心脏转录因子Nkx2.5真核表达质粒的构建

目的构建人类心脏特殊转录因子Nkx2.5的真核表达质粒,为进一步探讨Nkx2.5在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法以质粒pCMV6-XL5-Nkx2.5为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2.5编码区序列,将真核表达载体pCMV-HA和Nkx2.5的PCR产物分别在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-HA-Nkx2.5,转化至大肠杆菌,提取质粒后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果成功设计引物扩增出Nkx2.5基因编码区约1 000 bp的目的片段,PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2.5基因序列。结论成功构建了含有Nkx2.5的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。     

心脏转录因子GATA结合蛋白4真核表达质粒的构建

背景:有研究表明心脏转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)与先天性心脏病的发生有密切的关系,但其机制不明,而目前尚未查及GATA4真核表达质粒构建类的报道.目的:构建人类心脏特殊转录因子GATA4的真核表达质粒.方法:对重组质粒pUC57-GATA4进行酶切获得GATA4基因编码区序列,将真核表达载体pCMV-Myc和GATA4基因在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-Myc-GATA4,转化至大肠杆菌,提取质粒后经聚合酶链反应、双酶切及测序鉴定.结果与结论:实验成功酶切重组质粒获得GATA4基因编码区约1.3 kb的目的片段,聚合酶链反应和酶切鉴定以及基因测序结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的GATA4基因序列,证实成功构建了含有GATA4基因的真核表达重组质粒.     

造血转录因子GATA—3的研究进展

转录因子GATA－3是具有锌指结构的GATA家族中的一员,它的表达范围非常广泛,而且与造血细胞发育、分化的关键十分密切。GATA－3是T祖发育中所必需的转录因子;可调控Th1和Th2细胞的生成;还可调节一些细胞因子的表达以及调控 嗜酸性细胞相关基因的表达,并与白血病、肿瘤等疾病的形成有一定相关。     

转录因子GATA—2在早期造身过程中的作用

转录因子ＧＡＴＡ－２是ＧＡＴＡ家族的一成员,以其锌指结构结合于「（Ｔ／Ａ（ＧＡＴＡ）Ａ／Ｇ」的共同ＤＮＡ序列结构。近期,通过敲除小鼠ＧＡＴＡ－２基因的实验证明了ＧＡＴＡ－２在造血细胞发育中的重要地位。ＧＡＴＡ－２基因断裂导致全部造血祖细胞的减少;相反,强制表达ＧＡＴＡ－２则阻止正常造血。ＧＡＴＡ－２的调节作用发挥于早期胚胎时期并与其它的ＧＡＴＡ转录因子共同作用于粒系、红系、巨核系和肥大细胞系等的增     

先天性室间隔缺损患者GATA4基因新突变的识别

目的 识别先天性室间隔缺损患者新的GATA4基因突变,以确定其在室间隔缺损中的防治价值.方法 收集160例先天性室间隔缺损患者的临床资料和血标本,以200名健康者为对照.应用PCR扩增GATA4基因的全部外显子,采用双脱氧核苷链末端合成终止法对全部扩增片段进行测序.借助BLAS工程序将所测序列与GenBank中的已知序列进行比对,以识别基因突变,并用Clustal W 软件分析突变氨基酸的保守性.结果 从160例先天性室间隔缺损患者中,发现3例室间隔缺损患者的GATA4基因中各有1个新的杂合错义突变,即第191、267和380位的密码子分别由AGC、GTG和GTG变为GGC、ATG和ATG,导致第191、267和380位的氨基酸分别由丝氨酸、缬氨酸和缬氨酸变为甘氨酸、蛋氨酸和蛋氨酸,亦即S191G、V267M和V380M突变;200名健康对照者均无这些突变.多物种GATA4基因编码氨基酸序列比对显示,第267位的缬氨酸在进化上高度保守.此外,还发现了1个不改变氨基酸的单核苷酸多态,即c.99 G>T多态,但这些多态在室间隔缺损组(GG基因型87.5%,GT基因型12.5%,TT基因型0%)和健康对照组(GG基因型93.0%,GT基因型7.0%,TT基因型0%)间的频率分布差异无统计学意义(两组基因型频率比较,χ~2=3.1441,P=0.0762;等位基因频率比较,χ~2=2.987 7,P=0.083 9).结论 从先天性室间隔缺损患者的GATA4基因中识别出新的杂合错义突变,揭示了室间隔缺损的新分子病因,这将有助于室间隔缺损的早期防治.     

心脏转录因子Nkx2．5真核表达质粒的构建

目的构建人类心脏特殊转录因子Nkx2．5的真核表达质粒,为进一步探讨Nkx2．5在心脏发育及先天性心脏病发病过程中的作用奠定基础。方法以质粒pCMV6-XL5-Nkx25为模板,并设计上下游引物扩增Nkx2．5编码区序列,将真核表达载体pCMV-HA和Nkx25的PCR产物分别在双酶切后用,T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-HA-Nkx2．5,转化至大肠杆菌,提取质粒后经PCR、双酶切及测序鉴定。结果成功设计引物扩增出Nkx2．5基因编码区约1000bp的目的片段。PCR和酶切鉴定结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的Nkx2．5基因序列。结论成功构建了含有Nkx2．5的真核表达重组质粒,为后续研究奠定基础。     

急性非淋巴细胞白血病中转录因子GATA—2基因插入突变

采用ＲＴ－ＰＣＲ,单链构象多态性（ＳＳＣＰ）和核苷序列分析检测８５例急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）病人外周血单个核细胞中ＧＡＴＡ－２基因的表达和突变情况。结果发现绝大多数ＡＮＬＬ都表达了ＧＡＴＡ－２基因（８９．４％）,并发现１例Ｍ１病人的ＰＣＲ产物较正常产物大,序列分析显示在ＧＡＴＡ－２基因等二锌指区出现１８个核苷酸的插突变,使其ＧＡＴＡ－２因子的第二锌指增加６个氨基酸,其中含有１个能与锌离子结合的半胱氨酸,该插入突变可能引起ＧＡＴＡ－２的功能改变,该结果为首次发现ＡＮＬＬ中的ＧＡＴＡ－２基因的插入突变。     

二叶式主动脉瓣畸形相关GATA5基因突变谱分析

目的分析先天性二叶式主动脉瓣畸形(BAV)相关GATA5基因突变谱。方法收集150例先天性BAV患者和200名健康对照者的临床资料和血标本,使用DNA纯化试剂盒抽提基因组DNA。通过聚合酶链反应扩增GATA5基因的编码区和剪接点,采用双脱氧核苷链末端合成终止法测序,将所测序列与GenBank数据库中的GATA5基因序列进行比对以发现GATA5基因突变。分别应用在线软件MUSCLE和MutationTaster评估突变氨基酸的保守性和致病性。结果在2例先天性BAV患者各发现1个新的GATA5基因杂合突变,即p.M219I和p.T289I,突变率约为1.33%。这2种突变均不存在于200名健康对照者中。多序列比对显示被改变氨基酸在进化上均完全保守,致病性预测表明这2种突变均具有致病性。结论发现BAV相关GATA5基因新突变,有助于揭示BAV新的分子机制。     

转录因子GATA的发现及其在造血系统的研究进展

凡与「Ｔ／Ａ（ＧＡＴＡ）Ａ／Ｇ」序列结合的转录因子均称为ＧＡＴＡ转录因子或ＧＡＴＡ结合蛋白。其具有锌指结构，并且与造血细胞的发育和分化的关系十分密切。     

转录因子GATA的发现及其在造血系统的研究进展

凡与[T/A(GATA)A/G]序列结合的转录因子均称为GATA转录因子或GATA结合蛋白。其具有锌指结构,并且与造血细胞的发育和分化的关系十分密切。     

转录因子婆罗双树样基因4(SALL4)研究进展

婆罗双树样基因4(sal-like4,SALL4)位于染色体20q13.13-13.2,编码蛋白是1个含有8个锌指基序的转录因子。近年的研究表明,SALL4基因在胚胎早期发育、器官形成以及胚胎干细胞增殖和多能性维持方面发挥着重要作用。SALL4基因不同位点的杂合子突变产生无义突变或移框突变,导致终止密码子提前出现,其与常染色体显性遗传病Okihiro综合征、雅-肾-眼综合征、IVIC综合征发病相关。在生殖细胞肿瘤、肝样胃癌、急性髓系白血病和前驱B淋巴细胞白血病/淋巴瘤中SALL4表达水平增高。本文就SALL4的结构、功能及其与相关疾病的关系进行综述。