MYCN基因表达抑制促TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的神经母细胞瘤(NB)为小儿常见恶性肿瘤。MYCN基因高扩增NB细胞对TRAIL诱导凋亡多有抵抗。我们以MYCN基因高扩增NB细胞株为研究对象,抑制其MYCN基因的表达,探讨其对TRAIL诱导凋亡有无增强作用。方法构建MYCN siRNA,转染NB细胞株SK-N-BE(2),抑制MYCN基因表达后,Western-blot法检测SK-N-BE(2)细胞Bcl-2、Bcl-xL、Bid、DR4、DR5表达的变化,ELISA法检测细胞凋亡。结果转染MYCN siRNA的SK-N-BE(2)细胞中MY-CN基因表达显著降低(P<0.05)。MYCN基因表达抑制后,SK-N-BE(2)细胞DR5、Bid表达增高(P<0.05),Bcl-2、Bcl-xL表达降低(P<0.05),DR4表达无变化(P>0.05),TRAIL诱导细胞凋亡显著增强(P<0.05)。结论 MYCN基因表达抑制后,可调控Bcl家族中相关蛋白、DR5的表达,促进TRAIL诱导NB细胞凋亡。     

Circ0075829在神经母细胞瘤组织中表达并抑制细胞增殖和迁移

目的探讨circ0075829对人神经母细胞瘤(NB)细胞生物学行为的影响。方法通过Sanger测序和RNase R消化实验检测circ0075829环化位点序列及环化情况;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测NB组织样本和细胞系中circ0075829表达水平;应用si RNA和慢病毒分别敲减和过表达circ0075829;采用细胞克隆形成技术和实时无标记细胞分析技术(RTCA)观察NB细胞增殖和迁移情况。全自动蛋白质印迹定量(Wes)法验证circ0075829对MAPK通路(ERK、JNK、p38)的作用。结果在NB细胞系SH-SY5Y和SK-N-BE2中可鉴定到circ0075829表达;敲减circ0075829后SH-SY5Y和SK-N-BE2细胞系增殖和迁移能力增强;反之,过表达circ0075829使细胞增殖和迁移能力减弱。MAPK通路中,敲减circ0075829激活ERK磷酸化活性,对p38和JNK磷酸化活性无明显影响。Circ0075829表达量与INSS分期(P 0.05)和危险度分期(P 0.01)呈负相关,与患者总生存期(OS)呈正相关(P=0.002)。结论本研究表明,circ0075829可抑制NB细胞增殖和迁移;其高表达与临床表型良好相关;可能通过激活ERK MAPK通路起作用,是NB潜在的生物学标志物和治疗靶点。     

戊二酰辅酶A脱氢酶基因沉默及高浓度赖氨酸对BRL肝细胞活性的影响

目的探讨戊二酰辅酶A脱氢酶(GCDH)基因沉默和赖氨酸代谢物蓄积对肝细胞活性的影响。方法将BRL肝细胞分为正常对照组、阴性对照组和GCDH沉默组。构建含靶向沉默GCDH基因的sh RNA慢病毒载体,分别用该病毒和阴性对照病毒感染GCDH沉默组和阴性对照组BRL肝细胞。感染后细胞再用含5 mmol/L赖氨酸培养基培养。免疫荧光技术检测慢病毒感染效率;Western blot法检测GCDH蛋白表达水平;MTT法检测细胞活性,Hoechest 33342染色检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞凋亡的经典指标Caspase3水平。结果构建的慢病毒可有效沉默肝细胞GCDH表达(P0.01)。MTT及Hoechest 33342染色检测各组间细胞活性及细胞凋亡比较差异无统计学意义(P0.05)。Caspase3蛋白表达在各组间比较差异亦无统计学意义(P0.05)。结论 GCDH基因沉默和赖氨酸代谢物蓄积对肝细胞无明显损伤作用。     

CHFR基因和PARP-1基因对裸鼠Raji淋巴瘤细胞增殖和凋亡调控的研究

目的 CHFR基因是一种抑癌基因,低表达或表达缺失可能促淋巴瘤细胞增殖,PARP-1基因参与其对淋巴瘤细胞增殖的调控,本研究旨在通过过表达CHFR基因及分别沉默CHFR、PARP-1基因,观察其对裸鼠移植瘤Raji细胞的影响,探讨CHFR基因和PARP-1基因调控裸鼠Raji淋巴瘤细胞的增殖和凋亡机制。方法 在非霍奇金B细胞裸鼠Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞中,用5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)过表达CHFR基因,及用慢病毒介导的shRNA分别沉默CHFR、PARP-1基因,测定各组裸鼠移植瘤的肿瘤的大小及重量;采用实时荧光定量PCR技术测定各组CHFR及PARP-1基因mRNA含量;应用MSP方法检测各组CHFR的甲基化状态;分别通过TUNEL试剂盒和免疫组化监测凋亡指数(AI)和微血管密度(MVD)。结果 5-Aza-dC组的裸鼠在非霍奇金B细胞Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞能增强CHFR基因mRNA的表达,降低PARP-1基因mRNA的表达;在体内环境中,5-Aza-dC能够促进移植瘤Raji细胞的凋亡,抑制移植瘤的生长(P<0.05),这些结果...     

miR-34b-3p靶向FDX1抑制小儿神经母细胞瘤细胞生长和凋亡

目的探究miR-34b-3p在神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)细胞增殖和凋亡过程中的调节作用。方法体外培养人正常背根神经节细胞和NB细胞系, 搜集NB组织和邻近的正常组织。qRT-PCR检测NB组织和细胞中miR-34b-3p和FDX1的表达;CCK-8法、克隆形成实验和流式细胞术检测NB细胞的增殖和凋亡;双荧光素酶报告基因分析FDX1 mRNA 3’’非翻译区(3’’-untranslated region, 3’’-UTR)和miR-34b-3p之间的靶点关系;Western blot检测相关蛋白的表达。采用SPSS 23.0和GraphPad Prism 6.01进行Student’’st-test检验。结果与对照组比较, miR-34b-3p在NB肿瘤组织和癌细胞系(SK-N-BE、SK-N-SH、SH-SY5Y和LAN-6)中均下调(P<0.05)。与对照组比较, miR-34b-3p过表达抑制了癌细胞SK-N-BE和SH-SY5Y的生长, 并诱导凋亡增加(P<0.05)。萤光素酶报告基因证实, miR-34b-3p可以与FDX1 3’’-UTR...     

沉默PAX2基因对肾间质纤维化大鼠的影响

目的 探讨体内沉默PAX2基因对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞转分化(EMT)的影响。方法 64只Wistar大鼠麻醉后,单侧输尿管结扎法制作肾间质纤维化大鼠模型,随机分为阴性对照组和PAX2基因沉默组,每组32只。将200 μL NC-siRNA-in vivo jetPEITM混合液转染阴性对照组大鼠,将200 μL PAX2-siRNA-in vivo jetPEITM混合液转染PAX2基因沉默组大鼠,各组分别于转染后3、5、7、14 d分为4个亚组,每组8只。留取各组肾组织标本,应用Real-Time PCR及Western blot法检测肾皮质PAX2 mRNA及其蛋白的沉默情况,以及E-钙粘连素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达情况。结果 PAX2基因沉默组PAX2 mRNA和蛋白表达量较阴性对照组均降低 (P < 0.05)。随着梗阻时间的延长,两组E-cadhelin mRNA和蛋白表达量逐渐下降,α-SMA mRNA和蛋白表达量逐渐升高;在转染14 d时,PAX2基因沉默组E-cadhelin mRNA和蛋白相对表达量明显高于阴性对照组 (P < 0.05),而α-SMA mRNA和蛋白相对表达量明显低于阴性对照组 (P < 0.05)。结论 沉默PAX2基因在肾间质纤维化晚期大鼠中可明显抑制肾小管EMT进程,可能对肾间质纤维化有治疗作用。     

MEG3启动子甲基化在先天性巨结肠发病机制中的作用

目的探讨母系表达基因3(MEG3)启动子甲基化对p53/p21信号通路的调控及其在先天性巨结肠(HSCR)发病机制中的作用。方法检测30例HSCR患儿有神经节细胞段、无神经节细胞段p53 mRNA、蛋白表达和MEG3基因启动子甲基化情况。应用MEG3过表达和沉默质粒转染人神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞株,建立MEG3过表达(MEG3-OE)组、MEG3抑制(MEG3-KD)组及空白对照(NC)组,使用氮杂胞苷(5-aza-CdR)调控各组后检测细胞株的增殖、凋亡情况及其p21 mRNA和蛋白的表达情况。结果①无神经节细胞段与有神经节细胞段肠管组织p53 mRNA的相对表达量分别为10.56±0.37和2.24±0.3,p53蛋白的相对表达量分别为1 058.5±106.9和583.6±87.6,MEG3启动子甲基化率分别为(58.3±4.5)%和(33.3±1.3)%,两组比较,差异均有统计学意义(t=95.67,P<0.05;t=18.82,P<0.05;χ2=6.25,P<0.05)。②加入氮杂胞苷共培养72 h时:MEG3-OE组较MEG3-KD组、NC组...     

自噬在脂多糖诱导的A549细胞炎症反应中的作用及机制研究

目的 探讨自噬在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺泡上皮A549细胞炎症反应中的作用及机制。方法 用LPS刺激A549细胞建立炎症反应模型,按浓度(0、1、5、10μg/mL)和时间(0、4、8、12、24h)分组(各组n=3)。用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理细胞,分为对照组、LPS组、3-MA组、3-MA+LPS组(各组n=3);用自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)处理细胞,分为对照组、LPS组、RAPA组、RAPA+LPS组(各组n=3)。通过Toll样受体4 (Toll-like receptor 4,TLR4)过表达质粒和siRNA转染A549细胞,实验分为两部分,每部分各分4组(各组n=3):TLR4过表达对照组、TLR4过表达组、TLR4过表达对照+LPS组、TLR4过表达+LPS组;TLR4沉默对照组、TLR4沉默组、TLR4沉默对照+LPS组、TLR4沉默+LPS组。采用CCK-8法检测细胞存活率,免疫印迹法检测炎症指标(NLRP3、Caspase-1、ASC)、自噬指标(LC3B...     

红花注射液对白血病HEL细胞增殖和凋亡的影响及相关机制探讨

目的 研究红花注射液对白血病HEL 细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨其相关分子机制。方法 HEL 细胞随机用或不用红花注射液处理,不用红花注射液处理者为对照组。不同浓度(10、20、30、40、50 mg/mL)的红花注射液作用于HEL 细胞24、48、72 h 后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力;10、20、30 mg/mL 红花注射液处理HEL 细胞48 h 后,采用流式细胞术检测各组细胞细胞周期与凋亡的变化,RT-PCR 法检测细胞HOXB3 mRNA 的表达。结果 HEL 细胞经浓度为10、20、30、40、50 mg/mL的红花注射液处理24、48 及72 h 后,与对照组比较,细胞增殖均不同程度地受抑制,且随着红花注射液浓度的增加,细胞增殖抑制率增加(PPPP结论 红花注射液体外可有效抑制HEL 细胞的增殖并诱导其凋亡,其相关分子机制可能与下调HOXB3基因的表达有关。     

干扰Foxp3在神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2中的表达及对其免疫功能的影响

目的 探讨降低Foxp3的表达对神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2免疫功能的影响.方法 设计、合成Foxp3的siRNA干扰序列,转染神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2,分别采用Real-time PCR及流式细胞术观察Foxp3以及共刺激分子CD86在于扰前后的表达;最后将Foxp3干扰的SK-N-BE2细胞与人外周血共培养,观察Foxp3的不同表达水平对上述培养体系中T淋巴细胞功能的影响.结果 本研究设计、合成的siRNA显著降低了Foxp3在神经母细胞瘤细胞SK-N-BE2中的表达,低表达Foxp3的SK-N-BE2细胞上共刺激分子CD86的表达显著升高,且在共培养体系中细胞因子IFN-γ、IL-17的表达出现轻微上调,但同时显著降低了免疫抑制分子IL-10、TGF-β在mRNA水平的表达.结论 Foxp3在神经母细胞瘤中的高表达可能是该细胞逃避免疫监视的重要机制,干扰Foxp3的表达能降低共培养体系中的免疫抑制分子表达,表明干预该分子可望为肿瘤的免疫防治提供新的思路.     

MYCN通过抑制NK细胞介导神经母细胞瘤细胞免疫逃逸机制研究

目的探讨MYCN对NK细胞的调控作用及其介导神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)细胞免疫逃逸机制。方法采用荧光原位杂交法(FISH)法和免疫组织化学法检测NB组织MYCN的表达情况, 流式细胞术检测外周血NK细胞数量及比例、NK细胞的活化、NK细胞表面活化受体和NB细胞表面相应配体的表达状况;干扰/过表达NB细胞系MYCN, 与分选的健康儿童NK细胞进行共培养, ELISA法检测共培养上清中细胞因子的分泌状况, 4 h乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞对NB细胞的杀伤性。结果 MYCN高表达NB患儿外周血NK细胞数量(F = 45. 53, P = 0. 0002)及比例(F = 43. 93, P = 0. 0003)显著减少, MYCN可显著抑制γ-干扰素、颗粒酶B和穿孔素的释放[SK-N-BE (2):t = 9. 10, P = 0. 0008;t = 4. 76, P = 0. 0089;t = 4. 66, P = 0. 0096;SH-SY-5Y:t = 16. 79, P < 0. 0001;t = 35. 85, P < 0. 0001;...     

甲基化抑制剂对CEM细胞EphB4基因表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2'脱氧胞苷（5-aza-2'-deoxycytidine,5aza-CdR）对人急性淋巴细胞白血病细胞株CEM中抑癌基因EphB4的转录调控作用及对CEM细胞增殖凋亡的生物学影响,为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据。方法：采用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测EphB4基因甲基化水平,荧光定量PCR法(Q-PCR)和Western blot方法检测5-aza-CdR处理前后EphB4基因mRNA及蛋白表达水平;MTS法检测不同剂量(1.0、2.5、5.0 μmol/L) 的5-aza-CdR作用于CEM细胞0 h、24 h、48 h、72 h、96 h对CEM细胞存活率的影响,流式细胞仪分析5-aza-CdR作用96 h对CEM细胞周期及凋亡的影响。结果：CEM细胞中存在EphB4基因的甲基化,甲基化水平为31.4%;不同浓度5-aza-CdR作用后CEM细胞甲基化水平均下降。5-aza-CdR作用使CEM细胞中EphB4 基因的mRNA和蛋白表达上升;5-aza-CdR明显抑制CEM细胞增殖,并与药物浓度及作用时间呈正相关。5-aza-CdR处理 96 h后,早期凋亡由4.1%上升为24.8%。用药96 h后,CEM细胞G1期由62.4% 降至46.8%,G2期由2.1%升至16.2%,细胞阻滞于G2期。结论：特异性甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR能使CEM细胞中沉默的EphB4基因重新表达,并可抑制白血病细胞增殖和诱导其凋亡。     

RNA干扰沉默HOXA9基因逆转U937细胞多药耐药

目的采用小干扰RNA(siRNA)沉默HOXA9基因,探讨siRNA转染后人白血病细胞株U937能否逆转化疗药物的耐药性。方法设计合成针对HOXA9的特异性siRNA寡核苷酸链,应用阳离子脂质体介导瞬时转染U937细胞。实验分为3组:实验组(脂质体转染靶向HOXA9的siRNA)、细胞对照组(仅加等量细胞及培养基)和阴性对照组(脂质体转染阴性对照siRNA)。利用反转录(RT)-PCR法、蛋白免疫印迹法分别检测各组细胞HOXA9 mRNA、蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝法(MTT)、流式细胞术检测U937细胞转染前后对长春新碱(VCR)、依托泊苷(VP-16)的敏感性及凋亡率变化。结果靶向HOXA9的siRNA可有效沉默HOXA9的表达,HOXA9 mRNA及蛋白相对水平明显下降。siRNA转染后实验组U937细胞可明显增加对VCR、VP-16的敏感性,实验组细胞的半数抑制浓度值显著低于细胞对照组及阴性对照组(Pa<0.05)。流式细胞术检测结果表明,siRNA干扰后实验组细胞联合化疗药物较细胞对照组及阴性对照组细胞凋亡率显著增高(Pa<0.05)。而阴性对照组与细胞对照组之间差异均无统计学意义(Pa>0.05)。结论靶向HOXA9的siRNA可有效沉默HOXA9基因表达,增加其对VCR、VP-16的敏感性,能逆转白血病细胞对化疗药物的耐药性。     

RNA干扰联合小剂量阿糖胞苷对K562细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨利用RNA干扰(RNAi)技术沉默同源盒(HOX)A10基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对K562细胞增殖、凋亡的影响,为白血病的基因治疗提供实验依据。方法设计合成针对HOXA10的特异性短发卡RNA寡核苷酸链,构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10真核表达载体并测序,应用阳离子脂质体转染K562细胞。RNAi与小剂量Ara-C单独和联合应用后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建pGPHI/GFP/Neo-HOXA10载体,并转染K562细胞,结果显示该载体能有效降低HOXA10 mRNA表达水平,HOXA10/β-actin灰度比值(ODR)为(38.86±4.49)%;RNAi联合小剂量Ara-C作用于K562细胞后,细胞增殖能力明显下降,细胞增殖抑制率(IR)为(75.58±8.11)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);荧光显微镜可见红色荧光凋亡细胞明显增加,凋亡率显著升高,可达(29.71±1.24)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论靶向HOXA10的RNAi技术联合小剂量Ara-C能有效抑制K562细胞增殖,并诱导其凋亡,有望成为白血病基因治疗的新方案。     

miR-144通过靶定ITGβ1调控神经母细胞瘤的侵袭转移

目的 本研究旨在探讨miR-144对神经母细胞瘤的侵袭和转移的影响,并探索miR-144是否通过靶定ITGβ1调节神经母细胞瘤的侵袭和转移.方法 利用生物信息学技术预测miR-144的靶基因ITGβ1,应用荧光报告基因检测以及荧光定量PCR、Western Blot实验对靶基因进行验证.在神经母细胞瘤SH-SY5Y和SK-N-BE分别瞬时转染化学合成的成熟双链miR-144和靶基因敲降质粒及对照质粒,建立过表达miR-144细胞模型和靶基因敲降细胞模型.通过 Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞的体外侵袭和转移能力.结果 Transwell实验结果表明,在神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和SK-N-BE中过表达miR-144后,细胞的侵袭数目分别为41±2和55±2,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01).抑制ITGβ1基因的表达后,体外划痕实验结果表明,过表达miR-144后,与对照组相比,SH-SY5Y和SK-N-BE细胞的转移能力分别下降了65.45%和75.41%(P<0.01).荧光报告基因检测结果显示过表达miR-144后,含有结合位点的荧光报告质粒的相对荧光量降低了37.11%(P<0.01),而将结合位点进行基因突变后miR-144对靶基因的抑制作用消失.过表达miR-144后,与对照组相比,SH-SY5Y和SK-N-BE细胞内的ITGβ1 mRNA水平分别降低了40%和43%,Western Blot检测结果显示,ITGβ1蛋白水平分别降低了39%和40%.结论 miR-144通过靶定ITGβ1基因抑制神经母细胞瘤的侵袭和转移过程.     

苦参碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用机制

目的 探讨苦参碱对人神经母细胞瘤( NB) SH-SY5Y细胞的作用机制.方法 取对数生长期的细胞,分为对照组(含细胞、无苦参碱)及药物处理组(苦参碱质量浓度为2.0g·L-1,对细胞的作用时间分别为16 h、24 h、32 h)共4组,每组5个复孔.应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测NB SH-SY5Y细胞增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;比色法检测Caspase-8的相对活性.采用SPSS 16.0统计软件进行单因素方差分析.结果 MTT检测对照组及各时间点药物处理组增殖抑制率分别为(4.98±1.20)％、(11.01±0.85)％、(15.22±0.71)％和(22.31±1.45)％;FCM法检测对照组及各时间点药物处理组细胞的凋亡率分别为(5.23±1.19)％、(10.74±1.65)％、(14.00±0.98)％和(17.81±1.06)％;比色法测定各组Caspase-8的相对活性分别为(4.25±1.00)％、(10.69±1.10)％、(14.80±1.44)％和(19.80±0.97)％;以上检测各组间比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05).结论 苦参碱可抑制人NB SH-SY5Y细胞增殖,并可通过上调Caspase-8的活性诱导NB SH-SY5Y细胞凋亡,其作用随时间的延长逐渐增强.     

CD40信号激活对肾小管上皮细胞的影响

目的探讨CD40信号激活对肾小管上皮细胞(HK2)的作用。方法以不同剂量的CD40激发型单克隆抗体抗(5c11)刺激HK2细胞,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,以酶联免疫吸附法检测HK2培养中趋化因子受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)水平。结果 HK2表面CD40表达高达78.9%。在不同浓度5c11刺激下,第9天时随5c11浓度增加HK2细胞增殖(OD值)逐步下降,各组间的差异均有统计学意义(P0.01);第6、第9天时HK2凋亡率升高,差异有统计学意义(P0.01),RANTES分泌随5c11浓度增加而升高,差异有统计学意义(P均0.05),并随时间推移呈增加趋势,差异有统计学意义(P均0.01)。结论 CD40信号在HK2细胞中的表达在导致肾固有细胞凋亡以及效应性细胞因子的分泌过程中起重要调节作用。     

α-半乳糖神经鞘氨醇对自然杀伤T细胞的激活作用

目的　研究α 半乳糖神经鞘氨醇KRN70 0 0与白细胞介素 15 (IL 15 )、粒 单核细胞集落刺激因子(GM CSF)对自然杀伤T细胞的激活作用。方法　采集健康儿童外周血T细胞 ,与同一个体外周血树突细胞共同培养。在培养体系中分别加入KRN70 0 0和 (或 )细胞因子 (IL 15 GM CSF)。并检测各组T细胞增殖程度变化 ,NKT/T比例 ;并分选出非杀伤T细胞 ,分别测定各组NKT细胞对肿瘤细胞系的杀伤作用。结果　KRN70 0 0刺激组、细胞因子刺激组和共刺激组T细胞增殖程度 ,NKT/T比例高于其他各组 ;各组NKT细胞对多个肿瘤细胞系均有杀伤作用 (效∶靶为 2 0∶ 1和 10∶ 1) ,共剌激NKT细胞细胞毒作用高于其他组。结论　KRN70 0 0可有效促进NKT细胞增殖 ,激活NKT细胞发挥抗肿瘤作用。IL 15、GM CSF与KRN70 0 0有协同作用     

膜联蛋白A2对肺炎支原体诱导的人气道上皮细胞EGFR/NF-κB信号转导及黏蛋白表达的影响

目的探讨沉默膜联蛋白A2(Anx A2)对肺炎支原体(MP)处理后人气道上皮细胞H292表皮生长因子受体(EGFR)/核因子κB(NF-κB)信号转导及黏蛋白表达的影响。方法将H292细胞分为对照组、MP组、NC-si RNA+MP组和Anx A2 si RNA+MP组。MP组上皮细胞采用5μg/m L MP抗原孵育2 h。NC-si RNA+MP组和Anx A2 si RNA+MP组细胞分别转染NC-si RNA和Anx A2 si RNA 24 h后用MP抗原刺激2 h。MTT法检测各组细胞活性;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测各组细胞中Anx A2 m RNA的表达水平;Western blot法检测各组细胞Anx A2、磷酸化EGFR(p-EGFR)、磷酸化p65 NF-κB(p-p65 NF-κB)的表达水平;酶联免疫吸附试验检测黏蛋白5AC(MUC5AC)和黏蛋白5B(MUC5B)的分泌。结果 MP组和NC-si RNA+MP组细胞活性低于对照组(P0.05),Anx A2 si RNA+MP组细胞活性高于MP组和NC-si RNA+MP组,但仍低于对照组(P0.05)。MP组和NC-si RNA+MP组Anx A2 m RNA和蛋白表达水平均明显高于Anx A2 si RNA+MP组(P0.05)。相比于对照组,MP组和NC-si RNA+MP组中p-EGFR、p-p65 NF-κB、MUC5AC和MUC5B的蛋白表达水平均明显升高(P0.05),Anx A2 si RNA+MP组上述蛋白表达水平则低于MP组和NC-si RNA+MP组,但仍高于对照组(P0.05)。结论 Anx A2通过介导人气道上皮细胞EGFR/NF-κB信号活化和黏蛋白表达参与MP抗原诱导的气道病变。     

����B�ܰ�ϸ����Ѫ��Bϸ���ܰ���/��Ѫ��-2�����Ｐ���Ԥ�������о�

目的探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)在儿童急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的发生、发展及预后中的意义,分析反义寡核苷酸技术(ASODN)在儿童B-ALL的临床应用前景。方法选取2006年10月至2010年10月青岛大学医学院附属医院儿科初诊B-ALL患儿36例,收集骨髓标本,获取骨髓单个核细胞(BMMCs),采用实时荧光定量PCR方法检测BMMCs中bcl-2 mRNA的表达;将bcl-2-ASODN用脂质体介导转染细胞后检测儿童B-ALL白血病细胞增殖和凋亡改变;联合bcl-2-ASODN和VDLP(长春新碱、柔红霉素、门冬酰胺酶和地塞米松)化疗药物,四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测bcl-2-ASODN对儿童B-ALL白血病细胞体外化疗药物敏感性的影响。结果 (1)bcl-2 mRNA在B-ALL患儿中表达升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),化疗敏感组患儿治疗后bcl-2 mRNA表达明显减低,较化疗耐药组差异有统计学意义(P<0.05);(2)bcl-2-ASODN用脂质体介导转染后白血病细胞增殖减弱、凋亡增加,较对照组差异有统计学意义(P<0.05);(3)体外联合bc...