低剂量中波紫外线照射Nrf2基因缺陷小鼠后诱导晒伤反应的实验研究

[目的]观察Nrf2-Keap1通路在保护皮肤免受中波紫外线(UVB)影响中的作用.[方法]8周龄雌性野生型(即Nrf2+/+组)和Nrf2-/-小鼠,每组8只,分别用200 mJ/cm2 UVB(FL120SE灯)照射小鼠耳朵背侧,用刻度计分别测量UVB照射前和照射后1、2、4、7、9、11、14 d小鼠耳朵厚度,记录照射前后两组鼠耳皮肤镜下形态,36 h取各组鼠耳标本进行HE染色及TUNEL实验,记录结果并进行统计学分析.[结果]Nrf2-/-组小鼠耳平均厚度为(0.49±0.22) cm,Nrf2+/+组为(0.25±0.03) cm,经秩和检验,差异有统计学意义(P＜0.01).UVB照射小鼠后36 h组织学检查,Nrf2-/-组真皮水肿和表皮坏死,淋巴细胞浸润和真皮血管扩张更显著；表皮晒伤细胞数[(17.0±3.9)/视野]也较Nrf2+/+组[(5.0±1.7)/视野]明显,两组差异有统计学意义(P＜ 0.01)；Nrf2-/-组TUNEL阳性细胞数约是Nrf2+/+组的5倍.单一UVB照射Nrf2-/-小鼠较Nrf2+/+小鼠发生更强烈而持久的晒伤反应.[结论]Nrf2-Keap1通路可保护皮肤免受UVB的影响,包括由于UVB照射引起的细胞凋亡和氧化损伤.     

人参皂苷Rb1对紫外线损伤的保护作用及其机制研究北大核心CSCD

目的观察人参皂苷Rb1对中波紫外线（UVB）照射诱导小鼠表皮细胞、培养的HaCaT细胞产生与清除环丁烷嘧啶二聚体（CPD）的影响及对核苷酸切除修复蛋白XPC、ERCC1表达的影响。方法42只去毛BALB／c小鼠分为4组：未处理组（6只）,UVB组（12只）,UVB＋小剂量Rb1组（12只）,UVB＋大剂量Rb1组（12只）。后2组照射前2h在背部按100μl／cm2分别外用含0．5g／L、2g／L人参皂苷Rb1的丙酮溶液,而前2组予以相应丙酮溶液。UVB剂量均为180mJ／cm2,于照射后0．5、16h分别处死半数小鼠,利用免疫组化法检测表皮CPD水平。培养的HaCaT细胞用含人参皂苷Rb1（5、20、50mg／L）的培养基孵育4h,部分细胞于UVB照射（15、30mJ／cm2）后0．5、12h终止培养并提取基因组DNA,通过斑点杂交法检测CPD。其余细胞照射（30mJ／cm2）后0、0.5、2、4、12h终止培养,提取细胞总蛋白,通过免疫印迹法分析XPC、ERCC1蛋白的表达。结果UVB照射小鼠0．5h后,各照光组表皮均产生大量CPD,但组间差异无统计学意义;在照射后16h,UVB＋小剂量Rb1组、UVB＋大剂量Rb1组表皮CPD分别为32．1±8．5、14．6±4．1,均较UVB组（67．3±11.2）显著减少,且大剂量组更为明显（P值均〈0．01）。HaCaT细胞在UVB照射后0．5h,各组CPD总量差异无统计学意义,但照射后12h,给药组CPD水平明显降低。UVB组HaCaT细胞XPC、ERCC1蛋白的表达均随着时间延长不断下降,在照射后即刻、0．5、2、4、12h,XPC／GAPDH蛋白灰度比值分别为0．68±0．11、0．47±0．09（与照射后即刻比较,P〈0．05,下同）、0．45±0．08（P〈0．05）、0．37±0．06（P〈0．01）、0．18±0．03（e〈0．01）,ERCC1／GAPDH分别为0．28±0．03、0．25±0．03（P〉0．05）、0．21±0．02（P〈0．05）、0．14±0．02（P〈0．01）、0．11±0．01（P〈0．01）;加入50mg／L Rb1干预后,XPC、ERCC1蛋白的表达不断增加,XPC／GAPDH分男别为0．56±0．07、0．48±0．14、0．68±0．15、0．97±0．20（P〈0．01）、0．79±0．12（P〈0．05）,ERCC1／GAPDH分别为0．27±0．04、0．24±0．04、0．29±0．05、0．35±0．05（P〈0．05）、0．39±0．05（P〈0．01）。结论人参皂苷Rb1对UVB诱导的CPD的产生无明显影响,但可显著加速其清除,这可能与其上调XPC、ERCC1蛋白的表达有关。     

绞股蓝皂苷对光损伤小鼠皮肤中核因子κB、p38MAPK的影响北大核心CSCD

目的观察绞股蓝皂苷（GP）对光损伤Balb／C小鼠皮肤中核转录因子kappa—B（NF—KB）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）的影响,进一步探讨GP抗皮肤光损伤的可能机制。方法将80只雌性Balb／C小鼠随机分为8组,每组10只。①空白对照组：不做任何处理;@uvB模型组：UVB照射60S;③GP乳膏I组;@GP乳膏Ⅱ组;⑤维生素E乳膏I组;⑥维生素E乳膏Ⅱ组;⑦基质I组;⑧基质Ⅱ组。I组均先外涂相应的乳膏或基质,30min后照射UVB60s;1／组均先用UVB照射60S,30min后外涂相应的乳膏或基质。采用隔日UVB照射7次Balb／C小鼠建立皮肤光损伤动物模型,应用Western印迹法检测小鼠皮肤中NF—KB抑制蛋白（IKB蛋白）、KB抑制蛋白激酶（IKK蛋白）及p38MAPK、磷酸化p38MAPK（pp38）的表达。结果空白对照组小鼠表皮中IKB、IKK蛋白未见表达。UVB模型组小鼠表皮中IKB蛋白水平为0．40±0．07,IKK蛋白为2．01±1．75。GP乳膏I组与Ⅱ组IKB蛋白表达（分别为1．63±0．85和0．90±0．40）明显高于UVB模型组（P值均〈0．05）,IKK蛋白表达（分别为0．23±0．12和0．45±0．29）明显低于UVB模型组（P值均〈0．05）,与维生素E组小鼠皮肤中IKB蛋白、IKK蛋白的表达结果相似。各组p38MAPK表达量没有明显差异。GP乳膏I组与Ⅱ组磷酸化p38MAPK表达水平（分别为0．425±0．054和0．571±0．090）明显低于UVB模型组（0．835±0．049）,与维生素E组相似。结论UVB照射能促使NF-KB活化,激活磷酸化p38MAPK;1．5％GP乳膏能抑制UVB诱导的NF—KB通路及p38MAPK的激活,可能是其抗炎、抗光损伤的作用机理之一。     

Nrf2蛋白在中波紫外线照射HaCaT细胞中的光保护作用

【摘要】 目的 探讨Nrf2对中波紫外线（UVB）致HaCaT细胞光损伤的保护作用及其作用机制。方法 将培养的HaCaT细胞分为对照组、UVB组、Nrf2组、Nrf2 + UVB组，Nrf2组、Nrf2 + UVB细胞感染Nrf2基因过表达慢病毒，UVB组、Nrf2 + UVB组细胞以30 mJ/cm2的UVB照射30 s，继续培养24 h，观察UVB照射后HaCaT细胞形态的变化，Western印迹检测各组Nrf2蛋白水平，CCK8法检测各组细胞生存率，流式细胞仪检测各组细胞活性氧（ROS）水平，生化法检测超氧化物歧化酶（SOD）水平。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果 对照组 HaCaT 细胞形态为多角形、呈簇集状生长，UVB照射后细胞出现皱缩、变圆，漂浮细胞数增多，贴壁数量明显减少。对照组、UVB 组、Nrf2组、Nrf2 + UVB组Nrf2蛋白相对表达水平分别为1.84 ± 0.047、0.63 ± 0.082、2.19 ± 0.168、1.43 ± 0.069，差异有统计学意义（F = 64.81，P < 0.05），Nrf2组水平高于对照组（t = 14.82，P < 0.05）；4组细胞生存率分别为98.00% ± 2.39%、24.40% ± 2.98%、71.63% ± 3.39%、43.38% ± 3.39%，差异有统计学意义（F = 236.66，P < 0.05），UVB 组细胞活力低于对照组（t = 33.34，P < 0.05）和Nrf2 + UVB组（t = 10.07，P < 0.05）；4组细胞的相对ROS含量分别为1.27 ± 0.10、5.65 ± 0.19、2.10 ± 0.73、3.67 ± 0.19，差异有统计学意义（F = 481.39，P < 0.05），UVB组高于对照组（t = 33.68，P < 0.05）和Nrf2 + UVB组（t = 12.47，P < 0.05）。4组细胞SOD水平差异有统计学意义（F = 170.76，P < 0.05），UVB组低于对照组（t = 11.25，P < 0.05）和Nrf2 + UVB组（t = 17.52，P < 0.05）。4组细胞IL-6水平差异有统计学意义（F = 532.34，P < 0.05），UVB 组高于对照组（t = 28.48，P < 0.05），Nrf2 + UVB组低于UVB 组（t = 27.82，P < 0.05）。4组细胞TNF-α水平差异无统计学意义（F = 2.02，P = 0.19）。结论 Nrf2可以通过降低细胞内ROS水平，提高内源性抗氧化酶SOD的活性，保护细胞免受UVB照射引起的氧化损伤。     

外源性胆绿素对中波紫外线诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用

目的 探讨外源性胆绿素对中波紫外线（UVB）照射的HaCaT细胞的保护作用及其机制。方法 将培养的HaCaT细胞分为对照组（不加胆绿素,不照射UVB）、UVB组（30 mJ/cm2 UVB照射）和100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组（分别于30 mJ/cm2 UVB照射前1 h加入相应浓度胆绿素）,处理完成后继续培养24 h,观察HaCaT细胞形态变化,CCK8法检测各实验组细胞生存率。Western 印迹检测抗氧化信号分子Nrf?2蛋白及光损伤信号分子基质金属蛋白酶1（MMP?1）和MMP?3蛋白表达。结果 CCK8法结果显示,UVB组HaCaT细胞活力低于对照组（P < 0.05）,在加入100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L 胆绿素预处理后,细胞生存率逐渐升高,与UVB组比较,差异有统计学意义（均P < 0.05）。Western印迹显示,UVB组MMP?1（1.150 ± 0.187）、MMP?3（0.979 ± 0.054）蛋白表达较对照组（0.116 ± 0.018、0.636 ± 0.035）升高（均P < 0.01）,而100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组MMP?1（0.825 ± 0.139、0.313 ± 0.047和0.286 ± 0.036）、MMP?3（0.888 ± 0.017、0.672 ± 0.042和0.569 ± 0.037）蛋白表达较UVB组降低（均P < 0.05）。UVB组Nrf?2蛋白（0.906 ± 0.034）较对照组（1.242 ± 0.141）表达降低（P < 0.05）,100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组Nrf?2蛋白表达（1.556 ± 0.112、1.897 ± 0.234和2.035 ± 0.274）较UVB组升高（均P < 0.01）。结论 外源性胆绿素对UVB诱导的HaCaT细胞损伤起保护作用,该作用可能与Nrf?2抗氧化信号通路有关。     

强功率UVA1照射对增生性瘢痕动物模型瘢痕形成的影响

目的 探讨不同剂量UVA1对全层皮肤缺损诱导的兔耳增生性瘢痕模型的影响情况。方法18只新西兰白兔双耳腹面手术切除2 cm × 5 cm全层皮肤至筋膜,建立兔耳增生性瘢痕模型后,随机分成3组,每组6只兔,将每只兔左耳分别于伤后即刻、1个月、2个月开始用不同剂量大功率UVA1照射,右耳为非照射组。各照射组又分为两个剂量照射组,兔耳分别每次照射UVA1 60 J/cm2、110 J/cm2,连续30次。结果 创伤建模1个月、2个月后开始照射UVA1组,与照射前比较,高剂量组照射后瘢痕处真表皮厚度（282.32 ± 58.60;336.50 ± 98.34）和真皮胶原含量（24.91 ± 16.88;34.47 ± 8.90）均显著降低（P < 0.05）;照射组与非照射组在UVA1照射前后差值的比较,高剂量组照射后瘢痕处表真皮厚度差值（-143.52 ± 42.91;-142.44 ± 49.96）和真皮胶原含量差值（-56.39 ± 15.04;-48.35 ± 10.44）的差异有统计学意义（P < 0.05）;各照射组UVA1对瘢痕皮肤厚度（811.68 ± 79.03;659.08 ± 178.98）和胶原含量（67.80 ± 9.06;61.35 ± 12.91）的影响均存在剂量依赖性（P < 0.05）。而创伤建模的同时照射UVA1组,两种剂量的UVA1照射后瘢痕处皮肤厚度和胶原含量较非照射耳均显著增加（P < 0.05）。结论 上皮化后开始UVA1照射可使瘢痕变软,皮肤变薄,胶原含量降低。创伤同时照射UVA1不仅不能阻止瘢痕模型的建立,反而加重瘢痕。     

甘草、红景天、黄芪粗提物对中波紫外线诱导小鼠皮肤组织白介素—10的影响

目的探索甘草、红景天、黄芪等粗提物对中波紫外线（uw3）损伤BALB／c小鼠皮肤组织的保护作用及其机制。方法将54只BALB／c小鼠用随机数字法分为9组（每组6只）：正常对照组、UVB对照组、溶剂对照组、UVB＋5％与10％甘草组、UVB＋5％与10％红景天组、UVB＋5％与10％黄芪组。其中,正常对照组不予处理,UVB对照组单独给予UVB照射,溶剂对照组给予外涂蒸馏水＋UVB照射,其余各处理组分别给予外涂相应浓度药物＋UVB照射,连续1个月。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组小鼠背部照射部位皮肤组织匀浆上清液中白介素（IL）．10水平。结果经UVB慢性照射后小鼠皮肤中Ⅲ—10水平为（838．8±114．34）pg／ml,较正常对照组（568．45±78．8）pg／ml显著增高（P〈0．01）,经不同剂量甘草、红景天、黄芪粗提物水溶液处理后可进一步上调IL-10水平,以甘草组最为明显,但IL-10水平与粗提物浓度之间无明显依赖关系。结论在受到UVB慢性照射后小鼠皮肤组织中IL-10表达水平增加,甘草、红景天、黄芪粗提物水溶液可进一步上调其IL-10水平,上述3种药物对UVB诱导的小鼠皮肤损伤的保护作用可能与上调IL-10表达水平有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对紫外线辐射后小鼠表皮细胞凋亡的影响

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯[（-）-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]脂质体对急、慢性中波紫外线（UVB）辐射后BALB／c小鼠表皮细胞凋亡的影响。方法：EGCG脂质体局部外用于BALB／c小鼠背部皮肤,将小鼠分为5组,分别给予中波紫外线180mJ／cm^2照射1次为急性损伤组：30mJ／cm^2每天照射1次,持续30d,为慢性损伤组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测小鼠表皮中的凋亡细胞。结果：急性损伤组中接受UVB照射的小鼠表皮中大部分细胞发生凋亡,EGCG脂质体未表现出对表皮细胞凋亡的影响;慢性损伤组中照光加药组的凋亡细胞多于其他组,EGCG脂质体表现为促凋亡作用（P〈0．05）。结论：EGCG脂质体不影响急性大剂量UVB辐射所致的表皮细胞凋亡;对慢性低剂量UVB辐射有促凋亡作用。     

外用表没食子儿茶素没食子酸酯抵抗中波紫外线对小鼠皮肤的慢性光损伤作用

目的：研究中波紫外线（UVB）慢性辐射BALB／C小鼠后皮肤的组织病理改变、表皮细胞凋亡情况及表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对其的影响。方法：EGCG局部外用于小鼠耳、背部皮肤后分别给予不同强度的UVB辐射，每日1次．连续1个月，石蜡切片苏木精-伊红染色观察不同处理条件下皮肤组织病理变化，同时应用末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测小鼠表皮中的凋亡细胞。结果：UVB慢性辐射对BALB／C小鼠皮肤有明显影响，主要表现有表皮过度角化、棘层肥厚、海绵样水肿、晒斑细胞、真皮乳头层水肿、毛细血管扩张、炎性细胞浸润等。EGCG预处理能减轻UVB诱导的上述组织病理变化。另外，对慢性低剂量UVB辐射组，EGCG有一定的促细胞凋亡作用。结论：不同剂量UVB慢性辐射后小鼠皮肤组织病理改变明显，EGCG可保护UVB辐射诱导的光损伤作用，并对低剂量慢性UVB辐射后BALB／C小鼠皮肤细胞有促进凋亡作用。     

金属硫蛋白基因对小鼠UVB照射的保护作用

目的:研究金属硫蛋白基因对UVB照射反应的影响.方法:敲除小鼠金属硫蛋白基因,背部皮肤剃毛后24 h照射不同剂量的UVB(0.05 J/cm2,0.70 J/cm2,1.40 J/cm2),照光前、后24 h测量小鼠背部皮肤厚度,皮肤组织病理观察照光后24 h日晒伤细胞形成情况.正常野鼠作对照.结果:小剂量UVB照射时两种小鼠水肿程度无显著性差异,大剂量UVB照射时金属硫蛋白基因敲除小鼠背部水肿显著高于野鼠.病理显示金属硫蛋白基因敲除小鼠较野鼠有更多的日晒伤细胞产生.结论:金属硫蛋白基因对急性UVB照射具有保护作用.     

Nrf2及其下游抗氧化因子在茶多酚防御UVB致无毛鼠皮肤急性光损伤中的表达及意义

目的探讨Nrf2在茶多酚防御UVB致无毛鼠急性光损伤中的表达及意义。方法将10%茶多酚溶液均匀涂于BALB/C突变无毛鼠背部皮肤,30min后用约540m J/cm2UVB照射背部,连续3d,于第4天取皮肤组织备用检测。采用光学显微镜观察无毛鼠皮肤组织病理的变化情况,q-PCR检测Nrf2 m RNA的表达量,免疫组化分析皮肤组织中Nrf2表达情况,ELISA法检测Nrf2通路下游超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的变化。结果外用10%茶多酚溶液可降低无毛鼠皮肤急性光损伤程度,免疫组化结果显示茶多酚治疗组Nrf2表达量明显高于空白对照组及UVB照射组,Nrf2 m RNA的表达量及其该通路下游SOD,CAT,GSH-Px等抗氧化因子亦明显增加(P0.05)。结论茶多酚能有效防御UVB致无毛鼠皮肤急性光损伤,与茶多酚激活Nrf2通路,启动Nrf2及其Ⅱ相解毒酶基因表达,使得组织内Nrf2通路下游抗氧化分子SOD,CAT,GSH-Px等浓度明显增加直接相关。     

紫檀芪对中波紫外线照射的HaCaT细胞抗氧化物酶表达及活性的影响

目的 探讨紫檀芪对HaCaT细胞急性中波紫外线（UVB）损伤的防御作用及相关机制。方法 MTS法和流式细胞仪检测不同浓度紫檀芪作用后HaCaT细胞增殖活性及凋亡与坏死率,筛选无毒性紫檀芪浓度。HaCaT细胞随机分为对照组（不做任何处理）、UVB组和2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪组及2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪 + UVB组。Western印迹法检测紫檀芪和UVB处理前后HaCaT细胞内Nrf2核转位情况,定量PCR检测过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）的表达,ELISA检测CAT和SOD活性。结果 MTS法和流式细胞仪检测结果显示,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪对HaCaT细胞无毒性作用。对照组Nrf2胞质蛋白1.03 ± 0.08、胞核蛋白1.04 ± 0.11;与对照组比较,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪组Nrf2胞质蛋白和胞核蛋白均无明显变化,UVB组Nrf2胞质蛋白无明显变化,但Nrf2胞核蛋白显著增加（1.77 ± 0.08,q = 17.24,P < 0.01）。与对照组及UVB组比较,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪 + UVB组Nrf2胞质蛋白浓度均显著下降（0.86 ± 0.10、0.87 ± 0.11、0.46 ± 0.11,均P < 0.05）,胞核蛋白浓度则显著升高（2.38 ± 0.11、2.57 ± 0.11、2.07 ± 0.13,均P < 0.01）。qPCR显示,与对照组相比,UVB照射对CAT mRNA表达有明显的抑制作用（P < 0.05）,对SOD mRNA表达则无明显影响（P > 0.05）,2.44、4.88和9.75 μmol/L紫檀芪组CAT和SOD的表达亦均无明显变化（P > 0.05）。然而,2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪可减轻UVB对CAT表达的抑制（P < 0.05）,并上调SOD的表达（P < 0.05）。ELISA显示,UVB照射可显著降低HaCaT细胞内CAT和SOD活性（均P < 0.001）,2.44、4.88、9.75 μmol/L紫檀芪可减轻UVB对CAT和SOD活性的抑制作用（P < 0.05）,但其活性仍明显低于对照组（P < 0.05）。结论 紫檀芪可通过激活Nrf2通路,上调其下游抗氧化物酶CAT、SOD表达,防御HaCaT细胞急性UVB损伤。     

扇贝多肽对UVB损伤无毛小鼠皮肤结构及其抗氧化剂含量的影响

目的 :　本文探讨扇贝多肽 (PCF)对中波紫外线 (UVB)照射下小鼠皮肤的氧化损伤有无保护作用。方法 :　建立UVB(辐照强度为 5 .15× 10 - 2 J cm2 × 30天 )对无毛小鼠皮肤氧化损伤模型。昆明种无毛小鼠 ,随机分为双蒸水未照射组和UVB模型组 (双蒸水对照组、5 %PCF组、2 0 %PCF组、10 %维生素C组 )。光镜下测表皮平均厚度及成纤维细胞数目 ;电镜观察皮肤组织超微结构。酶法测定皮肤匀浆上清液中抗氧化酶 (谷胱甘肽GSH -Px、超氧化物歧化酶SOD、)的活性和丙二醛 (MDA)的含量及总抗氧化能力(T -AOC)。结果 :　①UVB损伤的对照组小鼠皮肤光镜下可见表皮变薄、成纤维细胞数量减少 ;电镜下表皮细胞胞质内可见空泡形成 ,真皮的成纤维细胞内可见囊泡状扩张的滑面内质网、粗面内质网等细胞器减少。②PCF能增加表皮的平均厚度和皮肤成纤维细胞的数量 ;超微结构显示PCF组表皮细胞结构正常 ,成纤维细胞的粗面内质网明显增多 ,与维生素C的抗氧化作用一致。③PCF可提高UVB辐射损伤小鼠皮肤组织的总抗氧化能力、SOD活性 ,降低MDA含量 ;与维生素C的抗氧化作用一致。结论 :　扇贝多肽与VitC一样具有抗UVB氧化损伤的作用。其作用机制可能与扇贝多肽提高抗氧化酶含量、清除自由基有关     

维甲酸促进UVB照射引起无毛小鼠真皮损伤的修复及皱纹的消失

慢性日光或 UVB 照射可致真皮结缔组织的严重损伤,具有代表性的表现为弹力纤维病和葡萄糖氨基聚糖的改变,从而导致皮肤的老化。以往曾认为此损伤是不可逆的,但最近的研究证明,这种损伤在停止 UVB 照射后可自然恢复,在真皮出现修复带。作者用动物试验证明维甲酸能加速这种修复过程。作者用 UVB 照射无毛小鼠,每次剂量一般不超过0.06J/cm~2,以引起轻度红斑为度,每周照射3次,共5～6月,每只小鼠接受的总量约为3.5～4.0J/cm~2,在组织学上可见明显的弹力纤维变性,弹性硬蛋白见于整个真皮,特别是在真皮表皮连接处,表皮亦增厚,皮肤表面出现了“固定性”皱     

日常暴露日光改变表皮通透屏障功能稳态动力学及角质层的致密性

日晒导致皮肤的变化主要由UVA和UVB所致.通常UVA主要导致真皮的改变,而UVB主要引起表皮的改变.由UVB所致的表皮改变包括:晒斑、晒伤、色素增加、皮肤肿瘤等.角质层的功能也可由UVB照射而发生改变.动物试验显示,UVB照射降低角质层含水量[1],红斑量UVB照射降低表皮通透屏障功能[2],亚红斑量UVB促进表皮屏障功能的恢复[3].日常直接日光暴露对表皮通透屏障功能及角质层的致密性是否有影响,尚未见相关的报道.了解这些对于我们日常生活中更好地预防UVB对皮肤的损害具有指导意义.为此,我们在大连地区测量日常直接日光暴露时间长短不同的群体的表皮通透屏障功能及角质层的致密性.基金项日:2008中华医学会-薇姿皮肤医学研究基金(080923ACD1472328)     

黄芩苷对UVB照射后小鼠表皮细胞Ki-67及PCNA表达的影响

目的:评价外用黄芩苷对UVB照射后小鼠表皮厚度及细胞增殖标志物Ki-67、PCNA表达的影响.方法:将6周龄大的雌性C57BL/6小鼠随机分为空白对照、单纯UVB照射和涂抹黄芩苷+UVB照射3组.末次照射24 h后取背部皮肤切片HE染色,免疫组化法、Western blot法检测皮肤组织中Ki-67、PCNA蛋白的表达.结果:黄芩苷预处理可抑制反复UVB照射引起小鼠皮肤表皮层增厚,真皮层单一核细胞浸润.Ki-67及PCNA在对照组表达分别(27.78±13.85)%和(20.68±10.64)%,UVB组表达分别(57.83±9.71)%、(62.48±8.73)%,两组有显著性差异(P<0.05).涂抹黄芩苷+UVB照射组Ki-67及PCNA表达为38.69±11.76、42.83±10.37,虽高于对照组,但明显低于UVB照射组(Ps<0.05).结论:外用黄芩苷可通过降低照射小鼠表皮中Ki-67及PCNA的表达从而发挥其抗UVB损伤作用.     

紫外线调节血管内皮生长因子分泌机制的研究

目的：探讨中波紫外线（UVB）增强血管内皮生长因子（VEGF）分泌的信号途径。方法：采用流式细胞仪检测表皮生长因子受体（EGFR）和磷酸化EGFR表达。ELISA检测上清液中VEGF水平。结果：UVB照射后15min可以检测到磷酸化EGFR表达．30min时达最高峰,1h开始下降,2～8h降至基础水平,而EGFR表达量不变。UVB（30mJ／cm^2）分别照射EGFR^＋/-、EGFR^＋/＋和EGFR^-/-小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）,结果显示EGFR^＋/＋MEF组VEGF分泌明显高于EGFR^＋/-MEF组和EGFR^-/-MEF组,UVB对EGFR^-/--MEF的VEGF分泌促进作用不明显。EGFR磷酸化酶抑制因子PD153035可明显抑制VEGF分泌,1μmol／L有抑制作用,5μmol／L抑制作用增强。磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）高度选择性抑制剂LY294002及不可逆抑制剂wortmannin均可明显抑制VEGF分泌。结论：紫外线通过EGFR—PI3K-蛋白激酶（AKT）途径增强VEGF分泌。     

UVA诱导抗Ro/SSA血清注射多巴色素异构酶基因敲除小鼠表皮细胞凋亡

目的 探讨人抗Ro/SSA血清腹腔注射多巴色素异构酶基因敲除小鼠(Dct~(-/-))与野生型C57BL/6J小鼠对慢性UVA照射诱导表皮细胞凋亡的易感性.方法 将高滴度人抗Ro/SSA血清间断腹腔注射于Dct~(-/-)、鼠与野生型C57小鼠,随后给予小鼠慢性UVA照射.每次照射剂量为10 J/cm~2,共6次,累计剂量为60 J/cm~2.取尾部照射区域皮肤,行石蜡包埋组织切片,经HE染色和TUNEL标记在光镜下分别计数每个视野100个表皮细胞中日晒伤细胞(SBC)数和凋亡细胞数.结果 经慢性UVA照射后,抗Ro/SSA血清注射Dct~(-/-)-小鼠SBC数为(14±1.0)/100个表皮细胞,凋亡细胞数为(62 ±2.7)/100个表皮细胞.血清注射C57野生型小鼠SBC数为(7±0.6)/100个表皮细胞,凋亡细胞数为(30±1.6)/100个表皮细胞,两者比较差异均有统计学意义(P<0.05).而未注射血清的Dct~(-/-)小鼠SBC数为(6±0.9)/100个表皮细胞,凋亡细胞数为(42±2.5)/100个表皮细胞,与注射血清的Dct~(-/-)小鼠相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 当一定浓度的抗Ro/SSA抗体存在时,表皮黑素细胞Dot基因缺陷能增强慢性UVA诱导的表皮细胞凋亡,可能关系到红斑狼疮患者抗Ro/SSA抗体介导皮肤光敏感性发生.     

绞股蓝皂苷对光损伤小鼠皮肤中核因子κB、p38MAPK的影响

目的 观察绞股蓝皂苷(GP)对光损伤Balb/C小鼠皮肤中核转录因子kappa-B(NF-κB)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的影响,进一步探讨GP抗皮肤光损伤的可能机制.方法 将80只雌性Balb/C小鼠随机分为8组,每组10只.①空白对照组:不做任何处理;②UVB模型组:UVB照射60 s;③GP乳膏Ⅰ组;④GP乳膏Ⅱ组;⑤维生素E乳膏Ⅰ组;⑥维生素E乳膏Ⅱ组;⑦基质Ⅰ组;⑧基质Ⅱ组.Ⅰ组均先外涂相应的乳膏或基质,30 min后照射UVB 60 s;Ⅱ组均先用UVB照射60 s,30 min后外涂相应的乳膏或基质.采用隔日UVB照射7次Balb/C小鼠建立皮肤光损伤动物模型,应用Western印迹法检测小鼠皮肤中NF-κB抑制蛋白(IκB蛋白)、κB抑制蛋白激酶(IKK蛋白)及p38MAPK、磷酸化p38MAPK(pp38)的表达.结果 空白对照组小鼠表皮中IκB、IKK蛋白未见表达.UVB模型组小鼠表皮中IκB蛋白水平为0.40±0.07,IKK蛋白为2.01±1.75.GP乳膏Ⅰ组与Ⅱ组IκB蛋白表达(分别为1.63±0.85和0.90±0.40)明显高于UVB模型组(P值均＜0.05),IKK蛋白表达(分别为0.23±0.12和0.45±0.29)明显低于UVB模型组(P值均＜0.05),与维生素E组小鼠皮肤中IκB蛋白、IKK蛋白的表达结果相似.各组p38MAPK表达量没有明显差异.GP乳膏Ⅰ组与Ⅱ组磷酸化p38MAPK表达水平(分别为0.425±0.054和0.571±0.090)明显低于UVB模型组(0.835±0.049),与维生素E组相似.结论 UVB照射能促使NF-κB活化,激活磷酸化p38MAPK; 1.5％GP乳膏能抑制UVB诱导的NF-κB通路及p38MAPK的激活,可能是其抗炎、抗光损伤的作用机理之一.     

UVB诱导人皮肤成纤维细胞的氧化应激损伤研究

目的 观察人皮肤成纤维细胞被UVB照射后的光损伤、凋亡、周期阻滞和氧化应激损伤状态,并检测氧化应激的相关信号蛋白p66Shc的表达情况。方法 用小剂量UVB多次照射培养的人皮肤成纤维细胞,以细胞衰老β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）化学染色法观察细胞衰老状态,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,ELISA法检测细胞内超氧化物歧化酶活性和丙二醛的含量,并以Western印迹法检测p66Shc蛋白的表达。结果 SA-β-Gal染色显示,培养的人皮肤成纤维细胞在UVB照射后呈强阳性染色;细胞凋亡率在未照射的对照组为0.96％,UVB照射组为37％;而细胞周期检测显示,经UVB照射的人皮肤成纤维细胞大部分阻滞于G0/G1期（80.07%）。细胞内超氧化物歧化酶水平对照组为（52.35 ± 4.97） ng/g蛋白,UVB照射组为（7.81 ± 0.68） ng/g蛋白（两组比较,P < 0.01）;而丙二醛水平两组分别为（3.52 ± 0.34） ng/g蛋白和（33.91 ± 3.20） ng/g蛋白（两组比较,P < 0.05）。人皮肤成纤维细胞经UVB照射诱导后24 h,p66Shc呈弱阳性表达,48 h后表达进一步增强。结论 培养的人皮肤成纤维细胞经UVB照射后进入氧化应激增强状态。p66Shc蛋白在此过程中表达逐渐增强。