大剂量吡哆醇的睾丸毒性体内外效应的比较研究

目的：　探讨大剂量吡哆醇（ＰＮ）的大鼠睾丸的毒性及可能机制。方法：采用腹腔注射和Ｓｅｒｔｏｌｉ－ｇｅｒｍ 细胞共培养两种模式,观察睾丸及副性腺变化。结果：注射１５ 天３００ｍ ｇ 和６００ｍ ｇ 组睾丸及副性腺萎缩,光镜和电镜下见精子细胞脱落、精母细胞变性坏死、精子释放延迟和异形精子,Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞肿胀、微管稀少,内质网异位和扩张等。注射３０ 天效应更为明显。体外实验显示ＰＮ剂量与生精细胞脱落显著相关,并与Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞骨架的变化一致。结论：　吡哆醇可能主要通过损伤Ｓｅｒｔｏｌｉ细胞,引起睾丸结构和功能改变。     

大剂量吡哆醇对大鼠睾丸一氧化氮合酶和细胞凋亡的影响

为探讨大剂量吡哆醇(PN)对睾丸结构和功能损害的分子机制,研究其对睾丸一氧化氮合酶(NOS)和细胞凋亡的影响.实验采用吖啶橙荧光染色法显示睾丸细胞DNA和RNA,黄递酶(NADPH-d)组织化学法显示睾丸细胞NOS,采用原位缺口平移技术检测睾丸生精细胞凋亡的数目.结果表明 ,与对照组相比,注射PN 3 d,大鼠睾丸间质细胞NOS反应活性轻度增加;注射PN 7 d后,大鼠睾丸细胞DNA和RNA荧光显色明显减弱,间质细胞NOS活性明显增强,睾丸生精细胞凋亡数目(38.41±8.20)较相应对照组(11.39±4.86)明显增多,差异有显著性(P＜0.01).提示大剂量PN腹腔注射后,大鼠睾丸细胞NOS活性和凋亡细胞数目明显增加,这些变化可能是PN损害睾丸结构和功能的分子机制之一.     

乌头碱对大鼠睾丸支持细胞的毒性研究

[目的]研究乌头碱对体外培养的大鼠睾丸支持细胞的毒性。[方法]无菌制备18～20日龄SD大鼠的睾丸支持细胞,通过Tris-Hcl低渗处理进行细胞纯化,采用HE染色、瑞氏-吉姆萨染色进行细胞鉴定。然后用MTT法(四唑盐比色法)检测浓度为0、5×101、5×102、5×103、5×104 ng/ml的乌头碱对大鼠睾丸支持细胞活力的影响,并用乳酸试剂盒检测乌头碱对支持细胞乳酸分泌功能的影响。[结果]MTT结果显示:乌头碱作用24h后,各剂量组对大鼠睾丸支持细胞的增殖均有促进作用;作用48 h后,低剂量乌头碱(5×101、5×102ng/m)对大鼠睾丸支持细胞的增殖有促进作用;高剂量乌头碱(5×103、5×104 ng/ml)抑制支持细胞的增殖。乳酸测定结果显示:乌头碱作用24 h后,各剂量组乳酸分泌量均增加,乌头碱剂量为5×104 ng/ml时,乳酸分泌量增加率降低。[结论]低剂量乌头碱可促进大鼠睾丸支持细胞的增殖及乳酸分泌量的增加,高剂量乌头碱可抑制大鼠睾丸支持细胞的增殖,降低其对乳酸分泌的刺激作用。     

用均匀设计方法优化Sertoli-germ细胞培养条件的研究

采用均匀设计方法对Ｓｅｒｔｏｌｉｇｅｒｍ细胞共培养条件进行优化。结果显示，所观察的三个因素（３或６个水平）中，培养温度和ｐＨ值对生精细胞脱落的影响最为明显，而小牛血清浓度的影响较少。回归方程提示该培养系统的适宜条件，逐步回归分析剔除了小牛血清浓度的因素，说明不必加入过多小牛血清。此外，用所获回归方程对指标值进行回算，结果提示，以脱落生精细胞数作为培养效果的观察指标比较稳定，实验误差较小     

邻苯二甲酸二丁酯对大鼠睾丸支持细胞的影响

目的探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对睾丸支持细胞超微结构和功能的影响。方法将6周龄雄性SD大鼠随机分成0、250、500和1000mg/kg组,每组16只。给予DBP灌胃,分别于染毒2周和4周后各处死8只动物。采用放射免疫法测定血清卵泡刺激素,逆转录聚合酶链反应测定雄激素结合蛋白mRNA和抑制素αmRNA的相对表达量,用透射电镜观察支持细胞的超微结构。结果DBP染毒4周后,卵泡刺激素表现出明显的上升趋势,250和1000mg/kg组与对照组比较差异有统计学意义;精子头计数和每日精子生成量呈现出单一的下降趋势,500和1000mg/kg组与对照组比较差异有统计学意义。雄激素结合蛋白mRNA和抑制素αmRNA表达水平随着DBP染毒剂量的增加呈现出明显的下降趋势,无论是染毒2周还是4周,500和1000mg/kg组与对照组比较差异均有统计学意义。0、250、500和1000mg/kg组的雄激素结合蛋白mRNA相对表达量在染毒2周后分别为0.89±0.15、0.85±0.23、0.54±0.17和0.52±0.16,染毒4周后分别为0.76±0.16、0.73±0.17、0.47±0.14和0.38±0.14;抑制素αmRNA的相对表达量在染毒2周后分别为0.88±0.16、0.61±0.12、0.48±0.15和0.47±0.11,染毒4周后分别为0.75±0.19、0.56±0.16、0.53±0.08和0.45±0.10。电镜观察结果显示,1000mg/kg组支持细胞胞浆中初     

二硫化碳对大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因表达的影响

[目的]研究二硫化碳（carbondisulfide,CS：）染毒对大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因表达的影响。[方法]选用22～24d龄清洁级雄性SD大鼠,建立睾丸生精-支持细胞体外共培养体系,将细胞分为4组：1个对照组和3个不同浓度csz染毒组（1、2、4μmol／mL）,提取RNA,应用荧光实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测Cyto C、 Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9、Aif、EndoG、Smac、IAPS、 Bax、 Bcl-2 mRNA表达水平。[结果]大鼠睾丸支持一生精共培养细胞中,CS2染毒可导致CytoC、Smac、IAPS、Caspase-3、BaxmRNA的表达水平和Bax／Bcl-2mRNA表达水平值均明显升高（P〈0．05）,同时使Apaf-1、Aif、Bcl-2和EndoGmRNA的表达水平明显下降（P〈0．05）。[结论]CS2染毒可影响大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因的表达,并且这一机制与CS2导致生殖损伤相关。     

敌鼠钠对大鼠睾丸的毒性作用

目的：观察敌鼠钠对大鼠睾丸的毒性作用。方法：以ＳＤ雄性大鼠为试验动物,一次性灌胃染毒不同剂量敌鼠钠,７ｄ后聚睾丸制作 石蜡切片,观察对大鼠睾丸结构的影响;同时对附睾内精子进行活性测试。结果①敌鼠钠致使活动精子百分率明显下降,特别是１．２５和５．０ｍｇ／ｋｇ体重大鼠的活动精子降到５０％以下;②敌鼠钠可使大鼠睾丸的曲细精管管壁萎缩、变形,生精上皮细胞胞层和精子层厚度明显变薄,精母细胞,精子细胞和精子均     

稀土氟化钕对雄性大鼠睾丸毒性的影响

目的探讨稀土氟化钕(Nd F3)对雄性大鼠睾丸的影响。方法将48只SPF级健康成年雄性SD大鼠随机分为对照组和低、中、高剂量Nd F3染毒组,每组12只,采用非暴露式气管注入法建立大鼠损伤模型。3个染毒组分别灌注不同剂量的Nd F3溶液,染毒剂量分别为70、210、280 mg/kg,对照组予以相应体积的生理盐水,初次染毒间隔15 d后再次染毒,于第42天称重后处死。检测大鼠血清睾酮含量及附睾精子数量、精子存活率、精子畸形率。采用电感耦合等离子体质谱法测定大鼠睾丸组织Nd F3水平,在普通光镜下观察大鼠组织病理学改变,采用TUNEL法进行睾丸细胞凋亡检测,用透射电子显微镜进行睾丸组织超微结构检测。结果与对照组比较,各染毒组大鼠睾丸内Nd F3含量均增加,差异有统计学意义(P0.05);与对照组相比,低、高剂量组大鼠血清睾酮含量升高,中剂量组睾酮含量下降,且高剂量组睾酮含量低于低剂量组、高于中剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,中、高剂量组大鼠精子数量、精子存活率降低,精子畸形率、睾丸细胞凋亡指数升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论低剂量Nd F3颗粒物可促进大鼠睾丸发育,但中剂量Nd F3可损伤睾丸组织,进而可能影响雄性大鼠生殖功能。     

图象采集系统在大鼠睾丸毒性病理诊断中的应用探讨

目的：利用图象采集系统对二乙氧基乙醇引发的睾丸毒性进行病理定量分析,使组织形态变化结果的表达更加量化.方法：以400、800、1200、1600 mg/kgBW二乙氧基乙醇经口给予大鼠,连续染毒7 d,对睾丸进行光镜病理组织学检查并利用图象采集系统对睾丸曲细精管直径进行测量.结果：染毒7 d大鼠各组生精过程受到不同程度抑制,睾丸重量明显减轻（P＜0.01）,镜下观察睾丸各级生精细胞,精子发生退行性改变,曲细精管直径测量各染毒组比对照组明显变小（P＜0.01）.结论：利用图象采集系统对大鼠睾丸曲细精管直径测量,与睾/体比、细胞形态观察结果较为一致,对睾丸生殖毒性组织损伤的量化起到一定的作用,可以作为评价睾丸生殖毒性的指标之一.     

邻苯二甲酸二丁酯对F1 代仔鼠睾丸损害的可逆性恢复特性

目的研究和探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对F1代仔鼠睾丸损害是否具有可逆性恢复的特性。方法在宫内暴露和哺乳期(妊娠1d至仔鼠出生21d),每日每kg体重0、50、250和500mg DBP灌胃染毒孕鼠(每组10只),从解剖学、病理学等角度观察DBP对不同发育阶段(出生14、21和70d)F1代雄性大鼠的睾丸损害。结果与对照组相比,虽然不同发育阶段大鼠睾丸重量及系数没有明显统计学意义,但与对照组相比较,250、500mg／L组出生14d大鼠生精上皮变薄,Sertoli细胞数量明显减少(分别减少至对照组的84％和86％),并出现空泡样改变;出生21d时,Sertoli细胞数量和形态基本恢复正常,但有少量生精细胞脱落;至出生70d时,个别大鼠睾丸出现曲细精管变性、生精上皮萎缩等不可逆性损害。结论DBP宫内暴露和哺乳期染毒可损害F1代大鼠睾丸Sertili细胞,但随着仔鼠的发育,DBP致Sertoli细胞损害作用具有部分可逆性恢复的特性。     

乙醇的雄性生殖毒性

40只健康雄性成年SD大鼠随机分为4组,各组每日分别灌胃给予乙醇0、2.7、4.5、7.5g/kg,连续13周。测定各组大鼠血清睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、促卵泡刺激素(FSH)含量,光、电镜观察睾丸组织的形态学改变,同时测定睾丸线粒体中丙二醛(MDA)的含量。结果显示各乙醇组动物血清T水平较对照组明显降低(P<0.01),血清LH、FSH含量亦明显降低(P<0.05)。睾丸的组织病理学观察显示染毒动物睾丸生精细胞核固缩、变性,曲细精管腔中脱落细胞增多;超微结构显示睾丸生精上皮结构破坏,支持细胞和各级生精细胞均有退化变性,且损伤程度与乙醇剂量明显相关。乙醇4.5、7.5g/kg组动物睾丸线粒体MDA含量明显高于对照组(P<0.05)。说明乙醇既可以直接作用于睾丸,引起生精细胞损伤和睾丸类固醇合成抑制,还可使下丘脑垂体轴生殖内分泌功能受损。脂质过氧化可能是乙醇致睾丸损伤的机制之一。     

壬基酚对大鼠睾丸和血清中某些生化指标的影响

目的研究环境类激素壬基酚对大鼠睾丸和血清中某些生化指标的影响.方法以壬基酚50、100、200 mg/kg剂量对Wistar雄性大鼠连续经口染毒35 d,检测大鼠睾丸组织匀浆及血清中β-葡萄糖醛酸苷酶(β- G )、乳酸脱氢酶同工酶(LDHx)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA) 含量,血中睾酮(T)、雌二醇(E2)水平.结果 50 mg/kg处理组睾丸组织中β-G和200 mg/kg处理组血清中LDHx活性显著高于对照组(P＜0.05);200 mg/kg处理组睾丸组织中SOD活性及血中T含量显著低于对照组(P＜0.05).结论壬基酚可能会诱发大鼠睾丸和血清某些生化指标的改变,表明对睾丸有损伤.     

Effect of antispermatogenic agents on cell marker enzymes of rat Sertoli cells in vitro

OBJECTIVE: To examine the role of Sertoli cells in the antispermatogenic action of two nonsteroidal male contraceptive compounds (CDRI-84/35 and gossypol) by evaluating their effect on some key parameters of Sertoli cell function in vitro. METHODS: Primary cultures of Sertoli cell were established from 18-day-old rat testis and treated on day 5 with different concentrations (1.0, 0.1, 0.01, and 0.001 mM) of either CDRI-84/35 or gossypol in vitro. Lactate (secretion), along with beta-glucuronidase, gamma-glutamyl transpeptidase, lactate dehydrogenase (LDH) and aromatase activities, was measured in these cells to examine the functions targeted by antispermatogenic agents in Sertoli cells. RESULTS: CDRI-84/35 significantly affected Sertoli cell parameters (stimulation in most of the cases) that are important for germ cell development like lactate secretion, LDH activity, aromatase activity (estradiol secretion) and so on. Gossypol in comparison to CDRI-84/35 had a more severe effect on Sertoli cells with complete inhibition of enzyme activities at higher concentrations. CONCLUSION: It is probable that the antispermatogenic action of CDRI-84/35 and gossypol is routed through Sertoli cells by disruption of important cell functions that support spermatogenesis in vivo. However, the two compounds appear to have different course of action in Sertoli cells, ultimately leading to spermatogenic failure.     

己烯雌酚影响雄性胎鼠睾丸引带ACTIN和PCNA表达的研究

目的研究环境雌激素(EEs)的经典代表己烯雌酚(DES)对雄性胎鼠睾丸引带肌动蛋白(ACTIN)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法怀孕雌性昆明小鼠60只,随机分成6组,实验组于孕9~17 d分别给予DES 0、25、50、100、200μg.kg-1.d-1,二甲基亚砜(DMSO)作为溶剂,对照组给予等体积NS。孕17 d处死母鼠取出胎鼠,取下腹部,常规固定、制片,应用免疫组织化学方法检测睾丸引带ACTIN和PCNA的表达。结果实验组雄性胎鼠睾丸引带发育较差,ACTIN、PCNA表达明显降低(P<0.05),均有显著的剂量效应关系。结论DES降低雄性胎鼠睾丸引带ACTIN和PCNA的表达,从而影响睾丸引带的收缩及增殖活性,这可能是EEs影响睾丸引带发育及导致隐睾的机制。     

香烟烟雾暴露对大鼠睾丸组织雄激素结合蛋白mRNA及蛋白表达水平的影响

目的探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸结构及睾丸组织雄激素结合蛋白(ABP)mRNA及蛋白表达水平的影响。方法清洁级成年雄性SD大鼠160只,随机分为对照组和低(10支)、中(20支)、高(30支)剂量染毒组,各组大鼠分别染毒2、4、6、8、12周,共16组,每组10只。实验组采用呼吸道静式染毒,每日1次,每次30 min。观察大鼠睾丸组织结构,采用RT-PCR及Western Blot法检测睾丸组织ABP mRNA及蛋白表达水平。结果染毒组大鼠睾丸病理切片可见,生精细胞排列紊乱疏松,支持细胞呈现空泡化。大鼠睾丸组织ABP mRNA和蛋白表达水平均随染毒剂量的增加而降低,染毒4周及12周后中、高剂量组ABP基因mRNA表达水平低于对照组,染毒6周后高剂量组ABP基因mRNA表达水平低于对照组,染毒4~8周后高剂量组ABP蛋白表达水平低于对照组,染毒12周后低、中、高剂量组ABP蛋白表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论香烟烟雾暴露可引起雄性大鼠睾丸组织受损,且睾丸组织ABP基因mRNA及蛋白的表达水平下降。     

2-乙氧基乙醇急性染毒大鼠血清和睾丸某些抗氧化指标的变化

目的 观察2-乙氧基乙醇(2-Ethoxythanol,EE)急性染毒对SD大鼠血清和睾丸某些抗氧化指标的变化，探讨EE致睾丸损伤的可能机制。方法 选择健康雄性SD大鼠，体重180-220g。随机分为对照组、EE800、1600和3200mg／kg组4组，每组24只。采取一次性灌胃染毒。于灌胃后12、24、48和72h，将各组动物随机处死6只，留取动物血液、睾丸，制备血清和睾丸匀浆，测定血清和睾丸匀浆脂质过氧化物(LPO)水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性，以及血清铜蓝蛋白(CP)活性。结果 与对照组比较，各染毒组睾／体比明显下降(P＜0.05)，睾丸匀浆LPO水平和血清CP活性增高。染毒12、24h，血清CAT、睾丸匀浆CAT和SOD活性增高，而染毒48、72h后，血清CAT、睾丸匀浆CAT和SOD活性显著降低(P＜0.05)。EE各染毒组血清LPO水平和SOD活性变化不明显。结论 推测EE毒作用的靶器官可能是睾丸，睾丸抗氧化功能的改变是EE致睾丸毒性的可能机制。