肾综合征出血热病毒50kD结构蛋白的抗原位点分析

采用23株抗HFRS病毒McAb,以放射免疫沉淀及ELISA等试验,证实HFRS病毒的50kD蛋白为该病毒的核蛋白(NP)。用抗NP的McAb对经亲和层析纯化的NP以ELISA阻断试验进行抗原位点分析,结果表明该蛋白与一般有囊膜病毒的NP相比,有两点明显的不同。一是HFRS病毒的NP上不仅有组特异性抗原位点,而且有型特异性抗原位点,两者都至少分布在2个区域,这些抗原位点及其分布区域之间有部分重叠或比较靠近。二是HFRS病毒的NP上可能存在中和抗原及血凝抗原位点。     

HLAⅠ类抗原的基因芯片分型技术研究

目的：采用DNA芯片技术进行汉族人群HLAⅠ类抗原A、B位点的DNA分型研究，并实现将A、B位点的DNA分型集中于一张芯片上，同时完成。方法：根据HLAⅠ类抗原A、B位点不同基因亚型的独特序列设计探针，制成分型芯片；待检测样品经PER反应标记上荧光之后，与探针在芯片上进行杂交，通过对杂交产生的荧光信号值进行分析，确定样品的HLA-A、B基因亚型。将这一方法应用于220份样本的HLAⅠ类DNA分型并将部分样品进行基因测序。结果：所有样本的HLAⅠ类基因芯片分型均获得成功，无假阳性和假阴性出现，80份样本的重复率为100％，总耗时2．5h。分型结果经双盲验证完全符合。可准确分辨出A位点等位基因20个，B位点等位基因41个，实际检出汉族人群A抗原特异性13个、B抗原特异性32个。结论：基因芯片用于HLAⅠ类A、B分型技术可行，其分辨率高、特异性强、重复性好、操作简便快速、结果直观，可以在一张芯片上同时检测HLA-A、B位点，并实现一张芯片多人份，适合于临床应用。     

双特异性IgG的研究进展

传统的免疫球蛋白只能结合单一特异性的抗原分子，而双特异性抗体的两个抗原结合位点具有不同的特异性，能够结合不同的抗原分子。双特异性抗体在生物医学领域特别是在肿瘤免疫治疗方面已取得了较大成就。鉴于用传统的方法很难大量制备符合临床要求的双特异性抗体，近年来，双特异性抗体片断制备技术进展很快。然而，在双特异性抗体的临床应用中，许多需要其具备完整的IgG形式。因为这种形     

链霉素亲和IgG的发现及在机体中的分布

免疫球蛋白通过Fab端的抗原结合部位可以特异的和抗原结合。但抗原结合部位不是免疫球蛋白中唯一可与其它物质结合的部位,F端、交链区等部位均有不同的结合位点可与细胞膜受体、植物凝集素等相互作用。我们最近发现,链霉素(SM)对部分IgG有较强的亲合能力,其结合位点和IgG Fab端抗原结合部位的特异性无关。具体实验结果概述于下:     

用ELISA检测流行性出血热特异性免疫复合物的初步研究

为检测流行性出血热特异性循环免疫复合物,建立了抗原特异性双抗体夹心ELISA技术。以兔抗EHF IgG包被反应板,使待检标本内循环免疫复合物通过暴露的EHF病毒抗原位点而被结合到固相上,再以辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG进行示踪,从而检出EHF’特异性循环免疫复合物。在228份EHF患者血清中,用胶因素ELISA检出非特异性循环免疫复合物183份,抗原特异性ELISA检出特异性循环免疫复合物188份。本方法特异性强,重复性及稳定性较好,可应用于临床检测。     

腺病毒六邻体蛋白型间线性化抗原位点的研究

目的 对人类腺病毒（adenovirus,AdV)六邻体型间抗原位点的特性进行研究。方法 通过计算机对腺病毒六邻体氨基酸序列进行比较分析，结合抗原性的预测结果和六邻体蛋白三维空间结构的肽段暴露状态，选定了保守性抗原位点进行多肽合成或通过构建重组质粒表达蛋白，将合成的六邻体肽段和表达纯化的蛋白抗原免疫动物后，用免疫印迹和间接免疫荧光方法检测抗血清的免疫特异性，结果 免疫印迹分析显示，抗多肽抗体和抗重组蛋白抗体均与腺病毒的六邻体蛋白特异性识别，间接免疫荧光显示，腺病毒感染HeLa细胞核内荧光着色，并且抗血清有较好的腺病毒型间反应性，合成多肽抗体与含有相同肽段的重组蛋白抗原产生特异性结合。结论 在腺病毒六邻体蛋白中存在有线性化的型间抗原位点，全盛的六邻体多肽和表达重组蛋白可用于诊断价值抗体的研制。     

具胆碱酯酶活性的抗人血清丁酰胆碱酯酶单克隆抗体3A5

目的研究具抗原酶活性的抗人血清丁酰胆碱酯酶单抗3A5的催化特性及活性位点。方法利用酶促反应动力学方法测定3A5的Km及Kcat/Km;根据胆碱酯酶抑制剂对其催化活性的影响情况分析其活性位点。结果3A5催化丁酰胆碱酯酶特异性底物的水解符合米.曼氏方程规律,但Kcat/Km明显小于抗原酶;丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF明显抑制其胆碱酯酶活性,胆碱酯酶活性中心催化位点抑制剂吡啶斯的明及活性中心阴离子位点抑制剂四甲基铵则分别对其产生竞争性及非竞争性可逆抑制。结论3A5具有与抗原酶相似但较弱的催化活性,具有与天然胆碱酯酶相似的活性中心催化位点及阴离子位点。     

TCR BV CDR3谱型与自身免疫性疾病

自身抗原特异性T细胞克隆性增生在自身免疫病的发生发展中起重要作用 ,TCRCDR3区是T细胞直接与抗原接触的位点 ,一种CDR3序列代表一个T细胞克隆 ,通过对TCRBVCDR3谱型分析及序列测定可迅速发现自身免疫性T细胞克隆 ,指导疾病的免疫治疗     

使用PCR-SSP方法检测HLA-DR抗原

目的采用顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)建立人类白细胞抗原DR位点的DNA分型方法.方法合成29个特异性引物和1对阳性对照引物,组成20个PCR反应用于DR位点,建立一步法PCR-SSP.结果所有样本PCR-SSP基因分型获得成功,分型结果经标准DNA,限制性核酸内切酶分析证实符合,特异性和重复性100%.结论 PCR-SSP检测HLA-DR的方法具有快速、准确、特异性高等优点,适合临床应用.     

山西省部分地区汉族人群血小板特异性抗原基因多态性研究

目的研究山西省汉族人群血小板特异性抗原(HPA)基因多态性分布特点,丰富血小板人类遗传学资料,同时为山西地区患者血小板配型提供参考依据。方法本研究使用序列特异性引物-聚合酶链式反应(SSP-PCR)方法,对山西150例汉族成年人进行血小板特异性抗原基因分型检测。结果山西汉族人群血小板特异性抗原HPA 1-17位点中,HPA 1-6,157个位点呈现多态性,基因频率分别是1a 0.997、1b 0.003、2a 0.980、2b 0.020、3a 0.563、3b 0.437、4a0.997、4b 0.003、5a 0.960、5b 0.040、6a 0.970、6b 0.030、15a 0.490、15b 0.510。结论山西省汉族人群血小板特异性抗原有其特有的地域特点,人类血小板特异性抗原基因有明显的地域种族多态性分布规律。     

TCR BV CDR3谱型与自身免疫性疾病

自身抗原特异性T细胞克隆性增生在自身免疫病的发生发展中起重要作用，TCR CDR3区是T细胞直接与抗原接触的位点，一种CDR3序列代表一个T细胞克隆，通过对TCR BV CDR3谱型分析及序列测定可迅速发现自身免疫性T细胞克隆，指导疾病的免疫治疗。     

一对高亲和力抗人肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定

目的 获取抗人肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）的单克隆抗体（McAb）.方法 以人cTnI作为抗原,免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备了抗人cTnI高亲和力、高特异性单克隆抗体.随后采用间接ELISA法测定抗血清效价,用protein G亲和纯化法纯化抗体,抗原竞争ELISA法鉴定抗体亲和力,SDS-PAGE法鉴定纯度,Western blotting鉴定抗cTnI单克隆抗体的特异性,竞争ELISA法分析抗原结合位点.结果 筛选出9株稳定分泌抗cTnI的单抗杂交瘤细胞株,其中A3、A9两株免疫球蛋白亚类均为IgG2a,分泌的抗体纯度高,与CK-MB、cTnT无交叉反应,效价均为：1：1024000,亲和力分别为4.21×10^8mol/L、1.07×10^8mol/L,抗原结合位点不同.结论 成功制备出了一对高亲和力、高特异性抗人cTnI单克隆抗体.     

077 TCR BV CDR3谱型与自身免疫性疾病

自身抗原特异性T细胞克隆性增生在自身免疫病的发生发展中起重要作用，TCR CDR3区是T细胞直接与抗原接触的位点，一种CDR3序列代表一个T细胞克隆，通过对，TCR BV CDR3谱型分析及序列测定可迅速发现自身免疫性T细胞克隆，指导疾病的免疫治疗。     

使用PCR—SSP方法检测HLA—DR抗原

目的　采用顺序特异引物聚合酶链反应 (PCR -SSP)建立人类白细胞抗原DR位点的DNA分型方法 .方法　合成 2 9个特异性引物和 1对阳性对照引物 ,组成 2 0个PCR反应用于DR位点 ,建立一步法PCR -SSP .结果　所有样本PCR -SSP基因分型获得成功 ,分型结果经标准DNA ,限制性核酸内切酶分析证实符合 ,特异性和重复性 10 0 % .结论　PCR -SSP检测HLA -DR的方法具有快速、准确、特异性高等优点 ,适合临床应用 .     

抗人IgA单克隆抗体的特性分析和初步应用

用常规免疫法和脾内直接注射抗原(SIgA)法免疫小鼠,平行作细胞融合实验,建立4株分泌抗人IgA McAb杂交瘤细胞株,所得McAb对人IgA有较高特异性和抗体效价,经免疫印染法表明对α重链呈特异性。用抗原竞争抑制ELISA和ELISA添加试验分析McAb的抗原结合位点,均表明McAb A4与A1b、A3b、A9针对不同的抗原位点。用于检测EB病毒VCA和EA的IgA抗体,显示满意的特异性和敏感性,这将为有关试剂的生产提供稳定的抗体来源。     

HLA基因多态性与多种血液系统疾病相关性的研究进展

人类白细胞抗原(HLA)是人细胞表面的一种特异性抗原,在调控人体特异性免疫应答和决定疾病易感性的个体差异中起着重要作用.HLA与人体多种疾病相关,目前大量的研究发现不同HLA基因位点与不同血液系统疾病之间可能存在重要关联,对疾病的发生、进展、治疗及预后有重要意义.本文综述了国内外关于HLA与淋巴瘤、骨髓异常增生综合征、再生障碍性贫血、特发性血小板减少性紫癜及多发性骨髓瘤等多种血液系统疾病相关性的最新研究进展.     

不育与免疫

一、男性不育与免疫1、精子抗原精于抗原相当复杂。有精子特异性抗原,此外还有血型抗原,组织相容性抗原和精子包被抗原等。(1)精子特异性抗原:精子有不同于其它组织(如睾丸、附睾等)的特异性抗原。Barker 和 Amann(1969)用免疫扩散和免疫电泳技术,发现牛精子有4种精于特异性抗原,其一位于精于头部,另一位于尾部,其余     

双特异性抗体及其在肿瘤诊治上的研究进展

双特异性抗体是含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体,能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁,激发具有导向性的免疫反应,现已成为抗体工程领域的热点,在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景。双特异性抗体可通过多种途径获得,随着分子生物学技术的迅速发展,出现了基因工程双特异性抗体的多种构建模式,并有多种用于肿瘤的临床诊断和治疗试验。     

用抗独特型抗体治疗恶性淋巴瘤(文摘)

用单克隆抗体(McAb)治疗恶性淋巴瘤,理想的抗原分子应具备:①抗原分子存在于恶性细胞表面,在正常细胞不存在,即所谓肿瘤特异性抗原;②全部肿瘤细胞均有抗原分子;③抗原分子仅存在于细胞表面,而不分泌入血;④抗原分子对肿瘤细胞的增殖起重要作用,而免疫细胞的抗原受体具备这些条件。它们相当于T细胞和B细胞性肿瘤表面的免疫球蛋白分子的抗原结合位点,被命名为独特型,用肿瘤细胞作免疫原,该独特型为抗原,可制备出抗独特型抗体(抗-Id)。     

人巨细胞病毒UL57基因原核表达克隆的构建、表达及初步纯化

现有的ＩｇＭ血清学试验对ＨＣＭＶ的诊断存在敏感性和特异性较差问题 ,其主要原因是迄今采用的抗原仍为从纯化的病毒颗粒中提取的病毒抗原性物质或粗提的病毒全抗原成分。近几年来人们致力于探讨能替代ＨＣＭＶ全病毒抗原的基因工程抗原 ,以完善ＩｇＭ特异性血清学试验。本文通过构建ＨＣＭＶＤＮＡ结合蛋白的一段基因的原核表达克隆 ,从而对表达产物的抗原性进行初步分析。通过Ｏｌｉｇｏｓｉｓ软件设计ＵＬ5 7基因(ａａ5 40～ 6 0 4)两端引物 ,并在引物的 5′端分别引入ＢａｍＨⅠ和ＥｃｏＲⅠ内切酶识别序列及保护位点。引物序列如下 :…