淋球菌主要外膜蛋白的分离纯化及其单克隆抗体的制备

目的 建立快速，敏感，特异的淋球菌感染实验诊断方法。方法 采用溴化己二烯苯基三乙基胺-乙醇沉淀法提取淋球菌外膜蛋白复合物。以Z3.14,EDTA萃取外膜蛋白，经二乙氨基乙酸纤素-SepharoseCL-6B层析纯化获得主要外膜蛋白（PI），并按免疫杂交瘤技术建立分泌抗PI单克隆抗体（McAb)的杂交瘤细胞株。结果 获得了WI群淋球菌的PIA和WⅡ/WⅢ群淋球菌的PIB，SDS-PAGE测得PIA的分子量为35200，PIB的分子量为36700。建立了可持续，稳定分泌抗PIAMcAb的杂交瘤细胞2株和抗PIBMcAb的杂交瘤细胞3株，5株杂交瘤细胞培养上清液的抗体滴度为1：64-1：256，其诱生的BALB/c小鼠腹水中的抗体滴度为1：4096-1：16384，与淋球菌呈高效价反应。与脑膜炎双球菌等其他抗原不发生反应。结论 获得的高纯度PI及其McAb为建立快速，敏感，特异的淋球菌感染实验诊断方法奠定了基础。     

淋球菌nsp A基因原核重组质粒的构建及表达

目的:构建奈瑟淋球菌表面蛋白A(Neisseria surface protein A,Nsp A)基因原核表达载体.并诱导Nsp A融合蛋白在宿主菌B121(DE3)中表达.方法:根据基因库报道的淋球菌nsp A基因序列,设计合成一对引物:以淋球菌基因组DNA为模板,PCR扩增淋球菌Nsp A基因;将PCR扩增产物与带有谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferases,GSTs)基因的高效原核表达质粒pGEX4T-1定向重组,构建原核表达重组体pGEX4T-1-Nsp A;重组体经酶切、PCR鉴定和核酸序列分析正确后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)及Western blot技术检测重组蛋白表达情况.结果:重组体pGEX4T-1-Nsp A经BamH Ⅰ、Xhol Ⅰ双酶切、PCR和核酸序列分析表明:成功构建淋球菌Nsp A基因原核表达重组体pGEX4T-1-Nsp A;SDS-PAGE及Western blot分析显示:重组Nsp A基因在原核系统中得到了表达,融合蛋白GST-Nsp A约44 ku.结论:淋球菌NspA基因在大肠杆菌中得到了表达,为进一步研究淋球菌Nsp A蛋白免疫学性能和研制淋球菌疫苗提供了研究基础.     

蛋白表达在支原体研究中的应用

目的探讨蛋白表达技术在支原体研究中的作用。方法以解脲脲原体（ｕｒｅａｐｌａｓｍａｕｒｅａｌｙｔｉｃｕｍＵＵ）为例,根据所研究ＵＵ的目的ＤＮＡ片段设计一对特异性引物,经ＰＣＲ扩增得到目的ＤＮＡ,克隆后运用表达质粒载体ｐＧＥＸ ２Ｔ在ＩＰＴＧ诱导下成功诱导了蛋白的表达,并用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测其抗原活性。结果所表达的蛋白具有很好的抗原活性。结论蛋白表达应用于支原体研究中,为研究支原体的致病性与种类或型别的关系提供了重要的手段。实验中我们体会到：（１）在设计引物时,要注意避开ＵＧＡ,可用ＵＧＧ代替。（２）ＩＰＴＧ的浓度从０．１ｍｍｏｌ／Ｌ～１ｍｍｏｌ／Ｌ均有报道,我们实验证实两种浓度在诱导蛋白表达中无差别,因而推荐使用０．１ｍｍｏｌ／Ｌ。（３）蛋白诱导的时间以４～４．５ｈ为最佳。     

HIV—2gag蛋白在大肠杆菌中的表达纯化

目的 在原核系统中高效表达及纯化人Ⅱ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－２）ｇａｇ蛋白,以期作为检测试剂的原料。方法 采用基因工程手段将编码Ⅱ型人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－２）核心蛋白的部分ｐ５５ｇａｇ１（Ｇ１）及全部ｐ５５ｇａｇ２（Ｇ２）基因片段分别克隆到原核高效表达载体ｐＥＴ２８ａ的Ｔ７噬菌体启动子下游,构建出重组表达质粒ｐＥＴ２８ａＧ１和ｐＥＴ２８ａＧ２,将其转入不同的受体菌后,ＩＰＴＧ诱导下进行表达。经Ｓ     

黑素瘤抑制性活性蛋白在恶性黑素瘤中的表达

黑素瘤抑制性活性蛋白（MIA）是近年来在研究黑素瘤细胞株HTZ19时分离的抑制黑素瘤细胞增殖的因子，其基因与在软骨细胞内发现的CD—RAP基因相同。在对转基因小鼠的研究中观察到，MIA主要在胚胎的软骨细胞内表达．在乳腺胚胎发育过程中也有该基因的短暂表达，乳腺发育成熟后即消失，并且发现MIA在部分乳腺癌及胰腺癌、胃癌中有一定表达。[第一段]     

热休克蛋白在皮肤病领域中的研究现状

热休克蛋白是一组在进化上高度保守的蛋白质，广泛存在于自然界原核、真核细胞中，正常时在细胞中发挥重要的生理功能，应激时呈高表达，起到应激保护作用。文中主要就其在皮肤和皮肤病中的表达及意义作一扼要介绍。     

早幼粒细胞白血病基因及其蛋白在银屑病表皮中的表达

目的探讨早幼粒细胞白血病(PML)基因及其蛋白在银屑病发病中的作用机制。方法用原位杂交和免疫组化方法检测正常组织、进行期银屑病皮损及非皮损区PMLmRNA和蛋白表达。结果在正常人皮肤组织中,PMLmRNA和蛋白不表达(阴性);在非皮损区,PMLmRNA和蛋白在基底层和基底上层细胞核内低表达(52%,36%);在银屑病皮损周边PMLmRNA和蛋白在基底层和基底上层细胞核内呈灶状表达(72%,64%);在银屑病皮损中心表皮中,PMLmRNA和蛋白高表达(96%,88%)。结论PML基因和其蛋白在银屑病表皮中的过表达提示,PML基因可能与银屑病表皮细胞的过度增殖相关。     

人乳头瘤病毒6b型E7基因的克隆和表达

目的　克隆人乳头瘤病毒 6b型E7(humanpapillomavirus 6bE7)基因 ,构建原核表达载体 ,并进行蛋白表达和纯化。方法　将HPV 6bE7基因经PCR扩增和亚克隆 ,与GST原核表达载体pGEX 4T 2重组 ,转化E .coliP2 3 92 菌表达蛋白 ,经GlutathioneSepharose 4B亲和层析纯化GST HPV 6bE7融合蛋白。结果　限制性酶切和DNA测序表明 ,HPV 6bE7DNA正确克隆于 pGEX 4T 2多克隆位点。经IPTG诱导表达的GST HPV 6bE7融合蛋白主要存在于可溶性上清。经亲和层析 ,每升诱导菌回收 8.4mg融合蛋白 ,10 %SDS PAGE分析融合蛋白表观分子量约 3 7kDa。结论　成功构建了HPV 6bE7基因原核表达载体 ,并大量表达和纯化了GST HPV 6bE7融合蛋白     

凋亡调控蛋白在银屑病患者外周血淋巴细胞中的表达

有资料表明 ,淋巴细胞凋亡发生异常是导致免疫紊乱和一些疾病发生的重要原因［１］。我们应用流式细胞计数分析了凋亡调控蛋白Ａｐｏ １、Ａｐｏ ２．７和Ｂｃｌ ２在银屑病患者外周血淋巴细胞（ＰＢＬＣ）中的表达 ,旨在从凋亡的角度探讨银屑病的免疫发病机制。一、病例和方法（一）病例 :寻常型银屑病患者３０例 ,男２６例 ,女４例 ;年龄２１～５６岁 ,平均３３．３岁 ;病程１个月至１５年 ,平均３年。所有患者均于治疗前后即进行期和缓解期各抽血１次 ,抽血前均以ＰＡＳＩ给患者的病情程度计分［２］。健康对照２０例 ,男１７例 ,女３例 …     

p21与p53蛋白在银屑病皮损中的表达

银屑病是一种皮肤表皮细胞良性增生性疾病,其发病机理仍不清楚。近年来发现ras基因和p53基因与肿瘤细胞的增生有关[1～3]。为探讨ras基因和p53基因与银屑病皮损发生、发展的关系,我们分别对13例银屑病患者皮损内ras基因表达的p21蛋白和p53基因表达的p53蛋白进行了免疫组化研究。一、病例和方法1.病例资料:随机选择1996年5～12月门诊就诊的13例进行期斑块状银屑病患者,其中男8例,女5例;年龄19～50岁;病程半年至10年。诊断依据临床表现及组织病理学检查。4例正常人对照来自皮肤外伤患者创口周边外观正常皮肤。2.试剂:鼠抗人多克隆p21抗体、鼠…     

人乳头瘤病毒6型L1蛋白在原核表达体系中的表达

目的：比较人乳头瘤病毒6型(HPV6)L1序列的变异，并筛选有代表性的分离标本进行重组HPV6 L1蛋白的表达和抗原性检测。方法：根据不同临床特征选择主要致病型HPV6型8个分离标本，扩增L1基因，构建重组测序质粒。分析L1区的氮基酸序列变异状况，选择L1序列变异较大的临床分离标本，通过对HPV6 L1基因的起始和终止端进行基因定点改造，连于表达载体质粒pET32a，在原核表达体系表达重组HPV6 L1蛋白，并进行L1蛋白的抗原性检测结果：HPV6型8个分离标本中有6个分离标本L1区的蛋白质一级结构中分别有1～3个氨基酸发生变异，原核表达重组L1蛋白可与HPV6L1抗体发生特异反应。说明HPV6 L1序列的变异并未影响L1蛋白的抗原性。结论：本临床分离标本可提供发展HPV6 L1蛋白和病毒样颗粒(VLP)疫苗的候选目的基因，并可通过原核表达体系表达重组HPV L1蛋白进行L1蛋白的免疫学分析，以及L1蛋白疫苗的研究。     

周期素依赖性激酶4,视网膜母细胞瘤蛋白在银屑病皮损中的表达

周期素依赖性激酶４、视网膜母细胞瘤蛋白在银屑病皮损中的表达陆前进①卢放根②文海泉①颜兰香①张其亮①张桂英①余桂英①周期素依赖性激酶４（ｃｙｃｌｉｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｋｉｎａｓｅＣＤＫ４）是细胞周期因子依赖性激酶家族（ＣＤＫｓ）中的一员，ＲＢ蛋白是视...     

P53基因蛋白在皮肤鳞癌中的表达

应用免疫组化ＡＢＣ法，用多克隆抗体ＣＭＩ和单克隆抗体ＰＡｂ１８０１检测５０例皮肤鳞癌及癌旁上皮中Ｐ５３基因蛋白的表达。结果显示在正常上皮与癌旁轻、中度不典型增生上皮中未见Ｐ５３基因蛋白的表达，在１２．５％（２／１６）癌旁重度不典型增生上皮中和５６％（２８／５０）鳞癌中有Ｐ５３基因蛋白的表达，在分化差的鳞癌Ⅲ～Ⅳ级中有５５．５６％（５／９）的病例Ｐ５３阳性表达细胞超过１０％，相反分化较好的鳞癌Ⅰ～Ⅱ级中Ｐ５３阳性表达细胞少于１０％，提示Ｐ５３基因蛋白的表达与鳞癌发生密切相关，它是肿瘤进展为恶性的标志，并且在鳞癌进展阶段呈稳定增加。     

Survivin及p63蛋白在鳞状细胞癌皮损中的表达及其意义

目的：研究皮肤鳞癌组织中Survivin蛋白和p63蛋白的表达及其意义：方法：采用免疫组化法检测60例皮肤鳞癌组织中Survivin蛋白和p63蛋白的表达，探讨两者与鳞癌组织分化程度的关系。结果：Survivin蛋白在皮肤鳞癌组织中阳性表达率为73．3％，其表达越强，组织分化程度越低。p63在高分化鳞癌中呈环状分布于癌巢周围，低分化鳞癌中阳性细胞增多，分布紊乱，其表达在癌的不同分化中差异有显著性。结论：皮肤鳞癌中Survivin蛋白的表达与分化程度有密切关系，它的高表达提示肿瘤预后不良，也可能成为治疗皮肤鳞癌的重要新靶点。p63过度表达的癌细胞是获得了更具增殖、侵袭和间变能力的细胞。     

成纤维细胞活化蛋白在瘢痕疙瘩组织中的表达及意义

 目的:了解成纤维细胞活化蛋白（FAP）在瘢痕疙瘩组织中的表达情况,探讨FAP在瘢痕疙瘩发病机制中的作用。方法:采用免疫组化染色技术检测30例瘢痕疙瘩组织（病例组）和20例正常皮肤组织（对照组）中FAP的表达强度,并比较两组间及瘢痕疙瘩不同临床分级之间FAP表达阳性率的差异。结果:病例组瘢痕疙瘩组织中FAP在成纤维细胞和血管内皮细胞内表达,阳性率为73.33％;对照组正常皮肤组织中未见FAP表达,两组间FAP表达阳性率比较,差异有统计学意义（  X²=26.19,P=0.001）;瘢痕疙瘩临床分级中,轻度与重度之间及中度与重度之间比较,FAP表达阳性率差异均有统计学意义（P值分别为0.002、0.006）。结论:瘢痕疙瘩组织中FAP表达阳性率明显高于正常皮肤组织;瘢痕疙瘩临床分级越严重,FAP表达阳性率越高;FAP可能参与瘢痕疙瘩的发病机制,针对FAP的干预可能有助于瘢痕疙瘩的治疗。     

沙眼衣原体主要外膜蛋白基因的克隆、序列测定和真核表达

沙眼衣原体(Ct)引起的泌尿生殖道感染已成为许多国家和地区最常见的性传播疾病之一。其感染特点隐匿、迁延,症状不特异,相当一部分对治疗不敏感,易复发,最终出现一系列严重的并发症和后遗症。治愈Ct感染存在很多困难,因此预防Ct感染尤为重要。     

环状RNA泛素关联蛋白2在子宫内膜癌中的表达及其与患者预后的关系

目的 探究环状RNA(circ RNA)泛素关联蛋白2(UBAP2)在子宫内膜癌中的表达及其与患者病理特征和预后的关系。方法 选取2017年3月至2020年3月海南省儋州市中医医院收治的82例子宫内膜癌患者的手术切除标本为子宫内膜癌组,选取同期因子宫肌瘤或子宫脱垂等行手术治疗的82例患者的正常子宫内膜标本为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测circ RNA UBAP2表达水平;随访子宫内膜癌患者3年生存情况;COX回归分析影响子宫内膜癌患者预后的危险因素。结果 与对照组相比,子宫内膜癌组circ RNA UBAP2表达水平显著下降(P<0.05);circ RNA UBAP2水平与患者组织学分级、病理分期、有无淋巴结转移、子宫肌层浸润深度有关(P<0.05);生存分析发现,circ RNA UBAP2低表达的子宫内膜癌患者中位生存时间为13.32个月,显著低于circ RNA UBAP2高表达的患者(22.43个月)(P<0.05);COX回归分析发现,子宫肌层浸润深度>1/2、有淋巴结转移、circ RNA UBAP2低表达是子宫内膜...     

p16和pRb在皮肤鳞癌中的表达及其意义

目的：探讨p16、pRb蛋白在皮肤鳞癌中的表达及他们的相互关系和意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测40例原发性皮肤鳞癌绀织中p16、pRb的表达：结果：p16、pRb阳性表达率分别为37．5％和52．5％。两者在皮肤鳞癌中的表达呈显著负相关（P=0．011）。结论：在原发性皮肤鳞癌中存在p16和pRb的异常表达现象，两者的表达相互抑制，呈显著负相关。     

金黄色葡萄球菌肠毒素A基因在C57BL/6小鼠淋巴细胞中的表达

目的 通过复制缺陷型腺病毒载体的介导,将金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因转染入C57BL/6小鼠淋巴细胞中,观察基因表达产物对B16细胞的作用。方法 通过MTT法直接测定重组腺病毒颗粒感染的淋巴细胞的增殖情况,采用双抗体夹心ABC-ELISA法,测定淋巴细胞培养上清液中白介素2的水平。MTT法测定活细胞数目,以了解活化的C57BL/6小鼠淋巴细胞对B16细胞的杀伤效应。结果 加入不同滴度的重组腺病毒颗粒后,C57BL/6小鼠淋巴细胞明显增殖;同时淋巴细胞培养上清液中白介素2水平也明显增加。重组腺病毒颗粒转染的C57BL/6小鼠淋巴细胞可明显杀伤B16细胞,效/靶比越高,杀伤效应越明显。结论 SEA基因可以在C57BL/6小鼠淋巴细胞中表达,并且表达产物能够活化C57BL/6小鼠淋巴细胞,进而杀伤B16细胞。