乌司他丁对重症急性胰腺炎大鼠肾脏细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响

目的探讨乌司他丁(UTI)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾脏细胞凋亡及bcl-2基因表达的影响。方法60只大鼠随机均分为假手术组、SAP组和UTI组,大鼠SAP模型采用5%牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射法建立。于建模后6h及14h时测定血Cr及BUN,于光镜及电镜下观察肾组织病理变化,TUNEL法检测肾脏细胞凋亡情况,SABC免疫组化染色法测定肾脏组织bcl-2基因的蛋白表达。结果SAP组光、电镜下见肾脏组织损害明显,血Cr、BUN、肾脏细胞凋亡指数和bcl-2表达均高于假手术组(P<0.05,P<0.01),且除bcl-2表达外,均随病程延长逐渐升高(P<0.05);经UTI治疗后,光、电镜下见肾脏组织损害减轻,血Cr、BUN和肾脏细胞凋亡指数较SAP组明显下降(P<0.05),而bcl-2表达增强(P<0.05)。肾脏细胞凋亡指数与血BUN和Cr均呈正相关(r=0.807,P<0.05;r=0.812,P<0.05)。结论UTI对肾功能的保护作用可能部分是通过调节凋亡相关基因bcl-2的表达从而影响细胞凋亡实现的。     

异搏定对缺血-再灌注大鼠胰腺细胞凋亡、组织钙及bcl-2、c-myc表达的影响

目的探讨异搏定对缺血-再灌注损伤大鼠胰腺组织钙、胰腺细胞凋亡及凋亡相关基因(bcl-2、c-myc)的影响。方法取Wistar大鼠30只,随机均分为假手术组、缺血-再灌注组及异搏定治疗组。缺血-再灌注组和异搏定治疗组钳闭大鼠腹腔干及肠系膜上动脉15min,再灌注12h,制备胰腺缺血-再灌注损伤模型。异搏定治疗组分别于缺血前15min及再灌注1h后经大鼠尾静脉注射异搏定溶液0.1mg/100g;缺血-再灌注组2次经尾静脉注射等体积生理盐水。再灌注12h后,活杀大鼠取胰腺,进行组织学观察,测定组织钙含量、胰腺细胞凋亡率和bcl-2、c-myc的表达。结果异搏定治疗组大鼠胰腺病理改变较缺血-再灌注组轻微;异搏定治疗组组织钙含量和胰腺细胞凋亡率均明显低于缺血-再灌注组(411.1±55.8)μg/g干重vs(470.9±31.9)μg/g干重;(9.5±2.9)%vs(18.4±3.1)%,P均<0.05;bcl-2、c-myc表达阳性细胞率及荧光指数异搏定治疗组均明显高于缺血-再灌注组(8.7±0.6)%vs(6.9±1.2)%,(13.6±2.4)%vs(10.3±1.9)%;1.72±0.11vs1.41±0.07,1.76±0.19vs1.55±0.13,P均<0.05。结论胰腺缺血-再灌注损伤中存在细胞凋亡机理的参与,异搏定降低胰腺组织钙含量,并促进凋亡相关基因bcl-2、c-myc的表达,抑制细胞凋亡,保护了缺血-再灌注损伤的胰腺。     

急性胰腺炎大鼠肾上腺损伤中bax与bcl-2表达的研究

目的 观察急性胰腺炎(AP)大鼠肾上腺损伤时细胞凋亡及调控基因bcl-2和bax蛋白的表达及作用.方法 采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射法建立AP模型.术后3、6、12 h检测血皮质酮水平,观察肾上腺病理,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组织化学检测bcl-2和bax蛋白表达.结果 与SO组比较,AP3 h组血清皮质酮显著增高,随后逐渐降低(P＜0.05).随病程延长,肾上腺细胞凋亡指数增高,bax蛋白表达增强,bax/bcl-2比值亦逐渐升高(P值均＜0.05),并与凋亡指数(AI)呈正相关(r =0.759,P＜0.05).结论 bax和bcl-2可能参与了AP肾上腺损伤的发病过程.通过激活bcl-2和抑制bax的蛋白表达,减少细胞凋亡发生从而保护肾上腺结构和功能,可能为今后AP及相关肾上腺损伤的药物及基因治疗提供依据和新思路.     

细胞凋亡在大鼠胰腺移植急性排斥反应中的作用

目的探讨细胞凋亡和相关因子Fas、FasL、bcl-2和bax在大鼠胰腺移植急性排斥反应中的作用,评价十二指肠黏膜活检在胰腺移植中诊断排斥反应的价值。方法选SD和Wistar大鼠行全胰十二指肠移植,实验分同基因胰腺移植组和异基因胰腺移植组。于移植术后第3、5及7d分批处死受体,取移植胰腺和十二指肠标本用HE染色和原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记技术(TUNEL)检测移植物。免疫组化法检测移植后胰腺和十二指肠Fas、FasL、bcl-2和bax的表达。结果异基因胰腺移植组胰腺和十二指肠病理评分相同者占61.1%(11/18);评分不同者占38.9%(7/18),其中胰腺评分较高者6例,十二指肠黏膜评分较高者仅1例。异基因胰腺移植组胰腺和十二指肠病理学评分和细胞凋亡指数均明显高于同基因胰腺移植组(P<0.05,P<0.01)。胰腺和十二指肠细胞凋亡指数与急性排斥反应的病理学评分成正相关(r=0.965,P<0.01;r=0.942,P<0.01)。随着术后时间延长,排斥反应分级上升,细胞凋亡增加,FasL表达升高,在异基因移植组bcl-2表达下降,而Fas和bax表达无明显变化。结论细胞凋亡与移植胰腺急性排斥反应的严重程度呈正相关,细胞凋亡指数可作为判断移植物损伤程度的指标。FasL和bcl-2与胰腺移植急性排斥及组织损伤密切相关。十二指肠黏膜活检有助于判断有无胰腺急性排斥反应发生。     

缺血预处理对胆管上皮细胞凋亡及bcl-2/Fas蛋白表达的影响

目的 观察缺血预处理对缺血再灌注损伤引起的胆管上皮细胞凋亡(AI)以及对调控基因(bcl-2,Fas)蛋白表达的影响. 方法 SD大鼠36只分为假手术(SO)组、缺血再灌注(IR)组、缺血预处理(IP)组.热缺血时间为30min.缺血预处理为缺血前采用5 min缺血及5 min×2次再灌注.分别于再灌注12 h后处死动物取肝脏标本.检测肝内胆管上皮细胞凋亡及bcl-2/Fas蛋白表达水平. 结果 凋亡细胞主要见于肝内大胆管,SO组凋亡的胆管上皮细胞罕见,IR和IP组与SO组比较,胆管上皮细胞AI有显著性增加(P<0.01,P<0.05).IP组与IR组比较,胆管上皮细胞AI有显著性降低(P<0.05).肝内大胆管bcl-2蛋白阳性表达:IP组bcl-2蛋白阳性表达较SO组和IR组差异均具有显著性意义(P<0.01,P<0.05).Fas蛋白阳性表达:IR组与SO组比较,Fas蛋白阳性表达差异有显著性意义(P<0.05).IP组与IR组间相比差异无显著性意义(P>0.05). 结论 IR诱导Fas蛋白的表达促进肝内胆管上皮细胞发生凋亡.IP通过上调调控基因bcl-2蛋白的表达抑制胆管上皮细胞的凋亡,与Fas蛋白表达关系不明显.     

去铁胺在大鼠自体肝移植术后余肝细胞凋亡中的作用

目的 探讨去铁胺预处理对大鼠自体肝移植余肝细胞凋亡的作用及机制.方法 建立大鼠自体肝移植模型,将96只健康雄性SD大鼠随机分为去铁胺预处理(D组)32只,注射用水对照组(C组)32只和假手术模型(S组)32只.分别于术后0.5、2、6、24 h各时间点处死大鼠,检测血清ALT和AST水平;做病理组织学检查,免疫组织化学检测缺氧诱导因子(HIF)-1α、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1及bcl-2蛋白的表达,TUNEL测定细胞凋亡.结果 在各个时间点,D组血清ALT及AST水平及IL-1、TNF-α蛋白表达量和凋亡指数明显低于C组(P<0.01),而HIF-1α和bcl-2蛋白表达量明显高于C组(P<0.01).结论 去铁胺预处理对大鼠自体肝移植余肝细胞凋亡具有保护作用,其作用机制部分可能与促进HIF-1α表达上调,从而降低炎性因子水平,促进bcl-2表达达到抑制细胞凋亡的作用.     

冷保存供肝肝移植大鼠肝窦内皮细胞损伤机制的研究

目的 探寻肝移植大鼠肝窦内皮细胞(SEC)损伤的详细过程、方式及机制,为冷保存再灌注损伤的保护研究开辟新的途径.方法 雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=6)、UW 1 h肝移植组(n:48)、Uw 12 h肝移植组(n=48).大鼠原位肝移植采用双袖套法,分别于术后不同时相点采取血液及组织标本,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)及透明质酸(HA)水平;HE染色观察肝脏病理学变化;TUNEL法检测凋亡,免疫组化法检测Bcl-2及Cleaved Caspase-3的表达状况.结果 UW 1 h、UW 12 h组肝移植后血清ALT、HA均较假手术组明显升高(P<0.05),UW 12 h组又明显高于Uw 1 h组(P<0.05).UW 12 h组ALT水平于术后6 h达高峰,而HA水平却在术后1 h、24 h呈双峰表现.Uw 12 h组首先出现SEC的凋亡继而出现肝细胞的坏死,且UW 12 h组细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)明显高于UW 1 h组(P<0.01).两组大鼠SEC的AI均于术后6 h达高峰,与血中ALT的高峰时相点一致.肝移植术后Bcl-2表达明显减弱(P相似文献   

大鼠移植胰腺冷缺血再灌注后细胞凋亡及其调控基因的研究

目的探讨胰腺移植再灌注后胰腺细胞凋亡发生的过程,以及Bax、Bcl2及Fas等调控基因的表达。方法65只SD大鼠随机分成7组假手术组,冷缺血2h组,冷缺血2h再灌注1、3、6、9、12h组。电镜观察胰腺组织的病理变化;采用缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞;采用免疫组织化学方法检测胰腺组织中Bax、Bcl2及Fas蛋白的表达。结果胰腺移植后早期即可观察到细胞凋亡,凋亡的高峰期为再灌注后3h,凋亡指数(AI)为(95±29)%,P<001,再灌注6h组细胞凋亡有所减少,AI为(57±17)%,P<001,再灌注9h及12h组,AI分别为(36±16)%及(33±14)%,P<005。假手术组与冷缺血2h组均未见Bax、Fax蛋白表达。冷缺血再灌注1h组Bax( )、Fas( ),未见Bcl2蛋白表达;至冷缺血再灌注3h组Bax及Fas表达均增强,分别为Bax( )、Fas( ),以后各组表达有所下降。Bcl2蛋白在假手术组、冷缺血2h组及冷缺血再灌注1h组均未见表达,冷缺血再灌注3h及以后各组表达为( )。结论细胞凋亡是胰腺移植后的早期事件,Bax、Fas基因可能促进了胰腺细胞的凋亡,而Bcl2基因可能抑制细胞凋亡。     

Rolipram对大鼠急性脊髓损伤的保护作用

目的:研究磷酸二酯酶(Ⅳ)抑制剂Rolipram对大鼠急性脊髓损伤的保护机制.方法:健康Waster大鼠70只,Allen's法(10g×2.5cm)打击制作脊髓损伤(SCI)模型.实验组伤后立即皮下注射Rolipram 2.5mg/kg/d,每天分2次注射,至第14天;对照组皮下注射与实验组相同剂量的生理盐水.分别通过HE染色,免疫组化,测定6h、24h、72h、7d、14d五个时间段病理变化及B细胞淋巴瘤-2基因(bcl-2)表达,TUNEL法测定24h～7d凋亡细胞水平,并用放免方法测定各组大鼠给药3h和6h后脊髓中环磷酸腺苷(cAMP)含量.结果:脊髓损伤后,对照组和实验组TUNEL阳性细胞存24h～7d均有表达,多数为胶质细胞;～7d时实验组凋亡细胞较对照组明显减少(P<0.05).脊髓损伤后3～14d,实验组bcl-2表达强于对照组(P<0.05);放免方法测定实验组(给药3h和6h时)脊髓cAMP明显高于对照组(P<0.05).结论:磷酸二酯酶抑制剂Rolipram对大鼠急性脊髓损伤具有一定保护作用,这一作用可能通过多种途径,升高细胞内cAMP,进而上调bcl-2等保护性基因是其中之一.     

缺血预处理对鼠肝细胞凋亡及调控基因（bcl—2,Fas）蛋白表达的影响

目的观察鼠肝缺血再灌注损伤对肝细胞凋亡,以及缺血预处理对缺血再灌注损伤引起的肝细胞凋亡以及对其调控基因(bcl-2,Fas)蛋白表达的影响.方法Wistar大鼠分为假手术(SO)组、缺血再灌注(IR)组、缺血预处理(IP)组,后2组中分为3个亚组(IR1,2,3,IP1,2,3).缺血均为30min.缺血预处理为缺血前采用5min缺血及5min再灌.分别于再灌注1.5,3,4.5h后处死动物采取肝脏标本,SO组于术后3.5h采取肝标本.检测细胞凋亡及bcl-2,Fas蛋白表达水平.结果IR2组和IP2组与SO组比较细胞凋亡指数(AI)显著性增加(P<0.01),IP组较IR组细胞AI显著性降低(P<0.05).电镜示凋亡细胞,但IP组较IR组的细胞器特别是线粒体损伤要轻.bcl-2蛋白表达IP组较IR组及SO组显著性增加(P<0.05),IR组与SO组无差异(P>0.05).Fas蛋白表达IR2组和IP2组较SO显著性增高(P<0.05),IP组与IR组比较无显著性差异(P>0.05).结论IR损伤可能通过激活Fas蛋白的表达而促发肝细胞凋亡;IP可能通过激活bcl-2蛋白的表达而抑制肝细胞凋亡.     

中性粒细胞对大鼠急性重症胰腺炎胰腺腺泡凋亡的作用

目的探讨中性粒细胞在大鼠急性重症胰腺炎时对胰腺的病理损害及对胰腺腺泡凋亡的作用。方法氨甲蝶呤（MTX）腹腔注射制成大鼠低中性粒细胞模型，然后以脱氧胆酸胰胆管注射诱发急性重症胰腺炎，造模后0、3、6、9、24、48、72h随机分批处死动物，按各时间点检测胰腺组织髓过氧化物酶活性（MPO），血清淀粉酶，应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的DUPT末端标记染色（TUNEL）和电镜技术检测胰腺腺泡凋亡情况，胰腺组织的病理学检查。结果实验组MPO在造模24h开始明显低于对照组（P〈0．01），胰腺组织的病理损害程度也较对照组轻。两组胰腺腺泡凋亡在造模3和6h均仅出现少量凋亡，在24和48h显著增多，以后逐渐下降；实验组胰腺腺泡凋亡指数明显高于对照组胰腺腺泡凋亡指数（P〈0．01）。结论适当地降低外周血的中性粒细胞水平能够增加胰腺腺泡凋亡，从而减轻急性重症胰腺炎时胰腺的病理损害程度。     

区域动脉灌注5-FU诱导大鼠急性胰腺炎腺泡细胞凋亡及Caspase-3表达

目的 探讨区域动脉灌注（regional arterial infusion,RAI）5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）对大鼠急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）胰腺腺泡细胞凋亡的影响及其对急性胰腺炎的治疗作用。方法 18只健康成年SD大鼠随机分成3组：对照组（C组）、急性胰腺炎组（AP组）和5-FU治疗组（5-FU组）。各组均行胃左动脉置管,AP组和5-FU组以大剂量雨蛙素（每小时腹腔注射50 μg/kg,连续6 h）诱导建立大鼠急性胰腺炎模型,对照组注射同等剂量的生理盐水。5-FU组在第一次腹腔注射雨蛙素1 h后立即区域动脉灌注5-FU（40 mg/kg）治疗,C组和AP组区域动脉灌注等量的生理盐水。建模成功后3 h取标本并处死大鼠,检测血淀粉酶浓度,RT-PCR法检测胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平,胰腺标本送病理学检查,Western blotting法检测胰腺组cleaved Caspase-3的蛋白表达,同时TUNEL法检测大鼠胰腺腺泡细胞凋亡情况。结果 与AP组比较,5-FU组血淀粉酶浓度明显降低（P＜0.05）;胰腺组织内TNF-α、IL-1β、IL-6  mRNA表达水平下降（P＜0.05）;胰腺组织病理学改变减轻;胰腺组织cleaved Caspase-3的蛋白表达增加;胰腺腺泡细胞凋亡增加（P＜0.05）。结论 区域动脉灌注5-FU对大鼠急性胰腺炎有改善作用,其作用机制可能与诱导胰腺腺泡细胞凋亡有关。     

大鼠急性胰腺炎凋亡相关微小RNA表达谱分析

目的 分析大鼠急性胰腺炎凋亡相关微小RNA(miRNA)的表达谱.方法 将SD大鼠36只随机分为:空白对照组、急性水肿性胰腺炎组(AEP)和急性坏死性胰腺炎组(ANP).AEP组模型采用L-精氨酸150 mg/kg腹腔注射建立,ANP组模型采用L-精氨酸2400 mg/kg腹腔注射建立;各组于造模后12 h,检测血清淀粉酶、脂肪酶含量;TUNEL法检测胰腺组织腺泡细胞的凋亡,对胰腺组织进行病理学评分,各组选择2例应用miRNA芯片技术检测miRNA的表达,筛选表达差异miRNA,进行层次聚类分析.结果 与ANP组比较,AEP组的血清淀粉酶、脂肪酶和病理学评分明显降低(P＜0.05),胰腺腺泡细胞凋亡指数显著升高(P＜0.05);实验组与空白对照组比较各指标差异有统计学意义(P＜0.05).miRNA芯片分析:与空白对照组比较,ANP组和AEP组表达差异均在2倍以上;且与ANP组比较,AEP组表达差异在2倍以上,差异有统计学意义(P＜0.05)的miRNA认为是凋亡相关miRNA(AA miRNA).表达差异AA miRNA共计有8条,其中与ANP组比较,2倍以上升高AA miRNA的共5条;2倍以上降低AA miRNA的共3条.结论 急性胰腺炎发病过程某些miRNA可能参与胰腺炎腺泡细胞凋亡过程的凋节.

Abstract：

Objective To analyze micro RNA (miRNA) expression profile relating to rats apoptosis due to acute pancreatitis.Methods Thirty-six SD rats are randomly divided into:blank control group,acute edematous pancreatitis (AEP) and acute necrosis pancreatitis (ANP).AEP group model is established by L-arginine(150mg/kg) intraperitoneal injection and ANP group model is established by L-arginine (2400 mg/kg) intraperitoneal injection;inspect every group's serum amylase and lipase content 12 h after molding;inspect the apoptosis of acinar cell in pancreatic tissue by TUNEL method and give the pancreatic tissue the pathological score;choose 2 from every group to inspect miRNA expression by miRNA chip technology,and screen out the miRNA with differential expression and make hierarchical clustering analysis.Results Compared with ANP group,AEP group's serum amylase,lipase and pathological score decline dramatically (P＜0.05 ),and apoptosis index of pancreatic acinar cells increases significantly (P＜0.05 );there are dramatic differences between the experimental group indexes and blank control group indexes (P ＜0.05 ).miRNA chip analysis:In comparison with blank control group,the expression differences of ANP group and AEP group are both more than 2 times;in comparison with ANP group,the expression difference of AEP group is more than 2 times,and the miRNA with dramatic difference (P ＜0.05 ) by statistical analysis is regarded as apoptosis associated miRNA ( AA miRNA).There are 8 AA miRNAs with expression difference,and compared with ANP group,5 increase more than 2 times;3 reduce more than 2 times.Conclusion In the process of acute pancreatitis,pathophysiologic changes are associated with miRNA expression profile,and some miRNA may participate in the regulation of pancreatic acinar cell apoptosis process.     

Effects of penehyclidine hydrochloride on apoptosis of lung tissues in rats with traumatic acute lung injury

Objective： To investigate the effects ofpenehyclidine hydrochloride on apoptosis of lung tissue cells and its mechanism in acute lung injury following blunt chest trauma in rats. Methods： Sprague Dawley （SD） rats （n=54） weighing （250-25） g were divided equally and randomly into three groups： normal control group （C group, n= 18）, trauma model group （T group, n= 18） and penehyclidine hydrochloride treatment group （P group, n=18）. Each group was further divided into three subgroups according to the time points of 3, 12 and 24 hours after experiment （at each time point, n=6 for each subgroup）. Rats of P group were intraperitoneally injected with penehyclidine hydrochloride for 2 mg/kg immediately after blunt chest trauma and rats in its 24 hours subgroup were once again injected with penehyclidine hy- drochloride in the same dose 12 hours after injury. Lung tissue samples were collected at every time point and cell apoptosis in lung tissues were measured by TUNEL. Apoptotic index （AI） was calculated, expressions of bax and bcl-2 were detected by immunohistochemical staining of SABC, and lung tissue sections were taken for light and electron microscopic observation. Results： As compared with C group, at every time point, AI and expressions ofbax and bcl-2 in T group were higher （P〈0.05）, and the ratio of bcl-2/bax markedly decreased （P〈0.05）, especially in the 24 hours subgroup. The ratio in T group （0.468±0.007） was lower than that in C group （1.382±0.058, t=12.5, P〈0.01）. Lung tissue injuries were significant under a light microscope, and the number of apoptotic cells increased obviously under a transmission electron microscope. As compared with T group at the same phase, AI and expression of bax decreased in P group （P〈0.05 and P〈0.01）, while the expression of bcl-2 increased significantly （P〈0.01）, and the ratio of bcl-2/bax markedly increased （P〈0.05）, especially in the 24 hours subgroup. The ratio in P group （1.012-0.070） was much higher than that in T group （0.468±0.007, t=-8.3, P〈0.01）. The injury of lung tissues was relieved, and apoptosis of cells decreased obviously under a transmission electron microscopic observation. Conclusions： Apoptosis and expressions ofbax and bcl-2 in lung tissues might be involved in the pathogenesis of lung injury induced by blunt chest trauma. Penehyclidine hydrochloride can alleviate lung injuries by inhibiting apoptosis of lung tissue cells, during which effects ofpenehyclidine hydrochloride on regulating expressions ofbax and bcl-2 may play an important role.     

Phosphatidylserine receptor in chronic pancreatitis: evidence for a macrophage independent role

OBJECTIVE: This study analyzes the role of phosphatidylserine receptor (PSR) in chronic pancreatitis. SUMMARY BACKGROUND DATA: In chronic pancreatitis, destruction of parenchyma comes along with infiltration of lymphocytes and macrophages. The phosphatidylserine receptor is expressed on the surface of macrophages and is crucial for the recognition and engulfment of apoptotic cells. In the present study, we investigated the role of this receptor and its relation to apoptosis in chronic pancreatitis. METHODS: The expression and localization of PSR were analyzed by Northern blot analysis, RT-PCR, Western blot analysis and immunohistochemistry. Apoptosis was detected by the TUNEL method, and the RNA protection assay (RPA) was used to compare activation of apoptosis with PSR mRNA expression levels. In addition, the molecular data were related to clinicopathological parameters. RESULTS: PSR mRNA expression was low to absent in normal pancreatic tissue samples. In human chronic pancreatitis, increased expression of PSR mRNA was present in 12 of 29 samples (41%). Up-regulation of PSR could be confirmed by Western blot analysis. In chronic pancreatitis tissue, PSR immunoreactivity was present in all islets, in some ductal cells and in macrophages. The RNA protection assay revealed high mRNA levels of the antiapoptotic genes bcl-2 and bfl-1 (P < 0.05) in chronic pancreatitis tissues with high PSR mRNA expression. The TUNEL apoptosis in situ detection method showed positive signals in some redifferentiating acinar cells and focally in acinar cells adjacent to stromal fibroblasts in chronic pancreatitis tissue samples. The distribution pattern of PSR on pancreatic cells in chronic pancreatitis corresponded to a great extent with regions of high apoptotic activity. CONCLUSIONS: We show for the first time the presence of PSR in chronic pancreatitis on pancreatic cells other than macrophages in regions with high apoptotic activity. The coexpression and colocalization of this gene with other apoptosis mediators suggest its involvement in apoptotic processes. However, in chronic pancreatitis PSR is not only involved in phagocytosis of apoptotic cells by macrophages.     

NF-κB P65亚基siRNA增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡作用的实验研究

目的 探讨NF-κB P65亚基siRNA(NF-κB P65 siRNA)在体内外增强吉西他宾诱导胰腺癌细胞凋亡的作用及机制.方法 培养人胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1,分为空白对照组、阴性干扰序列对照组、吉西他宾组、NF-κB P65 siRNA组和联合治疗组.MTT方法检测细胞增殖情况;Western blot方法检测NF-κB P65及凋亡相关蛋白的表达水平;Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测胰腺癌细胞凋亡情况;电泳凝胶迁移实验检测NF-κB的DNA结合活性.BxPC-3接种裸鼠皮下建立胰腺癌移植瘤模型.治疗后监测肿瘤体积;TUNEL染色检测移植瘤组织细胞凋亡指数.结果 转染后72 h,与其他组相比,联合治疗组显著降低了细胞活力指数(P<0.05),下调了Bel-2和proeaspase-3的表达水平,同时上调了Bax的表达水平;流式细胞仪检测结果显示,联合治疗组细胞凋亡率高于其他组(P<0.05);EMSA实验结果证实,NF-κB P65 siRNA组和联合治疗组NF-κB的DNA结合活性低于对照组(P<0.05).联合治疗能够通过诱导凋亡而抑制裸鼠移植瘤生长(P<0.01).结论 NF-κB P65 siRNA可以通过抑制NF-κB的DNA结合活性,调控凋亡相关蛋白的表达水平,激活线粒体凋亡途径,从而增强吉西他宾对胰腺癌细胞的促凋亡作用.     

NGAL对大鼠肾脏缺血再灌注损伤时肾小管上皮细胞凋亡的保护作用

目的探讨中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase associated lipocalin,NGAL）对大鼠肾脏缺血再灌注损伤肾小管上皮细胞凋亡及凋亡蛋白fas,bcl-2表达的影响。方法建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型,用HE染色观察肾组织病理变化情况;TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡;免疫组织化学方法检测fas,bcl-2蛋白表达,并利用图像分析系统测量阳性表达率进行定量分析。结果①缺血再灌注模型组肾小管上皮细胞凋亡数为（20．8±3．7）个／高倍视野,NGAL组为（8．6±3．4）个／高倍视野,2组差异有统计学意义（P〈0．05）。②NGAL组较缺血再灌注模型组fas阳性表达率下降,差异有统计学意义（P〈0．05）;bcl-2阳性表达率增强,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论NGAL对大鼠缺血再灌注损伤的肾小管上皮细胞有保护作用,其作用可能与减少细胞凋亡、改变凋亡蛋白的表达有关系。     

大黄素对大鼠急性胰腺炎的治疗作用

目的 探讨大黄素诱导细胞凋亡对大鼠急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)的治疗作用.方法 45只SD大鼠分为对照组、胰腺炎组、治疗组,每组15只.观察胰腺组织内腺泡细胞凋亡指数、NF-κB mRNA、Bax mRNA、外周血中中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophii,PMN)凋亡指数及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase-3、caspase-8)的变化情况.结果 与胰腺炎组比较,治疗组腺泡细胞和PMN凋亡指数及胰腺组织内NF-κB mRNA、Bax mRNA、PMN caspase-3与caspase-8表达均明显增加(F=853.199,327.126,143.586,48.857,231.750,96.552,P＜0.05).治疗组中,胰腺组织病理学评分与胰腺腺泡细胞凋亡指数、PMN凋亡指数均呈负相关(r=-0.96,-0.94,P＜0.05);胰腺腺泡细胞凋亡指数与胰腺组织内NF-κB mRNA、Bax mRNA表达呈正相关(r=0.73,0.76,P＜0.05);胰腺组织内NF-κB mRNA与Bax mRNA表达呈正相关(r=0.94,P＜0.05);PMN凋亡指数与PMN caspase-3、caspase-8表达均呈正相关(r=0.99,0.99,P＜0.05).结论 大黄素能有效治疗AP,其机制是通过Bax途径诱导胰腺腺泡细胞凋亡,并通过caspase途径来诱导外周血中PMN凋亡,从而明显减轻AP病情程度.     

高脂血症促使大鼠急性胰腺炎胰腺腺泡由凋亡趋向坏死

目的 通过建立高脂血症性急性胰腺炎大鼠模型,探讨高脂血症可能加重急性胰腺炎病程的机制.方法 D-果糖饮食诱导SD大鼠的产生高脂血症,在此基础上通过腹腔注射蛙皮素诱导急性胰腺炎,并且设立正常组、高脂血症组和急性胰腺炎组作为对照.8周后,取大鼠血浆检测血糖、血脂和游离脂肪酸等指标;收集大鼠胰腺以及胰周组织,检测组织匀浆中ADP与ATP比值,通过Western blot法检测组织中caspase-3和caspase-8等蛋白以及其底物的表达情况,对组织切片进行HE染色并通过TUNEL法分析组织凋亡和坏死的情况.结果 高脂血症性急性胰腺炎大鼠的血浆中血脂、游离脂肪酸等指标偏高;caspase-3和caspase-8活性片断表达下调,而其底物蛋白降解较少;TUNEL分析阳性率偏低,以上提示胰腺组织凋亡蛋白活性受到一定的抑制;另外,ADP与ATP比值相对较高,提示胰腺组织更易产生坏死反应.结论 笔者推测高脂血症可能通过促进大鼠胰腺组织由凋亡趋向坏死,从而加重急性胰腺炎病变程度.