肉苁蓉总苷对清醒小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :探讨肉苁蓉总苷 (GCs)对清醒小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :结扎小鼠右侧颈总动脉建立脑缺血再灌注模型 ,观察GCs对清醒小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。结果 :GCs可使脑缺血再灌注过程中脑卒中指数、脑梗死范围百分比、脑组织丙二醛 (MDA)含量及一氧化氮合酶 (NOS)活性降低 ,超氧化物歧化酶 (SOD)活性升高。结论 :GCs对脑缺血再灌注损伤有保护作用。     

小檗碱对小鼠全脑缺血后神经元凋亡相关基因的影响

目的 探讨小檗碱对小鼠全脑缺血后神经元凋亡相关基因的影响,以了解小檗碱保护脑缺血的机制,为其开发利用提供理论依据。方法 利用改良的Pulsinelli-Brierley4血管闭塞法制成小鼠全脑缺血再灌注动物模型。小檗碱用量为1mg/kg,于术前30min,术后每日1次,腹腔注射。免疫组织化学技术检测凋亡相关基因Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果 正常组海马区未见Bcl-2或Bax蛋白表达;缺血组再灌注6h海马CA3区可见Bcl-2阳性细胞,24h达到高峰,48h开始下降;小檗碱治疗组再灌注24h、48h及168hBcl-2阳性细胞明显减少（P＜0．01）。缺血组再灌注6h海马CA1区可见Bax阳性细胞;48h达高峰;168h明显下降;小檗碱组再灌注24h,48h及168hBax阳性细胞数明显减少（P＜0．01）。结论 小檗碱可以增加小鼠全脑缺血后海马CA3区bcl-2基因的表达,降低CA1区Bax基因的表达,从而减少凋亡的发生,可能为其保护脑缺血的机制之一。     

葛根素对大鼠全脑缺血再灌注后学习记忆障碍保护作用及其机制的研究

目的 探讨葛根素对大鼠全脑缺血再灌注后学习记忆能力的影响及其机制。方法 采用四血管阻断法建立SD大鼠全脑缺血再灌注损伤模型，暗回避反应法测定学习记忆能力，并应用免疫组织化学法、原位末端标记法，检测大鼠全脑缺血再灌注海马CA，区的bcl-2阳性细胞数、凋亡细胞数的动态变化。结果 (1)与再灌注组相比，葛根素组大鼠潜伏期明显延长；(2)脑缺血再灌注后，海马CA1区bcl-2蛋白的表达随再灌注时间不同而变化，缺血20min后再灌注24h达高峰，葛根素组bcl2蛋白的表达于相应的时间点明显增多；(3)脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡损伤在再灌注72h损伤最重，葛根素组可减少相应时点神经细胞凋亡数。结论 葛根素对全脑缺血再灌注后大鼠学习记忆能力具有明显的改善作用，其作用机制可能与通过上调bcl-2基因表达从而抑制或延迟脑缺血再灌注后细胞凋亡有关。     

血塞通对缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡的影响

目的 观察血塞通预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤脑细胞凋亡的影响.方法 采用线栓法复制大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型,检测再灌注后缺血脑细胞凋亡情况, 并测定脑组织Ca2 含量变化.结果 血塞通能减轻缺血脑组织脑细胞的凋亡(P<0.01),能降低脑组织Ca2 含量(P<0.01).结论 血塞通对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤具有保护作用,可能与其降低脑组织钙含量、减轻脑细胞凋亡有关.     

疏血通对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其对NO、NOS含量的影响

目的　探讨疏血通对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法　 4 8只成年雄性沙土鼠随机分成假手术组、缺血再灌注组和治疗组 ,阻断双侧颈总动脉 7分钟后血液复流 ,制成沙土鼠脑缺血再灌注模型。每组随机取 8只沙土鼠于再灌注后 2 4小时处死 ,分离出海马区及额顶部脑组织 ,作脑组织匀浆。测定脑组织匀浆中的NO、NOS含量 ,同时对再灌注后 12小时、3天、7天海马区的病理学改变进行观察。然后比较假手术组、缺血再灌注组和治疗组上述指标的变化。结果　缺血再灌注后 12小时治疗组较缺血再灌注组海马CA1区神经元变性、坏死程度明显减轻 ,随再灌注时间的推移两组变性、坏死及形态不规则的神经元均逐渐增多 ;超微结构显示治疗组细胞器、细胞核及细胞内膜系统的损伤性改变较缺血再灌注组明显减轻。治疗组NO、NOS含量则明显低于缺血再灌注组 (P <0 .0 5 ) ,而缺血再灌注组NO、NOS含量明显高于假手术组 (P <0 .0 5 ) ;治疗组与假手术组NO、NOS含量差别无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　疏血通可能通过抑制NO合成来对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

缺血后处理通过水通道蛋白-4对大鼠缺血再灌注损伤的脑保护作用及其机制

目的研究缺血后处理(IP)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用,探讨各组大鼠水通道蛋白-4(AQP4)的表达。方法实验分组:48只雄性SD大鼠,随机分为3组(n=16)。假手术组;对照组:行单纯缺血再灌注;缺血后处理组:IP组。采用线栓法阻断大脑中动脉制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。大鼠脑缺血再灌注后24 h进行神经行为学评分和脑梗死体积测定,干湿重法测定脑水含量。并行免疫组织化学方法检测海马CA_1区细胞凋亡及AQP4表达的变化并行统计学分析。结果与对照组比较,IP组神经行为学评分明显降低,脑梗死体积、脑组织中的水分含量明显减少(P 0. 05)。再灌注24 h后,对照组海马CA_1区AQP4、凋亡细胞24 h表达量明显增加,IP组与对照组之间比较有差异(P 0. 05)。结论 IP组脑神经行为学评分、脑含水量、脑梗死体积均明显降低,提示缺血后处理可通过抑制AQP4的表达减轻缺血再灌注损伤后的脑水肿,起到脑保护作用。     

硫酸镁对脑缺血再灌注大鼠脑组织Bcl-2表达的影响及神经保护作用

目的探讨硫酸镁对脑缺血再灌注大鼠脑组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达的影响及脑保护作用。方法将32只大鼠随机分为缺血组(n=15)、硫酸镁组(n=15)和正常对照组(n=2)。采用改良的Pulsinelli法建立脑缺血再灌注大鼠模型;制模后分别给予缺血组和硫酸镁组大鼠腹腔注射生理盐水(1.5 ml/d)及硫酸镁(90 mg/kg.d)。缺血再灌注第1、3、7 d分别观察各组大鼠海马CA1区病理学改变和Bcl-2的表达水平。结果正常对照组大鼠海马CA1区神经细胞数量多,排列整齐。缺血再灌注1 d时,缺血组及硫酸镁组大鼠海马CA1区神经元均未见明显死亡;3 d时,缺血组海马CA1区神经元可见少量死亡,残存神经细胞呈较严重缺血性改变,硫酸镁组海马CA1区神经元无明显死亡;7 d时,缺血组海马CA1区神经元大部分死亡,伴有小胶质细胞增生,硫酸镁组仅见部分神经元死亡。与缺血组相比,硫酸镁组神经元受损程度较轻,坏死区较小。硫酸镁组缺血再灌注各时间点大鼠Bcl-2阳性细胞较缺血组均明显增加(均P<0.05)。结论硫酸镁能上调脑组织Bcl-2的表达,对缺血再灌注大鼠的脑组织有明显的保护作用。     

沙土鼠全脑梯度再灌注的脑保护实验研究

目的 动态研究不同灌注时间和灌注量全脑组织缺血损害的恢复程度和即早基因的表达，以探明梯度再灌注的脑保护作用机制。方法 将沙土鼠随机分为4组：实验组夹闭两侧颈总动脉，造成沙土鼠全脑缺血模型，夹闭10 min后开放10 min，开放不同脑血流量(1／4开放组，1／2开放组，一次性全开放组)，分别检测3组及单纯血液稀释组缺血海马CA区C-fos蛋白的表达，以及缺血区大脑半球的改善状况。结果 开放10 min、1／2脑血流量时C—fos蛋白表达最高(P＜0．05)，海马CA区缺血损害改善最明显；开放10 min、全脑血流量一次性开放时海马CA区损害最严重。结论 ①在梯度再灌注流量中，脑缺血海马区C-fos的表达和神经元凋亡呈反相作用关系；②低流量灌注有明显改善脑缺血的作用；⑧夹闭10 min后，开放1／2脑血流量，持续10 min的效果比一次性再灌注开放效果要好。     

大蒜素对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察大蒜素对全脑缺血再灌注损伤大鼠海马凋亡相关蛋白表达的影响,进一步探讨大蒜素的脑保护机制。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为5组:假手术组(Sham组);缺血再灌注组(IR组);缺血再灌注+大蒜素10 mg/kg(All-10 mg)、20 mg/kg(All-20 mg)、30 mg/kg(All-30 mg)组,夹闭两侧颈总动脉8 min再灌注24 h建立大鼠全脑缺血再灌注模型,取海马组织硫堇染色观察海马组织学改变及存活神经元密度;免疫组织化学染色测定海马CA1区Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果与Sham组相比,IR组海马CA1区神经元密度明显降低,Bax蛋白表达明显增加(均P0.05);与IR组相比,大蒜素处理各组海马CA1区神经元密度明显增多,Bcl-2蛋白表达明显增加,Bax蛋白表达明显减少,其中以All-20 mg组变化最显著(均P0.05)。结论大蒜素可以通过影响凋亡相关蛋白的表达而抑制细胞凋亡,从而发挥脑保护作用。     

促红细胞生成素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后梗死体积和脑组织水肿的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 采用阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCA)血流2小时,再灌注48小时制成局灶性脑缺血模型。于再灌注开始前,治疗组经腹腔注入EPO(3000 U/Kg);缺血组和假手术组给予生理盐水腹腔注射,48小时后断头取脑。制作 HE切片;以2％氯化-2,3,5三苯基四氮唑(TFC)对脑片进行染色;经图像分析仪计算梗死体积占全脑体积的百分比;同时用干湿重法测定脑组织的含水量。结果 与对照组相比,治疗组海马 CA_1区神经细胞减少(25.7±1.16)％,缺血组减少(31.2±1.49)％;治疗组与缺血组比较有显著性差异(P<0.01)。治疗组脑梗死体积比缺血组明显缩小(P<0.01)。治疗组脑组织含水量比缺血组明显减少(P<0.01)。结论 EPO能够显著降低脑组织含水量,抑制脑水肿,缩小脑梗死体积及减少神经细胞坏死,对脑缺血再灌注损伤有良好的保护作用。     

缺血后处理对大鼠脑缺血/再灌注后海马CA_1区神经元凋亡及β淀粉样蛋白1-40表达的影响

目的探讨缺血后处理(ischemic postconditioning,IP)对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)后大鼠海马CA1区神经元凋亡及β淀粉样蛋白1-40(β-Amyloid Prote in 1-40,Aβ1-40)表达的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为假手术(SH)组、I/R组、IP组。用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血60m in后进行不同时间点的缺血后处理,恢复再灌注24h后行神经行为学评分(NDS),检测神经元凋亡及Aβ1-40的表达。结果与I/R组比较,IP组显著改善NDS(P<0.01),显著减少海马CA1区神经元凋亡(P<0.01)及Aβ1-40表达水平(P<0.01)。Aβ1-40的表达与细胞凋亡呈正相关(r=0.845,P<0.01)。结论缺血后处理可通过抗细胞凋亡机制减轻脑缺血/再灌注损伤。缺血/再灌注后Aβ1-40表达上调,缺血后处理可减少缺血/再灌注后Aβ1-40表达。Aβ1-40可能参与缺血后处理抗细胞凋亡的脑保护机制。     

Synthetic fibronectin peptide exerts neuroprotective effects on transient focal brain ischemia in rats

Leukocytes have been investigated during the past decade for their roles in secondary tissue damage after ischemia/reperfusion injury. Peptide PRARIY, a synthetic fibronectin peptide, has shown an anti-adhesion effect in in vitro studies. Previous studies have demonstrated that anti-adhesion agents lead to reductions in apoptosis. The purpose of the present study was to determine whether the peptide PRARIY displays anti-inflammatory, anti-apoptotic, and neuroprotective effects following transient focal brain ischemia in rats. Twenty-six male Sprague-Dawley rats (300-350 g) were randomly divided into three groups: phosphate-buffered saline (PBS) controls, PRARI controls, and PRARIY treatments. The right middle cerebral artery was transiently occluded using a 4-0 nylon suture. One hour later, the occluder was withdrawn, and reperfusion was maintained for 48 h. Immediately after reperfusion, the peptides (20 mg/kg, dissolved in PBS) and the same volume of PBS were continuously infused through the right external carotid artery using an osmotic minipump for 24 h. Neurological deficits were examined at 3, 24, and 48 h after ischemia. Forty-eight hours after reperfusion, the rats were sacrificed for determining infarction size, leukocyte infiltration, and apoptosis in the ischemia area. Unexpectedly, PRARIY did not influence leukocyte infiltration. However, PRARIY-treated rats showed significantly functional outcome, reduction of infarction size, decrease of TUNEL positive cells, and increase of Bcl-2 (anti-apoptotic protein) positive cells in the ischemic areas when compared to the controls. These data indicate that the peptide PRARIY exerts its neuroprotective effects via supporting neural cell survival rather than anti-leukocyte recruitment following brain ischemia/reperfusion injury.     

Reduction of copper, zinc-superoxide dismutase in knockout mice does not affect edema or infarction volumes and the early release of mitochondrial cytochrome c after permanent focal cerebral ischemia

Copper,zinc-superoxide dismutase (SOD1) was shown to be highly protective against ischemia/reperfusion injury in the brain. We have recently reported that SOD1 prevents the release of mitochondrial cytochrome c and subsequent apoptosis after ischemia/reperfusion in mice. To investigate its dose dependent effect on permanent focal cerebral ischemia, we examined neurological deficit scores, infarction volume, and the amount of hemisphere enlargement after 24 h of focal cerebral ischemia in both knockout mutants of SOD1 (Sod1 -/+ and Sod1 -/-) and wild-type littermates. We also examined the release of cytochrome c and subsequent DNA fragmentation after ischemia. There were no differences in the neurological deficit scores, infarction volumes and edema formation. There was also no difference of the amount cytosolic cytochrome c at 2 h and of the amount of DNA fragmentation at 24 h after focal cerebral ischemia. The results indicate that the SOD1 enzyme does not appear to affect cerebral infarction, cerebral edema nor the mitochondrial signaling pathway for apoptosis following permanent focal cerebral ischemia where there is no reperfusion injury.     

小鼠大脑中动脉缺血再灌注后缺血区及周边区星形胶质细胞的变化

目的 探讨小鼠大脑中动脉缺血再灌注后脑梗死体积、星形胶质细胞(AS)病理形态及其蛋白表达的变化.方法 选取69只成年健康雄性KM小鼠,将小鼠随机分为脑缺血2h再灌注1、4、10、24、48、72 h模型组(n=9)以及假手术组(n=6,仅结扎右侧颈总动脉)和正常组(n=9).采用线栓法制备小鼠大脑中动脉局灶性脑缺血再灌注模型.应用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法观察脑梗死的部位与体积;免疫组化法观察脑缺血中心区与周边区不同再灌注时间点胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果 缺血再灌注1h开始出现脑梗死灶,且再灌注24 h时梗死体积最大,之后逐渐缩小(F=745.534,P=0.000).小鼠脑缺血再灌注后缺血中心区AS肿胀、肥大进而较快发生凋亡,其GFAP表达水平低于周边区(P＜0.05);而缺血周边区GFAP阳性表达的AS出现反应性活化,进而发生形态学改变;缺血周边区及对侧相应脑组织区域GFAP的表达量均随再灌注时间的延长呈现增加趋势(P＜0.05).结论 AS反应性活化可能是一种缺血后的全脑保护性防御机制,尤其是在缺血周边区,其活化程度影响脑组织的存活与修复,提示在脑缺血再灌注过程中AS反应性活化可能在脑损伤后可塑性形态及功能改变中发挥重要作用.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注ICRmRNA表达动态变化研究

目的 探讨白细胞介素1-β转化酶（ICE）在局灶性脑缺血再灌注后的表达及作用。方法 线栓法复制大脑中动脉脑缺血再灌注模型。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术检测大鼠局灶性脑缺血再灌注后ICEmRNA表达。结果 缺血3h及缺血3h再灌注随缺血及缺血再灌注时间延长,缺血中心区与半影区ICEmRNA表达处于动态变化之中,再灌注24h、48h半影区表达持续高水平,而中心区表达下降。结论 局灶性脑缺血再灌注过程中ICEmRNA表达增强,促进神经细胞凋亡,ICE参与局灶性脑缺血再灌注神经细胞凋亡的调控。     

Neuroprotective effect of pretreatment with ganoderma lucidum in cerebral ischemia/reperfusion injury in rat hippocampus

Ganoderma lucidum is a traditional Chinese medicine,which has been shown to have both anti-oxidative and anti-inflammatory effects,and noticeably decreases both the infarct area and neuronal apoptosis of the ischemic cortex.This study aimed to investigate the protective effects and mechanisms of pretreatment with ganoderma lucidum(by intragastric administration)in cerebral ischemia/reperfusion injury in rats.Our results showed that pretreatment with ganoder-ma lucidum for 3 and 7 days reduced neuronal loss in the hippocampus,diminished the content of malondialdehyde in the hippocampus and serum,decreased the levels of tumor necrosis fac-tor-αand interleukin-8 in the hippocampus,and increased the activity of superoxide dismutase in the hippocampus and serum.These results suggest that pretreatment with ganoderma lucidum was protective against cerebral ischemia/reperfusion injury through its anti-oxidative and an-ti-inflammatory actions.     

异丙酚和咪唑安定预处理对大鼠全脑缺血损伤的保护及递质机制

目的阐明异丙酚及咪唑安定预处理是否具有脑保护作用及其神经递质机制。方法雄性SD大鼠18只,随机分组,每组6只。建立清醒全脑缺血模型(4血管闭塞法)。收集清醒、缺血及再灌注后微透析标本。记录再灌注后的BIS变化,并观察反正反射恢复的时间。于缺血再灌注后进行运动功能双盲评定。全脑缺血3d后,迅速开颅取脑,10%甲醛固定后进行HE染色,并用TUNEL法进行细胞凋亡检测。双盲计数海马CA1区神经细胞及细胞凋亡率。结果异丙酚及咪唑安定预处理组与对照组相比,脑电BIS恢复较快;缺血期间谷氨酸递质浓度明显降低(P<0.01);反正反射恢复时间明显缩短(P<0.05);海马CA1区神经细胞计数明显增高(P<0.01);海马细胞凋亡率明显降低(P<0.01);两预处理组间无明显差异(P>0.05)。结论异丙酚及咪唑安定预处理脑缺血再灌注损伤具有脑保护作用,与减少缺血期间谷氨酸递质的释放有关;两组脑保护效能相同。     

Microcirculatory derangement and apoptosis in ischemia-reperfusion injury]

This study was undertaken to clarify the involvement of microcirculatory failure and apoptosis in the pathophysiology of cerebral ischemia using ICAM-1 knockout mice (K/O) and BCL-2 transgenic mice, respectively. In both permanent and transient focal ischemia, infarcted size of cerebral cortex in ICAM-1 K/O mice was significantly smaller than that in wild type mice. Microcirucaltaory disturbance in the cerebral cortex after permanent and transient focal ischemia was mitigated in ICAM-1 K/O mice compared with that in wild type mice. However, the number of granulocytes in the infarcted tissue was similar between K/O and wild mice, and neutrophil depletion in K/O mice showed further reduction of cortical infarction after transient focal ischemia. In contrast, neuronal overexpression of BCL-2 in mice showed protective effect on selective neuronal death observed in the hippocampus after transient global forebrain ischemia for 12 min. The present study supported the notion that (1) microcirculatory disturbance mediated through interaction of ICAM-1 and leukocytes played an important role in expansion of cerebral infarction after focal ischemia and (2) apoptosis inhibited in part by overexpression of BCL-2 was involved in selective neuronal vulnerability after transient global ischemia.     

海风藤提取物对脑缺血保护作用的实验研究

目的:探讨血小板活化因子(PAF)受体拮抗剂海风藤提取物对鼠脑缺血半暗带神经细胞凋亡的影响,并与传统的PAF受体拮抗剂银杏苦内酯相比较。方法:采用流式细胞分析和TUNEL方法,观察各实验组鼠脑缺血半暗带神经细胞的凋亡,并结合电镜观察缺血神经细胞超微结构的改变。结果:假手术组仅有极少量神经细胞凋亡;缺血90min再灌注12、24h缺血半暗带神经细胞凋亡明显增多;海风藤提取物、银杏苦内酯治疗组于相同时限内细胞凋亡较缺血/再灌组显著减少。结论:海风藤提取物与传统PAF受体拮抗剂银杏苦内酯均能明显减少缺血半暗带神经细胞的凋亡数量,减缓缺血区神经元损害,具有显著的脑保护作用。     

CGRP和NGF对脑局部缺血再灌注大鼠脑组织神经元凋亡及PKCmRNA表达的调节作用

目的研究大鼠脑缺血再灌注后蛋白激酶C信使RNA(PKCmRNA)的表达,探讨降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对脑组织缺血再灌注的保护作用及机制。方法采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型,采用TUNEL法、原位杂交方法及显微图像分析检测海马及皮质内神经元凋亡和PKCmRNA的表达。结果大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数及PKCmRNA反应产物较正常组增多(P<0.05),而注射CGRP或NGF后神经元凋亡数及PKCmRNA反应产物明显低于缺血再灌注组(P<0.01),二者联合应用效果更加显著(P<0.05)。结论CGRP和NGF抑制缺血神经元凋亡,参与PKCmRNA的调节,二者对缺血神经元有协同修复作用。