-β110 ng/mL的FM培养基1mL,对照组加入1mL FM培养基。各组设8 h及1、2、3、4、5 d六个时间点,ELISA法观察各组各时间点细胞上清中CTGF表达水平,用台盼蓝染色计数活细胞数,绘制细胞生长曲线,计算细胞增殖数。结果各时间点ET-1干预组、TGF-β1干预组CTGF水平均高于对照组（P均〈0.01）,且随着时间的增加表达水平呈逐步上升趋势。各组细胞数随着时间的增加呈上升趋势,ET-1干预组、TGF-β1干预组细胞数较对照组增加（P均〈0.01）。结论 ET-1、TGF-β1能够促进大鼠肺成纤维细胞CTGF的表达及肺成纤维细胞增殖。     

高糖对系膜细胞基质金属蛋白酶的影响

系膜区基质积聚是糖尿病肾病的病理特征之一，它主要由于基质合成与降解通路的精细平衡失调。近年来研究发现高糖能通过对系膜细胞基质金属蛋白酶类(MMPs)基因转录、活化及抑制等三方面复杂的调控而降低其基质降解活性，调控过程可能由转化生长因子(TGF)-β、胰岛素样生长因子(IGF)-1和基质糖化等介导。系膜细胞MMPs活性下降致系膜区基质降解减少可能是引起系膜区基质积聚导致糖尿病肾病的重要原因之一。     

尾加压素Ⅱ对体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质分泌的影响

目的观察尾加压素Ⅱ（UⅡ）对体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞（MC）细胞外基质（ECM）纤连蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）及转化生长因子（TGF）β分泌的影响。方法体外高糖培养大鼠MC,加入不同浓度UⅡ（终浓度10-7、10-8、10-9、10-10mol/L）,并设立UⅡ抑制组,37℃孵育24h,留取上清,应用ELISA法测定上清中FN、ColⅣ及TGFβ含量。结果10-8mol/LUⅡ作用下的大鼠MC培养上清中,FN、ColⅣ及TGFβ含量同对照组相比有显著升高（P〈0.05）;UⅡ10-8mol/L＋Ca2＋阻断剂尼卡地平组、UⅡ10-8mol/L＋Ca2＋螯合剂EDTA组及UⅡ10-8mol/L＋抗UⅡ抗体组同UⅡ10-8mol/L组相比较,细胞培养上清中FN、ColⅣ及TGFβ含量显著减少（P〈0.05）。结论一定浓度尾加压素Ⅱ能促进体外高糖培养的大鼠MC分泌ECMFN、ColⅣ及TGFβ。     

日本血吸虫病小鼠肝纤维化肝脏CTGF、TGF-β1的表达及意义

目的 研究结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）与转化生长因子β1（transforming growth factor-betal，TGF-β1）在日本血吸虫病小鼠肝纤维化肝脏中的表达状况及意义。方法 用昆明小鼠感染尾蚴建立日本血吸虫病小鼠肝纤维化模型，随机分为模型组和对照组，感染后6、10、14、18周杀鼠；HE染色观察肝脏病理变化，免疫组化法检测肝内CTGF、TGF-β1蛋白的表达水平。结果 模型组小鼠10周时形成血吸虫病肝纤维化，此时肝内CTGF表达达高峰。且10、14、18周时的表达量均显著高于同期对照组（P〈0．01）；模型组TGF-β1蛋白定量和CT—GF有相同的变化趋势，但18周时与同期对照组比较差异无显著性（P〉0．05）；模型组CTGF和TGF-β1蛋白表达水平具有直线相关性。结论 CTGF与TGF-β1的表达与日木血吸虫病小鼠肝纤维化形成有密切关系，TGF-β1的致纤维化作用可能部分通过CTGF的生物学作用介导，阻断CTGF的传导通路可能是血吸虫病肝纤维化治疗的有效靶点。