Tca-8113细胞系单细胞体外增殖的实验观察

目的:观察舌鳞癌Tca-8113细胞系的单细胞体外增殖能力,寻找肿瘤干细胞存在的依据,从而为鉴定其表面标记物奠定理论基础。方法:采用有限稀释法对舌鳞癌Tca-8113细胞进行单细胞体外培养,了解舌鳞癌细胞(Tca-8113)的分裂、增殖特点。结果:单细胞培养8d后,舌鳞癌Tca-8113细胞株中具有持续增殖能力的细胞占肿瘤细胞的10.85%,12d后,继续分裂增殖的细胞比例为5.23%,16d后,仅有5.09%的细胞继续增殖。结论:舌鳞癌Tca-8113细胞具有异质性,仅有少量细胞具有持续增殖能力,而这部分细胞是否就是舌鳞癌Tca-8113细胞的肿瘤干细胞。还有待进一步的实验研究证实。     

STAT3促进舌鳞癌细胞侵袭与转移的实验研究

目的:研究信号转导和转录激活因子3(STAT3)在人舌鳞状细胞癌组织中的表达,探讨STAT3对舌鳞癌细胞侵袭与转移的促进作用。方法:免疫组织化学染色法检测STAT3在舌鳞状细胞癌组织中的表达,利用小分子干扰RNA(siRNA)体外抑制舌鳞癌细胞系Tca-8113中STAT3的表达,运用体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变。结果:STAT3表达与肿瘤临床分期(P=0.029)及淋巴结转移(P=0.009)密切相关;siRNA抑制STAT3表达后,细胞侵袭能力明显下降。结论:STAT3促进舌鳞癌细胞侵袭与转移,STAT3 siRNA可以抑制肿瘤细胞的体外侵袭能力。     

JSI-124靶向性阻断STAT3通路对舌鳞癌Tca-8113细胞增殖抑制的研究

目的:观察选择性JAK/STAT3抑制剂JSI-124对舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖抑制以及胞质转录因子STAT3蛋白表达的影响。方法:用MTT、流式细胞仪分别检测Tca-8113细胞在不同浓度JSI-124及不同时间作用下,细胞增殖及凋亡的情况;Western Blot法检测作用后细胞中STAT3蛋白及其磷酸化蛋白表达的变化,并对所得结果进行统计分析。结果:JSI-124可以抑制舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖,其抑制作用随着时间的延长和药物浓度的增加而增强;STAT3蛋白的表达无明显变化,而磷酸化激活状态的STAT3蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:选择性JAK/STAT3抑制剂JSI-124可明显抑制舌鳞癌Tca-8113细胞的增殖并诱导其细胞凋亡。     

p75神经营养蛋白受体阳性舌鳞状细胞癌细胞的生物学特性研究

目的 对流式细胞仪分选获得的p75神经营养蛋白受体（p75NTR）阳性舌鳞状细胞癌细胞进行生物学特性研究。方法 通过流式细胞术检测舌鳞状细胞癌细胞系Tca-8113和Cal-27中p75NTR阳性细胞的表达。对流式细胞仪分选获取的 p75NTR阳性细胞进行单克隆培养、四甲基偶氮唑盐比色法及划痕实验检测,以未分选细胞为对照,分析 p75NTR阳性细胞的生物学特性。结果 舌鳞状细胞癌细胞株Tca-8113、Cal-27中,p75NTR阳性细胞的比例分别为3.1％和1.9％。与未分选的细胞相比,p75NTR阳性细胞的单克隆形成能力更高（ Tca-8113细胞, P=0.024;Cal-27细胞,P=0.009）;单克隆 p75NTR阳性细胞再培养 2周后, p75NTR阳性细胞率分别降为14.5%（Tca-8113）和5.8%（Cal-27）;p75NTR阳性细胞体外增殖能力显著增强,且具有明显的侵袭迁移能力。结论 p75NTR阳性舌鳞状细胞癌细胞具有肿瘤干细胞的特性。     

α5β1在舌鳞状细胞癌中的表达及其在细胞粘附与运动中的作用

目的：探讨舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞纤维连接蛋白受体α5β1的表达，及α5β1在Tca-8113细胞粘附、运动中的作用。方法：培养Tca-8113细胞，采用间接免疫荧光检测细胞α5β1的表达；应用抗α5β1抗体结合细胞表面纤维连接蛋白受体α5β1，分析α5β1在细胞粘附、运动行为中的作用。结果：α5β1在舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞表面呈点状和团块状分布；抗α5β1抗体可以显著抑制细胞在纤维连接包被表面的粘附和运动行为。结论：舌鳞状细胞癌细胞存在α5β1的表达，α5β1在舌鳞状细胞癌的浸润、转移中可能起着重要的作用。     

野生型p53基因对口腔鳞状细胞癌细胞系生长的影响

目的 :研究 p5 3基因对口腔鳞状细胞癌细胞系生长的影响。 方法 :以人鳞状细胞癌细胞系Tca83和Tca8113为实验对象 ,将载有人野生型p5 3cDNA的重组腺病毒 (Ad5CMV -p5 3 )感染鳞状细胞癌细胞系 ,观察Ad5CMV -p5 3对鳞状细胞癌细胞生长的影响。 结果 :鳞状细胞癌细胞系Tca83和Tca8113被转染Ad5CMV -p5 3病毒后 ,均可以诱导其发生调亡 ,使细胞系生长受到明显的抑制。结论 :Ad5CMV -p5 3介导的野生型p5 3基因治疗口腔鳞状细胞癌可能是一种有效的辅助手段     

人舌鳞状细胞癌细胞系WU-TSC-1的建立及鉴定

目的:建立1株人舌鳞状细胞癌细胞系WU-TSC-1并鉴定其基本生物学特性。方法:将所获得的舌鳞状细胞癌患者手术切除的组织块标本进行原代培养,传代后建立舌鳞状细胞癌细胞系WU-TSC-1,显微镜下观察并记录其细胞形态和生长特性,行基因组DNA短串联重复序列分析,并对其倍增时间、凝集反应、细胞表面标记物、染色体核型和裸鼠成瘤能力等特性进行检测。结果:WU-TSC-1可稳定传代50余代,为人源肿瘤细胞,无其他细胞交叉污染。细胞呈卵圆形或方圆形,失去接触抑制。染色体核型为非二倍体染色体。体外细胞倍增时间为51.15 h,体内具有成瘤能力。结论:该研究成功建立了1株人舌鳞状细胞癌细胞系WU-TSC-1,为揭示舌鳞状细胞癌的发病机制,探索诊断指标和治疗方案提供了新的实验细胞系。     

血竭素高氯酸盐对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖及凋亡的影响

目的:研究血竭素高氯酸盐(Dracorhodin perchlorate,DP)对舌鳞癌细胞Tca-8113增殖和凋亡的影响并初步探讨其相关机制。方法:以舌鳞癌细胞Tca-8113为研究对象,采用CCK-8、流式细胞术分析及Western Blot等方法检测不同浓度DP对Tca-8113细胞的增殖、凋亡及核因子E2-相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶 1(heme oxygenase 1,HO-1)蛋白表达的变化。采用SPSS17.0统计软件对实验结果进行分析。结果:CCK-8检测表明,与空白对照组相比,DP可以显著抑制细胞增殖,且对细胞的增殖抑制作用有时间-剂量依赖性(P<0.05)。流式细胞术及Western Blot检测结果显示DP可以促进细胞凋亡(P<0.05),并提高Nrf2、HO-1在Tca-8113细胞中的表达。结论:DP能抑制舌鳞癌细胞Tca-8113增殖并诱导其发生凋亡,其作用可能与Nrf2/HO-1信号通路激活有关;可能成为抗口腔癌药物。     

三氧化二砷抑制口腔鳞癌细胞增殖的研究

目的:体外试验研究三氧化二砷对口腔鳞癌的可能治疗作用。方法:以人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113细胞为研究对象之一,采用台盼蓝拒染法计数活细胞,观察三氧化二砷作用于Tca8113细胞的量效关系、时效关系。采用平皿法姬姆萨染色观察三氧化二砷对Tca8113细胞的克隆形成抑制作用。以舌鳞状细胞癌临床新鲜标本组织块为研究对象之二,消化后细胞悬液与各浓度三氧化二砷、一定浓度的MTX、5Fu、PYM体外培养后MTT法测定临床舌癌细胞生长抑制率。结果:三氧化二砷对Tca8113细胞、临床舌癌细胞均有显著生长抑制作用。1μmolAs2O3台盼蓝染色活细胞计数Tca8113细胞生长抑制率28.57%,克隆形成抑制率31.01%;3μmolAs2O3浓度Tca8113细胞生长抑制率58.36%,克隆形成抑制率76.63%;5μmolAs2O3浓度Tca8113细胞生长抑制率86.03%,克隆形成抑制率91.30%。体外药敏测定:1μmol浓度As2O3的临床舌癌细胞的生长抑制率39.5%,3μmol浓度As2O3为47.2%,5μmol浓度As2O3为89%,MTX为36.5%,5Fu为41.3%,PYM为58.16%。临床药敏标准一般大于30%为敏感,PYM大于50%为敏感。结论:体外试验表明三氧化二砷可显著抑制人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113细胞的生长,对临床癌细胞也表现了良好的抗增殖作用,三氧化二砷可能成为治疗口腔鳞癌的有效药物     

七氟烷通过MAPK/STAT3信号通路诱导人口腔舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞凋亡

目的:探究七氟烷对人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞的凋亡机制.方法:用2～10 μmol/L七氟烷作用体外培养人舌鳞状细胞癌Tca-8113细胞.MTT实验检测细胞活力;Hochest/PI双染法以及流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测MAPK/STAT3信号通路中相关蛋白表达含量的变化以及通过加入...     

Effect of MAb225 on radiosensitivity of Tca8113 tongue squamous cell carcinoma]

OBJECTIVE: The purpose of this study was to invest the effect of epidermal growth factor receptor monoclonal antibody MAb225 on radiosensitivity of tongue squamous cell carcinoma cell Tca8113. METHODS: Tca8113 cells were treated with different concentrations of MAb225. Radiation dose survival curve was generated from clonogenic survival assay. SERPD0 and survival faction (SF2) was analysed by single hit multi-target (SHMT) radiobiological model using RADMEDIC software. Nude mice with Tca8113 tumor xenografts were treated with MAb225, radiation treatment or both of them. Tumor responses were assessed by tumor growth delay, and t test was used for statistical analysis. RESULTS: MAb225 enhanced the radiosensitivity of Tca8113 cells. SERD0 of Tca8113 cells treated with 0.5 mg/L MAb225 was 1.23. The survival fraction of cells treated with MAb225 was significantly decreased. Tumor radioresponse could be enhanced by MAb225 (P < 0.05). CONCLUSION: MAb225 could enhance radiosensitivity of tongue squamous cell carcinoma cell.     

舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株醛脱氢酶高表达亚群细胞生物学特性的研究

目的检测醛脱氢酶（ALDH）在舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中的表达,研究ALDH高表达（ALDHhig）亚群细胞的生物学特性。方法采用流式细胞仪检测Tca8113细胞株中ALDH的表达;分选ALDHhig与ALDHlow亚群细胞,体外培养观察其增殖、分化及在无血清培养基中的成球能力;利用抑制消减杂交（SSH）技术筛选ADLHhig亚群细胞高表达基因。结果舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中仅有1.3%的细胞高表达ADLH;分选出的ADLHhig肿瘤细胞增殖能力高于ALDHlow细胞和未分选的肿瘤细胞;随着培养时间的延长,体外培养的ALDHhig细胞比例逐渐下降至分选前水平;ALDHhig亚群细胞能够在无血清培养基中悬浮生长形成肿瘤球,且高表达干细胞相关基因。结论舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中有一小群细胞高表达ALDH,具有干细胞的生物学特性;ALDH可能是舌鳞状细胞癌干细胞的标志物之一。     

Celecoxib enhances the inhibitory effect of cisplatin on Tca8113 cells in human tongue squamous cell carcinoma in vivo and in vitro

J Oral Pathol Med (2010) 39 : 579–584 Background: Overexpression of cyclooxygenase‐2 (COX‐2) is associated with carcinogenesis, invasiveness, and metastasis of malignant tumors. Inhibition of COX‐2 is one hot topic of research in prevention and treatment of malignant tumors. Because of the selective and specific inhibition on the activity of COX‐2, the roles of celecoxib in prevention and treatment of tumors have attracted broad attention in recent years. In this study, we investigated the inhibitory effect of celecoxib combined with cisplatin on the proliferation of human tongue squamous cell carcinoma cell line Tca8113 in vivo and in vitro. Methods: Human tongue squamous cell carcinoma tumor cells Tca8113 and a mouse model with Tca8113 cells were used to study the growth inhibition of cisplatin enhanced by celecoxib. Drug treatment of Tca8113 in vitro and mice bearing xenografts in vivo were used. The level of COX‐2 expression was detected by Western blotting. Sensitivity of cells to drug treatment was analyzed by MTT assay. Results: Treatment of Tca8113 cells with cisplatin (CDDP) had less effect on the expression of COX‐2, whereas the COX‐2 expression was significantly down‐regulated after treatment with celecoxib alone or in combination with CDDP for 24 h. In addition, the combination of celecoxib with CDDP was also able to inhibit the Tca8113 line heterotransplanted in Balb/c nude mice. Conclusions: Those findings indicate that a low dose of celecoxib could augment CDDP‐induced growth inhibition of Tca8113 cells and its xenograft in Balb/c nude mice.     

NS-398对Tca8113细胞体外增殖的抑制作用

目的:探讨环氧合酶-2抑制剂NS-398对Tca8113细胞的生长抑制作用。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法,观察NS-398对Tca8113细胞生长的抑制作用,检测NS-398与Tca8113细胞间的时-效关系和量-效关系;通过流式细胞仪(FCM)研究NS-398对Tca8113细胞周期的影响和作用,采用SAS8.1统计软件包进行数据处理,均数比较采用t检验和重复测量方差分析。结果:含0、25、50、75、100、125、150、200μmol/LNS-398的Tca8113细胞培养液,在分别培养48、72、96、120h后,随着作用时间的延长和药物浓度的增加,抑制作用也增强。NS-398在浓度150μmol/L作用96h后,抑制作用明显(药物浓度:P<0.05;时间:P<0.001),NS-398可引起Tca8113细胞G0/G1期细胞的大量增加,S期和G2/M期细胞比例数减少,阻滞细胞生长于G0/G1期(P<0.001)。结论:NS-398可抑制Tca8113细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性;这种作用可能与阻止细胞周期进展有关,NS-398可能在口腔鳞癌治疗中发挥重要作用。     

MAb225对Tca8113舌鳞癌细胞放射敏感性的影响

目的　探索表皮生长因子受体(EGFR)单克隆抗体MAb225对舌鳞癌细胞Tca8113的放射敏感性的调控作 用。方法　不同浓度的MAb225处理Tca8113舌鳞癌细胞,通过集落形成实验单靶多击模型拟合放射生存曲线,分 析细胞的增敏比(SERD0)和存活分数(SF2)的变化。同时,建立裸鼠移植瘤模型,单独及联合应用MAb225和放射处 理裸鼠移植瘤,通过生长延缓实验观察肿瘤生长变化,并进行统计学分析。结果　MAb225有明显的放射增敏作 用,0·5 mg/LMAb225作用后的SERD0为1·23,在一定的范围内,其增敏作用与剂量存在正相关;MAb225明显提高放 射对裸鼠移植瘤的杀伤作用(P<0·05)。结论　MAb225可以提高舌鳞癌细胞Tca8113的放射敏感性。     

高迁移率族蛋白N2抑制口腔鳞状细胞癌增殖作用的体外研究

目的 以人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113为实验模型,初步探讨高迁移率族蛋白N2（HMGN2）抗口腔鳞状细胞癌的作用。方法 大量培养重组人HMGN2表达载体大肠杆菌BL21,用异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷（IPTG） 诱导HMGN2的表达,产物用B-PER GST Fusion Protein Purification Kit进行纯化。在细胞培养基中加入不同质量浓度的HMGN2,通过MTT、Hoechst 33342荧光染色、流式细胞术和Western-blot法检测其凋亡效果及抗凋亡的分子机制。结果 经MTT检测证明HMGN2能显著抑制Tca8113细胞的生长,通过Hoechst 33342荧光染色、流式细胞术和 Western-blot检测证明HMGN2能使Tca8113的细胞形态发生改变,并且能使Tca8113细胞阻滞于细胞周期的S期,促进Tca8113细胞凋亡。结论 HMGN2可以促进人口腔鳞状细胞癌细胞的凋亡。     

RhoA小干扰RNA对舌癌细胞Tca8113增殖、侵袭影响的体外实验

目的 体外实验研究Ras基因家族同源物A(ras homolog gene family,member A,RhoA)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在舌癌转移中的作用.方法 登录Genebank确定人RhoA基因序列,利用RNA干扰技术针对RhoA的基因序列设计4条短链RNA,构建干扰表达载体,利用LipofectamineTM2000介导法将RhoA siRNA转染至舌癌细胞系Tca8113.转染细胞后48 h检测瞬时表达效率,经杀稻瘟菌素筛选及克隆化培养获得稳定抗性克隆转染株后,蛋白质印迹法检测RhoAsiRNA转染后的抑制效应,细胞计数绘制细胞生长曲线以观察RhoA siRNA转染前后细胞株的生长速度;划痕实验和Millicell小室实验检测转染细胞株的迁移力与侵袭力.结果 舌癌细胞转染RhoA siRNA后:RhoA蛋白表达下降;细胞倍增时间从38.0 h延长至45.7 h;细胞克隆形成率由35.2%降低至15.8%;细胞迁移能力减弱;细胞侵袭能力由100%降至58.9%,显著减弱.结论 RhoA siRNA能有效抑制舌癌Tca8113细胞中RhoA的表达,从而降低细胞增殖水平以及细胞侵袭力和迁移力,表明RhoA siRNA具有抑制舌癌细胞生物学特性的能力,提示RhoA在舌癌转移中可能发挥重要作用.     

二氢卟吩e6光动力学疗法对人舌鳞癌细胞株Tca8113的杀伤作用

目的：探讨二氢卟吩e6 （Ce6）光动力学疗法（Ce6-PDT）对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用.方法：向体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞中加入Ce6,浓度分别为5、10、20、50和100μg/ml,孵育1.5h,予波长630nm半导体激光照射,照射的功率密度为100mW/cm2,能量密度分别为0.5、1、2、5、10和15J/cm2,继续孵育6h,用MTS比色法测定细胞存活率.结果：（1）不受光照的条件下,较低浓度Ce6（＜10μg/ml）与细胞共同培养而对细胞的毒性较小,Ce6浓度为20μg/ml时对细胞的杀伤率约为10％.（2）光照条件下,Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,其杀伤作用与Ce6浓度及光照剂量正相关,呈浓度/剂量依赖性（P＜0.01）.结论：Ce62PDT能有效地杀伤体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞;Ce6在较大浓度下对细胞有毒性.     

表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞癌细胞Tca8113的抑制增殖作用

目的:了解表皮生长因子受体抑制剂AG1487对舌鳞癌细胞的抑制增殖作用。方法:应用不同浓度(0、50、100、200nmol/L)的AG1487处理培养的舌鳞癌细胞Tca8113,采用MTT方法和流式细胞技术测定AG1487对细胞生长曲线和细胞周期分布的影响。结果:经不同浓度AG1487处理的肿瘤细胞,随抑制剂浓度的增加,其生长曲线逐渐向下移动,即随浓度的增加,抑制细胞增殖的作用逐渐增强。同时,AG1487使细胞周期的分布发生改变,G1期细胞显著增加,而S期细胞则明显减少;AG1487对细胞周期的影响具有明显的时间和剂量依赖关系。结论:表皮生长因子受体抑制剂AG1487可对舌鳞癌细胞产生明显的增殖抑制作用。     

替尼泊苷诱导Tca8113细胞凋亡及细胞周期阻滞的实验观察

目的：检测替尼泊苷(teniposide,VM-26)的体外抗肿瘤增殖效果并探索其作用机制。方法：以不同浓度的VM-26体外作用Tca8113细胞,应用MTT方法、流式细胞仪、透射电镜和荧光染色等分别检测细胞的生长抑制率、凋亡率及细胞周期分布。使用SAS6．12软件进行单因素方差分析。结果：VM-26和CDDP对Tca8113细胞的半数抑制浓度分别为0．35μg／ml和1．1μg／ml。透射电镜观察细胞形态发生典型的凋亡表现,5.0μg/ml和0．15μg／ml的VM-26作用72h,细胞凋亡率分别为81．01％和17．38％,而细胞周期则分别被阻滞在S期和G2／M期。结论：VM-26可以显著诱导口腔鳞癌细胞凋亡并抑制细胞生长,不同剂量的VM-26对口腔鳞癌细胞周期阻滞的阶段不同。