针刺治疗对阴虚火旺型抑郁症的血清BDNF影响

目的 评价针刺对阴虚火旺型抑郁症患者的疗效及血清脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)浓度影响。方法 将64例阴虚火旺型抑郁症患者采用数字表法随机分为两组,试验组(n=32)接受针刺治疗,对照组(n=32)接受米氮平治疗,疗程为8周,分别于治疗前后抽取外周静脉血检测血清BDNF浓度,并在入组时、治疗4周末及8周末评定汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Scale,HAMD)-24来评估疗效,比较两组治疗前后血清BDNF浓度的变化及HAMD评分差异,并在8周末采用Asberg抗抑郁药不良反应量表(Side Effects Rating Scale,SERS)评估两组不良反应情况。结果 1治疗前两组HAMD评分差异无统计学意义(P>0.05),重复测量方差分析发现,评定时间主效应显著(F=381.87, P=0.000),事后检验(LSD法)发现,两组治疗4周末、8周末的HAMD-24评分均较治疗前显著降低,且治疗8周末的评分显著低于治疗4周末(P均<0.05),但在每个时间点上两组间差异无统计学意义(P>0.05);评定时间组别的交互作用不显著(F=0.063, P=0.939),组间效应不显著(F=0.008, P=0.931);根据治疗8周末的HAMD减分率计算试验组有效率为71.88%,对照组有效率为75%,组间差异无统计学意义(P>0.05);2治疗前两组血清BDNF浓度差异无统计学意义(P>0.05),经治疗后两组血清BDNF浓度均显著升高(P<0.05),组间差异无统计学意义(P>0.05);3治疗8周末试验组SERS评分显著低于对照组(P<0.05)。结论针刺可显著提高阴虚火旺型抑郁症患者的血清BDNF浓度,其抗抑郁作用与米氮平相当,且无明显不良反应。     

siRNA介导RRM2基因沉默治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤

目的 探讨siRNA沉默核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)基因联合顺铂治疗人卵巢癌裸鼠移植瘤的可行性。 方法 常规体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,采用皮下注射法建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,将24只荷瘤鼠随机分为对照组、顺铂组、siRNA组、siRNA联合顺铂组,每组6只,分组给药。观察肿瘤生长情况,测瘤体积并计算肿瘤生长抑制率。采用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测肿瘤组织中RRM2 mRNA及蛋白表达。 结果 对照组、siRNA组、顺铂组和siRNA联合顺铂组平均肿瘤体积分别为(358.28±46.40)、(261.38±52.49)、(261.65±31.97)、(189.37±41.67)mm³,单药作用后肿瘤体积差异有统计学意义(F_siRNA-RRM2=22.399,P_siRNA-RRM2<0.001;F_顺铂=22.254,P_顺铂<0.001);两药间无交互作用(F=0.474,P=0.499)。对照组、siRNA组、顺铂组和siRNA联合顺铂组肿瘤生长抑制率分别为0、36.39%、41.10%、64.33%。siRNA-RRM2与顺铂单药各自均能降低RRM2 mRNA表达水平(F_siRNA-RRM2=9.37,P_siRNA-RRM2=0.006;F顺铂=11.90,P顺铂=0.003)和蛋白表达水平(F_siRNA-RRM2=8.71,P_siRNA-RRM2=0.008;F顺铂=13.01,P顺铂=0.002);两药间无交互作用(F_{RRM2 mRNA}=3.93,P_{RRM2 mRNA}=0.061;F_RRM2蛋白=1.72,P_RRM2蛋白=0.204)。 结论 单用siRNA或联用顺铂均可有效抑制人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤瘤体的生长,可能与其沉默RRM2基因表达有关,特异性沉默RRM2或可成为卵巢癌治疗的一个新思路。     

齐拉西酮治疗对精神分裂症患者认知功能和生活质量的治疗效果研究

目的 研究齐拉西酮治疗对精神分裂症患者认知功能和生活质量的改善作用。方法 54名受试者采用数字表法随机分为两组,分别给予齐拉西酮或氟哌啶醇单药治疗。分别在基线、第8周、第12周和第16周进行症状、生活质量和满意度及认知功能测查,并对结果进行分析。结果 齐拉西酮组患者在威斯康星卡片分类实验的错误数上第12周、第16周的表现较基线明显减少（P<0.05）;持续错误数的表现在第16周较基线明显减少（P<0.05）,持续性操作实验（continuous performance test,CPT）的反应时间和数字广度的得分上齐拉西酮组第12周、第16周与基线相比,差异有统计学意义（P<0.05）。而氟哌啶醇组均无显著变化（P>0.05）。齐拉西酮组与氟哌啶醇组各时阳性和阴性症状评定量表（Positive and Negative Syndrome Scale,PANSS）量表分与基线相比,差异有统计学意义（F=77.10,P=0.000）,但两组间差异无统计学意义。齐拉西酮组生活质量及满意度评分的改善明显优于氟哌啶醇组（F=24.01,P=0.000）,并与基线相比差异有统计学意义（F=18.39,P=0.000）,而氟哌啶醇组差异无统计学意义（P<0.05）。结论 齐拉西酮对精神分裂症患者的注意力、工作记忆、执行功能和生活质量有一定的改善作用,但氟哌啶醇组未见改善作用,两者对患者精神症状都有一定的改善作用。     

脑源性神经营养因子对经颅磁刺激治疗难治性抑郁症的疗效预测作用

目的 探讨脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)对重复经颅磁刺激 (repetitive transcranial magnetic stimulation, rTMS)治疗难治性抑郁症疗效的预测作用。方法 将59例难治性抑郁症患者分为治疗组和对照组,其中治疗组34例,对照组25例。治疗组接受2周的高频(10 Hz)rTMS治疗,对照组接受2周伪刺激治疗。采用汉密尔顿抑郁量表-17项(Hamilton Depression Scale-17 Item, HAMD-17)、汉密尔顿焦虑量表(Hamilton Anxiety Scale,HAMA)评估临床症状;采用酶联免疫法测定血清BDNF浓度。评估时间点为基线、治疗(2周)末、随访(6周)末。结果 治疗组和对照组HAMD-17评分和HAMA评分均随治疗时间延长而逐渐降低(P_时间<0.05),组间比较差异无统计学意义(P_组间>0.05);治疗2周后,治疗组有效率(70.59%)高于对照组有效率(44%),差异有统计学意义(P=0.04)。治疗后,治疗组BDNF降低程度与对照组比较差异有统计学意义(P_组间<0.05)。基线BDNF浓度与疗效呈正相关(P<0.05)。治疗中无严重不良事件发生。结论 rTMS治疗难治性抑郁症有效;血清BDNF基线浓度高的抑郁症患者rTMS治疗效果更好,BDNF可以作为rTMS治疗抑郁症疗效的预测指标。     

吡格列酮对肥胖小鼠血清抵抗素的影响及其对肾脏的作用

目的:观察肥胖小鼠血清抵抗素的水平及其对肾脏的影响,以及吡格列酮对抵抗素的调节作用。方法:肥胖小鼠随机分为模型组（OB组,n=8）、治疗组（PI组,n=8）;同周龄普通小鼠为正常对照组（NC组,n=8）。PI组给予吡格列酮灌胃,NC组与OB组以等量生理盐水灌胃,12周后测体质量、24 h尿微量白蛋白（ 24 h-mALB）、空腹血糖及血清胰岛素、抵抗素,计算胰岛素抵抗指数;分离腹腔内脂肪并称重,计算脂体比（内脏脂肪质量/体质量）;摘取右肾,光镜下观察肾脏病理变化,测量肾小球直径。结果:OB组脂体比、24 h-mALB、血清抵抗素、胰岛素抵抗指数较NC组明显增加(P<0.05);PI组与OB组相比上述指标明显下降(P<0.05);OB组24 h-mALB与脂体比、抵抗素及胰岛素抵抗指数成正相关（r₁=0.789,P<0.05;r₂=0.722, P<0.05;r₃=0.896, P<0.05）,抵抗素与脂体比、24 h-mALB及胰岛素抵抗指数成正相关（r₄=0.792,P<0.05;r₅=0.722, P<0.05;r₆=0.762, P<0.05）。结论:肥胖小鼠血清抵抗素明显升高,抵抗素可以通过增加胰岛素抵抗而加重肾脏病理改变及蛋白尿,吡格列酮可以减轻上述改变。     

脂联素通过分泌型卷曲相关蛋白2及相关通路缓解AngⅡ诱导的心肌肥厚

目的 探讨脂联素(APN)通过调控分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)及相关通路对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥厚的作用及机制。 方法 出生3d Wistar大鼠中分离出原代心室肌细胞(NRVMs)。采用免疫荧光法检测NRVMs的骨架蛋白α-SMA的表达。将提取的NRVMs分为空白组、1 nmol/L组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、500 nmol/L组,检测不同浓度AngⅡ对NRVMs的作用。将NRVMs分为空白组、AngⅡ组、APN+AngⅡ组、AngⅡ+APN+si-sFRP2组、AngⅡ+APN+LiCl组、APN组、SP600125+AngⅡ组以及SB203580+AngⅡ组检测APN对AngⅡ作用的影响。采用Western blotting法检测各组细胞sFRP2的表达量以及Wnt/β-catenin、p38/JNK通路的激活。采用qPCR法检测各组细胞心肌肥厚相关指标以及sFRP2的表达水平。 结果 在NRVMs中加入AngⅡ24 h后,与空白组相比,1 nmol/L组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、500 nmol/L组ANP、BNP的表达升高(F_ANP=27.30, P=0.002;F_BNP=38.18, P=0.002),p-JNK和p-p38表达均升高(F_p-JNK=57.65,P<0.001; F_p-p38 =8.880,P=0.018),sFRP2的表达下调(F_AngⅡ=47.53,P<0.001)。加入APN预处理1 h后,与单加AngⅡ组相比,APN+AngⅡ组NRVMs心功能损伤标志物ANP、BNP的表达降低(F_ANP=101.8,P<0.001;F_BNP=51.14,P<0.001),sFRP2的含量上调(F=88.93,P<0.001),同时Wnt/β-catenin(F=41.33,P=0.006)及p38/JNK(F_p38=73.42,P<0.001;F_JNK=39.28,P=0.002)通路的激活被抑制。加入p38/JNK通路抑制剂后,能够达到APN预处理的效果(F_ANP=122.9, P<0.001; F_BNP= 202.3, P<0.001)。 结论 APN可能通过上调sFRP2,抑制Wnt/β-catenin、p38/JNK通路的激活,从而抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚。     

硫化氢对大鼠肢体再灌注损伤后炎症因子和线粒体能量代谢障碍的影响

目的 探讨硫化氢对大鼠肢体再灌注损伤后炎症因子和线粒体能量代谢障碍的影响。方法 60只大鼠分为3组:假手术组、对照组(缺血-再灌注损伤+生理盐水组)和实验组(缺血-再灌注损伤+H₂S 组)。建立Wistar大鼠肢体缺血再灌注损伤模型。采集骨骼肌标本测定坏死分解产物[包括肌红蛋白(MB)、脂蛋白复合物(LPC)以及脂质过氧化物(LPO)]的含量;采集血液标本测定白介素(IL)-1、IL-6及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;提取骨骼肌细胞线粒体进行线粒体跨膜电位测定及ATP含量检测。对检测结果进行统计学分析。结果 对照组大鼠在缺血再灌注损伤后肢体骨骼肌、肝脏、肺脏及肾脏组织内MB、LPO和LPC的含量均明显增高(MB:P_骨骼肌=0.003,P_肝脏=0.001,P_肺脏=0.001,P_肾脏=0.001;LPO:P_骨骼肌=0.001,P_肝脏=0.001,P_肺脏=0.001,P_肾脏=0.002;LPC:P_骨骼肌=0.000,P_肝脏=0.002,P_肺脏=0.002,P_肾脏=0.003),而缺血再灌注时采用硫化氢处理可明显抑制MB、LPO及LPC的生成(MB:P_骨骼肌=0.021,P_肝脏=0.036,P_肺脏=0.005;LPO:P_骨骼肌=0.003,P_肝脏=0.008,P_肺脏=0.010,P_肾脏=0.015;LPC:P_骨骼肌=0.002,P_肝脏=0.026,P_肺脏=0.007,P_肾脏=0.006)。大鼠下肢缺血再灌注可导致大鼠血清中IL-1、IL-6及TNF-α的含量均升高,并且随着时间推移,IL-1、IL-6及TNF-α含量升高呈递增趋势,且自3 h时各组间IL-1、IL-6及TNF-α含量差异有统计学意义(IL-1:P_{3 h}=0.019,P_{6 h}=0.011,P_{9 h}=0.009,P_{12 h}=0.008,P_{15 h}=0.002;IL-6:P_{3 h}=0.026,P_{6 h}=0.009,P_{9 h}=0.002,P_{12 h}=0.002,P_{15 h}=0.003;TNF-α:P_{3 h}=0.002,P_{6 h}=0.002,P_{9 h}=0.005,P_{12 h}=0.002,P_{15 h}=0.003)。而缺血再灌注时采用硫化氢处理可明显抑制血清中 IL-1、IL-6及TNF-α的含量水平(IL-1:P_{3 h}=0.035,P_{6 h}=0.039,P_{9 h}=0.012,P_{12 h}=0.005,P_{15 h}=0.006;IL-6:P_{3 h}=0.042,P_{6 h}=0.025,P_{9 h}=0.023,P_{12 h}=0.006,P_{15 h}=0.005;TNF-α:P_{3 h}=0.005,P_{6 h}=0.003,P_{9 h}=0.022,P_{12 h}=0.005,P_{15 h}=0.005),随着时间推移,其抑制效果越明显。对照组大鼠肢体缺血再灌注后,骨骼肌细胞线粒体跨膜电位比假手术组大幅度下降(t=6.698;P=0.001),而实验组经过硫化氢处理后线粒体膜势能高于对照组(t=7.507;P=0.000)。对照组大鼠缺血再灌注骨骼肌细胞内线粒体的ATP含量比假手术组下降(t=7.526;P=0.000);而实验组经过硫化氢处理后线粒体ATP 含量高于对照组(t=8.604;P=0.000)。结论 硫化氢在肢体缺血再灌注后,可以减轻骨骼肌及远隔器官的损伤,减轻局部炎性反应程度,同时还对减轻再灌注损伤时线粒体跨膜电位和能量代谢障碍具有重要意义。     

脾多肽注射液联合术后化疗对三阴性乳腺癌患者临床疗效的研究

目的 探讨脾多肽对三阴性乳腺癌术后辅助化学药物治疗（以下简称化疗）患者的临床疗效。方法 将2014年1月至2017年12月间收治的80例三阴性乳腺癌患者采用数字表法随机分为对照组（n=40）和试验组（n=40）,对照组采用常规的根治手术加术后辅助化疗,试验组在对照组的基础上加用脾多肽注射液,比较试验组和对照组患者的临床疗效和免疫功能。结果 治疗后,试验组与对照组相比,Karnofsky功能状态评分明显增高（F=5.793,P=0.018）,CD4⁺（t=5.337,P<0.001）、CD8⁺（t=9.874,P<0.001）、自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）（t=－7.460,P<0.001）的比例及Treg细胞（t=7.113,P<0.001）都有不同程度地增高。试验组的无进展生存期（progress-free survival period,PFS）比对照组长,两组差异有统计学意义（P<0.05）。两组的上肢淋巴水肿率差异无统计学意义（P>0.05）。结论 脾多肽注射液可明显提高患者免疫功能,促进生活质量改善与提高,在临床治疗领域具备进一步推广价值。     

经直肠超声导入前列腺治疗仪联合前列通瘀汤治疗Ⅲb型慢性前列腺炎的临床疗效研究

目的 探讨经直肠超声导入前列腺治疗仪联合前列通瘀汤治疗Ⅲb型慢性前列腺炎的临床治疗效果。方法 选取2016年7月至2020年8月在陕西中医药大学附属医院泌尿科治疗的Ⅲb型慢性前列腺炎患者124例为研究对象,采用随机数字法分为研究组(n=62)和对照组(n=62),对照组予以前列通瘀汤治疗,研究组在对照组基础上联合直肠超声导入前列腺治疗仪治疗,对比两组患者的治疗总有效率、前列腺炎症状评分、炎性因子水平、排尿症状、疼痛等指标。结果 研究组的总疗效显著提高(P＜0.05);两组患者的NIH-CPSI评分及排尿、疼痛等情况均显著改善(P＜0.05),且研究组改善更显著(P＜0.05);两组患者IL-1β、IL-8等炎症因子水平显著下降(P＜0.05),且研究组下降更显著(P＜0.05)。结论 经直肠超声导入前列腺治疗仪联合前列通瘀汤治疗Ⅲb型慢性前列腺炎的临床治疗效果显著,治疗后患者的NIH-CPSI评分及各评价指标均显著改善。     

经颅直流电刺激治疗轻中度老年抑郁症的临床观察

目的 探讨经颅直流电刺激（transcranial direct current stimulation,tDCS）治疗轻中度老年抑郁症的临床疗效。方法 选取2018年1月至2018年12月首都医科大学附属北京友谊医院康复医学科就诊的轻中度老年抑郁症患者40例,按随机数字表法分为观察组和对照组（各20例）。观察组采用tDCS,对照组采用相同的刺激部位和时间的伪刺激。分别于治疗前和治疗4周后采用24项版汉密尔顿抑郁量表（Hamilton Depression Scale,HAMD）、老年抑郁量表（Geriatric Depression Scale,GDS）、蒙特利尔认知评估量表（Montreal Cognitive Assessment,MoCA）评价两组患者抑郁及认知功能改善情况。结果 两组患者治疗前后HAMD、GDS变化的组间差异有统计学意义,观察组明显优于对照组（P<0.05）,MoCA评分差异无统计学意义（P>0.05）。结论 tDCS可显著改善轻中度老年抑郁症患者的抑郁症状,值得临床推广。     

黄芪皂苷Ⅱ对肾透明细胞癌细胞生长抑制作用及机制

目的 探讨黄芪皂苷Ⅱ(AsⅡ)对肾透明细胞癌786-O细胞增殖的影响及潜在机制。方法 噻唑兰(MTT)法和克隆实验检测AsⅡ对786-O细胞的生长和集落形成的抑制作用。细胞流式术检测ASⅡ的凋亡诱导作用。随后,用免疫印迹法检测不同处理组细胞PI3K-AKT-mTOR通路蛋白及凋亡执行蛋白的变化,最后利用PI3K-AKT-mTOR通路激活剂IGF-1与AsⅡ对细胞共处理后,流式细胞术检测细胞凋亡水平的变化,进一步验证PI3K-AKT-mTOR通路在凋亡诱导中的作用。结果 AsⅡ对786-O细胞的增殖抑制效应具有浓度和时间依赖性,时间与浓度之间有交互作用(F_时间=513.00,P<0.001;F_浓度=1 678.00,P<0.001;F_{时间×浓度}=18.23,P<0.001),并可抑制细胞集落形成。AsⅡ可诱导细胞凋亡并诱导凋亡执行蛋白cleved caspase-3的表达(P_{0μmol/L AsⅡ组vs 10μmol/L AsⅡ组}=0.013 9,P_{0μmol/L AsⅡ组...}     

中间型血友病患者四肢主要关节功能状况分析

目的：分析93例血友病患者四肢主要关节功能状况,提高对该病的认识和管理。方法：93例中间型（FVⅢ：C/FⅨ：C1%~5%）血友病患者根据患者年龄分为7个亚组,即<10岁组,10~20岁组,20~30岁组,30~40岁组,40~50岁组,50~60岁组,>60岁组。统计患者各关节血友病性关节炎累及率,采用血友病关节健康评分（HJHS）评估患者四肢主要关节功能状况。结果：中间型和重型血友病患者各关节累及率比较差异均无统计学意义（P>0.05）。中间型血友病患者平均HJHS与重型血友病患者比较差异无统计学意义（P=0.157）。20~30岁重型血友病患者平均HJHS高于中间型血友病患者（Z=-2.127,P=0.033）。10~20岁组和20~30岁组中间型和重型血友病患者膝关节HJHS比较差异有统计学意义（Z_10~20=-2.710,P_10~20=0.007;Z_20~30=-2.384,P_20~30=0.017）,其他各个年龄段中间型和重型血友病患者HJHS比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：中间型血友病患者出血治疗现状较差,采取按需治疗和预防治疗相结合的方法可有效减少关节出血,有效保证血友病患者关节功能,提高患者生活质量。     

体位性心动过速综合征儿童及青少年在直立试验中血流动力学变化

目的 分析体位性心动过速综合征(postural tachycardia syndrome, POTS)儿童及青少年直立试验过程中血流动力学变化及不同心脏指数(cardiac index, CI)患者血流动力学指标的差异。方法 回顾性分析26例POTS患者与12例健康对照者间直立试验过程中总外周血管阻力指数(total peripheral vascular resistance index, TPVRI)、心率和血压的变化,并比较两组间各指标变化趋势。根据每位POTS患者直立试验过程中CI变化趋势将患者分为CI降低组(14例)与CI未降低组(12例), 分析两组患者在直立试验过程中CI、TPVRI、心率、血压变化,并比较两组间各指标变化趋势。结果 POTS患者在直立试验过程中CI显著下降(F=6.936, P=0.001), 心率明显增快(F=113.926, P <0.001),收缩压明显降低(F=6.049, P <0.001),而TPVRI (F=2.031, P=0.138)和舒张压(F=2.018, P=0.113)无明显变化。健康对照组CI在直立后显著升高(F=3.646, P=0.016),同时心率明显增快(F=43.970, P<0.001),收缩压(F=4.043, P=0.020)和舒张压(F=8.627, P<0.001)均明显升高,TPVRI (F=1.688, P=0.190)无明显变化。POTS患者与健康对照组比较,CI (F=6.221, P=0.001)、心率(F=6.203, P<0.001)和收缩压(F=7.946, P<0.001)随时间变化趋势显著不同,而TPVRI和舒张压在两组间的变化趋势差异无统计学意义(P>0.05)。CI降低组与CI未降低组POTS患者在直立试验中CI变化趋势差异有统计学意义(F=14.723, P<0.001), 前者直立后收缩压明显降低(F=8.010, P<0.001),而后者却无明显变化(F=0.612, P=0.639), TPVRI、心率和舒张压在CI降低组与CI未降低组间随时间变化趋势差异无统计学意义(P>0.05)。年龄是POTS患者直立后CI呈下降趋势的独立影响因素(P=0.013, OR=2.233; 95% CI:1.183~4.216)。结论 POTS患者在直立试验过程中存在明显的血流动力学变化,不同患者心输出量变化可能不同,年龄是心输出量下降的独立影响因素。     

乌苯美司对卵巢癌A2780细胞的生物学影响

目的 研究乌苯美司对卵巢癌A2780细胞增殖、细胞周期、凋亡和自噬以及迁移和侵袭能力的影响,探讨可能的作用机制。 方法 CCK-8实验检测乌苯美司对A2780细胞增殖的影响;Transwell实验检测乌苯美司对A2780细胞迁移及侵袭能力的影响;流式细胞术检测乌苯美司对A2780细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting检测APN、AKT、p-AKT、LC3B、p62表达水平的变化。 结果 (1)乌苯美司能够抑制A2780细胞的增殖(F浓度=812.56,P<0.001;F时间=8.58,P=0.010;F交互=4.00,P=0.027)、迁移(t=56.9,P<0.001)和侵袭(t=11.8,P<0.001)、导致G₂/M期细胞比例增高(t=7.9,P=0.016),G₁期细胞比例减少(t=14.8,P=0.005),发生G₂/M细胞周期阻滞。(2)乌苯美司能够诱导A2780细胞凋亡(P=0.002),且联合应用AKT抑制剂后诱导细胞凋亡的作用增强(P=0.007)。(3)乌苯美司可以导致APN表达降低,p-AKT、LC3-B和p62表达增加。 结论 乌苯美司可能是卵巢癌的一种治疗方法或者辅助治疗方法,与AKT抑制剂联用能够增强其治疗效果。     

Noggin蛋白对小鼠脑缺血再灌注损伤后学习和记忆能力与齿状回结构的影响

目的 探讨侧脑室注射Noggin蛋白对小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)后学习、记忆能力及齿状回(DG)结构的影响,以期为临床缺血性脑血管疾病的预防与治疗提供新思路。 方法 240只小鼠随机分为:假手术组(n=80)、缺血再灌注损伤组(I/R组,n=80)、缺血再灌注损伤+Noggin治疗组(Noggin组,n=80),每组再分为1、3、7、14 d共 4个亚组;取材前1天采用Y型迷宫检测小鼠学习记忆能力(n=5);然后比色法检测缺血侧脑组织超氧化物歧化酶(SOD)与丙二醛(MDA)含量(n=5);2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测脑梗死面积(n=5); 尼氏染色与免疫荧光检测DG神经元与胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞变化(n=5);Western blotting法检测骨形态发生蛋白4(BMP4)蛋白表达(n=5)。 结果 随着损伤时间的增加,I/R组、Noggin组与假手术组相比,小鼠神经功能评分升高(F组别=21.19, P<0.001; F时间=25.13, P<0.001),学习、记忆能力均下降［(F组别=216.10, P<0.001; F时间=260.10, P<0.001)、(F组别=114.40, P<0.001; F时间=184.60, P<0.001)］,脑梗死面积增加(F组别=2374, P<0.001; F时间=3 292, P<0.001),SOD活性降低(F组别=1 426, P<0.001; F时间=1 723, P<0.001),MDA含量升高(F组别=2.22, P<0.001; F时间=6.33, P<0.001),神经元数量减少(F组别=148.90, P<0.001; F时间=485.50, P<0.001),GFAP阳性细胞和BMP4蛋白表达量增加［(F组别=40.18, P<0.001; F时间=141.90, P<0.001)、(F组别=426.70, P<0.001; F时间=1 329, P<0.001)］。在各个相同时间点,与I/R组相比,Noggin各组小鼠神经功能评分降低(P<0.001),学习、记忆能力提高(P<0.001),脑梗死面积减小(P<0.001),SOD活性升高及MDA含量降低(P<0.001),神经元数量增加及染色变浅(P<0.001),GFAP阳性细胞和BMP4 蛋白表达量降低(P<0.001)。 结论 Noggin蛋白对小鼠脑缺血再灌注损伤后学习、记忆能力提高与DG组织损伤修复有改善作用,其作用机制可能与阻断BMP4蛋白表达和抑制胶质细胞的反应性增生有关。     

ACE2基因通过调控Nrf2/HO-1通路改善肾缺血再灌注损伤

目的 探讨血管紧张素转化酶2(ACE2)对缺氧复氧诱导的肾小管上皮细胞HK-2氧化应激、炎症、凋亡及核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响。 方法 将ACE2慢病毒转染HK-2细胞,按照实验需要分为常氧组(Control组)、缺氧复氧模型组(H/R组)、缺氧复氧转染阴性对照慢病毒组(H/R-NC组)和缺氧复氧转染ACE2慢病毒组(H/R-ACE2组)。细胞经H/R处理后,通过CCK-8法检测细胞活力;RT-PCR及ELISA法检测炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平;比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)表达水平;Western blotting法检测胱天蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、Nrf2、HO-1的蛋白水平。采用Nrf2抑制剂ML385以及HO-1抑制剂SnPPIX抑制Nrf2/HO-1通路,Western blotting法检测Caspase-3、Bcl-2、Bax、Nrf2、HO-1的蛋白表达水平变化,比色法检测SOD和MDA表达变化。 结果 与Control组相比,H/R组细胞活力降低(t=7.58,P<0.001),MDA含量和炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平以及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白水平均增加(t_MDA=11.08,P_MDA<0.001;t_PCR-IL-6=5.82,P_PCR-IL6<0.001;t_PCR-TNF-α=7.69,P_PCR-TNF-α<0.001;t_PCR-IL-1β=4.80,P_PCR-IL-1β=0.001;t_ELISA-IL-6=34.11,P_ELISA-IL-6<0.001;t_ELISA-TNF-α=14.12,P_ELISA-TNF-α<0.001;t_ELISA-IL-1β=9.63,P_ELISA-IL-1β<0.001;t_Caspase-3=2.73,P_Caspase-3=0.026;t_Bax=27.75,P_Bax<0.001),SOD活性、Bcl-2和ACE2蛋白水平下降(t_SOD=7.74,P_SOD<0.001;t_Bcl-2=75.49,P_Bcl-2<0.001;t_ACE2=11.41,P_ACE2<0.001)。与H/R组相比,H/R-ACE2组细胞活力增加(t=3.61,P=0.002),MDA含量和炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β表达水平以及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax蛋白水平均下降(t_MDA=6.15,P_MDA<0.001;t_PCR-IL-6=3.34,P_PCR-IL-6=0.006;t_PCR-TNF-α=3.65,P_PCR-TNF-α=0.007;t_PCR-IL-1β=4.06,P_PCR-IL-1β=0.004;t_ELISA-IL-6=14.62,P_ELISA-IL-6<0.001;t_ELISA-TNF-α=10.42,P_ELISA-TNF-α<0.001;t_ELISA-IL-1β=8.65,P_ELISA-IL-1β<0.001;t_Caspase-3=3.74,P_Caspase-3=0.006;t_Bax=30.52,P_Bax<0.001),SOD活性、Bcl-2和ACE2蛋白水平增加(t_SOD=3.58,P_SOD=0.007;t_Bcl-2=63.86,P_Bcl-2<0.001;t_ACE2=58.72,P_ACE2<0.001),Nrf2/HO-1信号通路被激活蛋白水平增加(t_Nrf2=44.55,P_Nrf2<0.001;t_HO-1=14.19,P_HO-1<0.001)。然而ML385和SnPPIX处理会抑制ACE2基因过表达在H/R中HK-2细胞的保护作用(F_Bax=11.02,P_Bax=0.003;F_Bcl-2=21.48,P_Bcl-2<0.001;F_Caspase-3=20.80,P_Caspase-3<0.001;F_SOD=133.49,P_SOD<0.001;F_MDA=14.06,P_MDA=0.001)。 结论 ACE2在HK-2细胞缺氧复氧损伤中具有抑制氧化应激、调节炎症、改善凋亡的作用,Nrf2/HO-1信号通路发挥重要作用。     

高分辨外周骨定量CT评估阻塞性睡眠呼吸暂停患者的骨质情况

目的 通过高分辨外周骨定量CT(HR-pQCT)检测阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)患者的骨强度及结构,探索其与骨质疏松症之间的联系。方法 连续收入2017年8月至2019年1月于本院睡眠呼吸中心就诊的男性患者,完善相关临床资料,包括爱普沃茨睡眠量表(ESS)评分、整夜多导睡眠监测等,行HR-pQCT测定其非优势侧的肱骨及胫骨的相关指标,比较不同严重程度的OSA患者及非OSA人群在骨几何学参数、骨密度及骨微结构方面的差异,并寻找OSA与骨质疏松症的联系。结果 本研究共纳入83名受试者,其中轻、中、重度及不符合OSA的对照组人数分别为21、18、34及10人。4组人群在年龄、血压、ESS评分、睡眠分期及睡眠效率等方面差异均无统计学意义(P>0.05),在体质量指数(BMI)及颈围方面差异有统计学意义(F=4.234,P=0.008;F=3.100,P=0.031)。4组研究对象的桡骨HR-pQCT指标差异均无统计学意义(P>0.05)。在胫骨方面,4组研究对象骨几何参数指标皮质骨面积(Ct.Ar)差异有统计学意义(F=3.937,P=0.011);骨微结构指标骨小梁厚度(Tb.Th)、皮质骨厚度(Ct.Th)差异有统计学意义(F=6.247,P=0.001;F=3.746,P=0.014),表现为3组病例组的均值均低于对照组。进一步两两比较显示,重度OSA组的Ct.Ar明显高于轻度OSA组(P=0.019);对照组的Tb.Th明显高于轻、中度OSA组(P=0.006,P=0.001)。相关性分析显示,在一定范围内,桡骨和胫骨的总体积骨密度(Tt.vBMD)、Tb.Th与年龄呈负相关(r=-0.312,P=0.004;r=-0.328,P=0.002;r=-0.265,P=0.015;r=-0.280,P=0.010;),与BMI呈正相关(r=0.240,P=0.029;r=0.369,P=0.004;r=0.299,P=0.006;r=0.416,P=0.010)。逐步多元回归分析显示,桡骨与胫骨的Tb.Th受BMI(β=0.262,P=0.008,R ²=0.243,F=6.270,P=0.000;β=0.494,P=0.000,R ²=0.186,F=7.243,P=0.000)及年龄(β=-0.216,P=0.030,R ²=0.243,F=6.270,P=0.000;β=-0.306,P=0.003,R ²=0.186,F=7.243,P=0.000)的影响,桡骨Tt.vBMD与睡眠效率及OSA引起的夜间较低的平均血氧饱和度亦具有一定的相关性(β=0.312,P=0.002, β=-0.249,P=0.012,R ²=0.327,F=7.482,P=0.000)。结论 本研究表明,在非老年男性中,OSA主要引起胫骨Tb.Th、Ct.Th的下降。骨强度及结构的改变主要与年龄及体型相关,与睡眠效率及OSA引起的夜间平均血氧饱和度的下降亦具有一定的相关性。