β分泌酶生物学特性的研究进展

β分泌酶是一种Ⅰ型跨膜蛋白,其在脑内的主要作用是从Met596和Asp597之间以及Tyr606和Glu607之间切割β淀粉样蛋白前体蛋白（β-amyloid precursor protein,APP）形成β淀粉样蛋白（β-amyloid protein,Aβ）的N端,以启动Aβ生成。β分泌酶包括多个成员,其中因天冬氨酸蛋白酶β-位淀粉样蛋白前体蛋白裂解酶1（β-site amyloid precursor protein-cleaving enzyme 1, BACE1）在阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease,AD）的发病机制中占有重要地位而研究较多。本文主要对BACE1的基因和蛋白结构、转录和翻译调控、胞内运输和调控、代谢及其调控、底物以及与其同源的酶进行综述,为以BACE1为靶点的药物研发提供借鉴。     

β分泌酶在β-淀粉样蛋白代谢中作用的研究进展

大量的实验研究提示β-淀粉样蛋白（Aβ）在阿尔茨海默病（AD）的发病机理中起重要作用。老年斑（SP）是AD的两大病理改变之一，主要是由Aβ在脑中逐渐沉积所致。Aβ来源于I型跨膜蛋白淀粉样前体蛋白（APP）。目前已知有三种分泌酶参与APP的分解代谢，     

超表达SorLA对阿尔茨海默病β淀粉样蛋白的影响

目的：探讨超表达SorLA对引发阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的β淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）的影响,以揭示SorLA表达与Aβ之间的作用关系。方法：采用Western blot测定脑组织中SorLA蛋白的表达分布,SorLA cDNA转染人胚胎肾细胞（HEK-293）,以梯度浓度G418筛选SorLA cDNA细胞,采用Western blot测定转染后淀粉样前体蛋白（amyloid precur－sor protein,APP）表达水平,采用ELISA测定Aβ表达水平。结果：（1）超表达SorLA转染组细胞提取物中的APP表达水平降低;（2）超表达SorLA转染组中Aβ表达水平降低（21.6±12.1）％（P<0.01）。结论：SorLA显著影响引发AD的Aβ表达水平,且两者呈负相关。     

血小板淀粉样前体蛋白加工过程：1种阿尔茨海默病的生物标记物

脑内淀粉样前体蛋白（APP）通过下述两种途径进行加工：由β-分泌酶和γ-分泌酶介导的淀粉样通道产生Aβ（β-淀粉样蛋白4kDa）肽或由β-淀粉样蛋白区域的α-分泌酶介导产生非淀粉样产物。在31例阿尔茨海默病（AD）患者和10例年龄相匹配的健康对照受试者中，研究22kDa片段的血小板水平，上述片段包括Aβ（β-淀粉状蛋白4kDa）肽、β-分泌酶（BACE1）、α-分泌酶（ADAMl0）和120—130kDa到110kDa肽的APP异构体比。研究发现，与正常对照者相比，AD患者的Aβ4水平升高、BACE1活性增加、ADAM10活性和APP比降低。上述研究结果提示，与脑内APP的加工相同，血小板APP也是通过淀粉样和非淀粉样通道进行加工的，并且AD患者血小板APP的加工过程与对照者相比有所改变，这也许可以作为临床试验中诊断AD、病程和监测药物疗效的生物标记物。     

锌离子与锌转运体6在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布

 目的 研究游离锌离子和锌转运体6（zinc transporter 6,ZnT6）在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布。方法 应用浸入式金属自显影技术（AMG）和免疫组织化学染色标记游离锌离子、ZnT6和淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein,AYY）,通过免疫荧光染色和共聚焦激光扫描显微镜观察ZnT6和β-淀粉样蛋白（β-amyloid,Aβ）在老年斑内的定位,并分析锌离子、ZnT6与APP和Aβ分布的相关性。结果 游离锌离子、ZnT6和APP免疫阳性反应产物均定位于老年斑内,老年斑主要分布于小脑分子层,浦肯野细胞层和颗粒层分布较少;ZnT6和Aβ荧光双标的结果进一步证实两者共存于老年斑内。结论 APP/PS1转基因小鼠小脑Aβ老年斑内有大量的ZnT6蛋白表达,并聚集着大量的锌离子,提示锌离子可能参与小脑Aβ老年斑的形成,而ZnT6在老年斑内锌离子的聚集过程中起着重要的调节作用。     

沂蒙山区阿尔茨海默病与淀粉样β蛋白及其前体基因的相关研究

目的　探讨阿尔茨海默病 (AD)与淀粉样 β蛋白 (Aβ)及其前体 (APP)基因的关系。 方法　研究 32例沂蒙山区AD患者 ,并设对照组 30例 ,检测脑脊液Aβ水平、APP基因表达量。 结果　AD组Aβ水平 (13.6 2 7±9.335 ) μg/L、APP表达量 (16 2 4± 2 98)拷贝 / μl。均明显高于对照组 (P <0 .0 1)。结论　痴呆程度与Aβ水平、APP基因表达量呈正相关。AD与Aβ、APP密切相关。但APP表达量在AD的诊断中不具特异性。     

淀粉样前体蛋白在阿尔茨海默病分子生物学和临床医学中的研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种常见的老年性痴呆症,主要病理表现有两种,即:细胞内发生神经纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs)、细胞外产生淀粉样沉积物(俗称老年斑,senile plaques,SP).NFTs的聚集主要是微管Tau蛋白异常高度磷酸化的生成;SP的淀粉样沉积物主要成份是β-淀粉样肽(Aβ,包括Aβ40和Aβ42),由淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)分解而来,被认为在AD的发病机制中起着十分重要的作用.近年来很多研究都集中在α、β和γ-分泌酶对APP的作用和Aβ生成的影响上,以及家族性AD(FAD)和散发性AD(SAD)的发病原因和进程的研究.本文主要综述了APP的代谢通路与淀粉样物生成对AD发病的假说;早发性和迟发性AD与APP、PS1、PS2和ApoE基因突变的关系,以及目前Aβ疫苗对AD治疗和预防作用的研究进展.     

阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白可与低密度脂蛋白受体相关蛋白6直接作用

目的:研究低密度脂蛋白受体相关蛋白6(low density lipoprotein receptor related protein6, LRP6)的胞内代谢及其与淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)的相关性.方法:构建含有APP羧基端106个氨基酸的融合表达质粒,用酵母双杂交系统筛选人胎脑cDNA文库.结果:发现LRP6的羧基端可以和含有β淀粉样蛋白和胞内区的APP片段相互作用.结论:使与AD相关的两个重要蛋白载脂蛋白E和APP联系起来,并提示LRP6可能在APP的代谢和β淀粉样蛋白的产生中起重要作用.     

β-分泌酶研究

β-分泌酶（β-siteAPPcleavingenzyme,BACE）在β位点裂解β淀粉样蛋白前体蛋白（β-amyloid precurgor protein,APP）并产生β淀粉样蛋白（Amyloid protein,Aβ）,Aβ的聚集是形成阿尔茨海默病（Alzhemier’s disease,AD）患者脑中老年斑的主要原因,引起神经元损伤和认知功能减退,在AD的发病过程中起到中心和共同通道的作用。     

淀粉样前体蛋白研究进展

淀粉样前体蛋白（amyloid precursor protein,APP）是一种广泛存在于全身组织细胞上的单次跨膜蛋白,因其经蛋白酶裂解后产生具有毒性作用的β-淀粉样肽（β-amyloid,Aβ）而广受关注,但迄今为止人们对APP真正的生理功能仍知之甚少,本文就APP及其整个家族在细胞中的正常生理功能、结合蛋白以及作用机理做一简要的综述。     

β-淀粉样前体蛋白与β-淀粉样蛋白在糖尿病大鼠脑组织中的表达意义及行为学相关性研究

目的观察糖尿病大鼠脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ)、β-淀粉样前体蛋白(APP)表达,探讨糖尿病糖代谢异常在阿尔茨海默病中的作用机制。方法腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病大鼠动物模型,随机分组:正常组(N组)、假手术组(S组)、4周模型组(M4组)、6周模型组(M6组)、8周模型组(M8组)。穿梭箱实验、Morris水迷宫实验检测认知行为学改变,蛋白质免疫印迹法、RT-PCR和酶联免疫吸附法检测APP,酶联免疫吸附法检测Aβ,用图像分析仪测定光密度值。结果模型组与正常组、假手术组比较有明显差别(P<0.01),模型组APP、Aβ表达明显增高。3个模型组比较无显著性差异,Aβ与APP正相关,APP表达水平与学习、记忆损伤负相关,Aβ与学习、记忆损伤正相关。结论APP、Aβ在糖尿病大鼠脑组织表达增高,糖尿病糖代谢异常增强Aβ表达参与了阿尔茨海默病的发病机制,APP具有双重作用机制,既具有脑保护作用,又有增高Aβ表达作用。     

IL-1对大鼠脑组织β淀粉样前体蛋白基因表达的影响

目的：研究在整体动物水平白细胞介素1（interleukin1，IL－1）对β淀粉样前体蛋白（βamyloidprecursorprotein，APP）基因表达的影响。方法：大鼠侧脑室注射；Northern杂交。结果：首次证实IL－1β在整体动物水平可以诱导大鼠脑组织APPmRNA表达的增加，而且这种诱导作用具有时间依赖性。结论：IL－1β在体内、外均可诱导神经组织内APP基因的表达增加，进而在阿尔茨海默病（Alzheimerdisease，AD）中与促进β淀粉样蛋白（βamyloidprotein，βAP）的沉积可能密切相关。     

游离锌离子在APP/PS1转基因鼠脑老年斑内分布的研究

目的研究阿尔茨海默病(AD)动物模型-APP/PS1转基因鼠大脑内游离锌离子和β淀粉样蛋白前体蛋白(APP)在老年斑内的分布。方法分别应用浸入式锌金属自显影技术和APP免疫组织化学技术检测游离锌离子和APP在APP/PS1转基因鼠大脑内的分布。结果游离锌离子和APP免疫阳性反应产物均定位于老年斑内,新皮质和海马区域含有大量的老年斑,脑内其他部位有很少或没有老年斑。结论APP/PS1转基因鼠大脑β淀粉样蛋白(Aβ)老年斑内聚集着大量的锌离子,提示锌离子可能在Aβ老年斑的形成过程中起重要作用。     

测定海马脑片可溶性淀粉样前体蛋白分泌量的方法

淀粉样蛋白 (am yloidβ- protein,Aβ)在阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发生、发展中有着重要意义 [1 ,2 ] ,它系病理情况下 ,由淀粉样前体蛋白 (APP)经历β、γ分泌酶两次加工和剪切而成 ;而正常情况下 APP通过 α分泌酶生成可溶性淀粉样前体蛋白 (s APP) ,因此 Aβ的产生与s APP的产生相互制约。 AD患者尸解时其大脑 Aβ含量升高而 s APP含量下降 ,证实上述说法并提示 s APP水平测定具有的重要意义。谷氨酸刺激皮质脑片、电刺激海马脑片 [3,4] 等研究表明有多种因素可以调节 s APP分泌。本实验结合递质刺激与海马结…     

神经心理评估的新进展:认知功能与脑淀粉样蛋白沉积的关系

阿尔茨海默病（Alzheimer''s disease,AD）是一种退行性疾病。在早期阶段,AD的特征是大脑中β淀粉样蛋白（β amyloid,Aβ）和tau蛋白的聚集和记忆力减退。本文总结了脑内Aβ与认知功能的关系,对当前Aβ如何影响认知功能（记忆、执行、语言）的研究进行了综述,同时对今后研究趋势进行展望,为Aβ沉积的识别提供新思路。     

雌激素受体α对血小板 Aβ所诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨血小板β淀粉样蛋白（Aβ）在动脉粥样硬化（AS）发生中的作用机制以及雌激素受体α（ERα）对血小板淀粉样前体蛋白（APP）代谢的调节作用。方法：分别提取12只6月龄 APP / PS1鼠和6只同月龄野生型小鼠的血小板。将所获得的血小板分为3组：正常对照组、APP / PS1组和 APP / PS1+ ERα激动剂（PPT）组。在 APP / PS1+PPT 组的血小板悬液中加入 PPT 溶液;在正常对照组和 APP / PS1组的血小板悬液中加入等量生理盐水。ELISA 法检测各组血小板释放 Aβ的量以及α、β内分泌酶活性;离心提取各组血小板悬液的上清,并将其加入主动脉内皮细胞的培养液中,用流式细胞仪 JC-1法检测主动脉内皮细胞线粒体膜电位。结果：与正常对照组相比,APP / PS1组血小板释放 Aβ的量明显增加（P﹤0.01）;APP /PS1+PPT 组血小板释放 Aβ的量与 APP / PS1组血小板相比明显减少（P﹤0.01）;APP / PS1+PPT 组血小板而α内分泌酶活性较 APP / PS1组增强（P﹤0.01）;与对照组血小板的上清相比,APP / PS1组血小板上清可增强血管内皮细胞线粒体膜电位的去极化（P﹤0.01）。相比之下,APP / PS1+PPT 组血小板的上清对血管内皮细胞线粒体膜电位的作用较 APP / PS1组血小板的上清明显减弱（P﹤0.01）。结论：血小板 Aβ的过度生成可导致内皮细胞凋亡,这可能是血小板 Aβ促进 AS 形成的机制之一。激活 ERα可通过增强α分泌酶介导的血小板 APP 代谢减少血小板 Aβ的生成,为 AS 的防治提供了新思路和新途径。     

A β蛋白对阿尔兹海默病的作用及药物研究进展

阿尔兹海默病（Alzheimer’s disease ,AD）是多病因诱发的中枢神经退行性疾病,β淀粉样蛋白（Aβ）在其中起着关键作用。本文综述了国内外关于β淀粉样蛋白与阿尔兹海默病关系的研究进展,包括 Aβ蛋白的形成过程、Aβ蛋白级联反应以及针对其的药物研究思路。     

天青B对淀粉样前体蛋白代谢和Aβ生成的影响

目的:探究天青B对淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)代谢及β淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)生成的影响。方法:用天青B处理能稳定表达APP695基因的Neuron-2a细胞(N2a-APP695)。利用Western blot检测APP、可溶性APPα(soluble APPα,sAPPα)和β-分泌酶1(β-site APP cleaving enzyme 1,BACE1)的水平,利用ELISA检测Aβ的水平。采用BACE1酶活性检测试剂盒检测BACE1酶活性的抑制。采用t检验分析各组数据。结果:(1)天青B在5、10、15、20μmol/L的终浓度下不会影响N2a-APP695细胞的活力。(2)ELISA检测结果显示天青B能够降低Aβ_1-40(P=0.002)和Aβ_1-42(P=0.036)的水平。(3)Western blot检测结果显示天青B能够降低全长APP(P=0.018)和sAPPα(P=0.006)蛋白的水平,但不影响BACE1蛋白的水平(P>0.05)。(4)BACE1酶...     

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠Aβ及Aβ寡聚体表达的影响

目的运用免疫组织化学方法和蛋白质印迹(Western-blot)方法观察淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因小鼠治疗前后β淀粉样蛋白42(Aβ42)、β淀粉样蛋白40(Aβ40)和可溶性Aβ寡聚体(ADDLs)的变化,判断姜黄素(curcumin)对Aβ级联反应的影响。方法将3月龄的APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组、阳性对照组(罗格列酮组)及姜黄素大、中、小剂量组。灌胃3个月后,以免疫组织化学方法和Western blot方法检测Aβ42、Aβ40和ADDLs蛋白表达量的变化。结果免疫组织化学检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞均较正常组增加,Aβ40和Aβ42相比,阳性细胞计数增加以Aβ42更加明显,各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs阳性细胞明显降低。Western blot检测模型组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达比正常对照组明显增加(P<0.01);与模型组小鼠相比,虽然各干预组小鼠海马Aβ40、Aβ42和ADDLs蛋白表达均减少,罗格列酮组和姜黄素中剂量组小鼠海马Aβ40和Aβ42的蛋白表达显著减低(P<0.01);罗格列酮组小鼠海马ADDLs的蛋白表达减低显著(P<0.01),姜黄素大、中剂量组小鼠海马ADDLs的蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论姜黄素给药3个月能显著减少APP/PS1双转基因小鼠脑内海马CA1区Aβ40、Aβ42和ADDLs的表达,对Aβ42减低更为明显。其潜在的神经保护机制是否通过下调Aβ42和ADDLs的产生,增强Aβ42和ADDLs的降解影响Aβ级联反应,有待进一步研究。     

α分泌酶在阿尔茨海默病中的研究进展

<正>淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)经过淀粉样代谢途径(β、γ分泌酶)产生Aβ,Aβ不同程度的聚集能够促进AD的发生、发展,而APP经过非淀粉样代谢途径(α、γ分泌酶)则产生可溶性片段s APP a,s APP a具有神经营养和保护作用,能竞争性的减少Aβ的产生,从而延缓AD的发展。因此,激活α分泌酶是一种治疗AD的方法,而研究最多的a