温肾养血方提高高龄雌鼠卵母细胞质量和胚胎发育潜能的研究

目的 探讨温肾养血方提高高龄雌鼠卵母细胞质量和胚胎发育潜能的作用机制。方法 按随机数字表法将8月龄ICR小鼠分为对照组、血清促性腺激素（pregnant mare serum gonadotropin,PMSG）组、温肾养血组、温肾组、养血组,观察用药后各组受精率和卵裂率,卵母细胞和受精卵线粒体的表达情况。结果 温肾养血组、温肾组、养血组的受精率和卵裂率明显高于对照组和PMSG组（P<0.05）,温肾养血组的受精率和卵裂率最高（P<0.05）。2细胞率、4细胞率、8细胞率、桑葚胚率和囊胚率,温肾养血组均比PMSG组高且差异有统计学意义（P<0.05）。卵母细胞和受精卵中的线粒体DNA拷贝数温肾养血组最高,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 温肾养血方可能通过调控卵母细胞线粒体DNA拷贝数提高卵母细胞质量和胚胎发育潜能。     

温肾养血方对无排卵模型大鼠卵巢质量和形态的影响

目的 探讨温肾养血方对无排卵大鼠子宫指数、卵巢指数及卵巢组织形态的影响.方法 采用丙酸睾酮皮下注射法复制无排卵大鼠模型.将模型大鼠分为模型组,西药组,温肾养血方大、中、小剂量组,分别给予生理盐水,枸橼酸氯米芬,温肾养血方大剂量(52 mg/kg)、中剂量(26 mg/kg)、小剂量(13mg/kg)灌胃.另选22日龄大鼠作为正常组.连续灌胃21 d后,测定各组大鼠体质量、子宫指数和卵巢指数,光镜下观察卵巢组织形态.结果 与正常组比较,模型组大鼠体质量无明显变化(P＞0.05),子宫指数和卵巢指数显著降低(P＜0.05).与模型组比较,各给药组大鼠体质量和子宫指数、卵巢指数无明显变化(P＞0.05).温肾养血方大、中剂量组卵巢形态近似正常组,结构明显改善,多数卵巢可见发育期的各级卵泡,可见卵丘、卵细胞及典型黄体形成.西药组和温肾养血方小剂量组卵巢形态类似模型组,卵巢体积较小,卵巢表面苍白,无斑点,色泽苍白,卵泡数目少,卵泡较小,且形状不规则,多呈囊性扩张,无黄体.结论 温肾养血方能改善卵巢结构和促进卵泡发育.     

芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响

目的观察芪杉方联合顺铂对肺癌A549细胞PI3K/AKt信号通路的影响。方法 Wisatr雄性大鼠随机分成芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组和空白对照组,每组10只,各组连续灌胃3 d后取血。分别运用MTT法、Annexin V-PE/7-AAD双染法、蛋白质印迹(Western blot)法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测芪杉方含药血清联合顺铂对A549细胞增殖、细胞凋亡及其相关蛋白和基因表达的影响。结果芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组分别作用于A549细胞时,均表现为抑制细胞增殖作用,其抑制率分别为27.20%(P0.01),28.52%(P0.01)和51.25%(P0.01)。芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组Caspase-3、Caspase-9、m TOR及PI3K蛋白和基因表达量与空白对照组相比,表达量降低(P0.01),且芪杉方含药血清联合顺铂组对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响最显著(P0.01)。结论芪杉方含药血清组、顺铂组、芪杉方含药血清联合顺铂组均能够抑制A549细胞增殖,激活Caspase-3、Caspase-9、AKT、m TOR相关凋亡途径,从而诱导A549细胞凋亡。     

miR-27a调控PI3K/AKT通路在脓毒症肾损伤中的作用机制

目的 探究微小RNA-27a(miR-27a)调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路在脓毒症肾损伤中的作用机制研究。方法 腹腔注射7 mg/kg脂多糖建立脓毒症肾损伤大鼠模型,随机分为模型组、miR-27a agomir组、miR-27a agomir阴性对照组、miR-27a antagomir组、miR-27a antagomir阴性对照组,每组12只,另取12只Wistar大鼠设为对照组。分组处理后,测定各组大鼠肾功能指标[血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)];苏木素-伊红(HE)染色检测各组大鼠肾组织病理变化;酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组大鼠血清炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠肾组织miR-27a和IL-1β、IL-6 mRNA水平;免疫印迹法检测各组大鼠肾组织PI3K/AKT通路相关蛋白表达水平。结果 对照组大鼠肾组织形态正常,无异常病理变化。模型组大鼠肾小管上皮细胞坏死,出现空泡样变性,肾组织内有炎症细胞浸润,表现出严重的病理损伤;模型组大鼠Scr、BUN、血清IL-1β、IL-6以及肾组...     

骨痹方对大鼠膝骨关节炎PI3K/AKt信号通路及组织形态学的影响

〖H探讨骨痹方对KOA大鼠软骨细胞PI3K/AKt信号通路及膝关节滑膜病理组织形态学的影响。方法 按照改良Hulth''s法复制40只KOA大鼠模型随机分为5组：模型组、阳性药组（维固力组）、骨痹方高、中、低剂量组,每组8只,另假手术组（n=8）大鼠术中暴露前后交叉韧带后即可,正常组（n=8）大鼠无需任何处置。每日灌胃1次,共8周。8周后取各组大鼠患膝滑膜,观察其组织形态学变化;应用Western blot法检测膝关节软骨细胞PI3K/AKt信号通路AKt及其下游靶蛋白Bcl2、Bax的表达。结果 模型组大鼠膝关节滑膜组织形态学检查评分比正常组显著增高(P<0.01);骨痹方中、高剂量组大鼠膝关节滑膜损伤评分较模型组均有所下降(P<0.05)。模型组大鼠AKt及下游靶蛋白Bcl2表达低于正常组,骨痹方高剂量组AKt表达量显著高于正常组（P<0.01）,骨痹方中剂量组AKt表达量与正常组接近;与模型组比较,骨痹方高剂量组AKt表达量及下游靶蛋白Bcl2显著升高（P<0.01）,Bax表达降低。结论 骨痹方可以有效地减少膝骨关节炎病变过程中软骨细胞的凋亡,一定程度地改善膝骨关节炎病理组织形态学,其作用机制可能与其干预KOA大鼠软骨细胞PI3K/AKt信号通路密切有关。     

扶正健脾方联合化疗通过PI3K/AKT信号通路对肿瘤转移微环境的影响

目的:观察扶正健脾方对PI3K/AKT信号通路的影响,分析该方抑制肿瘤转移的作用机制及途径。方法:建立裸鼠结肠癌原位移植高转移模型,分为模型组、5-氟尿嘧啶组、奥沙利铂组、5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组、扶正健脾方+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组及谷氨酰胺+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组,每组10只;原位移植手术第3天开始,均按照0.01 mL·g~(-1)开始腹腔注射给药,第17天到第38天共21 d,连续灌胃处理。第39天仅提供水禁食,第40天处死取材。观察裸鼠体质量和肠道肿瘤的质量,采用免疫组织化学法、Real-Time PCR、Western Blot检测肠道肿瘤组织中AKT、PI3K的表达。结果:①裸鼠体质量和肠道肿瘤质量:各组裸鼠体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05);各组肠道肿瘤质量比较,差异有统计学意义(P<0.05),与其他组比较,扶正健脾方+5-FU+奥沙利铂对肿瘤质量有影响,能使瘤体明显缩小(P<0.05),但与谷氨酰胺+5-FU+奥沙利铂组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②PI3K/AKT表达:扶正健脾方+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组与模型组、5-氟尿嘧啶组、奥沙利铂组比较,明显下调PI3K、AKT表达(P<0.05);扶正健脾方+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组与谷氨酰胺+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组PI3K、AKT表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾扶正方联合化疗能有效控制瘤体大小,有效降低PI3K、AKT的表达;与谷氨酰胺联合化疗疗效相当,证实中药扶正健脾方可通过PI3K/AKT信号通路抑制肿瘤转移产生。     

扶正健脾方联合化疗通过PI3K/AKT信号通路对肿瘤转移微环境的影响

目的:观察扶正健脾方对PI3K/AKT信号通路的影响,分析该方抑制肿瘤转移的作用机制及途径。方法:建立裸鼠结肠癌原位移植高转移模型,分为模型组、5-氟尿嘧啶组、奥沙利铂组、5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组、扶正健脾方+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组及谷氨酰胺+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组,每组10只;原位移植手术第3天开始,均按照0.01 mL·g~(-1)开始腹腔注射给药,第17天到第38天共21 d,连续灌胃处理。第39天仅提供水禁食,第40天处死取材。观察裸鼠体质量和肠道肿瘤的质量,采用免疫组织化学法、Real-Time PCR、Western Blot检测肠道肿瘤组织中AKT、PI3K的表达。结果:①裸鼠体质量和肠道肿瘤质量:各组裸鼠体质量比较,差异无统计学意义(P0.05);各组肠道肿瘤质量比较,差异有统计学意义(P0.05),与其他组比较,扶正健脾方+5-FU+奥沙利铂对肿瘤质量有影响,能使瘤体明显缩小(P0.05),但与谷氨酰胺+5-FU+奥沙利铂组比较,差异无统计学意义(P0.05)。②PI3K/AKT表达:扶正健脾方+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组与模型组、5-氟尿嘧啶组、奥沙利铂组比较,明显下调PI3K、AKT表达(P0.05);扶正健脾方+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组与谷氨酰胺+5-氟尿嘧啶+奥沙利铂组PI3K、AKT表达比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:健脾扶正方联合化疗能有效控制瘤体大小,有效降低PI3K、AKT的表达;与谷氨酰胺联合化疗疗效相当,证实中药扶正健脾方可通过PI3K/AKT信号通路抑制肿瘤转移产生。     

miRNA-21对PI3K/AKT通路影响的研究进展

MicroRNAs(miRNAs)最早是由Victor Ambros和Gary Ruvkun在1993年研究线虫(nematode C.elegans)时发现的类似于siRNA的分子.它由lin-4基因转录生成,但不翻译生成蛋白质,在线虫的发育过程中起着短暂调节作用.目前研究发现,miRNAs负性调控人体约1/3的基因表达[1],其中microRNA-21(miRNA-21)是最受关注的miRNAs分子之一.miRNA-21可作用于不同的靶基因,如人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、程序性细胞死亡因子4(PDCD4)等,通过调控不同的信号通路发挥作用.磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(protein kinase B,PKB,又称Akt)是细胞内重要的信号通路,参与细胞增殖、分化和凋亡等过程的信号转导.     

miR-155靶向PI3K/Akt通路对大鼠发育性髋关节发育不良的作用机制研究

目的 探讨微小RNA(miR)-155对大鼠发育性髋关节发育不良（DDH）的影响,以及对磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)信号通路的调节作用。方法 40只大鼠建立DDH模型,并分为造模组（n=12）、NC组（n=14）和inhibitor组（n=14）,NC组和inhibitor组新生大鼠分别于髋关节周注射inhibitorNC和miR-155inhibitor,另取10只大鼠为对照组。测量大鼠股骨头长径和横径、髋臼长径和横径;qRT-PCR法检测miR-155、MMP-13和Ⅹ型胶原表达mRNA相对表达量;HE染色观察髋关节病理损伤,蛋白印迹技术检测MMP-13和Ⅹ型胶原、p-PI3K、PI3K、p-Akt和Akt蛋白相对表达量。结果 造模组和NC组关节软骨边缘不平整,结构层次不清晰,细胞排列紊乱,细胞表层发生塌陷;inhibitor组关节软骨边缘平整,结构清晰,细胞排列不规整,细胞表层无塌陷。与对照组比较,造模组新生大鼠股骨头长径和横径、髋臼长径和横径均缩短,miR-155、MMP-13和Ⅹ型胶原mRNA表达水平及MMP-13和Ⅹ型胶原蛋白相对表达量升高,p-P...     

消痰解郁方对乳腺癌前病变MCF-10AT细胞PI3K/Akt通路的影响及机制

目的 探讨消痰解郁方对乳腺癌前病变MCF-10AT细胞PI3K/Akt信号通路的影响及机制.方法 将MCF-10AT细胞分为消痰解郁方组、PI3K激酶选择性抑制剂LY294002组(抑制剂组)、消痰解郁方+抑制剂组和对照组.给予相应药物干预24、48 h后,采用CCK-8法观察各组细胞增殖及生长情况;药物干预48 h后,采用流式细胞仪检测各组细胞周期变化,用蛋白质印迹法检测各组细胞PTEN、PI3K、Akt蛋白表达变化.结果 药物干预24和48 h后,消痰解郁方组、抑制剂组和消痰解郁方+抑制剂组MCF-10AT细胞增殖受到抑制,且消痰解郁方+抑制剂组抑制率高于消痰解郁方组和抑制剂组,差异有统计学意义(P＜0.05);药物干预48 h后.消痰解郁方组、抑制剂组和消痰解郁方+抑制剂组MCF-10AT细胞G0/G1期细胞比例增高,S期及G2/M期细胞比例下降,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中消痰解郁方+抑制剂组与其他各组相比差异有统计学意义(P＜0.05);药物干预48 h后,消痰解郁方组、抑制剂组、消痰解郁方+抑制剂组PI3K、p Akt蛋白表达较对照组减弱,PTEN蛋白表达较对照组增强,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 肖痰解郁方可能通过抑制PI3K/AKT信号通路发挥其对MCF10AT细胞的抑制及促凋亡作用.     

PI3K/Akt-NO信号通路在Ang Ⅳ诱导大鼠心肌肥大中的作用

目的研究PI3K/Akt-NO信号通路在血管紧张素Ⅳ(AngⅣ)诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用。方法用乳鼠心肌细胞培养,以细胞表面积和心房利钠因子mRNA表达为心肌肥大指标,观察不同浓度AngⅣ对心肌细胞的作用,并观察PI3K阻断剂LY294002和NO合成酶(NOS)抑制剂L-NAME对AngⅣ作用的影响;利用Real-time PCR和Western blot方法检测mR-NA及蛋白水平的表达;硝酸还原法和ELISA法分别检测NO和内皮型NOS(eNOS)含量。结果 AngⅣ浓度依赖地(0.01、0.1及1nmol/L)诱导心肌细胞肥大;使Akt mRNA和蛋白表达明显降低,eNOS mRNA表达以及细胞培养液中eNOS的含量减少,NO的释放下降(P<0.05);LY294002和L-NAME均使AngⅣ的作用加强(P<0.05)。结论 AngⅣ诱导的心肌肥大作用至少部分地与PI3K/Akt-NO信号通路被抑制有关。     

健脾养血汤对特异性皮炎小鼠模型中Toll样受体的表达影响及意义

目的:观察健脾养血汤剂对特异性皮炎小鼠模型皮肤炎症症状和Toll样受体表达的影响。方法:通过外用2,4-二硝基氟苯(DNFB)丙酮制备特异性皮炎小鼠模型,小鼠随机分为正常对照组(n=10)、模型组(n=10)和健脾养血汤剂治疗组(n=10)。造模后10d各组皮炎症状打分,使用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组皮肤组织中TLR2、TLR3、TLR4、TLR9m RNA表达。结果:与正常组比较,模型组和健脾养血汤治疗组皮炎症状显著,TLR2、TLR3、TLR4、TLR9m RNA均明显上升,表达显著增高(P<0.05)。与模型组比较,健脾养血汤治疗组皮炎症状显著减轻,TLR2、TLR3、TLR4、TLR9m RNA表达均降低(P<0.05)。结论:健脾养血汤剂可通过抑制TLR2、TLR3、TLR4、TLR9表达,改善特异性皮炎临床症状。     

促排汤序贯治疗对多囊卵巢综合征患者行控制性超促排卵的影响

目的 探讨促排汤序贯治疗对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者行控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)的影响.方法 将60例行COH的PCOS患者随机分为观察组和对照组,每组30例.其中,观察组中超重患者19人,体质...     

阿尔茨海默病大鼠海马组织PI3K—AKt—caspase-9相关蛋白的表达

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-Kinase,PDK）-蛋白激酶B（v-akt routine thymoma viral oncogenehomolog,AKt）-半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶9（caspase-9）相关蛋白在阿尔茨海默病大鼠海马表达的动态变化。方法24只SD大鼠随机分为2组：模型组（腹腔注射D-半乳糖60mg／kg）和假手术组,焦油紫染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法（terminal dexynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL法）检测其海马区细胞形态学变化、神经元凋亡;免疫组织化学染色检测p—PI3K、p-AKt和caspase-9P35的表达水平。结果和假手术组相比,模型组大鼠海马区锥体细胞层损伤严重,可见到较多TUNEL阳性神经元;p—P13K和p—AKt的活性明显降低,caspase-9P35的表达明显增加。结论阿尔茨海默病大鼠存在海马区细胞凋亡及P13K—AKt—caspase-9信号转导通路的改变。     

反复控制性超促排卵对胚胎发育及妊娠结局的影响

目的 探讨反复控制性超促排卵(COH)对胚胎发育潜能及妊娠结局的影响。方法 回顾性分析2014年1月至2020年7月于河南省人民医院生殖医学中心接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕治疗的7 086例患者的临床资料,根据COH次数将患者分为A组(首次行COH者)、B组(第2次行COH者)、C组(第3次或第4次行COH者),比较3组患者的胚胎发育指标(卵子成熟率、正常受精率、正常卵裂率、可利用胚胎率)和妊娠结局(胚胎种植率、生化妊娠率、临床妊娠率、异位妊娠率、流产率、早期流产率)。结果 3组患者的卵子成熟率、正常受精率随COH次数的增加有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。A组患者的正常卵裂率和可利用胚胎率均高于B组和C组(P<0.05);B组与C组患者的正常卵裂率、可利用胚胎率比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组患者的胚胎种植率、生化妊娠率、临床妊娠率均显著高于B组和C组(P<0.05);B组与C组患者的胚胎种植率、生化妊娠率、临床妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.05)。3组患者异位妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.05)。...     

重组人促红细胞生成素对缺血后处理大鼠心脏保护作用及对PI3K/Akt信号通路的影响

目的:研究重组人促红细胞生成素(Erythropoietin,rhEPO)对大鼠心肌再灌注损伤心脏功能的影响及对PI3K/Akt信号通路影响。方法:将42只SD雄性大鼠随机分为7组:①假手术组(Sham组);②缺血/再灌注组(I/R组);③缺血后处理组I-PostC组;④渥曼青霉素+缺血后处理组(Wort+I-PostC)组;⑤rhEPO组;⑥Wort+rhEPO组;⑦rhEPO+I-PostC组。术中监测心电变化,于再灌注结束后采用伊文氏蓝-TTC法测定心肌梗塞面积,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测各组心肌组织中Akt mRNA、p70s6k mRNA水平,Akt、p70s6k蛋白表达水平。结果:(1)心肌梗塞面积:I-PostC组、rhEPO组和rhEPO+I-PostC组心肌梗塞面积较I/R组明显减少(P<0.05),组间无统计差别;I-PostC+Wort组和rhEPO+Wort组较I-PostC组和rhEPO组心肌梗塞面积显著增大(P<0.05)。(2)心肌组织中Akt mRNA、p70s6k mRNA、Akt、p70s6k蛋白表达:各组大鼠心肌组织均有Akt mRNA、p70...     

丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素PI3K/Akt信号通路的调节作用及其机制

目的：观察丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏胰岛素磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路中胰岛素受体（IR）、胰岛素受体底物1（IRS-1）、PI3K和Akt的调节作用,初步探讨丝胶降血糖的作用机制。方法：36只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组和实验组,每组12只。模型组和实验组大鼠采用高脂高糖饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ,35 mg·kg^-1·d^-1,连续2 d）的方法制备2型糖尿病模型,以STZ注射结束后72 h的空腹血糖≥ 11.1 mmol·L^-1作为成模标准。模型建立成功后,实验组大鼠给予2.4·kg^-1·d^-1丝胶灌胃,正常组和模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,连续用药35d。取各组大鼠血液标本,采用葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖;取各组大鼠肝组织,采用免疫组织化学法和Western blotting法检测各组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白的表达,采用过碘酸-Schiff染色法检测各组大鼠肝糖原含量。结果：模型组大鼠血糖水平明显高于正常组（P<0.05）,实验组大鼠血糖水平明显低于模型组（P<0.05）。正常组和实验组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白呈棕黄色和（或）棕褐色颗粒,小部分呈弥散状;模型组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达量明显减少,呈棕黄色和（或）棕褐色颗粒,其中IR、IRS-1和Akt蛋白主要位于肝细胞胞膜和胞质,PI3K蛋白主要位于肝细胞胞质。各组大鼠肝切片均可见肝糖原阳性染色的红色或紫红色颗粒,其中模型组大鼠肝糖原染色浅,面积较小。与正常组比较,模型组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达水平及肝糖原含量明显降低（P<0.05）;与模型组比较,实验组大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt蛋白表达水平及肝糖原含量明显升高（P<0.05）。结论：丝胶可通过上调糖尿病大鼠肝组织中IR、IRS-1、PI3K和Akt的表达以增强肝脏胰岛素PI3K/Akt信号通路的转导效应,从而起到降低血糖的作用。