丙型肝炎病毒不同区抗原酶免疫试剂研究

目的　探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） 不同区抗原的反应性,为建立抗ＨＣＶ 酶免疫测定（ＥＩＡ） 确认试剂提供依据。方法　利用基因工程技术,重组所表达的ＨＣＶ 不同区抗原片段（ ＨＣＶＣ、ＮＳ３ 、ＮＳ４ 、ＮＳ５） ,建立了ＨＣＶ 单片段抗原ＥＩＡ 检测方法,检测了７４７ 份四川地区献血员血清。对其中３７３ 份血清,用２ 个厂生产的经批检合格的抗ＨＣＶＥＩＡ 试剂进行检测比较,对个别结果不符的样品进一步进行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 分析。结果　献血员中抗ＨＣＶＣ 等４ 种抗体阳性检出率分别为４ ．６８ ％ （３５／７４７） 、５ ．２ ％ （３９／７４７） 、１ ．１ ％ （８／７４７） 、１ ．２ ％ （９／７４７） ,２ 家试剂阳性检出率均为４ ％（１５／３７３） 。结论　ＨＣＶ 不同区抗原片段的抗体检出率差异较大,ＮＳ３ 检出率最高,其次为Ｃ 区、ＮＳ５ 、ＮＳ４ 。说明抗ＨＣＶＥＩＡ 检测试剂以ＨＣＶ ＮＳ３ 区和Ｃ 区为主要抗原片段。     

血清丙型肝炎病毒核心抗原、ＮＳ３抗原的检测及临床意义

目的　为检测病人血清中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心抗原、ＮＳ３抗原井探讨其临床意义。方法　用基因工程表达的ＨＣＶ核心蛋白、ＮＳ３抗原制各其单克隆抗体，建立检测病人血清中ＨＣＶ核心抗原、ＮＳ３抗原的ＥＬＩＳＡ法。结果　６０例慢性丙型肝炎患；２５０例杭—ＨＣＶ—１８Ｇ阳性；３０例抗—ＨＣＶ—ＩｇＧ、ＩｇＭ均阳性；２００例透析病人；２０例白血病病人；１５０例普通病人中ＨＣＶ核心抗原、ＮＳ３抗原阳性检出率分别为：６．６％、８．４％、１６．７％、４％、５％、２％和１３．３％、１０．４％、２３．３％、３．０％、５．０％、２．６％。结论ＨＣＶ核心抗原、ＮＳ３抗原的检测，可作为现有检测方法的补充，能更好地反映患体内ＨＣＶ的活动情况。     

HCV感染基因型病毒复制程度与肝病关系的研究

采用限制性内切酶Ｓａｕ３Ａｌ和ＨａｅⅢ对５４例ＲＴ－ＰＣＲ法ＨＣＶＲＮＡ阳性的５＇ＮＣ区扩增产物进行酶切分型；ＰＣＲ滴定法半定量分析ＨＣＶＲＮＡ含量。结果显示４种酶切类型：ＨＣＶⅠ型感染３．７％（２／５４），ＨＣＶⅡ型感染７７．８％（４２／５４），ＨＣＶⅢ、Ⅳ型感染１１．１％（６／５４），ＨＣＶⅠ、Ⅱ／Ⅲ、Ⅳ型混合感染７．４％（４／５４），ＨＣＶⅡ型感染阳性率在ＡＨ、ＣＡＨ、ＬＣ三组间无显著差异（     

庚型肝炎病毒感染的回顾性调查

采用国内合成肽抗原检测１９９２年采集的部分献浆血员血清中庚型肝炎病毒（ＧＢＶ—Ｃ）抗体，阳性率为５．４％（１１／２０３），输血后肝炎病人血清中ＧＢＶ—Ｃ抗体阳性率为９．５％（２／２１），男性阳性率为２．５％（３／１１８），女性为９．４％（１０／１０６）。提示，庚型肝炎在献浆血员和献血员中感染率较高，应尽快研制检测ＧＢＶ—Ｃ诊断试剂盒，开展此型肝炎的流行病学和血清学的研究。     

丙、丁、庚型肝炎同原发性肝癌的相关因素分析

目的;探讨ＲＮＡ病毒引起的丙型,丁型,庚型肝炎同原发性肝癌（ＰＬＣ）发生的关系。方法：采用免疫病理观察比较丙型肝炎病毒ＮＳ５抗原（ＨＣＶ－ＮＳ５）,丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＶＡｇ）,庚型肝炎病毒ＮＳ５抗原（ＨＧＶ－ＮＳ５）在肝细胞肝癌（ＨＣＣ）组织中的表达特点。结果：在７２例ＨＣＣ中ＨＣＶ－ＮＳ５,ＨＤＶＡｇ、ＨＧＶ－ＮＳ５检出率分别为２６．３９％、１９．４４％,６．９４％,总检出率为２９．１７％,     

重组抗原在戊型肝炎病毒感染诊断中的应用

目的探讨重组抗原在戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染诊断中的应用。方法用ＨＥＶ重组抗原建立酶免疫试验（ＥＩＡ）检测肝病患者和健康人群血清中抗戊型肝炎病毒抗体（抗－ＨＥＶ）。结果５５份用新加坡ＤＢＬ公司抗－ＨＥＶ诊断试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阳性的肝炎患者血清中，５３份（９６．４％）用本方法检测也为阳性；４５份ＤＢＬ试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阴性的血清中，本法检测有３份为抗－ＨＥＶ阳性。检测甲、乙、丙型肝炎患者血清各３０份，抗－ＨＥＶ阳性率分别为１３．３％（４／３０）、１３．３％（４／３０）和１０．０％（３／３０）。健康人抗－ＨＥＶ阳性率为５．０％（８／１６０）。重组抗原与合成肽抗原混合用于ＥＩＡ，可以检出两种抗原单独阳性的抗－ＨＥＶ。结论以重组抗原为基础的ＥＩＡ特异性强、灵敏度高、快速简便，是戊型肝炎血清学诊断及流行病学调查的一种可靠方法     

丙型肝炎病毒不同基因区的聚合酶链反应扩增

目的探讨提高聚合酶链反应（ＰＣＲ）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）病毒血症的检出率和对变异较大区域的扩增效率的方法。方法分别以ＨＣＶ基因组５＇端非编码区（５＇ＵＴＲ）、非结构基因４区（ＮＳ４）及ＮＳ５ｂ区的引物检测ＨＣＶ，并比较双退火温度与单一退火温度对ＨＣＶ基因扩增效率的影响。结果ＨＣＶ不同基因区（５′ＵＴＲ、ＮＳ４、ＮＳ５ｂ）引物的ＰＣＲ扩增阳性率分别为９２％、６２％、５９％。以双退火温度扩增ＮＳ４区与ＮＳ５ｂ区基因，扩增阳性率分别提高到７７％与７９％。将血清按原血清、１０－１～１０－１０系列稀释后检测，发现２份血清单退火温度ＰＣＲ的检出水平分别为１０－５与１０－７，双退火温度ＰＣＲ检出水平则分别提高至１０－８与１０－９稀释血清。结论５′ＵＴＲ引物对ＨＣＶＲＮＡ的检出率明显高于ＮＳ４区与ＮＳ５ｂ区引物。双退火温度ＰＣＲ可显著提高ＨＣＶＲＮＡ检出的敏感性     

荧光探针定量PCR检测HBV—DNA

本文采用荧光探针定量（ＦＱ－ＰＯＣＲ）法准确定量检测ＨＢＶ－Ｍ阳性标志中的ＨＢＶ－ＤＮＡ数量。结果显示：ＨＢｅＡｇ（＋组（３２份）的阳性率为１００％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数范围在１０＾５－１０＾９／ｍｌ之间。ＨＢｅＡｂ（＋）组（４７份）的阳性率为２３．４％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝范围在１０＾３－１０＾５．７／ｍｌ之间;ＨＢｓＡｂ（＋）组（３７份）的阳性率为２．７％,ＨＢＶ－ＤＮＡ拷贝数为１０＾５／ｍｌ。     

人巨细胞病毒糖蛋白gp52的原核表达及初步应用

目的探讨以表达人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）中抗原性较强的蛋白片断代替全病毒抗原建立ＨＣＭＶＩｇＭ检测试剂盒的可行性。方法以聚合酶链反应扩增ＨＣＭＶ聚合酶辅助糖蛋白（ｇｐ５２）的有效抗原基因序列，导入带有高效转录启动子ｐＴｒｃ和６个串联组氨酸的原核表达载体ｐＴｒｃＨｉｓ，在大肠杆菌中表达，经金属鏊和亲和层析（ＩＭＡＣ）法纯化后，用酶联免疫吸附法检测新生儿血清，并与全病毒抗原检测进行比较。结果重组ｇｐ５２占大肠杆菌总蛋白的４０％，ＩＭＡＣ纯化后纯度达９４．５％。在４３份疑似ＨＣＭＶ感染的新生儿血清中阳性检出率为５１．２％，而用全病毒抗原检测阳性率只有２５．９％。结论ＨＣＭＶｇｐ５２蛋白具有良好的抗原性，可用于建立新一代的检测试剂盒。     

肝癌患者血清乙型肝炎病毒标志物和抗丙型肝炎病毒抗体的检测及其相互关系

采用ＥＬＩＳＡ法检测１４０例肝癌患者血清ＨＢＶ－Ｍ和抗－ＨＣＶ，以５６例非肝病组做对照。抗－ＨＣＶ肝癌组阳性率３２．１％，对照组８．９％，两组差异有极显著性（ｐ＜０．００５）。ＨＢＶ－Ｍ在肝癌中ＨＢｓＡｇ阳性率为６９．３％，ＨＢｅＡｇ１９．２％，抗－ＨＢｅ６２．１％，抗－ＨＢｃｌｇＭ５５．４％，总阳性率９１．４％。抗－ＨＣＶ阳性率在ＨＢＶ－Ｍ阳性组和阴性组间差异无显著性。结果表明，ＨＢＶ和ＨＣＶ均与肝癌有关。但ＨＣＶ次于ＨＢＶ，可能是通过调节ＨＢＶＤＮＡ表达及整合而起促癌作用。     

输血后丙型肝炎患者不同功能区抗体的研究

为了了解丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）不同功能区抗体的诊断价值，利用体外表达的ＨＣＶＣ、Ｅ１、Ｅ２／ＮＳ１、ＮＳ３、ＮＳ５蛋白作为重组抗原，按ＥＬＩＳＡ方法检测了已确诊为输血后丙型肝炎患者的血清１１２份。结果，检出率最高的是抗ＨＣＶ－Ｃ（８１．３％），最低的是抗ＨＣＶ－Ｅ１（１０．７％），输血后１个月内检出率最高的也是抗ＨＣＶ－Ｃ（８０％）。表明Ｃ蛋白是进行ＨＣＶ诊断的最重要抗原。另外，动态观察１０例输血     

输血后庚型肝炎的前瞻性研究

为探讨输血后庚型肝炎的发病率,１９９７ 年２ 月开始,我们采用前瞻性研究方法,对１０２名住院输血病人进行了１２ 个月的随访研究。１１３ 名献血员提供的１１３ 份血液中单纯ＡＬＴ 异常率３.５ ％ （４／１１３） ,抗－ ＨＧＶ阳性率８.９ ％ （１０／１１３） ,抗－ ＨＣＶ 阳性率３.５ ％ （４／１１３） ;输血后ＨＧＶ 感染率为３.８ ％ （４／１０２） ;１０ 人输入抗－ ＨＧＶ 阳性血,输血后ＨＧＶ 感染４ 例,其中ＰＴ－ ＨＧ２ 例,ＰＴ－ ＨＧ潜伏期３８ ～６２ 天,平均４５ 天;抗－ ＨＧＶ 最早检出时间为输血后３８ 天,最迟为９６ 天,平均为６３.５ 天;ＰＴ－ ＨＣ发病率为４.９％ （５／１０２） ,５ 例ＰＴ－ ＨＣ 中４ 例输入抗－ ＨＣＶ 阳性血,１ 例输入单纯ＡＬＴ异常血,ＰＴ－ ＨＣＶ 感染率为１００ ％ ,证实ＨＧＶ 可经血传播,ＨＧ 的慢性化程度较高,ＨＧＶ可形成慢性携带;抗－ ＨＣＶ 阳性血具有很强的传染性。     

聚合酶链反应检测再生障碍性贫血清中乙型和丙型肝炎病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３７例非肝炎相关再生障碍性贫血（ＮＨＡＡ）和１８例肝炎相关再生障碍性贫血（ＡＨＨ）血清中的乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶ ＤＮＡ）、丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶ ＲＮＡ）。结果显示：ＮＨＡＡ的ＨＢＶ ＤＮＡ检出率为１３．５％（５／３７），ＨＡＡ为２２．２％（４／１８），两比较Ｐ＞０．０５。ＮＨＡＡ的ＨＣＶ ＲＮＡ检出率为２．７％（１／３７），ＨＡＡ为３８．９％（７／１８     

HCV在肝病患者中的感染模式及其免疫状况研究

对４１６例病毒性肝炎患者进行了抗－ＨＣＶ及其它血清标志物检测，结果共发现５２例抗－ＨＣＶ阳性患者，其中单独抗－ＨＣＶ阳性占２３．０％，与ＨＢＶ感染占４０．４％，与ＨＢＶ、ＨＤＶ感染占９．６％。抗－ＨＣＶ在慢性活动型肝炎、肝硬化中的阳性率分别为３０．４％和２２．７％，明显高于急性肝炎和非甲非乙型肝炎中的阳性率（２．８％、１３．０％），提示ＨＣＶ在促使肝病慢性化及加重病情方面有重要作用。对抗－ＨＣＶ阳性患者外周血Ｔ淋巴细胞分型结果显示：各型丙肝息者ＣＤ＿３、ＣＤ＿４比例均下降，而ＣＤ＿８比例上升，表现为Ｔｈ细胞功能下降，Ｔｓ细胞功能增强，提示细胞免疫功能紊乱是丙肝患者高慢性化率的免疫学基础。     

HCV不同编码区抗体检测意义的临床研究

目的：研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）不同编码区抗体检测的临床意义。方法：采用ＨＣＶ核心区合成肽ＣＰ１０、ＣＰ９及非结构区基因重组抗原５－１－１,Ｃ１００检测了１５８例丙型肝炎病人相应抗体抗－ＣＰ１０、抗－ＣＰ９,抗－５－１－１及抗－Ｃ１００。同时检测ＨＣＶ ＲＮＡ、ＡＬＴ。另选３５例健康体检者作对照。结果 四种抗体于输血后４．５￣８周均可检出,于病后４￣８周依次达９２．６％、８８．９％、５９．３％及２     

乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞及血清内HBV－DNA的检测及其意义

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测急性和慢性乙肝患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中的ＨＢＶ－ＤＮＡ，阳性率为６３．８％。其中，急肝患者阳性率为７８．６％；慢迁肝患者为５６．３％；慢活肝患者为５７．１％。ＰＢＭＣ中ＨＢＶ－ＤＮＡ与血清ＨＢＶ－ＤＮＡ和ｅ抗原有一致性，但ＨＢｅＡｇ阴性者中也有部分患者的ＰＢＭＣ中有ＨＢＶ－ＤＮＡ存在。本法消除了血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＰＢＭＣ自身ＤＮＡ的干扰，并且与传统分子杂交方法相比，工作量大大减少。     

正常人右胸头胸导联心电图特征

目的评价一种新的右胸导联心电图：头胸（ＨＣ）导联心电图的应用价值。方法对６４例正常人描记同时间、同部位的Ｗｉｌｓｏｎ导联（Ｖ３Ｒ～Ｖ７Ｒ）和ＨＣ导联（Ｈｖ３Ｒ～Ｈｖ７Ｒ）图形。结果两种导联方法心电图均无ＳＴ段抬高；ＨＶ５Ｒ～ＨＶ７Ｒ直立Ｐ波多于Ｖ５Ｒ～ｖ７Ｒ（Ｐ均（０．０５）；病理Ｑ波（Ｑ≥１／４Ｒ，ｔ＞０．０４秒）或Ｑｒ型波在Ｖ４Ｒ为６％，Ｖ５Ｒ为５６％，Ｖ６Ｒ为６２％，Ｖ７Ｒ为６５％，Ｔ波直立者仅１２％，然而ＨＣ导联均为Ｒ型或石型，Ｔ波直立者达８８％。Ｑ波出现率在Ｖ５Ｒ和ＨＶ５Ｒ、Ｖ６Ｒ和ＨＶ６Ｒ、Ｖ７Ｒ和ＨＶ７Ｒ间呈显著差异（Ｐ均＜０．００１），直立Ｔ波出现率在Ｖ３Ｒ～Ｖ７Ｒ和ＨＶ３Ｒ～ＨＶ７Ｒ间亦有明显差异（Ｐ波＜０．０１）。根据图形特征，ＨＣ导联右胸图形可分为３型：（１）ＨＶ３Ｒ～ＨＶ７Ｒ呈Ｒ型伴Ｔ波直立者占５５％；（２）ＨＶ３Ｒ～ＨＶ５Ｒ为ｒＳ型，ＨＶ６Ｒ和ＨＶ７ＲＲ型伴Ｔ彼直立者占３３％；（３）ＨＶ３Ｒ～ＨＶ７Ｒ均呈ｒＳ型伴Ｔ波平坦者占１２％。结论由于ＨＣ导联右胸心电图在健康人群中表现为正常的Ｐ－ＱＲＳ－Ｔ波群，故有益于右室疾病的诊断。     

肝癌患者庚型肝炎病毒感染血清学研究

采用抗－ＨＧＶ酶联免疫试验（ＥＩＡ）对１６０例肝细胞癌（ＨＣＣ）和１３０人健康人群进行了检测，结果抗－ＨＧＶ阳性率分别为１４．３８％和２．３１％，表明在不同人群中存在庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染；ＨＣＣ患者抗－ＨＧＶ阳性率明显高于健康人群，显示ＨＧＶ感染与ＨＣＣ发生有关；同时在抗－ＨＧＶ阳性ＨＣＣ患者中ＨＢＶ感染率高达８２．６１％，提示ＨＧＶ和ＨＢＶ重叠感染可增加ＨＣＣ的发生.     

聚合酶链反应检测再生障碍性贫血血清中乙型和丙型肝炎病毒

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测了３７例非肝炎相关再生障碍性贫血（ＮＨＡＡ）和１８例肝炎相关再生障碍性贫血（ＨＡＡ）血清中的乙型肝炎病毒ＤＮＡ（ＨＢＶＤＮＡ）、丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）。结果显示：ＮＨＡＡ的ＨＢＶＤＮＡ检出率为１３．５％（５／３７），ＨＡＡ为２２．２％（４／１８），两者比较Ｐ＞０．０５。ＮＨＡＡ的ＨＣＶＲＮＡ检出率为２．７％（１／３７），ＨＡＡ为３８．９％（７／１８），两者比较Ｐ＜０．０１。丙型肝炎相关再生障碍性贫血的预后较差。提示：ＨＣＶ感染与ＨＡＡ关系密切。     

输血后丙型肝炎前瞻性调查

１９９０－１９９１年在河北省甲乙两县用前瞻性方法调查了输血后肝炎、甲县献血员在献血前筛查ＡＬＴ和ＨＢｓＡｇ，观察了６４名受血者；乙县献血员献血前不筛查任何指标，观察了９０名受血者。结果输血后肝炎发生率，甲县为２１．９％，乙县为４４．４％；输血后抗－ＨＣＶ阳转率分别为１８．８％和４５．６％；其中输血后丙型肝炎分别为１４．１％和４１．１％。ＡＬＴ首次异常距输血平均时间，甲县为５１．９±２０。９天，乙县为４８．２±１６．８天，抗－ＨＣＶ阳性受血者为３５．９±１７．９天。抗－ＨＣＶ阳转距输血平均时间，甲县４２．４±１５．９天，乙县３８．４±１１．８天。输入抗，ＨＣＶ阳性或阴性血的受血者，ＨＣＶ总感染率分别为８８．２％（４５／５１）和７．８％（８／１０３），其中输血后丙型肝炎发生率分别为７８．４％（４０／５１）和５．８％（６／１０３）。既往ＨＣＶ隐性感染者输血后丙型肝炎发生率为５２．４％（１１／２１）。