拆方益肝康不同药物血清对肝星状细胞胶原代谢及TGF-β1的影响

目的:探讨益肝康抗肝纤维化作用机制、配伍意义,并采用对比血清药理学方法探讨更为科学的中药研究方法.方法:分别制备益肝康及其拆方-丹参小复方正常大鼠(A组,A1组:正常大鼠血清对照组;A2组:正常大鼠丹参小复方血清组;A3组:正常大鼠益肝康血清组)与肝纤维化大鼠(B组,B1组:肝纤维化大鼠血清对照组:B2组:肝纤维化大鼠丹参小复方血清组:B3组:肝纤维化大鼠益肝康血清组)药物血清,温育体外培养的HSC,3H-脯氨酸掺入法检测胶原合成,Western blot技术检测TGF-β1蛋白表达,RT-PCR技术检测TGF-β1 mRNA表达.结果:益肝康及丹参小复方正常大鼠与肝纤维化大鼠药物血清均可抑制HSC胶原合成(100mL/L时A组:2275.00±114.30 cpm,2401.87±108.50 cpm vs 2963.62±128.01 cpm;B组:2205.3l±108.97 clom,2462.70±177.02 epm vs 3179.12±223.34 cpm;200 mL时A组:2372.96±123.3 cpm Vs 2515.37±98.25 cpm vs 3209.38±110.75 cpm;B组:2394.29±1 50.50 cpm vs 2611.25±126.05 cpm vs 3490.46±183.16 cpm,P<0.05或0.01).100 mL时降低TGF-β1基因及蛋白表达(均P<0.01).2组在胶原合成、TGF-β1基因及蛋白表达益肝康组作用优于丹参小复方(均P<0.01),而益肝康组与丹参小复方组比较则B组血清作用优于A组(益肝康组:TGF-β1基因:0.356±0.032 vs 0.568±0.028;TGF-β1蛋白:0.458±0.009 vs 0.639±0.102;丹参小复方组:0.601±0.047 vs 0.810±0.051:0.612±0.126vs 0.860±0.138.P<0.05或LP<0.01).结论:益肝康及丹参小复方均可抑制HSC胶原合成,其主要机制之一是抑制TGF-β1基因和蛋白表达,益肝康更具配伍意义,肝纤维化大鼠药物血清药效优于正常大鼠血清药效.     

益肝康抑制肝星状细胞Ⅰ型胶原合成的作用机制

目的:探讨活血化瘀中药复方“益肝康”抑制肝星状细胞Ⅰ型胶原合成的作用机制。方法:应用West-ern印记检测p38的活化程度;3H-Pro掺入法检测Ⅰ型胶原合成。结果:IL-1β有明显促大鼠HSCⅠ型胶原合成作用,IL-1β(10μg/L)作用培养的HSC24小时后,3H-Pro掺入量明显高于对照组(618.33±52.69vs388.83±49.72,P<0.01),阻断p38通路后,IL-1β的促HSCⅠ型胶原合成作用受到抑制。经不同浓度p38特异性阻断剂SB203580(10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L)预处理的各组细胞,3H-Pro掺入量分别为487.33±42.75、408.50±27.47、400.83±19.49,与对照组(未用SB203580预处理,629.67±69.88)相比,其掺入量均明显降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01)。益肝康可抑制IL-1β诱导的HSC中p38活性,与未用IL-1β处理组相比,在分别刺激HSCs5分钟、15分钟、30分钟和60分钟,HSC p38活性受到明显抑制(P<0.05,P<0.01)。经益肝康浸膏预孵育的益肝康 IL-1β组与单纯IL-1β组相比,p38活性明显受到抑制(1.550±0.410vs2.973±0.953,P<0.01)。结论:IL-1β可促进大鼠HSCⅠ型胶原合成;细胞内p38信号蛋白参与了IL-1β促HSCⅠ型胶原合成;益肝康可通过阻断p38通路,从而发挥抑制HSCⅠ型胶原合成作用。     

复方中药益肝康抑制肝星状细胞增殖的作用机制

目的:探讨活血化瘀复方中药益肝康抑制大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的作用机制.方法:采用IL-1β激活HSC,应用Westernblot检测JNK的活化程度;应用活细胞计数试剂盒-CCK-8检测HSC增殖并观察JNK特异性阻断剂SP600125对IL-1β促HSC增殖的影响.应用凝胶电泳移动抑制法测定AP-1的活性.结果:IL-1β有明显促大鼠HSC增殖作用,IL-1β作用培养的HSC24h后,吸光值明显高于对照组(1.573±0.026vs1.339±0.073,P=0.000);经JNK特异性阻滞剂SP600125预处理后,IL-1β促HSC增殖作用受到抑制,SP600125浓度为10,20及40μmol/L时,吸光值分别为1.427±0.113,0.772±0.093,0.675±0.074,与对照组(1.560±0.110)相比其增殖反应均明显降低(P=0.03;P=0.000;P=0.000);IL-1β可激活大鼠HSCsJNK信号蛋白,并呈现出一定的时相变化.IL-1β作用HSCs后0,5,15,30,60及120min,JNK活性分别为0.982±0.299,1.501±0.720,2.133±0.882,3.360±0.452,2.181±0.789,1.385±0.368.与0(未加IL-1β)相比,15min,30min及60min均有显著差异(P=0.002,P=0.000,P=0.001).益肝康可抑制IL-1β诱导的HSCsJNK活性(1.610±0.242vs3.360±0.452,P=0.000);益肝康可抑制IL-1β诱导的HSCsAP-1活性,经益肝康预处理HSCs1h后,AP-1活性明显受到抑制(342.43±85.77vs597.70±83.96,P=0.005).结论:IL-1β可刺激HSC增殖,细胞内JNK信号转导通路参与了IL-1β促HSC增殖作用;益肝康可通过阻滞JNK/AP-1通路,抑制HSC增殖.     

ASC在大鼠胰腺炎肺损伤发病中的作用及中药清胰汤对其表达的影响

目的:探讨ASC(apoptosis-associated specklike protein containing a Caspase recruitment domain)在胰腺炎肺损伤发病机制中的作用及中药清胰汤对胰腺炎肺损伤大鼠ASC及其相关的细胞因子表达的影响．方法:SD大鼠40只,随机分4组:假手术组、胰腺炎肺损伤组、清胰汤治疗组、善宁治疗组．采用15 g／L去氧胆酸钠逆行注入胰胆管诱发胰腺炎肺损伤模型．通过自动生化分析仪检测大鼠血清淀粉酶;采用ELISA法测定血清 IL-1β水平;RT-PCR检测肺组织ASC mRNA的表达;免疫组织化学法检测肺组织和胰腺组织ASC蛋白的表达．通过检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、肺湿／干质量比值和肺组织病理切片判定肺损伤程度．结果:胰腺炎肺损伤组血清淀粉酶和IL-1β水平较假手术组显著升高(77 632±5934 nkat／L vs 16 303±1450 nkat／L,P<0．01和386．26± 50．54 ng／L vs99．11±18．43 ng／L,P<0．01)．清胰汤治疗组血清淀粉酶(17 420±1867 nkat／L)和 IL-1β(105．23±20．21 ng／L)水平较肺损伤组血清淀粉酶(77 632±5934 nkat／L,P<0．01)和IL- 1β水平(386．26±50．54 ng／L,P<0．01)明显下降．善宁治疗组血清淀粉酶(20 437±123 nkat／L) 和IL-1β水平(109．63±19．98 ng／L)较肺损伤组血清淀粉酶(77 632±5934 nkat/L,P<0．01)和 IL-1β水平(386．26±50．54 ng／L,P<0．01)明显下降．假手术组肺组织内ASC mRNA表达较弱．胰腺炎肺损伤组肺组织及胰腺组织内ASC蛋白表达较假手术组显著上调,其灰度值有显著性差异(24．86±5．23 vs 54．12±7．91,P<0．01和 25．46±4．21 vs 52．32±8．10,P<0．01),清胰汤治疗组两者表达显著下调(48．97±7．45vs24．86 ±5．23,P<0．01和49．48±8．13vs25．46±4．21, P<0．01)．善宁治疗组两者的表达亦显著下调 (48．69±5．87 vs 24．86±5．23．P<0．01和49．11± 6．41vs25．46±4．21,P<0．01)．清胰汤治疗组和善宁治疗组肺组织MPO活性减低(5．33±0．50 nkat／L vs 18．67±1．17 nkat／L,P<0．01和5．16± 0．83 nkat／L vs 18．67±1．17 nkat／L,P<0．01),肺湿／干质量比值下降(7．02±0．34 vs 9．98±0．47, P<0．01和6．78±0．33vs9．98±0．47,P<0．01),肺组织损害程度明显减轻．结论:ASC在大鼠胰腺炎肺损伤发病机制中起到一定的作用,中药清胰汤通过下调ASC及其相关细胞因子IL-1β的表达起到治疗胰腺炎肺损伤的作用．     

瘦素及硬脂酰CoA去饱和酶-1在高脂饮食大鼠非酒精性脂肪肝发病中的作用

目的:研究瘦素及SCD-1在高脂饮食引起非酒精性脂肪肝形成及其药物治疗中的作用．方法:42只SD大鼠分成正常组、高脂组和干预组(自高脂饮食喂养8 wk起用罗格列酮进行干预16 wk)．酶联免疫法测定血清瘦素,RT-PCR实时荧光分析大鼠肝 SCD-1 mRNA与β-actin mRNA的比值．结果:肝组织HE染色显示高脂组大鼠肝脏内有弥漫性肝细胞脂肪变性,8 wk达到脂肪肝诊断标准．8,24 wk高脂组大鼠血清瘦素水平升高,与正常组相比有显著性差异(8 wk:5．29±1．83 μg／L vs 3．06±1．35 μg/L, P<0．05;24 wk:7．89±3．01 μg/L vs 3．09±1．52 μg/L, P<0．05);肝SCD-1 mRNA与β-actin mRNA的比值明显下降(8 wk:0．37±0．25 vs 0．82±0．34,P<0．05)．干预组与高脂组相比,血清瘦素水平下降(5．95±3．31 μg/L vs 7．89±3．01 g／L,P>0．05);肝SCD-1 mRNA表达明显增强(SCD-1/β-actin:1．02±0．11 vs 0．52±0．22,P<0．01)．结论:长期高脂饮食可导致血清瘦素水平升高,其通过下调肝SCD-1表达促进非酒精性脂肪肝的形成．罗格列酮可降低血清瘦素水平,上调肝SCD-1的表达,减轻因高脂饮食引起的非酒精性肝脂肪变．     

IL-1β上调大鼠HSCs TIMP-1 mRNA表达与JNK和P38通路的关系

目的探讨IL-1β调控大鼠HSCsTIMP-1mRNA表达与JNK、p38 MAPK通路的关系。方法RT-PCR用于检测大鼠HSCs TIMP-1 mRNA表达；Western blot用于测定IL-1刺激HSCs后JNK、p38的活化程度。结果IL-1β（10ng／mL）作用培养的HSCs 24h后，TIMP-1 mRNA表达（1．191±0．079）明显高于对照组（0．545±0．091），有统计学意义（P〈0．01）；IL-1β以时间依赖方式激活JNK、p38通路。用不同浓度JNK阻断剂-SP600125预处理HSCs后，IL-1β上调HSCs TIMP-1 mRNA表达作用受到抑制，分别为10μmol／L，1．022±0．113;20μmol／L，0．8694±0．070；40μmol／L，0．666±0．123，与对照组相比（1．163±0．107），各浓度组均有显著性差异（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01）。用不同浓度p38阻断剂-SB203580预处理HSCs后，HSCs表达TIMP-1 mRNA逐渐增多，分别为10μmol／L，1．507±0．099；20μmol／L，1．698±0．107；40μmol／L，1．857±0．054。与对照组相比（1．027±0．061），各浓度组均有显著性差异（P均〈0．01）。结论IL-1β可通过上调HSCs TIMP-1 mRNA的表达来加速肝纤维化的发生发展，JNK和p38信号蛋白参与了此过程，HSCs中两条通路均可被IL-1激活，但所起作用完全不同，它们相互作用相互调节，共同调控TIMP-1 mRNA的表达。     

大鼠急性胰腺炎早期肺损伤机制及前列腺素E1的保护作用

目的:探讨实验性急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)合并肺损伤的发生机制及前列腺素E1(PGE1)的保护作用．方法:健康成年SD大鼠78只,随机平均分为假手术组(SO组)、AP组和PGE1组,采用十二指肠闭袢法建立大鼠AP模型．PGE1组制模后即刻经颈静脉持续每分钟输入PGE160 ng／kg．观察胰腺和肺组织的病理组织学改变,测定血清淀粉酶、肺组织中性粒细胞髓过氧化物酶 (MPO)活性、脂质过氧化产物(LPO)水平及肺毛细血管通透性(LCP),免疫组织化学ABC法检测肺组织细胞黏附分子-1(ICAM-1)的表达．结果:制模后12和24 h,AP组大鼠胰腺和肺组织病理损伤持续加重,肺组织MPO(12 h: 5．65±0．80 vs 1．22±0．71 kat／g,P<0．01;24 h: 7．22±1．05 vs 1．48±0．57 kat／g,P<0．01)和 LPO(12 h:1．44±0．63 vs 0.38±0．07μmol／g． P<0．01;24 h:3．64±0．83 vs 0．44±0．15 μmol／ g,P<0．01)水平以及LCP(12 h:145．4±23．0 vs 47．3±5．5 μg／g组织湿重,P<0．01)明显高于SO组,AP组大鼠肺组织ICAM-1表达呈阳性或强阳性,而SO组呈阴性;与AP组比较, PGE1组的胰腺病理损伤虽未减轻,但肺组织 MPO(12 h:2．96±1．04 vs 5．65±0．80 kat／g, P<0．05;24 h:3．68±1．15 vs 7．22±1．05 kat／g, P<0．05)和LPO (12 h:0．86±0.34 vs 1．44± 0．63 μmol／g,P<0．05;24 h:1．69±0．45 vs 3．64 ±0．83 μmol／g,P<0．05)水平以及LCP(12 h: 105．9±23．9 vs 145．4±23．0 μg／g组织湿重, P<0．05)明显降低,ICAM-1表达下调．肺间质出血、水肿和中性粒细胞(PMN)浸润明显减轻．结论:肺组织ICAM-1过度表达、PMN浸润和氧自由基大量释放与AP早期肺损伤的发生关系密切．PGE1通过降低肺组织ICAM-1表达, 抑制PMN活化和氧自由基释放,从而减轻AP 早期肺损伤．     

人单核细胞Lox-1对MMP-9、TIMP-1mRNA表达的调控作用

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对人单核细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)mRNA表达调控的机制,以及血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(Lox-1)在其表达调控中的作用.方法 分离收集冠心病患者的外周血单核细胞,分为空白对照组(在不含血清的RPMI-1640中孵育24 h)、ox-LDL组(在不含血清的RPMI-1640中加ox-LDL 40 μg/ml孵育24 h)、多聚肌苷酸(PIA)组(在不含血清的RPMI-1640中先加PIA 250 μg/ml培育1 h,之后加入ox-LDL 40 μg/ml继续孵育24 h).收集单核细胞及细胞上清液,采用异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法提取总RNA,扩增目的 基因Lox-1、MMP-9、TIMP-1mRNA,并采用ELISA法测定上清液中sLox-1、MMP-9、TIMP-1浓度.结果 单核细胞经ox-LDL刺激后Lox-1、MMP-9 mRNA表达增加(0.813±0.131 vs 0.304±0.047,P＜0.01;1.130±0.089 vs 0.595±0.091,P＜0.01),细胞上清液中sLox-1、MMP9蛋白含量增加(16.517±2.064 vs 7.277±1.979,P＜0.01;2.213±1.071 vs 0.967±0.500,P＜0.01).与ox-LDL组相比,多聚肌苷酸预刺激后单核细胞Lox-1、MMP-9 mRNA表达减少(0.277±0.029 vs 0.813±0.131,P＜0.01;0.715±0.286 vs 1.130±0.089,P＜0.05),细胞上清液中sLox-1、MMP9蛋白含量显著减少(11.127±2.560 vs 16.517±2.064,P＜0.05;1.040±0.312 vs 2.213±1.071,P＜0.05),但与对照组比较无差异.TIMP-1 mRNA表达及细胞上清液中TIMP-1蛋白含量在各组间无显著差异.结论 ox-LDL可诱导人单核细胞Lox-1、MMP-9表达增加,并且Lox-1介导了ox-LDL对MMP-9表达的促进作用,但对TIMP-1表达无影响.     

慢性乙型肝炎患者高迁移率族蛋白1mRNA的表达及其临床意义

目的:通过检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)高迁移率族蛋白1(HMGB1) mRNA的表达情况,研究HMGB1在乙型肝炎中的临床意义．方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 对54例慢性乙型肝炎患者和10例健康对照者PBMCs HMGB1 mRNA的表达进行检测, 同时应用ELISA法检测外周血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)和内毒素(LPS)水平,比较各组HMGB1 mRNA表达水平的差异及其与 TNF-α、LPS、总胆红素(TBIL)、凝血酶原活动度(PTA)的关系．结果:PBMCs HMGB1 mRNA的表达水平在慢性重型肝炎组分别高于慢性肝炎组(0．89± 0．06 vs 0．70±0．10,P<0．01)和正常对照组 (0．89±0．06 vs 0．58±0．08,P<0．01),慢性肝炎组高于正常对照组(0．70±0．10 vs 0．58±0．08． P<0．01)．在23例慢性重型肝炎患者中,11例未恢复患者PBMCs HMGB1 mRNA表达水平明显高于12例恢复的患者(0．93±0．04 vs 0．85± 0．05,P<0．01)．其中12例已恢复的慢性重型肝炎患者,患者恢复期PBMCs HMGB1 mRNA 的表达水平较发病期明显下降(0．72±0．07 vs 0．85±0．05,P<0．01)．HMGB1 mRNA表达水平与外周血浆LPS、TNF-α及TBIL均呈显著正相关(r=0．74,0．64,0．71,均P<0．01),与PTA呈负相关(r=-0．82．P<0．01)．结论:HMGB1在乙型肝炎发病过程中可能起重要作用,HMGB1 mRNA的表达水平高低与病情轻重密切相关．     

丹酚酸B对MDA刺激的肝星状细胞增殖的抑制作用

目的:研究丹酚酸B的抗氧化性对大鼠肝星状细胞(HSC)的影响．方法:采用原位灌注法消化大鼠肝脏,108 g／L Nycodenz密度梯度离心,分离肝星状细胞,分别以不同浓度MDA／SAB处理细胞,MTT法观察细胞的增殖能力,2’,7’-二氯二氢荧光素 (DCFH)掺入反映细胞内氧化水平,Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白含量, 免疫组化法检测血小板衍生的生长因子受体 (PDGFR)含量．结果:MDA刺激后,细胞增殖明显增强, MTT结果显示,吸光度与对照组相比显著升高(0．253±0．016 vs 0．213±0．004,P<0．05), 而1 μmol／L SAB(0．182±0．006,P<0．01)和 10 μmol／L SAB(0．179±0．006,P<0．01)均可以显著抑制MDA刺激的HSC增殖．Western blot显示,PCNA蛋白在MDA刺激后明显增加(1．72±0．026 vs 1．223±0．025,P<0．01),而 1和10 μmol／L SAB可显著抑制PCNA蛋白表达的升高(分别是1．080±0．040和1．066± 0．025,P<0．01)．MDA可明显刺激细胞PDGF 受体的表达(5．5±0．653 vs 对照组3．3±0．616, P<0．01),提高HSC细胞内氧化水平(荧光强度: 4．721±0．385 vs 对照组2．413±0．662,P<0．01), 10 μmol／L SAB则可抑制PDGF受体的表达(2．723±0．326)和降低细胞内的氧化水平 (3．324±0．264)(P<0．01)．结论:丹酚酸B可通过影响PDGF信号通路而抑制体外培养HSC的增殖,且这种抑制作用与丹酚酸B的抗氧化作用有关．     

丹参对重症急性胰腺炎内皮素-1mRNA的影响

目的:探讨内皮素-1(ET-1)在重症急性胰腺炎(severeacutepancreatitis,SAP)胰腺中的表达对胰腺损伤的作用机制及丹参注射液对ET-1mRNA表达的影响.方法:Wistar大鼠45只,随机等分为模型组、药物组和对照组.以50g/L牛磺胆酸钠1mL/kg经胰管内逆行注射复制SAP模型.药物组在制模后im丹参[2mL/(kg·d)],1次/6h.对照组仅行假手术.各组动物在术后24h测血淀粉酶、ET-1和腹水量.使用原位杂交和图象分析检测胰腺ET-1mRNA的表达强度,并观察胰腺的病理变化.结果:模型组血中淀粉酶和腹水量分别为35.9±5.93μkat/L和9.87±2.34mL,显著高于药物组的23.96±5.56μkat/L和5.27±2.81mL及对照组的3.60±0.62μkat/L和0mL(P<0.001).模型组血中ET-1为185.47±20.80ng/L,高于药物组的164.27±18.53ng/L和对照组的72.90±17.27ng/L(P<0.05,P<0.001).模型组和药物组胰腺ET-1mRNA表达均增高,模型组显著高于药物组(28.22±1.15vs23.81±1.04,P<0.001).模型组和药物组胰腺均有病理改变,但药物组较模型组减轻(评分:10.45±1.42vs12.05±1.28,P<0.05).结论:SAP时胰腺ET-1mRNA高表达导致ET-1过度生成并与胰腺损伤有关.丹参能抑制胰腺ET-1mRNA的过度表达,从而对胰腺起保护作用.     

中药肝炎平对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGFβ1/Smad信号通路的影响

目的:研究中药肝炎平对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ水平和 Smad3,Smad7及前胶原α2(Ⅰ)(Colla2)mRNA 表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制．方法:健康Wistar大鼠38R随机分为正常对照组(N组)、模型对照组(A组)以及肝炎平治疗组(B组)．N组每日以生理盐水10μL/g灌胃,A 组及B组用CCl4制备大鼠肝纤维化模型,B组 4wk后开始以肝炎平10μL/g灌胃给药,A组同时以生理盐水10μL／g灌胃,每日1次．9 wk 后处死大鼠,取肝组织作病理学检查,免疫组化检测TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ的表达, RT-PCR检测胞内信号蛋白Smad3,Smad7以及 Coila2 mRNA的表达．结果:与正常对照组相比,模型组TGFβ1、 TβR Ⅰ、TβRⅡ、Smad3、Colla2表达明显增强,Smad7表达明显下降．经肝炎平治疗后大鼠肝脏TGFβ1及其受体TβR Ⅰ,TβR Ⅱ表达均比模型组减弱(TGFβ1:4．30±0．16 vs 4．18 ±0．17．P<0．05;TβR Ⅰ:4．35±0．14 vs 4．24± 0．10．P<0．05;TβRⅡ:4.37±0．11 vs 4．27±0．08． P<0．05)．肝炎平同时下调Smad3和Colla2 mRNA的表达(Smad3:0．93±0．05 vs 0．90± 0．41．P<0．05;Colla2:0．95±0．03 vs 0．92±0．03． P<0．05),上调Smad7 mRNA的表达(0．84±0．05 vs 0．87±0．03,P<0．05)．另外,肝炎平组大鼠肝脏病理变化显著改善．结论:肝炎平对大鼠肝纤维化肝脏TGFβ1/ Smad信号通路有明显的影响,能抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能为抑制 TGFβ1．及其受体TβR Ⅰ,TβRⅡ蛋白表达,下调Smad3 mRNA,上调Smad7 mRNA的表达, 并最终下调了作为主要细胞外基质的Colla2 mRNA的表达．     

丙酮酸乙酯对急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用

目的:观察丙酮酸乙酯(EP)对急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肺组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA表达的影响,探讨丙酮酸乙酯治疗急性坏死性胰腺炎肺损伤的机制.方法:逆行性胰胆管注射50 g/L牛磺胆酸钠制作ANP模型.随机分成3组,对照组、ANP组和EP治疗组(40 mg/kg,每隔6h静脉注射一次).ELISA法检测血清TNF-α和IL-1β水平;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织HMGB1 mRNA表达,并观察血氧变化及肺组织的病理变化.结果:ANP组血清TNF-α和IL-1β水平在建模后6h达高峰,12h下降,在此两时点治疗组血清TNF-α和IL-1β水平明显低于ANP组(TNF-α:131.6±29.6 ng/L vs 196.3±16.3 ng/L,65.0±16.6 ng/L vs 90.2±20.1 ng/L,P<0.05;IL-1β:194.9±26.8 ng/L vs 223.0±34.8 ng/L,105.2±24.0 ng/L vs 130.4±23.0 ng/L,P<0.05).ANP组大鼠肺组织HMGB1 mRNA表达水平在ANP后12h明显升高,至24h仍维持在高水平.治疗组肺组织HMGB1 mRNA表达水平在各时间点均明显低于ANP组(0.68±0.11 vs 0.88±0.11,0.81±0.11 vs 1.04±0.10,1.08±0.08 vs 1.33±0.15,P<0.05),且同期肺损伤比ANP组轻.治疗组PaO_2均明显高于ANP组.结论:丙酮酸乙酯能显著抑制TNF-α、IL-1β和HMGB1等早晚期炎症因子,改善低氧血症,对ANP肺损伤有明显保护作用.     

白细胞介素10对血管升压素诱导心脏成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的研究白细胞介素10(IL-10)对血管升压素(AVP)诱导大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型,四氮唑盐(MTT)比色法检测CFs增殖,流式细胞仪技术(FCM)测定细胞周期,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平。结果(1)10-7mol/L AVP作用24h,CFs的吸光度(A490)为0·216±0·013,较对照组(0·132±0·006)显著增加(P<0·01)。(2)IL-10呈浓度依赖性下调AVP诱导的CFs的A490的增加,其10-8g/mLIL-10干预组CFs的A490(0·157±0·029)较AVP组显著降低(P<0·01)。(3)AVP组CFs的S期百分率及增殖指数(12·30±0·71,19·58±0·88)较对照组(4·22±0·48,7·12±0·62)显著增加(P<0·01);而10-9g/mLIL-10干预组,CFs的S期百分率及增殖指数(9·56±1·13,13·86±1·28)较AVP组显著降低(P<0·01)。(4)AVP组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平(1·45±0·06,1·06±0·06)较对照组(1·03±0·05,0·77±0·05)显著增加(P<0·01)。而IL-10可浓度依赖性的下调AVP诱导的CFs的Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,其10-8g/mL IL-10干预组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平(1·14±0·06,0·88±0·02)显著低于AVP组(P<0·01)。结论IL-10具有抑制AVP诱导CFs增殖和胶原合成的作用,这可能对预防和逆转心脏重构有一定的价值。     

复方中药安胃汤提高大鼠胃溃疡愈合质量的机制

目的:通过实验性乙酸大鼠胃溃疡模型,研究复方中药安胃汤提高慢性胃溃疡愈合质量机制．方法:40只Wistar大鼠随机平均分为正常对照组、模型组、安胃汤组和雷尼替丁．采用乙酸浸渍法建立胃溃疡模型,造模3 d后前两组分别用生理盐水灌胃,后两组分别用安胃汤和雷尼替丁灌胃．采用放射免疫方法和免疫组织化学方法观察复方中药安胃汤对大鼠胃溃疡模型愈合时血清表皮生长因子(EGF)和胃黏膜 EGF,表皮生长因子受体(EGFR)及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响．结果:模型组相比,安胃汤组和雷尼替丁组可提高血清EGF(1．12±0．24,0．99±0．15μg／L vs0．52±0．13μg／L,P<0．01),安胃汤组与雷尼替丁组相比差异也有显著意义(P<0．05)．与模型组相比,安胃汤组和雷尼替丁组可显著增强胃黏膜EGF、EGFR及TGF-β1表达(EGF: 29．7％±1．9％,26．5％±1．6％vs18．4％±2．0％, P<0．01:EGFR:29．6％±2．6％,25．9％±1．0％vs 20．4％±1．8％,P<0．01;TGF-β1:67．0％±2．0％, 49．5％±1．1％vs27．3％±1．0％,P<0．01),安胃汤组强于雷尼替丁组(均P<0．01)．结论:安胃汤可能通过提高血清EGF和增强胃黏膜EGF,EGFR及TGF-β1表达,增强胃黏膜保护作用而提高溃疡愈合质量．     

白介素-10对梗阻性黄疸大鼠肝组织转化生长因子β1表达和肝细胞凋亡的影响

目的:探讨白介素-10(IL-10)对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的作用.方法:Wistar♂大鼠随机分为假手术(SO)组、梗阻性黄疸(OJ)组和IL-10组.OJ组和IL-10组结扎切断胆总管建立梗阻性黄疸模型,SO组仅游离胆总管.IL-10组术后第1天开始每天腹腔内注射IL-10(4μg/kg).实时荧光定量PCR法检测肝组织转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA的水平,免疫组织化学法检测肝组织TGF-β1蛋白表达情况.末端脱氧核甘酸介导生物素标记(TUNEL)法检测大鼠肝细胞凋亡情况,并检测血清TBIL、DBIL、ALT和AST水平.结果:胆总管结扎术后3d,与SO组相比,OJ组大鼠血清转氨酶、肝组织TGF-β1表达水平及肝细胞凋亡率均明显升高(ALT:91.83U/L±21.47U/Lvs47.67U/L±12.79U/L;AST:208.67U/L±32.36U/Lvs75.17U/L±11.96U/L;TGF-β1mRNA:7.48±1.51vs1.21±0.79;TGF-β1蛋白:6.11%±1.11%vs1.26%±0.64%;凋亡:15.06%±1.17%vs3.94%±0.46%;均P<0....     

大鼠重症急性胰腺炎内毒素血症、细胞因子和一氧化氮的变化及善宁的治疗作用

目的:探讨内毒素血症、细胞因子和一氧化氮在重症急性胰腺炎(severe acuce pancreatitis, SAP)发展中的作用及善宁的治疗作用．方法:经胰管逆行注射15 g/L去氧胆酸钠建立SAP模型,给予善宁治疗,观察造模后各时间点血中内毒素(ET)、过氧化脂质(LPO), TNF-α,IL-6,一氧化氮(NO)的变化,并进行相关分析;于24 h后取胰腺组织,测定胰腺组织中LPO,TNF-α,IL-6和NO水平,同时进行相关分析及胰腺组织病理学检查．结果:与对照组比较,SAP组各时间点血浆 ET,LPO,TNF-α,IL-6,NO的水平明显升高 (P<0．01),其中ET,LPO,TNF-α和NO 6 h尤为显著(898±114 EU/L,24．58±1．23 μmol/L, 246．3±16．5 ng／L,162．8±10．9 mmol／L,P< 0．05 vs 12,24 h)．胰腺组织LPO,TNF-α,IL-6, NO的水平SAP组明显高于对照组(3．31±0．85 μmol/g vs 0．33±0．04 μmol/g,P<0．01:2．57± 0．14 ng/g vs 0．16±0．04 ng/g,P<0．01;85．6± 24．6 ng/g vs 32．5±5．7 ng/g,P<0．01;15．3± 1．2 mmol／g vs 6．6±1．4 mmol/g,P<0．01),光镜下胰腺组织病理损害明显．相关分析显示 SAP组血浆LPO,TNF-α,IL-6,NO水平分别与ET水平呈显著正相关(r=0．858,P<0．01:r =0．958,P<0．01;r=0．918,P<0．01;r=0．875, P<0．01)．善宁治疗后上述各指标均较SAP组明显改善(P<0．01)．结论:ET血症、细胞因子、NO等相互激发、相互促进,在SAP的发展中起着重要的协同作用．善宁能阻断这些损伤因子的连锁反应．     

牛磺酸对大鼠胰岛活性和功能的保护作用

目的:探讨牛磺酸(taurine,Tau)在大鼠胰岛培养过程中对胰岛的保护作用及其机制.方法:实验Wistar大鼠分为2组,RPMI 1640组和牛磺酸组(Tau组).流式细胞仪检测Caspase-9和磷酸化Akt阳性细胞比例,观察牛磺酸对Caspase-9及Akt的影响.RT-PCR检测单纯1640组和Tau组胰岛细胞的TNF-α、IL-1β、NF-κB和HO-1基因的表达.结果:胰岛单纯用RPMI 1640培养1 wk后激活的Caspase-9与加入牛磺酸后相比有统计学意义(41.03%±4.46% vs 23.85%±3.09%,P<0.05).胰岛分离纯化后有明显的TNF-αmRNA、IL-1βmRNA、NF-κB mRNA、HO-1mRNA表达,随着培养时间的延长TNF-αmRNA、IL-1β mRNA、NF-κB mRNA表达逐渐减弱,HO-1 mRNA表达逐渐增强.加入牛磺酸后胰岛TNF-α mRNA、IL-1β mRNA、NF-κB mRNA表达明显减弱,在6 h,72 h及1 wk时(TNF-α:0.34±0.02.0.24±0.01,0.19±0.02;IL-1β:0.24±0.09,0.09±0.01,0.05±0.01;NF-κB:1.76±0.30,0.93±0.15,0.37±0.02)和单纯培养组(TNF-α:0.57±0.1,0.39±0.02,0.29±0.02;IL-1β:0.34±0.02,0.24±0.01,0.19±0.02;NF-κB:2.52±0.24.1.21±0.14,0.76±0.07)比较差异具有显著性(均P<0.05).HO-1mRNA的表达较单纯培养组明显增强且随着时间的延长表达更明显(3.74±0.10,4.33±0.29.5.28±0.29 vs 2.46±0.30,3.13±0.07,3.59±0.22;均P<0.05).结论:牛磺酸能抑制TNF-α、IL-1β和NF-κB转录并活化Akt,抑制细胞凋亡.     

全反式维甲酸对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏TGF-β1、CTGF和Col1a1表达的影响

目的:通过观察全反式维甲酸对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏TGF-β1、CTGF和Collal表达的影响,探讨该药物对酒精性肝纤维化形成的作用．方法:大鼠24只随机分为3组:酒精组(J组),给予酒精-玉米油混悬液灌胃;治疗组(A组),给予上述混悬液灌胃8 wk后加用0,15 mg／(kg·d) 的全反式维甲酸灌胃;对照组(N组),给予等量的生理盐水和玉米油灌胃．16 wk后处死大鼠．光、电镜下观察肝组织病理改变,高压液相色谱法(HPLC)测肝组织中维甲酸的含量,免疫组化法检测肝组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的蛋白水平,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中TGF-β1、CTGF和Ⅰ型胶原前胶原α1(Collal)的mRNA水平．结果:光镜下酒精组及治疗组均呈不同程度的酒精性肝炎改变,电镜下酒精组肝细胞线粒体肿胀,内质网扩张,脱颗粒,而治疗组改变轻于酒精组．肝组织中维甲酸含量:酒精组低于正常组,治疗组接近对照组水平．Collal 的mRNA表达在酒精组中较对照组明显增高 (0．18±0．03 vs 0．10±0．02,P<0．01),治疗组较酒精组表达下降(0．14±0．03 vs 0．18±0．03,P <0．05)．TGF-β1的mRNA及蛋白表达在酒精组中增高(0．53±0．17 vs 0．34±0．05,105．93 ±10．12 vs 149．27±10．17,P<0．01),治疗组相对于酒精组有所下降(0．41±0．06 vs 0．53± 0．17,130．80±6.23 vs 105．93±10．12,P<0．05)． CTGF的mRNA及蛋白表达在酒精组中增高 (0．41±0．13 vs 0．17±0．05,130．84±5．72 vs 158.37±6．64,P<0．05),治疗组对于酒精组有所下降(0.30±0．04 vs 0．41±0．13,149．23± 6．65 vs 130．84±5．72．P<0．05)．结论:小剂量全反式维甲酸通过降低慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏致纤维化因子TGF-β1, CTGF和Collal的表达抑制早期酒精性肝纤维化的形成．     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞基质金属蛋白酶-1及其抑制因子基因的表达

目的 比较外周血单个核细胞(PBMC)及自身血清中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)表达水平,探讨MMP-1及TIMP-1基因表达对肝纤维化的诊断价值.方法 实时荧光定量反转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法分别检测37例慢性乙型肝炎患者及20例健康对照者PBMC中MMP-1及TIMP-1 mRNA的表达水平,双抗体央心酶联免疫吸附方法检测血清MMP-1及TIMI-1水平;慢性乙型肝炎患者均行肝组织穿刺活检,行纤维化程度分期(S).组间比较采用多个独立样本非参数检验,并作Spearman相关性分析.结果 健康对照组PBMC中MMP-1 mRNA及TIMP-1 mRNA呈低水平表达,慢性乙型肝炎患者PBMC中MMP-1mRNA表达水平与健康对照组比较差异无统计学意义,而TIMP-1 mRNA表达水平显著高于健康对照组的(0.48±0.80)lg拷贝/μL,血清TIMP-1也高于健康对照组的(158.29±58.58)μg/L.随着慢性乙型肝炎肝纤维化程度加重,各期之间MMP-1 mRNA的表达水平及血清MMP-1水平比较差异无统计学意义(χ~2=8.960,P=0.111;χ~2=7.898,P=0.211);从S1～S4,TIMP-1 mRNA表达水平依次为(1.67±0.84)、(3.48±2.08)、(5.86±3.47)及(8.14±6.48)lg拷贝/μL,血清TIMP-1水平依次为(233.73±64.84)、(262.10μ71.12)、(301.15μ62.74)及(381.15±152.75)μg/L,各期之间TIMP-1mRNA表达水平及血清TIMP-1水平比较差异均有统计学意义(χ~2=14.290,P=0.002;χ~2=12.209,P=0.007).PBMC中TIMI-1 mRNA、血清TIMP-1与肝纤维化呈正相关(r=0.752.P<0.01;r=0.530,P=0.008).结论 PBMC中TIMP-1 mRNA表达水平及血清TIMP-1水平与肝脏纤维化程度密切相关.PBMC中TIMP-1 mRNA及血清TIMP-1可以作为诊断肝纤维化的新指标,尤其PBMC中TIMP-1 mRNA诊断价值最大.