培养大鼠皮层星形胶质细胞牵张损伤模型

目的建立培养大鼠皮层星形胶质细胞牵张损伤模型。方法取１～２天新生大鼠皮层细胞原代培养，经纯化后星形细胞传代培养于乳胶膜培养皿中，采用计算机控制的牵张损伤装置致伤，通过电镜形态学检察和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、台盼蓝染色定量检测确定损伤程度。结果不同的驱动压力可使乳胶膜牵张变形，导致培养细胞不同程度损伤。电镜可见伤后胞体和突起断裂，线粒体致密，嵴减少，微丝、微管减少。随驱动压力增加，ＬＤＨ释放量和台盼蓝染色定量逐渐增高。结论培养细胞牵张损伤为在细胞水平研究创伤性损伤的有用模型，星形胶质细胞是研究体外细胞损伤较理想的细胞。     

流体剪切应力对模拟微重力下MG-63细胞骨架系统的影响

目的观察水平回转模拟微重力(modeled microgravity,MMG)后人骨肉瘤MG-63细胞受流体剪切应力(flow shear stress,FSS)作用后细胞骨架的改变,探讨模拟微重力情况下骨质丢失的细胞学机制。方法 MG-63成骨细胞采用回转器水平回转培养48 h模拟微重力效应,同时设静止培养为对照组。之后,细胞随机分为两组,一组利用流室系统实施FSS,FSS设为1.5 Pa,作用时间60 min,另一组无FSS作用。细胞经过免疫荧光染色后,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架系统的变化。结果 FSS作用后,MG-63细胞微丝和微管的形态和分布均发生变化,微丝可见多束状排列,荧光强度增强,出现粗的应力纤维;微管可见其极性中心移向细胞质外缘,细胞外层荧光量加重,有少量束状结构出现。MMG后,MG-63细胞的细胞骨架发生解聚和重排,微丝向核周集聚;微管发生断裂,变短,弯曲等变化。MMG后,再给予FSS刺激,微丝未能形成应力纤维,仅见微丝、微管在应力方向有拉长。结论 1.5 Pa,60 min流体剪切应力未能在回转模拟微重力后成骨细胞内诱导形成应力纤维。     

体外培养星形细胞创伤后继发低氧二次损伤动物模型的建立

目的 建立体外培养星形细胞牵张损伤后继发低氧二次损伤动物模型。方法用计算机控制,以不同压力牵张损伤培养于硅胶膜培养皿上的大鼠星形细胞,并于牵张损伤后立即予以1小时低氧应激,用乳酸脱氢酶（LDH）和台盼蓝定量检测星形细胞在不同条件下和不同时相点的损伤程度。结果 不同程度的牵张压力可导致不同程度的细胞损伤,通过控制牵张压力可以调控损伤的程度;LDH与台盼蓝检测的结果明显相关;动态观察结果显示LDH的释放高峰主要在1小时之内;单纯短暂低氧应激后星形细胞LDH释放无明显升高,与正常对照组相比无显著性差异（P〉0．05）。但牵张损伤后复合低氧应激后,LDH释放量明显升高,与单纯牵张损伤组相比较,有显著性差异（P〈0．01）。结论 创伤后低氧可显著增加体外培养星形细胞的损伤程度,此模型可用于体外研究创伤后低氧二次打击的机制。     

模拟微重力对大鼠嗜铬细胞瘤细胞形态及其生长的影响

目的研究回转是否影响PC12细胞内蛋白质的羰基化和硝基化水平,进而影响细胞骨架和形态;细胞内活性氮水平升高是否会影响PC12细胞的增殖分化。方法观察并测定了静置对照组和回转组细胞的细胞形态和细胞密度的变化,采用免疫荧光标记和RT—PCR技术研究了回转对细胞骨架蛋白Actin羰基化和Tubulin硝基化以及nNOS和iNOS的mRNA和蛋白表达的影响;并利用流式细胞术检测了细胞周期的改变,初步探讨了这些改变和一氧化氮合酶之间的关系。结果细胞骨架蛋白发生硝基化和羰基化的改变,但回转组细胞骨架形态变化不明显,PC12细胞的微丝回转后明显伸长;回转后,细胞密度显著增加,细胞周期中DNA合成的S期明显缩短。结论结果表明水平回转模拟微重力并不改变PC12细胞形态,相反还有利于细胞的生长,其机制可能与一氧化氮合酶的表达上调有关。     

γ射线照射人正常肝细胞染色体损伤的修复

目的研究人类正常肝细胞经γ射线诱导染色体损伤的动态修复。方法应用早熟染色体凝集技术对人类正常肝脏细胞经γ射线照射导致的染色体损伤后48h内的动态修复过程进行研究。结果照射后原初染色单体断裂和等点染色单体断裂数随着照射剂量的增加而增多，染色单体断裂显著多于等点染色单体断裂；经过24h的继续培养，这两种类型的损伤都有不同程度的修复，约50％染色单体断裂得到修复，而等点染色单体断裂的修复率最多为15％；经过48h的照射后培养，染色体损伤的水平与24h相比没有显著差异。结论肝细胞经γ射线照射后染色体损伤的主要形式是染色单体断裂，易于修复；虽然等点染色单体断裂数量较少，但修复困难。提示等点染色体断裂是细胞经γ射线照射后死亡和癌变的一个重要因素。     

重组人肝活素(HPS)的制备及其对四氯化碳诱导肝细胞损伤的保护作用研究

目的 肝活素(hepassocin,HPS)是一种具有促肝细胞生长,保护肝细胞免于损伤的肝特异性生长因子,研究其保护机制将为肝病的防治机制提供重要的实验依据.方法 通过真核表达系统获得重组人HPS,通过EdU掺入实验检测其活性.用四氯化碳(CCl4)建立肝细胞损伤模型,在此基础上用不同浓度HPS进行处理或干涉内源HPS,检测细胞上清中转氨酶、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽转移酶的变化.结果 制备的HPS纯度达到95％以上,具有良好的促细胞增殖活性.10％CCl4处理可致肝细胞损伤,HPS处理可显著降低转氨酶及LDH水平,增加SOD及谷胱甘肽转移酶的水平;干涉HPS则显著增加转氨酶及LDH水平,降低SOD及谷胱甘肽转移酶的水平.结论HPS可通过增强肝细胞的抗氧化能力减轻肝细胞损伤.     

培养大鼠皮层星形胶质细胞牵引损伤模型

目的 建立培养大鼠皮层星形胶质细胞牵张损伤模型。方法 取１－２天新生大鼠皮层细胞原代培养，经纯化后星形细胞传代培养于乳胶膜培养皿中，采用计算机控制的牵张损伤装置致伤，通过电镜形态学检察和乳酸脱氢酶，台盼蓝染色定量检测确定损伤程度。结果 不同的驱动压力可使乳胶膜牵张变形，导致培养细胞不同程度损伤。     

兔视神经间接损伤的视神经组织压观察

目的　通过观察兔视神经间接损伤后视神经组织压的变化 ,探讨视神经间接损伤后继发性损伤机制。　方法　一侧视神经致伤后 2 4h ,采用微穿刺法分别记录损伤侧及对侧球后 2mm处视神经组织压的变化 ,并取测压开始后 40～ 6 0min的平均压力值进行分析比较。　结果　视神经间接损伤后 2 4h ,损伤侧视神经组织压 (0 .315± 0 .334 )kPa(1kPa =7.5mmHg)显著高于对侧 (- 0 .0 85± 0 .2 13)kPa (P <0 .0 1)。　结论　视神经间接损伤后视神经组织压显著增高 ,提示有必要实施视神经减压术。     

海马神经元损伤后PTEN表达水平与AMPA受体亚基表达定位变化的研究

目的 探讨海马神经元损伤过程中第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)表达水平的变化与谷氨酸(Glu)的α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚基表达定位变化的关系.方法 选用新生SD大鼠原代培养海马神经元,建立神经元牵张损伤模型,采用Western blot和TUNEL染色检测神经元损伤各时相点PTEN表达的变化以及AMPA受体各亚基在细胞中的表达定位变化.结果 神经元牵张损伤后,PTEN的表达增加,细胞总蛋白中AMPA受体GluR1、GluR2、GluR3亚基的表达水平损伤前后差异无统计学意义,但细胞膜中的AMPA受体GluR2亚基在牵张损伤后明显降低.结论 海马神经元受到机械性牵张损伤后,细胞内PTEN水平与膜表面GluR2亚基表达变化相反.提示PTEN磷酸酶可能参与了AMPA受体中GluR2亚基的转运和再聚合过程.     

海马神经元损伤后PTEN表达水平与AMPA受体亚基表达定位变化的研究

目的 探讨海马神经元损伤过程中第10染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)表达水平的变化与谷氨酸(Glu)的α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)受体亚基表达定位变化的关系.方法 选用新生SD大鼠原代培养海马神经元,建立神经元牵张损伤模型,采用Western blot和TUNEL染色检测神经元损伤各时相点PTEN表达的变化以及AMPA受体各亚基在细胞中的表达定位变化.结果 神经元牵张损伤后,PTEN的表达增加,细胞总蛋白中AMPA受体GluR1、GluR2、GluR3亚基的表达水平损伤前后差异无统计学意义,但细胞膜中的AMPA受体GluR2亚基在牵张损伤后明显降低.结论 海马神经元受到机械性牵张损伤后,细胞内PTEN水平与膜表面GluR2亚基表达变化相反.提示PTEN磷酸酶可能参与了AMPA受体中GluR2亚基的转运和再聚合过程.     

大鼠胸部撞击伤肺损伤模型的建立

目的 建立大鼠胸部撞击伤肺损伤模型。方法 采用小型多功能生物撞击机,以250kPa、350kPa、400kPa、500kPa驱动压力使撞击弹头对大鼠右侧胸部致伤,形成肺损伤。结果 肺损伤程度与驱动压力大小明显相关,其中400kPa驱动压力可以造成重度肺损伤,并在对侧形成继发性肺部损伤,而500kPa组早期死亡率高达80％。结论 用小型多功能生物撞击机以400kPa驱动压力可以复制出较标准 的大鼠重度肺损伤模型,且操作比较简便,模型可靠,重复性好, 适合研究选用。     

内毒素诱导产生的一氧化氮介导体外肝细胞损害

为弄清ＮＯ在ＬＰＳ所致肝损害中的作用。采用ＬＰＳ扩体外肝细胞,Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞单独及联合培养,观察ＮＯ产生情况及培养肝细胞形态改变。结果显示：ＬＰＳ刺激后各组培养上清ＮＯ产物水平显著升高,尤其Ｋｕｐｐｆｆｅｒ细胞单独培养及肝细胞／Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞联合培养升高更加显著,分别约为对照组１０倍和８倍,并且联合培养组中肝细胞形态出现明显改变,巾壁肝细胞变小,变圆,核内染色质致密,结块,部分染色质边集,     

大鼠轴索损伤后视网膜神经节细胞和少突胶质细胞内Tau蛋白的表达

目的 观察大鼠轴索损伤后视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)及少突胶质细胞(oligodendrocytes,OLs)内Tau蛋白表达的变化,探讨Tau蛋白与轴索损伤后病理变化的关系. 方法 光镜下观察正常对照组、单纯视神经牵拉伤组、单纯热应激处理组和热应激预处理牵拉伤组大鼠视神经、RGCs、OLs的形态学变化,免疫组化染色检测各组大鼠RGCs及OLs中Tau蛋白的表达情况. 结果 牵拉伤后视神经轴索、RGCs及OLs的形态发生明显的病理变化,热应激预处理再致伤后上述病理改变有显著改善.单纯牵拉伤可使RGCs及OLs中Tan蛋白的表达增加,单纯热应激处理后Tau蛋白的表达不受影响,热应激预处理后再致伤使Tau蛋白的表达明显减弱. 结论 神经元及神经胶质细胞共同参与了轴索损伤后的病理过程.Tau蛋白表达变化可能与迟发性轴索断裂及迟发性神经元凋亡有关.热应激能使Tau蛋白表达减弱和延后,减轻细胞骨架的损害.     

209例肝脏损伤的流行病学特征及临床分析

目的：总结创伤性肝破裂的流行病学特征并探讨其临床特点及救治效果。方法：总结分析我科1988－1999年收治209例肝破裂病例的临床资料。本组Ⅲ级以上严重肝脏损伤108例（51．7％），手术治疗186，保守治疗23例。结果：手术治疗组186例，治愈169例，18例发生并发症，其中死17例。保守治疗组23例中死亡1例。结论：严重的伤情和治疗的延误是导致本组肝外伤死亡的两大主要因素。外科手术仍是治疗创伤性肝破裂的主要措施；保守治疗应严重掌握适应证。     

模拟微重力诱导小鼠成骨细胞微丝变化对碱性磷酸酶及骨钙蛋白的影响

目的 研究模拟微重力诱导小鼠成骨细胞微丝结构改变对碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）及骨钙蛋白（osteocalcin,OCN）的影响,探讨失重导致骨质疏松的机制.方法本研究以已建株的小鼠成骨样细胞株（MC3T3-E1）作为对象,以回转器模拟微重力效应.实验将细胞分为4组：模拟微重力组、0.5 μg/ml细胞松弛素B组、模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组及正常重力组（对照组）.培养48 h后,利用异硫氰酸荧光素鬼笔环肽（fluoresceine isothiocyanate phalloidin,FITC-phalloidin）进行免疫荧光染色,在激光共聚焦显微镜下观察各组细胞微丝的变化;同时用ALP试剂检测各组细胞培养液内ALP的酶活性,采用ELISA法检测各组细胞裂解液中OCN的表达量.结果 除正常重力组外,其余各组细胞微丝结构都出现了不同程度的解聚,张力纤维减少,失去方向性,以模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组改变最为明显.和正常重力组比较,其余各组ALP的酶活性和OCN的表达量均成下降趋势（F=17.23、121.91,P〈0.01）,且模拟微重力＋0.5 μg/ml细胞松弛素B组与模拟微重力组和0.5 μg/ml细胞松弛素B组这两组之间的差别都有统计学意义（P〈0.05）.结论 微重力影响成骨细胞ALP的酶活性及OCN的表达可能与微重力诱导细胞骨架微丝解聚相关.     

体外培养大鼠脑皮质星形胶质细胞液压冲击损伤模型

 目的 建立体外培养大鼠脑皮质星形胶质细胞液压冲击损伤模型.方法 将30只新生24 h内Sprague-Dawley(SD)大鼠脑皮质制成单细胞悬液后原代培养于8个玻璃培养瓶,经纯化后传代于80个培养皿中,随机分为5组,各16个;以不同的液压损伤细胞0.5 h后,光镜下观察各组细胞形态学变化,Hoechst33342/PI荧光染色和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测细胞的损伤程度.结果 体外培养星形胶质细胞生长状态良好,纯度达(94.9%±1.2%);不同大小的冲击压力可导致细胞不同程度的损伤,形态学变化明显;随冲击压力增大,红色荧光细胞数量(P＜0.01)和LDH释放量逐渐增高(P＜0.01).结论 经改良的细胞液压冲击损伤模型是体外研究创伤性损伤的有效模型.     

冲击波复合四氧化二氮染毒致大鼠肺损伤的特点及可能机制研究

目的　探讨冲击波复合四氧化二氮 (N2 O4)染毒致大鼠冲毒复合伤肺组织损伤特点及其分子机制。方法　采用Wistar雄性大鼠复制冲击伤、N2 O4染毒及复合效应动物模型 ,于伤后 3,6 ,12 ,2 4 ,4 8及 72小时活杀动物 ,进行主要器官病理形态学检查 ,血气分析并采用H&E及SP免疫组化技术观察大鼠肺组织损伤病变特点及c fos蛋白表达的变化和肥大细胞的数量。结果　三组动物动脉血氧分压 (PaO2 )均在伤后 2～ 6小时内显著下降 ,以冲击伤 +N2 O4组动物下降最为显著 ,重者死于呼衰。三组动物的主要病理形态学均有改变 ,以冲击伤 +N2 O4组动物最甚 ;免疫组化显示 ,冲击伤组和N2 O4组动物c fos蛋白表达均明显增加 ,而冲击伤 +N2 O4组动物c fos表达持续呈强阳性 ,其阳性部位以支气管上皮、血管内皮和单核细胞为主。另外 ,大鼠肺组织出现大量的肥大细胞。结论　单纯冲击伤和单纯N2 O4中毒组动物早期血气均有显著变化 ;N2 O4冲毒复合伤对大鼠血气的影响最为显著。另外 ,三组动物的主要病理形态学均有改变 ,以冲击伤 +N2 O4组动物最甚 ;实验结果表明 ,c fos蛋白表达及出现大量的肥大细胞参与了冲毒复合伤对大鼠肺损伤的加重过程。提示对冲毒复合伤进行早期救治 (在染毒致伤后 2～ 6小时内 )的重要性。     

重力变化对表皮生长因子诱导的信号转导的影响

随着航空航天技术的进一步发展,重力的变化导致人体各种生理效应就越来越引起人们的重视,尤其是重力变化对细胞因子信号转导的影响近年来研究较多。表皮生长因子（EGF）诱导的信号转导会对多种细胞产生增殖效应,因此一直是多年来的研究热点。其早期的细胞生物学变化包括：受体慕集、细胞球形化和早期的基因表达。经过对EGF诱导人类A431细胞系的研究发现：在微重力条件下EGF诱导的c-fos和c-jun的基因表达降低,而这一结果是由于EGF受体和蛋白激酶C介导的信号转导通路的变化引起的。同时发现细胞骨架的主要成分肌动蛋白微丝系统也和这种信号转导途径有关,提示细胞骨架是细胞重力敏感性信号转导通路的重要组成成分。     

亚低温对颅脑损伤后脑细胞内钙离子浓度及脑水肿影响的实验研究

目的　研究大鼠颅脑损伤后亚低温治疗对脑细胞内钙离子浓度的影响 ,揭示亚低温保护脑细胞钙离子通道及减轻脑水肿的作用。方法　通过硬膜外自由落体打击法 ,制备颅脑损伤动物模型 ;采用激光扫描共聚焦显微镜技术 ,测定颅脑损伤后脑细胞内钙离子浓度变化及脑组织含水量的变化。结果　亚低温组大鼠伤后 6、2 4、4 8小时脑细胞内钙离子浓度明显低于同时相常温组大鼠 (P <0 .0 1) ,伤后 4 8小时亚低温组脑水肿程度较轻 (P <0 .0 5 )。结论　亚低温能够减少颅脑外伤后大量胞外钙离子移入胞内 ,减缓脑细胞内钙超载 ,减轻脑水肿程度