Senkirkine对黑色素瘤细胞B-16的增殖及细胞内谷胱甘肽含量的影响

目的探讨吡咯里西啶生物碱Senkirkine对黑色素瘤细胞B-16生长的抑制作用及细胞内谷胱甘肽含量、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GPx)以及谷胱甘肽还原酶(Glutathione Reductase,GR)活性的影响。方法以黑色素瘤B-16细胞为实验模型,采用MTT法和DTNB法检测Senkirkine与B-16细胞孵育后对B-16细胞存活率的影响,对细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量,GSH/GSSG比率的影响,采用DTNB和NADPH分光光度法检测GPx以及GR的活性。结果Senkirkine可以显著抑制B-16细胞的增殖(P0.001),同时明显降低了细胞内GSH的含量以及GSH/GSSG的比例,并呈时间、剂量依赖性(P0.001);同时GPx活力与对照组相比显著提高(P0.05)而GR活力没有显著性的改变。结论在本试验条件下,Senkirkine能够抑制B-16黑色素瘤细胞的增殖,同时降低了B-16细胞抗氧化应激损伤的能力。     

力达霉素抑制内皮细胞增殖和诱导细胞凋亡

目的研究力达霉素(lidamyein,LDM)对内皮细胞的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡作用。方法用MTT测定法和[^2H]胸苷掺入测定法观察LDM对内皮细胞的增殖抑制；用流式细胞分析、形态观察、蛋白质印迹分析等方法研究LDM诱导内皮细胞凋亡及对相关调节蛋白的影响。结果 LDM呈浓度依赖性抑制内皮细胞增殖和诱导内皮细胞凋亡。LDM浓度1～10nmol／L可将内皮细胞阻断在G2／M期。LDM可导致内皮细胞中的游离钙增高，可使Bcl-2和PCNA蛋白的表达下调，但对Bax蛋白的表达无影响。结论 力达霉素抑制内皮细胞增殖与诱导内皮细胞凋亡。可进一步说明其抑制血管生成的相关机制。     

雷帕霉素对肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨雷帕霉素对肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞(HK-2细胞),选择100, 200, 400, 800 ng/ml雷帕霉素作用于HK-2细胞24、48、72h。利用 MTT实验分析雷帕霉素对HK-2细胞增殖的影响,并计算各浓度及不同时间的增殖抑制率优化雷帕霉素作用的浓度和时间;选择最佳的作用浓度和作用时间处理HK-2细胞,通过流式细胞分析技术,分析雷帕霉素对HK-2细胞的凋亡的影响。结果 MTT实验显示不同浓度的雷帕霉素,对增殖有抑制作用,且表现浓度依赖性和时间依赖性;RAPA可以促进HK-2细胞的凋亡。结论 通过HK-2细胞模型研究,发现雷帕霉素可抑制肾小管上皮细胞增殖、促进细胞凋亡。     

雷帕霉素对大鼠缺血再灌注肾细胞凋亡和P53蛋白表达的影响

目的探讨雷帕霉素对肾缺血再灌注损伤大鼠肾细胞凋亡的作用及机制。方法 Wistar大鼠54只,随机分为三组:假手术组、手术组、药物组。采用HE染色分析肾组织的病理变化,TUNEL检测细胞凋亡率,P53蛋白表达用免疫组化SABC法检测。结果手术组肾组织细胞P53蛋白阳性表达及凋亡率均显著升高(P<0.05);药物组比手术组细胞P53蛋白阳性表达及凋亡率均显著降低(P<0.05)。HE染色,药物组肾组织损伤比手术组明显减轻。结论 RPM对大鼠肾缺血再灌注损伤所致的肾损害具有显著的保护作用,该作用可能与RPM通过抑制P53表达减少细胞凋亡有关。     

雷帕霉素对皮肤鳞癌细胞体外转移潜能的影响

目的研究雷帕霉素(rapamycin,RAPA)在体外对上皮鳞癌细胞系A431的增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法体外培养人上皮鳞癌细胞A431,通过噻唑蓝(MTT)实验检测不同浓度的RAPA(5、10、20 nmol·L-1)对A431增殖的影响,并筛选出最适浓度。依此浓度分别通过划痕、Transwell试验检测A431的迁移和侵袭能力变化。经RAPA处理后,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测A431中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的mRNA和蛋白的表达水平的变化。结果 MTT实验结果显示不同浓度RAPA对A431增殖有抑制作用,且表现浓度依赖性。RAPA作用于A431细胞48 h后,划痕实验及Transwell实验显示A431的迁移和侵袭能力受到明显抑制。RT-PCR和Western blot结果都显示RAPA处理的A431细胞中OPN的表达下调。结论 RAPA可降低鳞癌细胞A431的增殖、迁移以及侵袭能力,其机制可能与RAPA抑制OPN的表达有关。     

三氧化二砷诱导黑色素瘤B16细胞凋亡机制

目的 观察三氧化二砷（As2O3）对黑色素瘤B16细胞（B16细胞）的作用,探讨As2O3抗肿瘤的机制。方法 Hoechst33258染色观察细胞凋亡特征;应用激光扫描共聚焦显微术（LSCM）,结合特异性荧光探针Fluo-3／AM、H2EXEF-DA和DAF-FMDA,观察Asz03引起瘤细胞内钙离子（Ca^2＋）、活性氧（ROS）和一氧化氮（NO）的变化。结果 50μmol／L As2O3作用细胞12h后,Hoechst33258核染色可见典型凋亡细胞;细胞内Ca^2＋、ROS和NO含量明显高于对照组（P〈0．01）。结论 As2O3可诱导B16细胞发生凋亡,As2O3诱导凋亡可能与细胞内Ca^2＋、ROS和NO的增加有关。     

盐酸小檗碱对人黑色素瘤A375-S2细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

摘要：目的:探讨盐酸小檗碱对人黑色素瘤A375-S2细胞增殖、凋亡以及核因子κB（NF-κB）通路相关蛋白表达的影响。方法:体外培养A375-S2细胞,实验分为对照组（不添加任何药物处理）、盐酸小檗碱高、中、低剂量组(25,50,100μmol·L-1)、阳性对照组(顺铂,0.01 mmol·L-1)。采用CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;免疫印迹法（WB）检测细胞中NF-κB的抑制蛋白α（IκB-α）、p-NF-κB、NF-κB、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、剪切的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-caspase3）蛋白表达情况。结果:与对照组相比,盐酸小檗碱不同剂量组A375-S2细胞增殖抑制率、凋亡率、G1期DNA量、IκB-α、Bax、cleaved-caspase3蛋白表达均显著升高,p-NF-κB、Bcl-2蛋白表达显著降低（P<0.05）,且盐酸小檗碱高剂量组、阳性对照组与盐酸小檗碱中、低剂量组比较,差异有统计学意义（P<0.05）,高剂量组与阳性对照组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:盐酸小檗碱可明显抑制人黑色素瘤A375-S2细胞增殖并诱导细胞凋亡,其可能与引起细胞周期G1期阻滞及抑制NF-κB信号通路激活有关。     

雷帕霉素对宫颈癌患者HeLa细胞侵袭转移抑制作用的实验

目的:研究雷帕霉素对宫颈癌患者HeLa细胞侵袭转移抑制作用。方法:取宫颈癌患者HeLa细胞标本进行实验,空白组不加雷帕霉素,雷帕霉素组加入雷帕霉素30 nmol/L,分别培养48 h后,采用MTT法检测细胞活力(计算细胞生长抑制率)、Transwell法检测细胞迁移侵袭能力,以及采用Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)和兔抗雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化水平以及兔抗基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、兔抗基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、波形蛋白(Vimentin)与钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平。结果:雷帕霉素组患者宫颈癌HeLa细胞生长抑制率、E-cadherin表达率明显多于对照组(P<0.05),且宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭数量、Akt与mTOR磷酸化水平、MMP-2、MMP-9与Vimentin表达明显少于对照组(P<0.05)。结论:雷帕霉素能抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移,主要是通过Akt/mTOR信号通路发挥作用。     

雷帕霉素联合紫杉醇诱导卵巢癌细胞A2780和SKOV3凋亡及其分子机制

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。本研究观察特异性mTOR抑制剂雷帕霉素联合紫杉醇对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的作用及内在的分子机制。方法：A2780和SKOV3细胞经雷帕霉素和紫杉醇处理后，以MTT法检测细胞的增殖情况，金正均法计算q值判断两药的相关作用。以流式细胞仪检测细胞凋亡，逆转录聚合酶链反应检测survivin的表达。结果：雷帕霉素联合紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞的增殖，且随时间延长抑制作用越显著，[第一段]     

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡和自噬的影响

目的研究雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡和自噬的影响,并探讨可能的分子机制。方法雷帕霉素及顺铂分别单独或联合作用于卵巢癌细胞株SKOV3细胞后,流式细胞仪检测凋亡率,实时荧光定量PCR检测各处理组的mTOR mRNA表达,Western blot检测自噬蛋白Beclin1、LC3和抗凋亡蛋白bcl-2的表达。结果雷帕霉素联合顺铂组凋亡率为(12.520±1.499)%,较其他处理组凋亡率提高(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的mTORmRNA表达为0.339±0.015,较对照组明显降低(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达均增强(P<0.05),抗凋亡蛋白bcl-2明显降低(P<0.05)。结论雷帕霉素通过特异性阻滞mTOR的表达,可以促进顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡,增强卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。     

不同浓度地塞米松对人骨髓间充质干细胞体外增殖及凋亡的影响

目的观察地塞米松对体外培养人骨髓间充质干细胞增殖及凋亡的影响。方法利用1.073g/mLPercoll分离液以梯度密度分离法获取人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,进行体外培养。成骨诱导组细胞用地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠处理,分别进行ALP染色和矿化结节染色。实验组细胞分别以10^-9mol/L、10^-8mol/L、10^-7mol/L和10^-6mol/L地塞米松加以干预,MTT法检测各组细胞的增殖率;流式细胞仪定量分析hMSCs的凋亡率。结果成骨诱导组细胞ALP染色和矿化结节染色均为阳性,对照组为阴性;低浓度（10^-9mol/L）地塞米松对细胞的体外增殖无明显影响（P〉0.05）,10^-8mol/L及以上浓度地塞米松可明显抑制细胞的增殖（P〈0.01）;hMSCs凋亡率随地塞米松浓度的增加而升高（P〈0.01）。结论地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠可促使hMSCs成骨分化,10^-8mol/L及以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖,地塞米松能促进体外培养的人骨髓间充质干细胞凋亡。     

Ciprofloxacin-mediated induction of S-phase cell cycle arrest and apoptosis in COLO829 melanoma cells

Background

Low effectiveness of anti-melanoma therapies makes it necessary to search for new drugs that could improve or replace the standard chemotherapy. Fluoroquinolones are a group of synthetic antibiotics, used in the treatment of wide range of bacterial infections. Moreover, this class of antibiotics has shown promising anti-tumor activity in several cancer cell lines. The aim of this study was to examine the effect of ciprofloxacin on cell viability, apoptosis and cell cycle distribution in COLO829 melanoma cells.

Photodynamic therapy of experimental B-16 melanoma in mice with tumor-targeted 5,10,15,20-tetraphenylporphin-loaded PEG-PE micelles

Polyethylene glycol (PEG)-diacyl lipid micelles have been prepared by loading with the hydrophobic meso-5,10,15,20-tetraphenyl-21H,23H-porphine (TPP) and used for the photodynamic treatment of B-16 melanoma cells in vitro and in vivo. The use of PEG-PE micelles allowed for a 150-fold increased the solubilization of TPP, compared with the native drug. The average size of the PEG-PE micelles was in the range of 10–12 nm with a narrow size distribution. At 50 μg/ml of TPP in micelles with an irradiation intensity of 4.5–21.5 mW/cm², the viability of B-16 melanoma cells in vitro decreased in a fluence-dependent manner. A highly effective outcome of photodynamic therapy (PDT) with TPP-loaded PEG-PE micelles can be further increased by modifying such micelles with cancer-specific monoclonal antibody 2C5 to TPP-loaded micelles to tumor cells. TPP-containing 2C5-modified micelles provided the strongest phototoxic effect against B-16 cells in vitro compared with TPP-loaded plain micelles at the same TPP concentration. The association of TPP-loaded immuno-targeted micelles with melanoma cells was also studied by flow cytometry. An increase in cell association was found for 2C5-targeted micelles compared with non-targeted micelles. In vivo, the PDT treatment of subcutaneous melanoma-bearing C57BL/6 mice with 100 mW/cm² of 630 nm laser light 9 h after the administration of the micellar TPP (1 mg/kg of TPP) resulted in a significant inhibition of tumor growth. Compared with controls, the weight of postmortem tumors was approx. 3.5- and 7.5-fold smaller with TPP-loaded PEG-PE micelles and TPP-loaded PEG-PE 2C5-immunomicelles, respectively.     

细胞增殖和凋亡在前列腺上皮内瘤中的表达和意义

目的 通过研究细胞增殖核抗原(PCNA)和细胞凋亡在前列腺上皮内瘤(PIN)组织中的表达,探讨细胞增殖和凋亡在前列腺上皮内瘤形成过程中的作用.方法 采用免疫组织化学方法和脱氧核糖转移酶介导dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术检测12例前列腺上皮内瘤和12例良性前列腺增生(BPH)组织中细胞增殖核抗原和细胞凋亡的表达.结果 PIN中PCNA阳性细胞主要分布于腺上皮的基底细胞层与分泌细胞层,在BPH中主要见于腺上皮基底细胞层.PIN和BPH中细胞增殖指数分别为(15.92±4.40)%和(8.33±2.93)%,两组间比较有显著性差异(P<0.01).在BPH和PIN组织中凋亡细胞主要分布于腺上皮的基底层,分泌层内少见.PIN和BPH中细胞凋亡指数分别为(8.33±2.99)‰和(4.00±1.85)%,两组间比较有显著性差异(P<0.01).结论 PIN组织中细胞增殖和凋亡活性显著高于BPH,增强的细胞增殖和凋亡活性参与了前列腺上皮的恶性转化,在前列腺上皮内瘤的发生、发展中起重要作用.     

Recombinant rubistatin (r-Rub), an MVD disintegrin, inhibits cell migration and proliferation, and is a strong apoptotic inducer of the human melanoma cell line SK-Mel-28

Disintegrins are low molecular weight peptides isolated from viper venom. These peptides bind to integrin receptors using a conserved binding motif sequence containing an RGD or similar motif. As a consequence, disintegrins can inhibit platelet aggregation and inhibit cell migration, proliferation, and initiate apoptosis in cancer cell lines. Rubistatin is a MVD disintegrin cloned from a Crotalus ruber ruber venom gland. The biological activity of MVD disintegrins is poorly understood. Recombinant rubistatin (r-Rub) was cloned into a pET32b plasmid and expressed in reductase-deficient Escherichia coli. Expression was induced with IPTG and the resulting fusion peptide was affinity purified, followed by thrombin cleavage, and removal of vector coded sequences. r-Rub peptide inhibited ADP-induced platelet aggregation by 54% ± 6.38 in whole blood. We assessed the ability of r-Rub to initiate apoptosis in three human cancer cell lines. Cultures of SK-Mel-28, HeLA, and T24 cells were grown for 24 h with 2.5 μM r-Rub followed by Hoechst staining. Chromatin fragmentation was observed in treated SK-Mel-28, but not in T24 or HeLA cells. A TUNEL assay revealed that 51.55% ± 5.28 of SK-Mel-28 cells were apoptotic after 18 h of treatment with 3.5 μM of r-Rub. Cell migration and proliferation assays were performed in order to further characterize the biological effects of r-Rub on SK-Mel-28 cells. At 3 μM, r-Rub inhibited cell migration by 44.4% ± 0.5, while at 3.5 μM it was able to inhibit cell proliferation by 83% ± 6.0.     

Effects of genistein, a soybean-derived isoflavone, on proliferation and differentiation of B16-BL6 mouse melanoma cells

Genistein, a soybean-derived isoflavone, may contribute to the lower cancer incidence in South Asian countries. In this study, the effects and molecular mechanisms of genistein on growth and differentiation of B16-BL6 mouse melanoma cells were investigated. Genistein suppressed the growth of these melanoma cells. The IC₅₀ value is 15.5μM. On the other hand, genistein induced the changes of cell shape and cytoskeletal network. The cytoskeletal filaments were induced to form a bundle along the direction of elongation of the cells. Moreover, tyrosine phosphorylation levels of cytoskeleton-associated proteins decreased after the cells were exposed to 20 or 30 μM of genistein for 3 days. All these morphological and molecular changes were accompanied by appearance of the differentiated phenotypes. Genistein induced the increase of cellular melanin content, enhancement of tyrosinase activity, and decrease of colonization potentials in soft agar in a time-dependent and dose-dependent manner. The effective concentration was no more than 10 μM after 3 days' exposure. The tumorigenic potentials of B16-BL6 cells in C57BL/6 mouse also decreased after exposure to 20 or 30 μM of genistein for 3 days. When expressions of tumor-related genes were investigated in the differentiation-induced cells, the content of P53 dramatically increased while that of c-Myc protein decreased. Therefore, due to its ability to induce cellular and molecular changes, genistein suppressed the growth and induced differentiated phenotypes in B16-BL6 melanoma cells.     

体外转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响

目的 探讨转染Kiss-1基因对人黑色素瘤细胞A375生长增殖的影响,筛选出有意义的肿瘤治疗的生物学靶标.方法 在人黑色素瘤细胞A375中转染Kiss-1基因,经G418筛选,建立稳定高表达Kiss-1蛋白的细胞系.Western blot方法 检测Kiss-1蛋白以证实转染成功.流式细胞术检测Kiss-1基因对A375生长增殖的影响.结果 稳定转染Kiss-1基因的A375细胞中不仅Kiss-1蛋白稳定表达（1.20±0.21）高于对照组（0.60±0.41）,Kiss-1基因转染A375细胞48 h后对其具有凋亡的作用（凋亡率为28.42%）高于对照组（2.12%）.结论 外源性Kiss-1基因导入A375细胞后,可诱导A375细胞其凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖.     

黄芪多糖对食管癌细胞增殖与凋亡的影响及其分子机制研究

目的 研究黄芪多糖（APS）对食管癌细胞的调控作用。方法 分别在活体水平和细胞水平添加不同浓度的APS,研究其对裸鼠成瘤及食管癌细胞增殖和凋亡的影响。活体水平：向裸鼠体内注射食管癌细胞和不同浓度APS后,检测肿瘤的生长趋势和抑瘤率;细胞水平：采用EdU染色和流式细胞术检测不同浓度APS处理后,食管癌细胞的细胞周期和凋亡情况。qPCR、Western blotting和Co-IP试验探讨APS对食管癌进行调控的分子机制。结果 向裸鼠食管癌移植瘤模型体内注射APS可抑制肿瘤的增殖,且随着剂量的增加,其抑癌效果亦增强。APS可抑制食管癌细胞增殖,促进其凋亡。TP73、FBXW7的表达随APS浓度的增加而增加,Ki67、BCL-2的表达随APS浓度的增加而降低。Co-IP试验发现,APS能够与TP73蛋白结合。过表达TP73可抑制食管癌细胞增殖并促进其凋亡,沉默TP73则与之相反。结论 本研究揭示了APS对食管癌的调控作用及其可能的分子机制,为食管癌的治疗及APS的应用提供了一定的研究基础。     

ALCAM基因1沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制

目的 探讨活化白细胞黏附分子（ALCAM）基因沉默对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并对其分子机制进行初步研究。方法 将ALCAM 和对照 shRNA转染至胃癌细胞SGC-7901中,建立稳定细胞系,分别采用实时荧光定量（RT-PCR）技术和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测转染后SGC-7901细胞中ALCAM mRNA和蛋白水平;采用CCK-8法检测转染后SGC-7901细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测转染后SGC-7901细胞凋亡情况。采用胃癌肿瘤模型分析ALCAM基因沉默对肿瘤生长的影响。结果 ALCAM shRNA稳定细胞系ALCAM mRNA（1.01±0.26）和蛋白质的表达水平（1.66±0.23）低于对照 shRNA组细胞ALCAM mRNA（0.12±0.06）和蛋白质水平（0.23±0.09）,差异有统计学意义（P<0.05）。与对照shRNA稳定细胞系比较,ALCAM shRNA 稳定细胞系细胞增殖活性下降（P<0.05）、凋亡水平升高（P<0.05）、荷瘤小鼠肿瘤生长速度减缓（P<0.05）。ALCAM下调并不影响总蛋白激酶B（AKT）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达,而降低了AKT和mTOR磷酸化水平,抑制了mTOR活性,此外,ALCAM蛋白敲低提高了Caspase-3蛋白的表达水平,激活了凋亡信号通路。结论 ALCAM基因沉默能够降低胃癌细胞中ALCAM的表达水平,抑制胃癌细胞的增殖,增加细胞凋亡。