人子宫内膜异位症异位及在位内膜间质细胞分离与培养

目的：建立子宫内膜异位症（EMs）异位、在位内膜间质细胞的体外细胞模型,实时观察间质细胞形态变化。方法胶原酶消化异位、在位内膜组织,二次筛网过滤结合低速离心法分离纯化间质细胞,应用免疫细胞化学染色进行细胞鉴定,并进行传代培养,观察细胞生长状况及细胞形态差异。结果培养成功率91．3％,间质细胞纯度达95％;异位间质细胞9代内、在位及对照组间质细胞11代内,细胞形态及活性并无明显改变。结论子宫内膜间质细胞可为子宫内膜异位症研究提供较好的细胞模型。     

尿激酶型纤溶酶原激活物在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的：研究尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）在子宫内膜异位症（EMs）组织中的表达及意义。方法分别采用免疫组织化学 SP 法及 RT‐PCR 法检测正常子宫内膜组织30例,EMs 的在位内膜35例,EMs 的异位内膜35例,uPA 蛋白及 mRNA的表达。结果 uPA 蛋白主要定位于子宫内膜腺上皮细胞与间质细胞的细胞质中,极少数表达于血管内皮细胞中,在 EMs 异位内膜中的表达强于在位内膜、正常内膜,在 EMs 在位内膜中的表达强于正常内膜（P ＜0．05）。 uPA 蛋白在3组内膜的增生期与分泌期中的表达差异无统计学意义（P＞0．05）。 uPA mRNA 在 EMs 患者异位内膜中的相对表达量高于在位内膜和正常内膜,在内异症在位内膜中的表达高于正常内膜（P＜0．05）。结论 uPA 可能在 EMs 异位内膜的黏附、生长等方面起一定作用。     

子宫内膜异位症患者在位和异位内膜组织中TLR4的表达及意义

目的 检测Toll样受体4（TLR4）在正常子宫内膜、子宫内膜异位症（EMs）患者在位内膜和异位内膜中的表达情况,探讨TLR4在EMs发病中的作用.方法 选择EMs患者的卵巢异位内膜45例（EMs异位内膜组）和相对应的在位子宫内膜32例（EMs在位内膜组）,32例非EMs患者子宫内膜组织为对照组.采用免疫组织化学二步法检测各组内膜组织中TLR4的表达情况,以及TLR4在EMs不同临床分期的异位内膜组织中的表达,作半定量分析后进行组间比较.结果 EMs患者异位内膜、在位内膜及对照组子宫内膜中,TLR4蛋白均有不同程度表达,主要表达于子宫内膜腺上皮和腔上皮.TLR4蛋白在EMs患者异位内膜、在位内膜的表达均低于对照组子宫内膜,差异均有统计学意义（均P＜0.01）,但在异位内膜中表达要高于在位内膜的表达,差异有统计学意义（P＜0.01）.TLR4蛋白在Ⅰ～Ⅱ期EMs患者异位内膜的表达与Ⅲ～Ⅳ期患者异位内膜的表达比较,差异无统计学意义（P ＞0.05）.结论 EMs患者在位和异位内膜组织中的TLR4表达下降,但在异位内膜表达高于在位内膜,TLR4可能参与了EMs的发生、发展.     

GnRH II与GnRH I对子宫内膜异位症患者间质细胞 分泌VEGF作用的比较

目的：测定GnRH II与GnRH I对子宫内膜异位症（EMs）患者离体培养子宫内膜间质细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）的影响,探讨GnRH II对EMs患者可能的作用。方法：给予原代培养的EMs患者在位及异位子宫内膜间质细胞不同浓度的GnRH II,GnRH I类似物（戈舍瑞林,goserelin）处理,同时设对照组（不加GnRH）,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养液中VEGF浓度,并进行比较。结果：EMs患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞经48 h培养,能分泌VEGF,分泌量与在位子宫内膜间质细胞的相近,两者比较差异无统计学意义（P＞0.05）。不同浓度的GnRH II对EMs患者离体培养的在位和异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）,且较GnRH I类似物（戈舍瑞林）的作用更强（P＜0.05）。不同浓度的GnRH II对EMs患者离体培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF分泌的抑制作用明显强于在位（P＜0.05）。结论：EMs患者的异位子宫内膜间质细胞具有分泌VEGF的功能,分泌量与在位子宫内膜的相近,这对EMs的形成和发展可能起重要作用。GnRH II呈剂量依赖性地抑制异位内膜间质细胞分泌VEGF,其抑制作用明显强于在位,且GnRH II明显强于GnRH I,为寻找EMs抗血管形成方面的新药治疗提供了新的依据。     

组织因子和血管内皮生长因子在子宫内膜异位症组织中的表达及意义

目的：探讨组织因子（ TF）和血管内皮生长因子（ VEGF）在子宫内膜异位症（ EMs）组织中的表达及意义。方法通过腹腔镜活检或开腹手术,取得60例卵巢子宫内膜异位病灶组织及在位内膜40例,另取同期子宫肌瘤手术患者的正常子宫内膜组织25例作为对照,应用免疫组织化学技术对组织中的TF和VEGF蛋白的表达情况进行检测。结果 TF在EMs中异位内膜的表达与在位内膜中的表达差异无统计学意义（P＞0.05）,异位内膜及在位内膜中的表达明显高于正常子宫内膜（P＜0.05）;VEGF在EMs中异位内膜的表达与在位内膜中的表达差异无统计学意义（P＞0.05）,异位内膜及在位内膜中的表达明显高于正常子宫内膜（P＜0.05）。结论 TF和VEGF在EMs中诱导血管生成,促进EMs的发生发展。     

抑癌基因ARHI 在子宫内膜异位症及非子宫内膜异位症患者中差异表达的意义

摘要：目的研究子宫内膜异位症（endometriosis, EMs）组织中抑癌基因ARHI的mRNA和蛋白表达情况。方法利用
RT-PCR和Western Blot免疫印迹的方法,对EMs的异位内膜组织、在位内膜组织和非EMs在位内膜组织（正常内膜组织）
进行mRNA和蛋白表达的半定量分析。利用原位杂交和免疫组化技术对研究各组进行定性及定位分析。结果（1）
ARHI mRNA 和蛋白在各组中均有表达,异位内膜的表达高于在位内膜和正常内膜,差异显著（P<0.005）,在位内膜组与
正常对照组比较,ARHI的表达无明显差异（P>0.05）;（2）原位杂交阳性率分别为非EMs组97.3%,EMs异位内膜组100%,
EMs在位内膜组93.8%;（3）免疫组化阳性率分别为非EMs组93.2%,EMs异位内膜组100%,EMs在位内膜组92.3%;（4）
ARHI的DNA与蛋白表达一致;（5）5例恶变的异位内膜ARHI免疫组化检测,4例呈阴性,1例呈弱阳性表达。结论抑癌
基因ARHI在子宫内膜组织中均表达,且在异位内膜中呈表达上调,而在恶变的异位内膜中多呈阴性表达,提示ARHI基
因可能与子宫内膜异位症不孕及恶变相关。     

Survivin在子宫内膜异位症组织中的表达及意义

目的：探讨子宫内膜异位症（EMs）组织中Survivin表达及临床意义。方法：选取EMs患者的异位内膜组织35份和在位内膜组织32份及正常子宫内膜组织26份，采用S-P法测定Survivin表达。结果：EMs异位和在位内膜组织中Survivin的表达显著高于正常内膜组（P〈0．05），且异位内膜组Survivin的表达也显著高于在位内膜（P〈0．05）。结论：Survivin在EMs发病机制中起重要作用。     

GnRH-Ⅱ对子宫内膜异位症患者离体培养的子宫内膜间质细胞分泌VEGF的影响

目的:检测体外培养的子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者在位和异位内膜间质细胞分泌的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)的浓度,并观察不同浓度的II型促性腺激素释放激素（GnRH-Ⅱ)对在位和异位内膜间质细胞分泌VEGF的影响。方法:分别给予原代培养的EMs患者在位与异位子宫内膜间质细胞不同浓度（1×10-10~1×10-6 mol/L)的GnRH-Ⅱ处理,不加GnRH-Ⅱ组作为对照,采用酶联免疫吸附法（ELISA)测定培养液中VEGF浓度并进行比较。结果:体外培养的EMs患者异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF,培养48 h后分泌量与在位子宫内膜间质细胞比较差异无统计学意义（P﹥0.05)。1×10-10~1×10-6 mol/L的GnRH-Ⅱ可呈浓度依赖性地抑制体外培养的在位和异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF（P<0.01),且对异位子宫内膜间质细胞的抑制作用强于在位（P<0.01)。结论:EMs患者的异位子宫内膜间质细胞分泌VEGF的能力与在位子宫内膜的相近,这对EMs的形成和发展可能起重要作用。GnRH-Ⅱ对EMs患者体外培养的异位子宫内膜间质细胞VEGF的分泌有明显的抑制作用,且作用明显强于对在位内膜间质细胞的。     

PAI-1对子宫内膜异位症发生发展及临床分期的作用研究

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）对子宫内膜异位症发生发展的作用。方法应用免疫组化方法检测PAI-1蛋白在40例子宫内膜异位症组异位内膜及在位内膜、30例对照组子宫内膜的表达。结果①PAI-1蛋白主要定位于细胞浆,在异位内膜、在位内膜、对照组内膜的腺上皮细胞及间质细胞均表达;②PAI-1蛋白在异位内膜间质细胞表达高于腺上皮细胞（P〈0．05）;③PAI-1蛋白在间质细胞表达异位内膜高于在位内膜及对照组内膜（P〈0．05）;④PAI-1蛋白在血管内皮细胞呈阳性表达;⑤PAI—1蛋白在异位内膜Ⅲ-Ⅳ期的表达高于I～Ⅱ期及对照组内膜（P〈0．05）。结论PAI-1在异位内膜间质细胞高表达促使其转移、黏附、侵袭、生长,导致子宫内膜异位症的发生发展;PAI-1的作用研究对子宫内膜异位症的临床治疗有一定的指导意义。     

雌激素及其抑制剂氟维司群对子宫内膜异位症间质细胞中NGF、MAPK及CREB表达的影响

目的 探究雌激素及其抑制剂氟维司群对子宫内膜异位症（EMs）在位子宫内膜间质细胞神经生长因子（NGF）、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）及环腺苷酸应答元件结合蛋白（CREB）表达的影响。方法 收集EMs患者9例,分离培养子宫内膜间质细胞,应用免疫荧光染色检测子宫内膜间质细胞中NGF、MAPK及CREB的表达及定位情况;采用Western blot及qRT-PCR法检测雌激素及其抑制剂氟维司群干预后子宫内膜间质细胞中NGF、MAPK及CREB蛋白及mRNA表达变化情况。结果 细胞免疫荧光染色结果显示子宫内膜间质细胞中NGF、MAPK及CREB蛋白均主要定位于胞浆中;Western blot结果显示,与对照组相比,EMs患者在位内膜间质细胞中NGF、MAPK及CREB的表达升高（P均<0.05）。Western blot及qRT-PCR检测结果显示,与对照组相比,雌激素作用后,子宫内膜间质细胞中NGF、MAPK及CREB蛋白及mRNA表达水平均上升,氟维司群作用后NGF、MAPK及CREB蛋白及mRNA表达水平均下降（P均<0.01）。结论 EMs中NGF、MAPK及CREB蛋白...     

血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的表达及临床意义

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜异位症（EMs）发生、发展中的作用。方法：应用免疫组化二步法检测EMs患者异位内膜36例、在位内膜36例及正常内膜中VEGF的表达情况,并对三组的VEGF表达水平进行相关性分析。结果：VEGF阳性表达主要见于子宫内膜间质血管内皮细胞和腺上皮细胞的胞浆。正常内膜组和在位内膜组中,VEGF的表达强度以阴性为主,仅少量阳性表达。异位内膜组中,VEGF的表达强度以＋＋～＋＋＋为主,阳言表达率91.7%,显著高于在位内膜组（25.0%）、正常内膜组（15.0%）,差异有统计学意义（P〈0.05）;而在位内膜组与正常内膜组VEGF阳性表达率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：异位内膜中存在VEGF的高表达,可能导致了血管生成,利于种植及生长,更易发生远处部位的种植转移。检测VEGF的表达可用于判断子宫内膜异位症的侵袭转移和评估预后。     

人在位和异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的原代培养

目的:探讨在位和异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞分离培养方法,为研究子宫内膜异位症的发病机制提供体外细胞模型.方法:通过消化、过滤、沉降等方法,分离培养正常对照子宫内膜以及子宫内膜异位症在位、异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞,模拟人体内雌激素水平研究促进细胞生长的方法,光学显微镜观察离体细胞形态.结果:正常对照子宫内膜细胞分离培养成功率达91.7%(11/12),子宫内膜异位症在位子宫内膜细胞成功率为93.8%(15/16),子宫内膜异位症异位子宫内膜细胞成功率为75.0%(12/16).间质细胞传代2次后,生长缓慢,经雌激素作用后,生长明显改善;腺上皮细胞不能传代,经雌激素作用后,生长改善不明显.结论:体外分离培养的人子宫内膜细胞比子宫内膜异位动物模型更接近于人体的特点,在位和异位子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞分离培养可作为研究子宫内膜异位症的体外细胞模型之一.     

基质金属蛋白酶-1及其组织抑制剂-1在子宫内膜异位症中的表达

目的 :评价基质金属蛋白酶 1(MMP 1)和基质金属蛋白酶组织抑制剂 (TIMP 1)在子宫内膜异位症 (EMs)中的表达 ,明确二者的相关性 ,探讨它们在EMs的发生、发展中的作用。方法 :用免疫组化检测MMP 1及TIMP 1在EMs的异位内膜组织 (6 4例 )及在位内膜组织 (4 0例 )中的表达 ,并与同期 32例子宫正常内膜组织进行对比。结果 :MMP 1在在位及异位内膜中均高表达 ,与正常内膜组织中的表达相比有统计学意义 (P <0 0 1) ;TIMP 1在异位及在位内膜中均呈低表达 ,与正常内膜组织中的表达有统计学意义 (P <0 0 1) ;异位内膜较在位内膜TIMP 1表达降低 (P <0 0 1)。结论 :异位内膜组织中的MMP 1过表达 ,而TIMP 1表达下降 ,两者间的比例失调使异位内膜组织更具侵袭性 ,这在EMs的发病机制中起着重要作用     

环氧合酶-2在子宫内膜异位症子宫内膜组织中的表达

目的：研究环氧合酶-2（COX-2）在子宫内膜异位症（内异症）在位子宫内膜组织和异位子宫内膜组织中的表达及意义。方法：采用免疫组织化学方法检测30例卵巢内异症在位内膜、10例卵巢巧克力囊肿壁异位内膜及27例正常子宫内膜中COX-2的分布和表达。结果：COX-2在3组子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞中均可见表达。COX-2在正常对照组内膜和卵巢内异症组在位内膜腺上皮细胞中的表达均是分泌期高于增生期（P<0.05)，而在间质细胞中的表达分泌期与增生期比较无统计学差异（P>0.05)。COX-2在卵巢内异症组在位和异位内膜中的表达均高于对照组（P<0.05），而内异症患者在位和异位内膜中COX-2的表达则无统计学意义（P>0.05）。结论：COX-2在卵巢内异症在位和异位内膜中表达增高，可能与卵巢内异症的病理异常有关。     

Expression of TWEAK on the Ectopic and Eutopic Endometrium from Women with Endometriosis

Objective To investigate the relationship between Tumor necrosis factor （TNF）-like weak inducer of apoptosis（TWEAK） and endometriosis.
Methods TWEAK mRNA and protein concentrations in paired samples of eutopic endometrial tissue from women with and without endometriosis, and also of ectopic endometrial tissue from women with endometriosis were measured by Real-time PCR, immunohistochemistry and Western blotting, respectively.
Results Compared with control endometrium from women without endometriosis and eutopic endometrium from women with endometriosis, TWEAK expressions were reduced on the ectopic endometrium （P〈O.05）. Moreover, the expressions of TWEAK mRNA on eutopic endometrium and control endometrium in proliferative phase were much lower than those in secretory phase. TWEAK protein was expressed in the cytoplasm of glandular cells and stromal cells of endometrium.
Conclusion TWEAK is expressed on the endometrium of reproductive women, and its concentration rises in secretory phase, compared with that in proliferative phase. Patients with endometriosis had a lower expression of TWEAK on ectopic endometrium, which may lead to a decreased level of apoptosis on endometrial cells. Consequently, endometrial cells were able to survive outside uterus helping the development of endometriosis.     

子宫内膜异位症患者肝细胞生长因子及其受体c-Met的表达

目的 研究肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-Met在子宫内膜异位症发病机制中的作用。方法 采用mRNA原位杂交和免疫组织化学技术检测经腹腔镜手术及病理证实的54位子宫内膜异位症妇女(Ⅰ/Ⅱ期患者28例,Ⅲ/Ⅳ期患者26例)在位和异位内膜组织及24例正常对照组妇女在位内膜HGF、c-Met的分子和蛋白表达。结果 子宫内膜异位症患者在位内膜HGF、c-met基因和蛋白阳性表达与异位内膜一致,但阳性切片中,异位内膜阳性细胞数及表达强度高于在位内膜。增生期和分泌期的内膜细胞HGF/c-Met mRNA和蛋白的表达相近,无明显差异。对照组、Ⅰ/Ⅱ期患者在位、异位内膜与Ⅲ/Ⅳ患者在位、异位内膜比较,HGF、c-met基因和蛋白阳性表达频率依次上升,组间差异显著(P<0.01)。Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ/Ⅳ期患者在位和异位内膜与对照组比较,HGF、c-met基因和蛋白阳性表达频率有显著差异;Ⅰ/Ⅱ期患者与Ⅲ/Ⅳ期患者比较,HGF/c-Met阳性表达频率和表达强度均无显著差异。Ⅲ/Ⅳ期患者c-Met强阳性表达频率与对照组比较,有显著差异。结论 HGF、c-met基因和蛋白表达与子宫内膜异位症发病机制相关,在位内膜性质的改变可能是子宫内膜异位症发病机制的关键环节。     

基质金属蛋白酶MMP-3及其抑制因子TIMP-1 在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的:评价基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1)在子宫内膜异位症(EMs)中的表达,探讨它们在EMs的发生、发展中的作用。方法:用免疫组化检测MMP-3及TIMP-1在EMs的异位内膜组织(40例)及在位内膜组织(42例)中的表达,并与同期38例子宫正常内膜组织进行对比。结果:MMP-3在异位内膜中均高表达,与在位内膜组和正常内膜组织中的表达相比有统计学意义(P<0.01);TIMP-1在异位及在位内膜中均呈低表达,与正常内膜组织中的表达有统计学意义(P<0.01);异位内膜较在位内膜TIMP-1表达降低(P<0.01)。结论:异位内膜组织中的MMP-3过表达,而TIMP-1表达下降,两者间的比例失调使异位内膜组织更具侵袭性,这在EMs的发病机制中起着重要作用。     

MiR23b和Sp1在卵巢子宫内膜异位症中的表达及其意义

目的：检测miR23b和特异蛋白1(specifi c protein 1,Sp1)在卵巢子宫内膜异位症中的表达和分布情况,探讨 二者在卵巢子宫内膜异位症发生发展中的作用及意义。方法：qPCR检测miR23b和Sp1 mRNA在异位内膜、在位内膜、 正常内膜中的表达水平;免疫组织化学和Western印迹检测Sp1蛋白在异位内膜、在位内膜、正常内膜的表达和分布情 况。结果：MiR23b mRNA在异位内膜、在位内膜、正常内膜组中的表达水平依次增加(P<0.05)。Sp1在子宫内膜间质 细胞、腺上皮细胞中均有表达,主要表达在细胞核,少量表达在胞质中;Sp1 mRNA和蛋白在异位内膜、在位内膜、 正常内膜中的表达均依次降低(P<0.05)。MiR23b与Sp1 mRNA表达呈负相关(r=–0.526,P<0.05)。结论：MiR23b和Sp1与 卵巢子宫内膜异位症的发生发展密切相关,二者可能通过相互拮抗,共同参与异位病灶的形成。