新生大鼠成牙本质细胞及牙本质形成的光、电镜观察

目的:探讨成牙本质细胞的发育变化以及牙本质的结构发育特点.方法:取不同日龄新生大鼠的下颌切牙牙胚进行光、电镜观察.结果:成牙本质细胞由低柱状变为高柱状,并发生极化,细胞器渐增多,有分泌颗粒出现,细胞突起逐渐形成;形成的前期牙本质和牙本质在6～9 d达最厚,且胶原纤维较丰富而密集,牙本质小管多;成牙本质细胞突起贯穿前期牙本质和牙本质,并进入牙釉质中.结论:0～9 d日龄大鼠的下颌切牙牙胚正处于牙体组织的分泌形成期,是研究牙齿发育过程的很好的动物模型.     

牙本质形成的研究进展

牙本质形成包括细胞分化、成牙本质细胞分泌细胞外基质及基质矿化。目前认为这一过程有很多因素参与调控，如特异性蛋白、骨形成蛋白(BMP)及多种生长因子。现就近年牙本质形成有关影响因素的报道作一综述。     

牙本质及成牙本质细胞体外培养的研究现状

龋病是造成牙体缺损与缺失的主要原因 ,是口腔科常见的多发病 ,也是严重危害人类身体健康的三大疾病之一。世界卫生组织已将龋病列为危害人类健康的三大疾病之一。根据我国各地调查资料的统计结果 ,我国总平均患龋率为37 3%。患龋者龋均为 2 4 7颗牙 ,因龋病拔除者约占5 6 6 %〔1〕。另一严重危害口腔健康的疾病是牙周病 ,因牙周病拔除者约占 31 1%。事实上牙周病患牙很多是自行脱落的 ,故事实上由牙周病而丧失的牙齿大于以上数字。由此看来 ,龋病和牙齿缺失是关系到我国广大人们身体健康的重要因素之一。人们对龋病的治疗主要沿袭传…     

成牙本质细胞的分化指标

成牙本质细胞源于神经嵴 ,牙乳头细胞在来自上皮源性的生物分子作用下 ,依照特定的时空式于钟状期晚期开始分化 ,其主要功能是合成和分泌牙本质细胞外基质 ,并促进矿化[1] 。成牙本质细胞在成熟过程中表现出特定的形态 ,与其发挥的分泌功能相适应。细胞形态学特征和成牙本质细胞分泌的特异性基质蛋白是成牙本质细胞最为重要的表型[2 ] 。但是两者均有一定的复杂性 ,首先 ,成牙本质细胞形态经过一系列变化过程 ,最终才极化为成熟细胞。而随着分子生物学技术的进展 ,人们对牙本质特异蛋白的认识不断深入 ,业已进入分子水平 ,但仍有许多问题尚…     

强气流吹干牙本质对成牙本质细胞影响的实验研究

目的:利用强度不同气流吹干制备完全的深龋洞后充填窝洞,研究强气流吹干牙本质对成牙本质细胞的影响。方法:选取20颗健康成人第三磨牙,表现为无对颌或是阻生齿,均未患有牙体牙周疾患。将选取的20颗牙齿分别制备洞型致剩余牙本质厚度约0.25mm,将20颗牙齿随机分为2组,一组使用轻到中度强度气流吹干窝洞后进行充填作为对照组,另一组使用强气流。显微图像分析系统计算台盼兰染色率以判断强气流对成牙本质细胞的影响,并做统计学分析。结果:利用强气流吹干窝洞可造成龋洞对应髓室顶或髓室壁的成牙本质细胞及其突起萎缩、坏死,周围区域成牙本质细胞形态良好。结论:使用强气流吹干切割完全的牙本质可伤害成牙本质细胞,临床治疗深龋应避免使用强气流吹干生活牙本质。     

脱矿牙本质对修复性牙本质形成的诱导作用

自从 1 96 5年 Urist等建立了骨诱导理论以来 ,人们对与骨有相似化学组成的牙本质是否具有诱导能力产生了浓厚的兴趣 [1] 。大量研究表明 ,脱矿牙本质 (demineralized dentin)不仅具有骨诱导作用 ,而且还具有诱导修复性牙本质形成的作用 [2、3、4 ] 。因此 ,对脱矿牙本质诱导修复性牙本质形成的研究 ,既具有临床应用价值 ,又将对细胞分化理论的认识产生深远的影响。1　脱矿牙本质的种类和制备1 .1　同种脱矿牙本质基质 (allogeneicdemineralized dentin matrix,DDM.)取年龄 3 5岁以下供体的无龋坏、无牙周病的阻生牙、多生牙、埋伏牙或因…     

成牙本质细胞的分化指标

成牙本质细胞源于神经嵴 ,牙乳头细胞在来自上皮源性的生物分子作用下 ,依照特定的时空式于钟状期晚期开始分化 ,其主要功能是合成和分泌牙本质细胞外基质 ,并促进矿化[1] 。成牙本质细胞在成熟过程中表现出特定的形态 ,与其发挥的分泌功能相适应。细胞形态学特征和成牙本质细     

成纤维细胞在牙本质桥形成中的作用

对７５例牙本质桥进行了透射式电子显微镜观察研究。发现成纤维细胞是“桥”形成的重要细胞来源，牙髓穿孔盖髓后，在骨形成因子的诱导刺激下，可分化为造牙本质细胞，故提供骨形成蛋白因子及Ｖｉｔ．Ｃ，促进ＤＢ的形成，有重要的意义。     

人牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化中细胞周期变化

目的 建立成牙本质细胞样细胞体外培养体系,观察体外培养的牙髓细胞向成牙本质细胞分化过程中细胞周期的变化.方法 利用组织块酶解法培养人牙髓细胞并进行鉴定,使用矿化诱导液诱导其向成牙本质细胞样细胞分化.对细胞增殖情况使用流式细胞仪进行细胞周期测定.结果 ①获得的牙髓细胞均为波形丝蛋白阳性,角蛋白阴性,证明为中胚层来源的细胞.②诱导分化的牙髓细胞在2周左右进入复层生长期;3周左右开始有细胞结节形成,周围细胞呈放射状排列,部分细胞出现细长突起并呈极性排列;4周左右细胞团中央Von Kossa染色为阳性.③在诱导开始后1周,细胞处于活跃的增殖期,以后细胞增殖变慢,3周后多数细胞处于G0G1期.结论 实验成功建立了成牙本质细胞样细胞体外培养体系,所获得的成牙本质细胞样细胞具有成牙本质细胞的部分形态和生物学功能,诱导分化后细胞增殖变慢,是研究成牙本质细胞的较好模型.     

过量氟对大鼠牙髓成牙本质细胞显微和亚显微结构的影响

目的:观察过量氟作用下大鼠牙髓成牙本质细胞显微、亚显微结构的改变。方法:选择30只Wister大鼠,随机分为两组,每组15只。Ⅰ组为对照组,蒸馏水灌胃。Ⅱ组为实验组,20 mg/(kg.d)氟化钠水灌胃。8周后处死动物,利用磨片、HE染色、透射电镜技术观察过量氟对大鼠切牙形态、成牙本质细胞显微和亚显微结构的影响。结果:实验组切牙牙釉质牙本质厚度明显变薄,髓腔内侧前期牙本质宽于对照组,球间牙本质增多。釉质生长线、釉柱横纹明显,牙本质生长线明显。透射电镜观察实验组大鼠牙髓成牙本质细胞体积较小,细胞器减少,一些细胞呈现凋亡迹象。结论:过量的氟作用下大鼠牙髓成牙本质细胞分化和分泌基质都受一定程度的阻遏,成牙本质细胞细胞器减少,细胞凋亡。     

1-α羟化酶基因敲除导致小鼠牙本质形成和前期牙本质矿化障碍

目的:探讨1,25二羟维生索D在小鼠牙本质形成和前期牙本质矿化的作用.方法:利用组织学.免疫组织化学和RT-PCR比较分析了6周龄野生型和1-α羟化酶基因敲除小鼠牙本质形成和矿化的差异.结果:与野生型小鼠相比.1-α羟化酶基因敲除小鼠的牙量、I型胶原和骨钙素在牙本质的沉积和骨钙素在成牙本质细胞表达均明显降低.而前期牙本质则明显增加.结论:1,25二羟维生素D在小鼠牙本质形成和前期牙本质的矿化过程中起重要作用.     

生物活性玻璃45S5体外对根尖牙乳头细胞成牙本质方向分化的影响

目的 明确生物活性玻璃(45S5)对人根尖牙乳头细胞体外成牙本质方向分化的作用。方法 浓度为0.1 mg/mL的45S5浸提培养液与人根尖牙乳头细胞共培养,离子体发射光谱检测45S5浸提培养液硅、钙、磷离子浓度,细胞活性噻唑蓝比色法检测细胞增殖,Realtime-PCR检测细胞成牙本质方向分化相关基因牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白(DMP-1)的表达,茜素红矿化结节染色及氯化十六烷基吡啶钙结节半定量分析矿化结节形成。结果 与对照组相比,45S5浸提培养液中硅离子浓度显著升高(P<0.05);45S5浸提培养液连续诱导培养根尖牙乳头细胞3、5、7 d后,与对照组相比显著促进细胞增殖(P<0.05);45S5浸提培养液连续诱导培养根尖牙乳头细胞7 d,细胞DSPP、DMP-1的表达量显著高于对照组(P<0.05);45S5生物活性玻璃体浸提培养液连续诱导培养根尖牙乳头细胞14和21 d,茜素红染色后观察45S5组和矿化诱导培养液(OM)组均见明显红染矿化结节,对照组未见明显红染矿化结节;氯化十六烷基吡啶钙结节半定量分析各组钙离子浓,45S5和OM组OD值高于对照组(P<0.05),45S5组OD值高于OM组(P<0.05)。结论 0.1 mg/mL生物活性玻璃45S5体外促进根尖牙乳头细胞增殖、成牙本质方向分化相关基因高表达和矿化结节形成,45S5体外促进根尖牙乳头细胞成牙本质方向分化。     

内皮素1及内皮素受体A拮抗剂对人肾间质成纤维细胞的作用

目的 探讨内皮素1（ET－1）受体A拮抗剂（ETaRA）对人肾间质成纤维细胞（hRIF）的作用。方法 在体外培养的hRIF中进行如上试验：（1）MTT比色法检测细胞增殖情况。（2）逆转录多聚酶链反应法（RT－PCR）观察Ⅰ型胶原（ColⅠ）、转化生长因子β（TGF－β）、基质金属蛋白酶1（MMP－1）、金属蛋白酶组织抑制物1,2（TIMP－1,TIMP－2）mRNA表达的变化。结果 （1）ET－1（10^-11-10^-7mol/L,24h）可以促进hRIF增殖,10^-7mol/L增殖最显著（P＜0.05）,呈剂量相关;10^-7mol/L刺激8h,hRIF即明显增殖,24h达高峰（P＜0.01）。（2）ET－1（10^-11-10^-7mol/L,16h）可上调hRIFr ColⅠ、TGF-β、MMP-1、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达,10^-7mol/L作用最显著（P＜0.05）,呈剂量相关。10^-7mol/L刺激hRIFs时,ColⅠmRNA在8h表达显著增加（P＜0.05）,24h达高峰;TGF－βmRNA在8h表达显著增加（P＜0.05）且达高峰;TIMP－1及TIMP－2mRNA在16h表达显著增加（P＜0.05）,24h达高峰;MMP－1mRNA在16h表达显著增加（P＜0.05）,且达高峰。（3）上述作用可特异地被ETaRA阻断。结论 ET－1可刺激hRIF增殖,并上调ColⅠ、TGF－β、MMP－1、TIMP－1、TIMP－2mRNA的表达,ETaRA可抑制上述反应。ET－1可能在上参与肾间质纤维化过程。     

生物活性玻璃和牙本质浸提蛋白对人牙髓细胞的作用

目的：明确生物活性玻璃（bioactive glass, BG）和牙本质浸提蛋白（extracted dentin proteins, EDP）对人牙髓细胞增殖、成牙本质向分化、矿化的作用。方法： 采用酶消化法培养牙髓细胞,传代至第4代用于实验。分别用含BG-EDP浸提液、BG浸提液、EDP浸提液的达尔伯克必需基本培养基（Dulbecco’s minimum essential medium,DMEM）培养牙髓细胞,对照组为DMEM培养组;通过细胞活性噻唑蓝比色法检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性检测及real-time PCR检测细胞成牙本质向分化能力,茜素红钙化结节染色及氯化十六烷基吡啶半定量分析检测细胞矿化能力。结果： BG-EDP组3、7、9 d时（光密度值1.36±0.06、2.52±0.20 、2.72±0.29）能够增强人牙髓细胞增殖活性,同BG组（光密度值1.20±0.26、2.33±0.26、2.50±0.30）、EDP组（光密度值1.13±0.15、2.10±0.13、2.38±0.22）和对照组（光密度值0.84±0.17、1.84±0.18、1.95±0.19）比较差异具有统计学意义（P<0.05）。7 d时,BG-EDP组ALP活性与EDP组、对照组差异无统计学意义,分化相关基因（DSPP、DMP-1）表达无明显升高。14 d时,BG-EDP组ALP活性升高（56.67±1.83）, 显著高于EDP组（41.98±9.71）及对照组（30.82±6.70）,P<0.05,但同BG组（56.29±6.20）相比差异无统计学意义（P>0.05）;BG EDP组DSPP表达量明显升高(5.79±1.94),显著高于BG组(2.62±0.46)、EDP组(2.66±1.06)及对照组(1.84±0.76),P<0.05;BG-EDP组DMP-1表达升高(3.87±1.87),略高于BG组(1.89±0.90)、EDP组(2.38±1.04)和对照组 (2.25±0.93),但差异无统计学意义（P>0.05）。诱导2周后,BG-EDP组形成较多矿化结节,氯化十六烷基吡啶半定量分析显示BG-EDP组钙化量最高（0.27±0.01）。结论： 同单纯的BG及EDP相比,BG-EDP复合后具有更强的促进人牙髓细胞的增殖、成牙本质向分化、矿化作用。     

DNCP诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的浓度优化

目的 探讨牙本质非胶原蛋白(DNCP)诱导大鼠面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化的最适浓度.方法 取妊娠12.5d SD大鼠胎鼠第4代下颌突外胚间充质细胞,DNCP诱导浓度分别为10、50、100、200、500、1 000μg/mL,观察细胞形态变化,诱导6d后采用定量RT-PCR检测牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP1)的表达.结果 6d后除10μg/mL组和1 000μg/mL组外,其他诱导组细胞出现极性改变,部分细胞出现平行排列趋势;细胞表达DSPP和DMP1,以200μg/mL组最强,500μg/mL组和200μg/mL组表达量相当,而1 000μg/mL组细胞死亡.结论 在DNCP诱导面突外胚间充质细胞向成牙本质样细胞分化中过低浓度不利于成牙本质细胞的分化,而过高浓度则引起细胞死亡.200μg/mL是较为合适的有效诱导浓度.     

肝细胞生长因子在大鼠修复性牙本质形成过程中的表达研究

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)在大鼠修复性牙本质形成过程中的作用.方法 以窝洞预备形成大鼠修复性牙本质模型,免疫组织化学染色法检测HGF在窝洞预备后3 d、15 d、30 d的大鼠牙髓组织中的表达,采用积分光密度值(IOD)定量修复性牙本质形成不同阶段HGF的表达.结论 窝洞预备后3 d,HGF在大鼠牙髓细胞及成牙本质细胞胞浆中呈强阳性表达(IOD为8.995±0.943);窝洞预备后15 d,HGF在两种细胞的表达仍呈阳性(IOD为5.624±0.951), 但弱于3 d组(P＜0.01);30 d组(4.073±0.127)和正常对照组(4.279±0.348)大鼠牙髓细胞及成牙本质细胞胞浆中HGF均呈弱阳性表达,两者间差异无统计学意义.结论 HGF参与了牙髓损伤早期修复及修复性牙本质形成的过程.     

钠钙交换体1型通道蛋白在人牙髓成牙本质细胞和神经纤维组织中的表达

目的:探讨钠钙交换体1(NCX1)型通道蛋白在人牙髓成牙本质细胞和神经纤维组织中的表达,进一步解释牙髓组织的修复和传感功能。方法:选取就诊患者因正畸减数或阻生拔出的新鲜健康第三磨牙24颗。取牙髓行牙本质涎磷蛋白抗体染色、改良Bielschowsky银染色以分别定位成牙本质细胞层、神经组织;用特异性抗体染色分析NCX1在人牙髓组织成牙本质细胞层、神经组织中的表达情况。结果:免疫组化染色显示,人牙髓成牙本质细胞胞体和神经组织的NCX1型通道蛋白均为阳性表达。Image-Pro Plus 6.0半定量分析显示,牙冠部和牙根部上段成牙本质细胞中的NCX1型通道蛋白表达水平分别为0.152±0.023、0.135±0.020,两者差异无统计学意义(t=1.425,P=0.352)。结论:人牙髓组织成牙本质细胞层及神经组织中均存在明显的NCX1型通道蛋白表达,其在牙冠部及牙根部上段牙本质细胞中的表达差异不明显。     

细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达

目的：研究细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达,探讨其在牙胚发育中的可能作用。方法：取13.5、14.5、16.5和18.5d（E13.5、E14.5、E16.5和E18.5）的小鼠胚胎以及出生后1和5d（PN1和PN5）的小鼠,分离头部,固定、脱钙、脱水、石蜡包埋、切片,HE染色观察牙胚的组织形态表现,采用免疫组织化学染色方法观察CDC42及PAR3在牙胚发育过程中的表达。结果：HE染色观察,E13.5~E18.5分别为小鼠牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状早期和钟状晚期,PN1小鼠的牙胚中可见分化成熟的成牙本质细胞和成釉细胞,PN5小鼠牙胚可见牙冠部发育完成。免疫组织化学染色,CDC42在E13.5、E14.5和E16.5小鼠牙胚中有广泛表达,在E18.5小鼠牙胚中表达较E13.5、E14.5和E16.5减少,在PN1和PN5小鼠牙胚中主要表达于成牙本质细胞和成釉细胞的分泌端;PAR3弱表达于E13.5和E14.5小鼠牙胚,在E16.5和E18.5小鼠牙胚上皮处表达明显增强,在PN1和PN5小鼠牙胚中表达较E18.5减弱。结论：CDC42和PAR3参与小鼠牙发育的过程,在牙胚发育早期可能参与小鼠牙胚的增殖及迁移,在牙胚发育晚期可能参与了成牙本质细胞和成釉细胞的分化,尤其在成牙本质细胞和成釉细胞极性的形成与维持中可能具有重要作用。     

Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的促进作用

目的：研究Matrilin-4对大鼠牙髓损伤后修复性牙本质形成的作用,探讨其作为新型盖髓剂的可能性。方法：28只雄性Wistar大鼠,在大鼠的双侧上颌第一磨牙牙合面备洞至露髓后,左侧用含Matrilin-4的胶原蛋白海绵盖髓（Matrilin-4组）,右侧用含磷酸盐缓冲溶液（PBS）的胶原蛋白海绵盖髓（PBS组）,双侧均用玻璃离子封洞。分别于3、7、14和28 d灌流固定处死大鼠并取上颌双侧第一磨牙标本,HE染色和免疫组织化学染色观察分析各组大鼠修复性牙本质形成及成牙本质细胞中牙本质涎蛋白（DSP）的表达情况。结果：HE染色,3 d时与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方较少量炎症细胞聚集,并可见明显的血管扩张;7 d时2组穿髓孔下方炎症反应加重,但Matrilin-4组明显轻于PBS组,且可见前期牙本质形成;14 d时Matrilin-4组露髓区域可被较连续完整的修复性牙本质桥覆盖;28d时,与PBS组比较,Matrilin-4组穿髓孔下方可见厚而完整的修复性牙本质桥,牙本质桥下面有重组的成牙本质细胞层。免疫组织化学染色,2组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度在术后3、7和14 d呈逐渐增强趋势,28 d时减弱;盖髓后各时间点Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度均强于PBS组,且14 d时阳性表达达高峰。与PBS组比较,3、7和14 d时Matrilin-4组大鼠成牙本质细胞中DSP阳性表达强度明显升高（P<0.01）。结论：Matrilin-4对牙髓损伤后修复性牙本质的形成具有促进作用。     

TRPM7对dHL-60细胞极性化的影响

目的探讨瞬时受体电位M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7)对dHL-60细胞极性化的影响及可能的分子机制。方法通过siRNA技术下调dHL-60细胞TRPM7蛋白表达,分为转染无义干扰片段的对照组和TRPM7干扰组,用Zigmond小室观察细胞极性化的变化,采用Western blot检测TRPM7和磷酸化AKT的表达,并用细胞免疫荧光方法观察磷酸化AKT的定位情况。结果与转染无义干扰片段的对照组相比,转染TRPM7靶向siRNA的dHL-60细胞中,TRPM7蛋白表达水平明显降低(P<0.05);干扰TRPM7后dHL-60细胞的极性化率与对照组相比显著增加(P<0.05);磷酸化AKT表达明显上调,并从细胞质转向了细胞膜,呈极性分布在细胞质膜上,而总AKT的表达则无明显变化。AKT的特异性抑制剂Triciribine可使dHL-60细胞在fMLP刺激下的磷酸化AKT的极性分布消失。结论 TRPM7通过AKT信号通路调控细胞极性相关分子,进而影响dHL-60细胞的极性化能力。