丹参酮II_A对大鼠系膜细胞增殖及TGF-β1启动子活性的调控

目的观察丹参酮IIA对大鼠系膜细胞增殖及对人TGF-β1基因启动子活性的作用。方法应用MTT法观察丹参酮IIA对大鼠系膜细胞增殖的作用;将不同长度的人TGF-β1基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体phTGF 2.14,采用脂质体法转染至大鼠系膜细胞中,分别加入不同浓度的丹参酮IIA(1、5、10 mg/L)进行干预,用ELISA方法检测报告基因CAT的活性。结果10 mg/L的丹参酮IIA对大鼠肾小球系膜细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01)。丹参酮IIA浓度为1、5 mg/L时对重组体phTGF 2.14的表达活性无影响,当增大丹参酮IIA浓度为10 mg/L时对重组体phTGF2.14的表达活性有抑制作用,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。结论丹参酮IIA能够抑制系膜细胞增殖,当浓度为10 mg/L时对人TGF-β1基因启动子活性也具有抑制作用。     

丹参酮ⅡA对大鼠系膜细胞增殖及TGF-β1启动子活性的调控

目的 观察丹参酮ⅡA对大鼠系膜细胞增殖及对人TGF-131基因启动子活性的作用.方法 应用MTT法观察丹参酮u.对大鼠系膜细胞增殖的作用;将不同长度的人TGF-131基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体phTGF 2.14,采用脂质体法转染至大鼠系膜细胞中,分别加入不同浓度的丹参酮ⅡA(1、5、10 mg/L)进行干预,用ELISA方法检测报告基因CAT的活性.结果 10ms/L的丹参酮ⅡA对大鼠肾小球系膜细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01).丹参酮Ⅱ浓度为1、5 mg/L时对重组体phTGF 2.14的表达活性无影响,当增大丹参酮ⅡA浓度为10 ms/L时对重组体phTGF 2.14的表达活性有抑制作用,与对照组比较有显著差异(P<0.01).结论 丹参酮ⅡA能够抑制系膜细胞增殖,当浓度为10 ms/L时对人TGFβ1基因启动子活性也具有抑制作用.     

洛伐他汀对大鼠系膜细胞增殖及TGF-β1基因启动子活性的调控

目的:观察洛伐他汀对大鼠系膜细胞增殖及对人TGF-β1基因启动子活性的作用.方法:(1) 应用MTT法观察洛伐他汀(10-7、10-6、10-5、10-4mol/L)对大鼠系膜细胞增殖的作用;(2)将不同长度的人TGF-β1基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体phTGF2.14和phTGF1.12,采用脂质体法转染至大鼠系膜细胞中,分别加入不同浓度的洛伐他汀(10-7、10-5mol/L)进行干预,用ELISA方法检测报告基因CAT的活性.结果:(1)不同浓度洛伐他汀对大鼠系膜细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01).(2)洛伐他汀浓度为10-7mol/L时对重组体phTGF2.14及phTGF1.12的表达活性无影响,当增大洛伐他汀浓度为10-5mol/L时对重组体phTGF2.14及phTGF1.12的表达活性有抑制作用,与对照组比较有显著差异(P<0.01).结论:洛伐他汀能够抑制系膜细胞增殖,当浓度为10-5mol/L时对人TGF-β1基因启动子活性也具有抑制作用.     

肝细胞生长因子对高糖条件下系膜细胞基质降解酶系统及转化生长因子β1的影响

目的通过体外培养大鼠肾系膜细胞,研究肝细胞生长因子(hepatocyte grouth factor,HGF)对高糖条件下系膜细胞表达及分泌转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)及其抑制物金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,从而探讨HGF在糖尿病肾病中肾脏保护作用的机制。方法体外培养大鼠肾系膜细胞,分为正常对照组、高糖刺激组及HGF干预组,通过MTT比色测定不同时间、不同HGF浓度对大鼠肾系膜细胞增殖的影响;采用ELISA法测定细胞上清中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、HGF以及Ⅳ型胶原(Ⅳcol)的含量;以RT-PCR法检测系膜细胞MMP-9,TIMP-1、TGF-β1及HGF基因的表达。结果同正常对照组相比高糖刺激系膜细胞增生,HGF可以抑制高糖引起的系膜细胞增生。通过外源添加HGF可以显著抑制高糖条件下系膜细胞Ⅳcol、TIMP-1及TGF-β1的分泌,但对高糖条件下系膜细胞MMP-9的分泌则无显著影响。同高糖刺激组相比,外源HGF使系膜细胞MMP-9及HGF基因表达明显增强,而显著抑制系膜细胞TIMP-1及TGF-β1基因的表达。结论HGF对于高糖条件下的大鼠肾系膜细胞可能具有保护性作用,这一作用可能同以下途径有关:HGF抑制高糖刺激所导致的系膜细胞增生;HGF抑制TIMP-1mRNA表达及蛋白合成,促进MMP-9mRNA表达,从而调节MMP-9与TIMP-1之间的比例促进ECM降解;HGF显著抑制TGF-β1mRNA表达及蛋白合成,并且促使内源HGFmRNA表达增高,从而恢复TGF-β1与HGF之间的平衡。     

肝细胞生长因子对子宫内膜癌细胞增殖影响的实验研究

目的观察肝细胞生长因子(HGF)对子宫内膜癌细胞HEC-2B增殖的影响及子宫内膜癌细胞HEC-2B中HGF受体C-met的表达,了解HGF对子宫内膜癌细胞的作用及其机制。方法体外培养人子宫内膜癌细胞HEC-2B,用RT-PCR的方法检测HEC-2B中HGF受体C-met有表达。对HEC-2B进行24 h血清饥饿后用不同剂量的HGF作用于HEC-2B。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)分析细胞的增殖力,用流式细胞仪检测细胞的增殖周期。结果C-met在HEC-2B细胞中稳定表达,HGF促进细胞的增殖,并在一定的范围内有剂量依赖关系,各处理组与对照组相比,P<0.05。当HGF浓度达到60 ng.mL-1时,增殖水平较对照上调约1.9倍。结论HGF/C-met能够在体外促进子宫内膜癌细胞的增殖。     

转化生长因子β1启动子质粒重组体的构建及活性研究

目的:探讨调控TGFβ1基因高水平转录的启动片段.方法:以人基因组DNA为模板,PCR扩增获得TGF-β1基因转录起始位点上游5'端-1328～ 812 bp的片段中不同长度的片段,以此作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的质粒pCAT3-enhancer重组成5个重组体,并将其转染至大鼠肝里状细胞株中,测定细胞的CAT的表达水平并比较各重组体的启动子活性.结果:-308～ 812 bp序列具有较强的启动活性,-611～ 812 bp次之,其他几个重组体的启动活性从高到低的排序依次为1328～ 812 bp、-867～ 812 bp、 227～ 812 bp.结论:TGF-β1基因启动子片段中,-308～ 812 bp、-611～ 812 bp、1328～ 812 bp重组体具有较强的启动活性,是进一步研究人TGF-β1基因转录调控的重要靶序列.     

肝细胞生长因子对冠状动脉平滑肌细胞增殖迁移的影响

为观察肝细胞生长因子(HGF)对牛冠状动脉平滑肌细胞(BCASMC)增殖、迁移的影响,分离和培养BCASMC,采用四甲基偶氮唑蓝法观察HGF对BCASMC增殖的作用,倒置显微镜观察BCASMC的迁移。结果显示,对照组、HGF组BCASMC的D值相差显著(P<0.05),HGF组的BCASMC增殖率为45.2％,且迁移明显。提示HGF能促进BCASMC的增殖和迁移。     

肝细胞生长因子和表皮生长因子对体外肝细胞生长的影响

取成年小鼠肝细胞在RPMI1640培养液中加热60℃胎肝提取液(FE_(60)HSS),加热80℃胎肝提取液(FE_(80)HSS)及加热60℃成年雄性小鼠颌下腺提取液(M_(60)EGF),用I~(125)UdR掺入法测定其肝细胞DNA合成,结果显示FE_(60)HSS为8575±17cpm,FE_(80)HSS为4788±990cpm,M_(60)EGF为4592±1120cpm,和对照组1902±657cpm比较差异有非常显著意义(P值均<0.01)。FE_(60)HSS组对细胞DNA合成较FE_(80)HSS明显,说明HSS对加热80℃不很稳定。     

消渴颗粒剂对大鼠系膜细胞增殖和TGF-β1表达的影响

目的观察消渴颗粒剂对高糖刺激后系膜细胞增殖和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法培养正常大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入中药含药血清后,用MTT法和激光共聚焦显微镜分别观察系膜细胞增殖和TGF-β1的表达。结果消渴颗粒剂含药血清在48h可抑制高糖对大鼠系膜细胞的促增殖作用,在72、96 h可对抗高糖对系膜细胞增殖的抑制作用,96 h最为明显(P<0.05)。高糖刺激后TGF-β1在肾小球系膜细胞内表达增多,消渴颗粒剂明显减少系膜细胞内TGF-β1表达(P<0.05)。结论消渴颗粒剂可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖引起的TGF-β1过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。     

护肾固精方对系膜细胞增殖及转化生长因子β1的影响

目的:观察护肾固精方(Hushen Gujing Fang,HSGJF)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells, MsC)增殖及其分泌转化生长因子-β1(TGFβ1)的影响.方法:采用体外培养大鼠MsC和血清药理学方法,分为HSGJF血清组(高、中、低3个剂量亚组)、LPS病理组及空白组,采用MTT法和酶联免疫吸附(ELISA)法检测MsC增殖和TGFβ1含量.结果:HSGJF血清对MsC无明显细胞毒性作用.50,100,200 ml/L浓度的血清在作用24,48 h后与正常大鼠血清比较,能明显抑制大鼠MsC增殖(P《0.05或P《0.01).MsC经LPS刺激后,TGFβ1蛋白含量明显升高.而3种不同浓度的含药血清均能在一定程度上对抗 LPS诱导的MsC分泌TGFβ1的增加,这种抑制作用随用药时间及药物浓度的升高而增强.结论: HSGJF对肾小球MsC增殖有明显抑制作用,并能显著干预活化的肾小球MsC分泌细胞因子,具有免疫调节作用.     

肝细胞生长因子对培养大鼠系膜细胞低密度脂蛋白受体表达的影响

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)对培养大鼠肾小球系膜细胞转录及表达低密度脂蛋白(LDL)受体的影响.方法:以10、20、50、100 ng/ml HGF与大鼠系膜细胞在高LDL环境(250 μg/ml)中共孵育,应用RT-PCR及酶联免疫吸附方法,观察大鼠系膜细胞LDL受体的转录与表达的变化.结果:HGF可时间依赖及浓度依赖地在转录水平与蛋白水平增加培养大鼠系膜细胞LDL受体表达,并且不被高LDL环境所抑制.结论:HGF通过促进系膜细胞表达LDL受体,增加系膜细胞对LDL的摄取,可能参与了脂质肾损伤过程.     

重组肝细胞生长因子质粒的构建及对内皮祖细胞增殖的影响

目的构建一种携带人肝细胞生长因子（HGF）基因的表达质粒（pUDKH）,探讨重组质粒对体外培养的成人外周血中内皮祖细胞（endothelial progenitor cell,EPC）增殖的影响。方法用PCR方法从人胎盘cDNA文库扩增HGF基因,并将其克隆至病毒表达载体pLenti6/V5-Dest,获得表达质粒pLenti-HGF。制备病毒,感染原代培养的内皮祖细胞,免疫组化分析其感染效率及上清中HGF的表达水平。MTT法检测感染病毒后对细胞增殖的影响。结果 pLenti-HGF病毒可有效感染体外培养的内皮祖细胞,表达HGF,并能促进内皮祖细胞的增殖。结论内皮祖细胞经病毒感染后可以表达hHGF,外源性hHGF基因能够刺激内皮祖细胞增殖。     

促肝细胞生长素对大鼠肝星状细胞增殖及α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的影响

目的:探讨促肝细胞生长素(pHGF)对大鼠肝星状细胞HSC-T_6增殖及α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的影响。方法:(1)采用MTT法分析pHGF对HSC-T_6细胞增殖的影响。(2)构建含人α1(Ⅰ)胶原基因5′侧翼序列(启动子)与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的重组体 pCOLH1.5,以脂质体法转染HSC-T_6细胞,ELISA法测定不同浓度pHGF作用24 h后,转染了重组体质粒的HSC-T_6细胞的CAT表达量。结果:(1)不同浓度pHGF对HSC-T_6细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01)。(2)pHGF在200 μg/ml时对转染重组体质粒pCOLH1.5的HSC-T_6细胞的CAT活性具有明显的抑制作用,与对照组相比差异显著(P<0.05);增加pHGF浓度至400μg/ml时,对CAT活性抑制更为明显,与对照组相比差异非常显著(P<0.01)。结论:pHGF对HSC-T_6细胞增殖具有明显的抑制作用;对α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性具有负性调控作用。     

大黄酸及大黄素对人肾小管上皮细胞增殖及TGF—β1启动子活性的调控作用

目的：观察大黄酸和大黄素对人肾小管上皮细胞（HK-2）增殖及对人转化生长因子-β1（TGF-β1）基因启动子活性的作用。方法：应用MTT法观察不同浓度大黄酸和大黄素（1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml和100μg/ml）对人肾小管上皮细胞增殖的作用;将人TGF-β1基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶（CAT）报告基因组成重组体phTGF2．14,采用脂质体法转染至人肾小管上皮细胞中,分别加入不同浓度的大黄酸和大黄素（1μg/ml、10μg/ml和50μg/ml）进行干预,用ELISA方法检测报告基因CAT的活性。结果：大黄酸和大黄素各浓度组对人肾小管上皮细胞均具有明显的抑制HK-2细胞增殖的作用（P〈0．01）,且呈剂量依从性;大黄酸和大黄素浓度为lμg/ml和10μg/ml时对重组体phTGF2．14的表达活性无影响,当增大其浓度为50μg/ml时对重组体phTGF2．14的表达活性有抑制作用,其抑制率分别为38．0％和36．0％,与对照组比较均有显著差异（P〈0．01）。结论：大黄酸和大黄素能够抑制人肾小管上皮细胞增殖,当浓度为50μg/ml时对人TGF-β1基因启动子活性具有一定的抑制作用。     

肝细胞生长因子针剂制备及其活性测定

对临床应用的肝细胞生长因子针剂生产工艺进行了探索与改进，并对其活性进行了测定与比较。实验结果表明，肝细胞生长因子的生物学作用具有一定的量效关系，其疗效并不与浓度成正比，较理想的浓度为１．６ｍｇ（多肽）／ｍｌ。     

肝细胞生长因子对大鼠系膜细胞炎症介质与基质表达的影响

目的：研究肝细胞生长因子(HGF)对大鼠肾小球系膜细胞合成、分泌炎症介质及细胞外基质的影响。方法：以不同浓度HGF与大鼠系膜细胞共孵育，观察不同时间培养细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、转化生长因子β(TGF—β)、纤连蛋白(Fn)表达的变化。结果：HGF可时间依赖及浓度依赖的降低培养大鼠系膜细胞IL-6、TGF—β及Fn表达水平。结论：HGF可抑制大鼠系膜细胞炎症介质及细胞外基质表达，可作为一种新型的肾脏保护性因子，对肾脏疾病的治疗具有一定的意义。     

转化生长因子β1在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨转化生长因子(TGFβ1)在肝细胞癌中可能的作用机制.方法用免疫组化SABC方法检测45份石蜡包埋人肝细胞癌标本及36例癌旁组织中TGFβ1蛋白表达的情况.结果 45例肝癌组织中TGFβ1阳性表达率和为62.2%.肝细胞癌组织中TGFβ1表达在肝细胞癌中明显升高,与癌旁组织相比较差异有显著性(P<0.05),与肝细胞癌的组织分化程度(按Edmondson-Steiner分级标准),包膜是否完整及有无癌栓有相关性(P<0.05).结论肝细胞癌组织中TGFβ1呈过表达.TGFβ1的过表达对诱发肝细胞癌及对肝细胞癌的转移都起到一定的作用,可作为肝细胞癌的预后指标.     

MTT法检测异种肝细胞生长因子对大鼠肝细胞体外增殖的影响

目的 :研究肝细胞生长因子对大鼠肝细胞原代培养的影响。方法 :利用胶原酶原位二步灌注法分离大鼠肝细胞 ,接种并预培养 1 .5 h后 ,用含不同浓度 HGF的培养基继续培养至 48h,MTT比色法检测肝细胞生长因子对原代培养大鼠肝细胞增殖的影响。结果 :在所设加样量范围内 ,培养基所含 HGF为 1 0 μg/m L时 ,原代培养大鼠肝细胞的增殖出现最高峰。结论 :HGF对原代培养的大鼠肝细胞的增殖有明显的影响 ,但其作用效果无剂量依从关系     

肝细胞生长因子在人肝细胞中的表达及对肝细胞损伤的保护作用

目的　构建肝细胞生长因子 (HGF)真核细胞表达载体 ,并观察其在人正常肝细胞中的表达以及对细胞增殖和抗损伤能力的影响。方法　利用基因重组技术将HGF与绿色荧光蛋白 (GFP)融合并构建真核表达质粒 ,通过脂质体介导法 ,导入正常人肝细胞系中。用荧光显微镜以及免疫组织化学方法观察HGF表达情况。采用 [3 H] TdR掺入DNA法、PCNA免疫组织化学观察肝细胞DNA合成 ,了解肝细胞增殖能力的变化。用CCl4造成急性肝细胞损伤 ,通过测定细胞存活率、细胞内丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、K+ 的漏出量了解肝细胞的抗损伤能力。结果　酶切鉴定证实HGF片断已克隆到pEGFP N3 的BamHⅠ和SalⅠ位点之间 ,在转染人正常肝细胞后 ,利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达 ,用免疫组化方法进一步证实了HGF蛋白在细胞中的表达。 [3 H] T转导HGF的肝细胞的DNA合成明显增加 (转染 96h后 ,[3 H] TdR掺入量为对照组的 7倍 )。PCNA免疫组化结果显示转导HGF的肝细胞阳性率明显增加 ,肝细胞增殖活性增加。转导HGF的肝细胞抗CCl4损伤的能力明显增强 ,肝细胞存活率显著提高 (83%与 6 1% ,P <0 0 5 ) ,细胞内丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、K+ 的漏出显著降低 (分别为 35 16U·L-1与 6 5 31U·L-1,P <0 0 1,5 5 9mmol/L与 6 0 2mmol/L ,P