PCR二次扩增技术在结核病诊断中的应用

结核病的诊断与治疗是长期以来不断深入研究的一个课题。近年来,应用PCR技术检测各种临床标本中的结核杆菌,已较培养法及直接涂片法显示了明显的优越性。国外也将此技术作为结核病快速诊断的一个手段。尽管如此,仍有少部分临床疑为结核菌感染患者的取材标本,应用PCR技术检测无扩增产物,使诊断仍缺乏病原菌的依据。为使该技术在临床诊断中发挥更好的作用,我们对结核杆菌的检测采用了一次和二次扩增技术进行比较,现报告如下。     

核酸扩增检测技术和酶联免疫吸附在人类免疫缺陷病毒检测中的应用价值

血站是无偿献血的主要场所,也是临床急救和疾病预防血液的主要来源,因此加强血站血液筛选对预防血液途径传染性疾病的发生具有重要的意义[1]。近年来,艾滋病的发病率呈现明显的上升趋势,人免疫缺陷性病毒(HIV)携带者的比例也显著增加,导致无偿献血志愿者中HIV感染比例有所上     

Luminex液相芯片技术检测6种虫媒病毒方法的建立

目的 建立森林脑炎病毒(TBEV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、辛得比斯病毒(SINV)、西尼罗病毒(WNV)、东部马脑炎病毒(EEEV)、登革热病毒(DENV)6种虫媒病毒的液相芯片检测技术,并对该方法进行评价.方法 制备6种虫媒病毒的特异性单克隆抗体,检测抗体标记生物素,捕获抗体偶联荧光聚苯乙烯微球,建立双抗体夹心的液相芯片检测技术,利用Luminex200分析系统对6种虫媒病毒分别进行单一、多重液相芯片检测.结果 将平均荧光强度的判定阈值定为背景对照的2倍可对上述6种虫媒病毒进行有效鉴定.多批次实验均能对6种单一病毒样本和混合病毒样本进行准确鉴定,未出现交叉反应,批次间变异系数(CV)均小于7％,表明该方法的稳定性和特异性均较好.同时对该方法的敏感性进行鉴定,结果表明检测TBEV、WNV、JEV、SINV、EEEV、DENV的敏感性分别达到25.00、781.25、781.25、390.63、781.25、1562.5pfu/ml.该方法与ELISA相比具有灵敏性高、重复性好、节省样本和时间等优点,特异性相当.结论 通过制备特异性单克隆抗体,成功建立了可同时检测6种虫媒病毒的液相芯片检测技术平台.该平台对于病原体的检测具有较好的应用前景.     

PCR技术与直接涂片法在诊断泌尿系结核中的比较

为提高泌尿系结核杆菌的检出率,我们以膀胱镜活体检验(活检)和肾脏切除标本进行病理检验(病检)作为金标准,将聚合酶链反应(PCR)技术和直接涂片染色查找抗酸杆菌(涂片法)进行了比较。结果证明PCR检测     

利用GSP逆转录结合巢式PCR技术鉴定剪接变体的新方法及其在小鼠TrkC基因变体发现中的应用

目的利用基因特异性iI物（genespecificprimer,GSP）逆转录结合巢式PCR（nPCR）技术,建立鉴定剪接变体的新方法。方法以小鼠TrkC基因为例,参考其已知变体1和变体2的序列分别设计GSP和nPCR引物,以逆转录产物为模板进行nPCR反应,扩增产物采用1．5％琼脂糖凝胶分离并回收具有递减趋势的DNA片段,利用T／A克隆技术亚克隆到载体pMDl9一T进行直接测序,并与小鼠RefSeq数据库进行比对。结果利用GSP逆转录结合nPCR技术不仅可鉴定出mc基因的已知剪接变体,而且还能够筛选到TrkC基因的新剪接变体并命名为变体3,与变体1相比属于盒式外显子剪接模式,缺失了变体1的520～2188位共1669bp。结论利用GSP结合nPCR技术建立了一种鉴定剪接变体的方法,为新剪接变体的挖掘与功能研究以及理解异常剪接相关疾病的机制研究提供了重要参考。     

3种重要脑炎病毒的多重RT-PCR检测方法的建立

目的:建立针对西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)、委内瑞拉马脑炎病毒(Venezuelan equine encephalomyelitis virus,VEEV)和亨德拉病毒(Hendra virus,HeV)的多重RT-PCR检测方法.方法:分别针对WNV的NS1基因、VEE的NSP2基因和HeV的G基因设计3对引物,建立了同时检测WNV,VEEV和HeV的多重RT-PCR方法.以不同滴度的病毒评估该检测方法的敏感性,同时以中国地区流行的与脑炎相关的黄病毒属和甲病毒属成员为模板验证该检测方法的特异性.结果与结论:所建立的3种病毒的多重RT-PCR方法可同时或分别特异扩增WNV,VEEV和HeV的454 bp,541 bp和723 bp基因片段,敏感度分别达到10 PFU/ml,100 PFU/ml和100 fg/ml;而对中国流行的与脑炎相关黄病毒和甲病毒如日本脑炎病毒、森林脑炎病毒、黄热病毒、登革病毒、东部马脑炎病毒和西部马脑炎病毒的扩增均为阴性.结果表明所建立的多重RT-PCR敏感性和特异性良好,可用于3种脑炎病毒的快速鉴定和甄别.     

毛细管PCR技术的建立及其在传染病快速诊断上的应用

毛细管ＰＣＲ技术的建立及其在传染病快速诊断上的应用李建标，谭津，赖进祥，王春颖，朱美财，林万明临床实验科主题词聚合酶链反应，传染病，基因聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的发展及其在传染病诊断上的应用，使传染病的基因诊断有了新的突破［１］。然而常规ＰＣＲ反应...     

一维多重接力COSY核磁共振新方法及其在盐酸苯乃辛与环糊精包合物结构研究中的应用

本文报告一种新的一维多重接力 COSY 核磁共振方法。该方法是以同核磁化接力转移为基础,并采用小翻转角和等间隔重复的硬脉冲系列进行选择激发。实验结果表明,使用本方法可以将以往~1H 核磁共振谱分解为若干个亚谱,从而复杂重迭的谱图大为简化,谱峰归属容易确定。本方法用于盐酸苯乃辛和环糊精包合物的结构研究有独到之处。     

一种高性能磁性复合微球的制备及其在DNA提取中的应用

目的 研制一种分散性好、磁响应能力强的高性能Fe3O4@SiO2磁性复合微球,以配合核酸提取仪快速、自动分离纯化DNA.方法 通过透射电镜(TEM)、超导量子干涉磁强计(SQUID)对制备的磁性复合微球进行表征.利用紫外分光光度计、实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,RQ-PCR)及电泳验证DNA提取效果.结果 制备的Fe3O4@SiO2磁性复合微球分散性良好,粒径均匀,且具有良好的超顺磁性和较高的饱和磁化强度.核酸提取实验表明,T100磁性复合微球可从鲑鱼精、乙肝病毒及质粒菌等样品中提取出高质量的DNA.结论 制备出一种高性能Fe3O4@SiO2磁性复合微球,可应用于核酸提取仪.     

一种新型的表面增强拉曼散射基底的制备及其在大肠杆菌BL21检测中的应用

目的：研制一种新型的拉曼增强液态基底,采用免标记表面增强拉曼散射（ surface-enhanced Raman scat-tering,SERS ）技术快速检测大肠杆菌。方法采用改进后的Stober方法制备360 nm二氧化硅纳米球（ SiO2）,在其表面结合不同粒径Au＠Ag,制备纳米复合物（ SiO2-Au＠Ag）。通过透射电镜（ TEM）、紫外可见（ UV-Vis）分光光度仪对所制备的纳米结构进行分析表征。以对巯基苯胺（ PATP）为待检分子,筛选出SERS效果最佳的SiO2-Au＠Ag。以此纳米复合物检测不同浓度PATP,并通过简单混合培养的方法检测大肠杆菌。结果透射电镜拍摄图片显示,随着Au＠Ag 粒径增大,结合到SiO2表面的Au＠Ag 聚集度也增加。紫外光谱显示,随着Au＠Ag 粒径增大, Au＠Ag和SiO2-Au＠Ag最大吸收峰红移。通过实验,SiO2-100 nm Au＠Ag检测PATP的灵敏度为10-10 mol／L,最低可检测的大肠杆菌的浓度为105 CFU／ml。结论在该实验范围内,SiO2-Au＠Ag的SERS效应随着SiO2表面结合的Au＠Ag粒径增大而增大。 SiO2-100 nm Au＠Ag具有最强的SERS效应。     

人细小病毒B19三种基因型通用核酸检测体系的建立与评价

目的：建立能同时检测人细小病毒B19（简称B19病毒）3种基因型的通用核酸检测（ NAT）体系,并进行方法学评价。方法对B19病毒3种基因型代表毒株全序列进行比对,选取其保守区域（ NS1区）设计B19病毒的通用引物和探针。为避免假阴性结果,在体系中引入竞争性噬菌体内标。将适宜浓度的内标添加到一系列梯度稀释的参考品质粒中,建立B19病毒实时荧光定量PCR（ qPCR）标准曲线。对建立的B19病毒通用NAT体系分别进行敏感性、特异性、重复性等方法学评价。结果建立的B19病毒实时qPCR检测体系的标准曲线在1×109～1× 103拷贝（copies）／μl模板浓度范围内相关性良好。方法学评价显示,体系的最低检测下限为10拷贝／μl;与其他血源传播病毒等无交叉反应;批内和批间实验重复性良好。结论建立了B19病毒3种基因型全检的通用NAT体系,不仅可用于B19病毒感染的诊断,还可用于血液和血液制品中B19病毒的NAT筛查,对于保障输血和血液制品的病毒安全性具有重要意义。     

1,5-二咖啡酰奎宁酸与其四乙酰化物相对生物利用度的研究

目的 比较1,5-二咖啡酰奎宁酸与其四乙酰化物在大鼠体内的生物利用度,为目标化合物的筛选和结构优化提供参考依据.方法 Wistar大鼠随机分两组,分别灌胃给予等摩尔数的1,5-二咖啡酰奎宁酸(100 mg/kg)和四乙酰化物( 133 mg/kg).血浆样品经乙酸乙酯萃取后,以乙腈一水（5 mmol/L乙酸铵,pH 5...     

基于荧光碳点的免疫荧光探针构建及其对大肠杆菌的特异性识别

目的：将碳点（ CDs）应用在免疫荧光探针成为取代传统荧光染料的新型标记物。方法通过微波加热方法制备高强荧光碳点,并通过EDC偶联法与大肠杆菌抗体结合形成复合免疫荧光探针,以大肠杆菌O157∶H7为检测模型进行特异性识别实验。结果碳点成功应用在免疫标记大肠杆菌O157∶H7,并可见多色荧光。结论免疫荧光探针成功地识别大肠杆菌O157∶H7,表明碳点可作为免疫荧光探针的荧光标记物,有望制成具有自主知识产权的新型低毒生物传感器。