五倍子酸对人胃癌SGC-7901细胞迁移能力的影响

目的：探讨五倍子酸（GA）对人胃癌SGC-7901细胞转移的影响,阐明其作用机制。方法：培养人胃癌SGC-7901细胞,将其分为对照组及3.125、6.250、12.500、25.000、50.000和100.000 mg·L^-1GA组。MTT法检测各组SGC-7901细胞增殖抑制率,细胞划痕实验检测各组细胞转移能力,免疫细胞化学法检测各组SGC-7901细胞中血管内皮生长因子（VEGF）表达水平。结果：与对照组比较,不同剂量GA组SGC-7901细胞增殖抑制率明显升高,并呈剂量依赖性（F=59.451,P<0.01）。与对照组比较,不同剂量GA组SGC-7901细胞的划痕愈合率明显降低（P<0.01）,12.500和25.000 mg·L^-1 GA组细胞中VEGF蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：GA通过抑制人胃癌SGC-7901细胞中VEGF蛋白的表达来抑制SGC-7901细胞增殖及迁移。     

百合提取物对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

目的 初探百合的甲醇提取物、百合总生物碱对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法 不同浓度的百合甲醇提取物、百合总生物碱作用SGC-7901细胞,MTT法检测SGC-7901细胞的生长抑制率;荧光显微镜观察SGC-7901细胞的形态变化;流式细胞仪检测SGC-7901细胞周期改变及其凋亡率。结果 随着百合甲醇提取物、百合总生物碱作用SGC-7901细胞的时间、浓度递增,抑制SGC-7901细胞增殖的作用越明显,百合甲醇提取物最大浓度的抑制率可达到98.32%;百合总生物碱最大浓度的抑制率可达到91.93%,细胞逐渐失去正常的细胞形态,细胞边缘不整齐,细胞发生皱缩;阻滞细胞周期于G2/M期;可以诱导细胞的凋亡。结论 百合甲醇提取物、百合总生物碱阻滞SGC-7901细胞于G2/M期,诱导SGC-7901细胞凋亡是抑制SGC-7901细胞增殖的主要机制之一。     

孕激素受体膜组分1促进雌孕激素诱导的乳腺癌细胞增生的研究——雌二醇与周期序贯及连续联合比较

目的 研究孕激素受体膜组分1（progesterone receptor membrane component 1,PGRMC1）对激素诱导的乳腺癌细胞的促增生作用,采用单用雌二醇（estradiol,E2）/周期序贯（sequential combination）/连续联合（continuous combination）不同的治疗方案,观察其对乳腺癌细胞增生的影响。方法 采用脂质体转染法将T47D稳定转染后,对转染空质粒（T47D-HA-vector）或转染PGRMC1（T47D-HA-PGRMC1）的T47D乳腺癌细胞系,分别用E2（0.1、0.01、0.001 nmol/L）,或周期序贯/连续联合方案刺激6 d后,采用CCK-2法检测乳腺癌细胞的增生。结果 单用E2（0.1、0.01、0.001 nmol/L）,T47D-HA-vector细胞未出现明显增生（P>0.05）,T47D-HA-PGRMC1在E2浓度为0.1 nmol/L时与对照组（56%,P<0.05）及与T47D-HA-vector（36%,P<0.05）比均出现明显增加的细胞增生;周期序贯方案,T47D-HA-PGRMC1在E2/炔诺酮（norethisterone,NET）（E2=0.001 nmol/L）刺激时与对照组（82%,P<0.05）及与T47D-HA-vector（63%,P<0.05）比均显著地促进细胞增生。T47D-HA-vector在E2/NET（E2=0.1 nmol/L）刺激时与对照组相比显著地促进细胞增生（37%,P<0.05）,T47D-HA-PGRMC1在E2/屈螺酮（drospirenone,DRSP）或E2/NET（E2=0.1 nmol/L）刺激时与对照组（105%,170%,P<0.05）及与T47D-HA-vector（84%,133%,P<0.05）比均显著地促进细胞增生;采用连续联合方案时,T47D-HA-PGRMC1在E2/DRSP或E2/NET（E2=0.001 nmol/L）刺激时与对照组（77%,158%,P<0.05）及与T47D-HA-vector（60%,136%,P<0.05）比均显著地促进细胞增生。T47D-HA-vector在E2/NET（E2=0.1 nmol/L）刺激时与对照组相比显著地促进细胞增生（44%,P<0.05）,T47D-HA-PGRMC1在E2/DRSP或E2/NET（E2=0.1 nmol/L）刺激时与对照组（129%,174%,P<0.05）及与T47D-HA-vector（97%,131%,P<0.05）比均显著地促进细胞增生。结论 PGRMC1能够明显促进周期序贯/连续联合方案诱导的乳腺癌增生,与周期序贯方案相比,连续联合方案对T47D增生的促进作用更加明显。     

清毒汤对实验性重症肝损伤大鼠Bax蛋白及Bcl-2蛋白表达的影响

目的 观察清毒汤对实验性重症肝损伤大鼠Bax、Bcl-2蛋白的表达以及肝细胞凋亡的影响,探讨该方对慢性重型肝炎（chronic severe hepatitis,CSH）大鼠肝细胞凋亡作用机制。方法 建立硫代乙酰胺（thioacetamide,TAA）致实验性大鼠重症肝损伤模型,给予清毒汤干预后,用原位细胞凋亡技术法检测大鼠肝细胞凋亡指数（apoptotic index,AI）、蛋白免疫印迹法检测大鼠肝组织中Bax、Bcl-2蛋白表达的水平。结果 与正常组比较,模型组AI显著增高（P<0.05）,清毒汤各组较模型组AI明显降低,（P<0.01或P<0.05）。清毒汤对实验性肝损伤大鼠模型Bax蛋白表达具有抑制作用（P<0.01）,对Bcl-2蛋白表达具有促进作用（P<0.01）,能够提高Bcl-2/Bax的比值（P<0.01）。结论 清毒汤可以调控Bax、Bcl-2蛋白表达量、降低AI,减轻肝细胞的凋亡和坏死。     

瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)在SGC-7901细胞增殖中的作用

目的 探讨瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)与SGC-7901细胞增殖的关系。方法 体外培养SGC-7901细胞,以是否加入TGF-β₁分为对照组和实验组。根据实验组是否加入SKF96365抑制剂分为TGF-β₁和TGF-β₁+SKF96365组。免疫荧光染色观察TRPC6在对照和TGF-β₁组的表达。Western blot方法检测TRPC6和增殖指标在对照组、TGF-β₁组和TGF-β₁+SKF96365组中的变化。结果 与对照组相比,TRPC6蛋白在TGF-β₁组中表达升高(P＜0.05)。抑制TRPC6蛋白表达,增殖指标在TGF-β₁+SKF96365组表达明显降低(P＜0.01)。结论 抑制TRPC6蛋白表达可降低SGC-7901细胞增殖能力。     

温肾养血方提高高龄雌鼠卵母细胞质量和胚胎发育潜能的研究

目的 探讨温肾养血方提高高龄雌鼠卵母细胞质量和胚胎发育潜能的作用机制。方法 按随机数字表法将8月龄ICR小鼠分为对照组、血清促性腺激素（pregnant mare serum gonadotropin,PMSG）组、温肾养血组、温肾组、养血组,观察用药后各组受精率和卵裂率,卵母细胞和受精卵线粒体的表达情况。结果 温肾养血组、温肾组、养血组的受精率和卵裂率明显高于对照组和PMSG组（P<0.05）,温肾养血组的受精率和卵裂率最高（P<0.05）。2细胞率、4细胞率、8细胞率、桑葚胚率和囊胚率,温肾养血组均比PMSG组高且差异有统计学意义（P<0.05）。卵母细胞和受精卵中的线粒体DNA拷贝数温肾养血组最高,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 温肾养血方可能通过调控卵母细胞线粒体DNA拷贝数提高卵母细胞质量和胚胎发育潜能。     

过表达TLR4基因对胃癌细胞自噬的抑制作用及其机制

目的 采用慢病毒过表达胃癌细胞中Toll样受体4（TLR4）基因,探讨其对胃癌细胞自噬的作用,并阐明其作用机制。 方法 处于对数生长期的胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞分为未感染组、阴性对照病毒组和基因过表达组,分别给予无慢病毒感染、空载体慢病毒和过表达TLR4慢病毒稳定感染。采用Western blotting法检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞及胃癌BGC-823细胞、SGC-7901细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法分别检测各组细胞中TLR4、Beclin1和微管相关蛋白轻链3（LC3）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）、磷酸化PI3K／磷酸化Akt（p-PI3K／p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化mTOR（p-mTOR）信号通路相关蛋白及细胞自噬相关蛋白（LC3、Beclin1和p62）蛋白表达水平。 结果 BGC-823细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平高于胃黏膜上皮GES-1细胞。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞增殖活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,BGC-823细胞中Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）,SGC-7901细胞中LC3和Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中LC3和Beclin1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,p62、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 过表达TLR4基因可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路明显抑制胃癌细胞的自噬活性。     

过氧化氢抑制三氧化二砷诱导的伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡

目的 探讨过氧化氢(H₂O₂)对三氧化二砷(As₂O₃)诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞凋亡的影响及双染法荧光显微技术在检测细胞凋亡中的作用。方法 应用As₂O₃诱导人类伯基特氏淋巴瘤细胞株BJAB细胞凋亡,采用Hoechst 33342和碘化丙啶(PI)核染料双染法荧光显微镜和透射电镜对细胞死亡进行观察及定量分析。结果 BJAB细胞经As₂O₃处理后,荧光显微镜下可见大多数细胞出现细胞染色质凝集、核边集、核碎裂等凋亡的特征性改变;在低剂量(200 μmol/L)H₂O₂的影响下,抑制了As₂O₃诱导的细胞凋亡,降低细胞的死亡率;细胞的死亡方式由凋亡转变为核固缩性坏死,表现为既无凋亡的特征性改变,又非典型的细胞坏死,死亡细胞的细胞核呈固缩状态而非肿胀。结论 低浓度(200 μmol/L)H₂O₂可抑制临床治疗浓度的As₂O₃诱导的人类伯基特氏淋巴瘤BJAB细胞凋亡;双染法荧光显微镜技术不但可明确区分细胞凋亡及坏死,还可判断早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞,并可进行定量分析,是一种良好的细胞凋亡检测方法。     

27-羟基胆固醇对神经细胞和星形胶质细胞溶酶体胆固醇转运相关因子表达的影响

目的 探讨27-羟基胆固醇（27-hydroxycholesterol,27-OHC）在神经细胞（SH-SY5Y）和星形胶质细胞（C6）共培养体系中对细胞溶酶体胆固醇转运相关因子表达的影响。方法 采用Trans-well小室进行SH-SY5Y细胞和C6细胞共培养,使用不同剂量的27-OHC对共培养体系下细胞进行处理,分为对照组（DMEM组）、低剂量组（27-OHC 5 μmol/L）、中剂量组（27-OHC 10 μmol/L）及高剂量组（27-OHC 20 μmol/L）。采用COD-PAP法检测两种细胞中的总胆固醇浓度;采用Real-time PCR和Western blotting检测两种细胞溶酶体内特异性胆固醇转运蛋白质——尼曼匹克蛋白质1（Niemann-Pick C protein 1,NPC1）、NPC2的基因表达水平和蛋白质表达水平。结果 随着27-OHC处理浓度的升高,SH-SY5Y细胞内胆固醇浓度逐渐上升（P<0.05）,C6细胞内胆固醇浓度逐渐降低（P<0.05）;SH-SY5Y细胞溶酶体内NPC基因及蛋白质表达水平显著下调（P<0.05）;C6细胞内溶酶体NPC基因及蛋白质表达水平显著上调（P<0.05）。结论 27-OHC可引起神经细胞及星形胶质细胞溶酶体内胆固醇转运障碍,使胆固醇在神经细胞溶酶体内蓄积。     

银杏叶提取物对帕金森病模型大鼠脑内神经炎性反应的影响

目的 观察银杏叶提取物对帕金森病（Parkinson's disease,PD）模型大鼠中脑和纹状体神经炎性反应因子及其调控因子核因子-κB （nuclear factor-kappa B,NF-κB）的影响。方法 将32只3月龄雄性SD大鼠采用数字表法随机分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组8只。背部皮下注射鱼藤酮制备PD大鼠模型,低剂量组和高剂量组同时给予银杏叶提取物灌胃共30 d。酶联免疫法检测大鼠脑内纹状体中神经炎性反应因子-肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）及白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）含量变化,同时Western blotting检测大鼠脑内星形胶质细胞、小胶质细胞和NF-κB的表达改变。结果 与对照组相比,模型组大鼠纹状体中TNF-α和IL-1β均明显增加（P<0.01）,大鼠脑内GFAP、Iba1和NF-κB表达明显增加（P<0.05）。银杏叶提取物治疗后明显逆转了上述神经炎性反应,与模型组相比,治疗组GFAP、Iba1和NF-κB蛋白表达明显降低（P<0.05）,大鼠纹状体中TNF-α和IL-1β明显减少（P<0.05）。同时上述改变有明显剂量依赖性。结论 银杏叶提取物能改善PD大鼠脑内的慢性神经炎性反应,保护脑内黑质多巴胺能神经元,为PD的临床治疗提供新的靶点。     

Skp2反义寡核苷酸对胃癌细胞SGC-7901生长增殖的影响

目的：研究S期激酶相关蛋白2反义寡核苷酸（Skp2 antisense oligodeoxynucleotide，Skp2 ASODN）对胃癌细胞SGC-7901生长增殖的影响及其可能机制。方法：采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000 Reagent包裹Skp2寡核苷酸（ODNs）转染SGC-7901细胞，通过显微镜和MTT实验观察细胞的生长和增殖情况；应用流式细胞术检测细胞周期；应用逆转录聚合酶链反应检测Skp2、P27mRNA表达变化；应用Western blot法检测Skp2蛋白及其底物p27蛋白表达变化。结果：Skp2ASODN对SGC-7901细胞的生长和增殖产生浓度依赖性抑制效应，且各组细胞的抑制率均在48h达到最高峰，其中200nmol／LASODN在48h对细胞的抑制率为42．4％，P〈0．01。200nmol／LASODN组细胞周期发生改变，S期细胞所占比例明显高于正常对照组细胞，P〈0．05。在200nmol／L浓度下，ASODN组Skp2mRNA和蛋白表达水平均低于正常对照组和Skp2无义寡核苷酸（Skp2 nonsense oligodeoxynucleotide，Skp2NSODN）组，P〈0．05；而p27mRNA表达未发生变化，但其蛋白水平明显高于正常对照组和NSODN组，P〈0．05。结论：Skp2ASODN能抑制SGC-7901细胞生长和增殖，这种抑制作用主要是通过干预泛素-蛋白酶体途径影响细胞周期而实现的。     

血清饥饿激活表皮生长因子受体诱导胃癌耐药

目的 探讨血清饥饿对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)高表达胃癌细胞化学药物治疗(以下简称化疗)敏感性的影响及其作用机制。方法 将胃癌细胞分为4组:正常对照组、饥饿组、化疗药处理组、饥饿+化疗药处理组。采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]方法观察肿瘤细胞的存活率,两两比较验证血清饥饿对化疗药敏感性的影响。采用Western blotting法观察细胞EGFR及其下游靶分子细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK),蛋白激酶B(RAC-alpha serine/threonine-protein kinase, Akt)的磷酸化水平变化;最后进一步借助EGFR单克隆抗体西妥昔单抗抑制EGFR的磷酸化的活性,观察其对胃癌细胞化疗感性的影响。结果 与对照组相比,胃癌细胞SGC7901血清饥饿时对多种化疗药物的敏感性下降,血清饥饿可促进EGFR、ERK磷酸化,差异有统计学意义(P<0.05)。EGFR单克隆抗体可部分逆转血清饥饿所导致的化疗药耐药。结论 缺营养饥饿可诱导EGFR高表达胃癌细胞化疗耐药,其诱导机制可能与激活EGFR/ERK信号通路有关。     

水飞蓟素对人胃癌SGC 7901细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及其机制

目的：探讨水飞蓟素对人胃癌SGC 7901细胞增殖、迁移及侵袭的影响和促凋亡作用,阐明其可能机制。方法：选取对数生长期的人胃癌SGC 7901细胞,分为对照组和不同浓度水蓟素组（分别给予15、30和60 mg·L^-1水飞蓟素）,倒置显微镜观察各组细胞形态表现,MTT法检测细胞周期和细胞凋亡率,流式细胞术检测细胞增殖抑制率,划痕实验和Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力。结果：水飞蓟素作用SGC 7901细胞24 h后,与对照组比较,30和60mg·L^-1水飞蓟素组细胞贴壁密度变小,细胞形态不规则、体积变小,产生大量细胞碎片。与对照组比较,不同浓度水飞蓟素组细胞增殖抑制率明显升高（P<0.05）,G₁期细胞百分率和细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,细胞迁移距离明显缩短（P<0.05）,穿膜细胞数量明显降低（P<0.05）。结论：水飞蓟素对人胃癌SGC 7901细胞的增殖抑制作用可能是通过诱导G₁期细胞阻滞和早期凋亡引起的。     

蚓激酶对胃癌SGC7901细胞增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：探讨蚓激酶（LBK）对胃癌SGC7901细胞的调控作用,并阐明其作用机制。方法：取对数生长期SGC7901细胞,将细胞分为对照组和2、4、8 U·mL^-1LBK组。采用MTT法检测不同时间段（24、48和72 h）各组SGC7901细胞增殖抑制率,采用细胞划痕实验检测各组SGC7901细胞体外迁移能力,采用流式细胞术检测各组SGC7901细胞凋亡率和不同细胞周期细胞百分率,采用Western blotting法检测各组SGC7901细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达水平。结果：MTT检测,与对照组比较,作用24、48和72h后不同剂量LBK组SGC7901细胞增殖抑制率明显升高（P<0.01）。细胞划痕实验,与对照组比较,4和8 U·mL^-1LBK组SGC7901细胞划痕距离明显增加（P<0.01）。流式细胞术检测,与对照组比较,4和8 U·mL^-1LBK组SGC7901细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,G₁期和S期细胞百分率明显降低（P<0.01）,G₂期细胞百分率明显升高（P<0.01）。Western blotting法检测,与对照组比较,8U·mL^-1LBK组SGC7901细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bax和caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：LBK可抑制胃癌细胞株SGC7901增殖和迁移能力,且能够诱导细胞凋亡,其可能的机制是通过调节Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达水平来实现的。     

TLR4-NFκB信号通路在顺铂致胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用

目的 探讨TLR4-NFκB信号通路在顺铂致胃癌细胞凋亡中的作用。方法 终浓度为10 μmol/L的顺铂处理SGC-7901细胞12 h后,Western blot检测SGC-7901细胞中TLR4和NFκB的表达情况。设计合成无义序列和TLR4 siRNA序列,分别转染至SGC-7901细胞,即无义序列转染组(Scramb-Anti-TLR4 group)和TLR4 siRNA序列转染组(Anti-TLR4 group)。顺铂处理后,Western blot检测细胞中TLR4、NFκB、Bax、Bcl-2、Activecaspase-3和GAPDH的表达,流式细胞术检测细胞凋亡和坏死。结果 顺铂处理后TLR4(t=14.070,P＜0.001)和NFκB(t=17.660,P＜0.001)的表达显著增加。与Scramb-Anti-TLR4组相比较,Anti-TLR4组在顺铂处理后TLR4(t=16.810,P＜0.001)和NFκB(t=15.040,P＜0.001)表达显著下降;Bax(t=17.870,P＜0.001)和Activecaspase-3(t=8.881,P＜0.001)表达显著升高,Bcl-2(t=17.300,P＜0.001)表达显著下降;细胞凋亡率(t=4.122,P＜0.001)和坏死率(t=9.367,P＜0.001)显著升高。结论 顺铂可以激活胃癌SGC-7901细胞的TLR4-NFκB信号通路,抑制TLR4-NFκB信号通路可以增强顺铂的致凋亡效应。     

1,25-二羟维生素D3对胃癌细胞增殖和TNF-α表达的影响

目的研究1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]对胃癌SGC-7901细胞增殖和细胞周期的影响,以及对细胞因子TNF-αmRNA及蛋白表达的影响。方法用不同浓度1,25(OH)2D3处理胃癌SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞生长周期;RT-PCR和Western blotting分别检测TNF-α在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果 1,25(OH)2D3对胃癌SGC-7901细胞增殖有抑制作用(P<0.05),并呈时间剂量依赖性。经1,25(OH)2D3处理72 h后细胞周期出现向G0/G1期移行的动力学改变(F=9.81,P<0.05)。TNF-αmRNA及蛋白的表达水平均呈剂量依赖性减少(P<0.05)。结论 1,25(OH)2D3可抑制胃癌细胞增殖,且与其抑制TNF-α的表达可能有相关性。