MLPA与基因测序技术检测联用检测地中海贫血基因缺陷分析

目的对深圳地区地中海贫血(简称:地贫)人群及正常人群进行HBA、HBB基因突变的筛查,旨在提高地贫基因确诊率,发现传统基因诊断技术易漏检的地贫相关基因突变类型。方法选取2009年4月～2010年10月送检本实验室疑似地中海贫血基因缺陷血样100例,采用MLPA技术和基因测序技术联合检测。结果 (1)成功检测出β合并α地贫双重杂合子;(2)β地贫中,41-42杂合子基因型占53.57%,β合并α地贫双重杂合子,占28.6%,α1地贫中一SEA/αα基因型占96.9%;(3)α2地贫以αcs/αα、α3.7/αα和αWS/αα基因型居多;(4)进一步经MLPA检测后另发现α地贫缺失型及β地贫β基因缺失型占12%。结论联合应用MLPA技术、PCR技术和基因测序技术,可以提高地中海贫血基因缺陷检测的准确率,为本病家系成员的遗传咨询和产前基因诊断提供准确的依据。     

福州地区α地中海贫血产前基因诊断分析

目的 对夫妇双方都是α地中海贫血携带者进行产前基因诊断,以杜绝重型α地中海贫血患儿的出生.方法 应用单管多重PCR体系对孕妇夫妇携带α地中海贫血的19例风险胎儿的羊水(或脐血)进行α地中海贫血基因诊断.结果 19例胎儿东南亚缺失型杂合子(--SEA/αα)3例,右缺失型杂合子(-α3.7/αα)2例、左缺失型杂合子(-...     

某地区地中海贫血的分子流行病学调查

目的调查广东韶关地区α、β地中海贫血基因型及构成比。方法采用Gap-PCR检测--SEA、-α3.7、-α4.2三种常见的α地贫基因,PCR-RDB检测17种常见的β地贫基因。结果共检出地贫基因携带者1579例,其中α地贫982例(35.68%),8种基因型。β地贫597例(21.69%),13种基因型。αβ复合型地贫54例(1.96%)。结论广东韶关地区α地贫以αα/--SEA为主,β地贫以CD41-42(-TCTT)、IVS-Ⅱ-654(C-T)为主,为进行遗传咨询和制定地中海贫血预防措施提供了科学依据。     

产前基因诊断预测地中海贫血胎儿的价值分析

目的：探讨产前基因诊断预测地中海贫血胎儿的价值。方法选取本院2010年1月~2013年12月65例父母为地中海贫血基因携带的胎儿为受试对象,均抽取羊水给予产前基因诊断,引产或分娩后留取脐带血检验诊断准确性。结果65例风险胎儿中诊断为地中海贫血者48例,其中--SEA/--SEA型10例,-αSEA/αα和CD41-42/CD41-42各3例,-α3.7/αα、-αα1/αα、CD41-42/-α3.7和-α4.2/αα各检出2例,CD41-42/(-CTTT)型检出19例,-28(A→G)型检出5例。48例产前基因诊断为地中海贫血胎儿中,引产率为26.8%,分娩率为73.2%,其中--SEA/--SEA型的10例胎儿引产8例,分娩2例;-αSEA/αα和CD41-42/CD41-42均引产2例,分娩1例;CD41-42/-α3.7均引产;剩余胎儿均成功分娩;所有胎儿脐带血检测结果与产前羊水基因检测结果一致。结论对地中海贫血携带夫妇孕育的高风险胎儿予以产前基因检测,准确率较高,对优生优育等具有积极意义,值得临床推广。     

广州市番禺区城镇人群α和β地中海贫血的基因型分析

目的:分析本地区人群地中海贫血的分子遗传学特征,为有效诊断和预防中重型患者提供客观依据。方法:对2009年1月1日～2011年12月31日来本院门诊和住院部的就诊者进行地中海贫血(地贫)筛查,以血常规MCV(平均红细胞体积)和/或血红蛋白电泳进行初筛,阳性者进行基因分析。α基因检测缺失型和非缺失型的缺陷、β基因检测17种点突变。结果:α地贫基因型以--SEA/αα为主;α地贫2在轻型携带者(α地贫1+α地贫2)中占26.9%;非缺失型的基因缺陷占α地贫2的26.8%。β地贫中β41-42/β的比例最高,其次为β654/β、β-28/β和β17/β。281名β地贫携带者中有40人检出复合α基因的突变。结论:α地贫2和非缺失型α地贫在本地区的比例较高,应注意HbH的诊断和咨询。初筛为β地贫者应进行α基因检测。     

α-地中海贫血基因检测结果分析

目的:通过分析本公司α-地中海贫血(α-地贫)基因检测结果,了解当地该基因分布情况,为地贫防控与遗传咨询提供实验室依据。方法:采用PCR-反向点杂交法对1551例标本中的α-地中海贫血基因缺失突变(--~(SEA)、-α~(3. 7)、-α~(4. 2))与位点突变(CS、QS、WS)进行检测。结果:1551例标本共检测出α-地中海贫血共112例,阳性率占7.2%,共检出7种基因型。结论:α-地中海贫血中主要以右缺失型(-α~(3. 7)/α)和东南亚型缺失型(--~(SEA)/αα)为主。     

2506例不孕不育患者地中海贫血基因分型分析

目的 调查某院生殖医学中心就诊的不孕不育患者中地中海贫血基因的携带情况、基因突变类型及构成比,制定有效可行的地中海贫血防治计划,有效降低地中海贫血的发病率,为达到“优孕”的目的提供参考.方法 采用聚合酶链反应(PCR)法、跨越断点PCR方法和导流杂交技术对某院就诊地中海贫血血液学筛查阳性的不孕不育患者进行地中海贫血基因分析.结果 2 506例疑似病例中检出942例地中海贫血基因携带者,检出率为37.59％;其中654例为α地中海贫血基因携带者,占69.43％,检出11种α地中海贫血基因型,以--SEA/αα(72.32％)、-α3.7/α α(15.75％)和-α 4.2/α α(3.67％)三种缺失型α地中海贫血基因最常见;β地中海贫血基因携带者占28.77％,15种β地中海贫血基因突变类型中共检出13种,突变频率较高的前3位依次为IVS-2-654(38.75％)、CD41-42(29.89％)、CD17(10.70％);复合型地中海贫血基因携带者占1.80％,检出12种复合型地中海贫血基因类型,以-α3.7/α α复合CD17/N最多见,占23.53％.结论 安徽医科大学解放军174临床学院生殖医学中心就诊的不孕不育患者地中海贫血发生率较高,α地中海贫血以缺失型-SEA/αα基因型最为常见,β地中海贫血则以IVS-2-654 (C-T)位点的突变最为常见.应加强对不孕不育患者地中海贫血血液学筛查和基因诊断,以预防重型地中海贫血患儿的出生,达到“优孕”的目的.     

厦门地区2960对育龄夫妇地中海贫血筛查及基因检测结果分析

目的 初步了解并分析厦门地区育龄青年地中海贫血(地贫)流行情况及其基因分布特征,为地贫基因诊断、遗传咨询及减少地贫漏诊和误诊提供理论依据.方法 对2013年4月至2016年4月来本院进行孕前优生健康检查的2 960对育龄夫妇进行血常规、血红蛋白电泳、血清铁、铁蛋白筛查,筛查阳性患者通过“PCR+膜杂交法”进行地贫基因检测.结果 2 960对育龄夫妇经血液学筛查结果中阳性共1 160例(占19.59％),检出地贫基因携带者408例,占6.89％;其中α地贫基因携带者286例,占4.83％,最常见的地贫基因型为--SEA/αα,占全部α地贫基因携带者的74.13％;β地贫基因携带者1 14例,占1.93％,最常见的地贫基因型为CD41-42(-TCTT)和IVS-2-654(C→T),分别占全部β地贫基因携带者的34.21％和32.46％;α地贫复合β地贫基因携带者8例,占0.14％.结论 厦门地区地贫基因突变类型复杂多样,α地贫基因携带者最常见的基因型为--SEA/α α,β地贫基因携带者最常见的基因型为CD41-42(-TCTT)和IVS-2-654(C→T);对于血液学筛查阳性的人群,进一步进行地贫基因诊断,可避免漏诊误诊,更好的为临床地贫诊断和遗传咨询提供依据.     

某区208例地中海贫血基因检测结果的分析

目的检测208例就诊者α,β-地中海贫血基因,探讨渝北区儿童、孕妇和其他人群α,β-地中海贫血的基因突变类型和频率。方法采用PCR+膜反向点杂交技术(RDB)检测缺失型α-地贫(--SEA、-α3.7、-α4.2)、2种突变型α-地贫(CS、QS)及11种突变型β-地中海贫血(41-42M、CD_(43)、IVS-II-654、CD_(17)、CD_(14-15)、-28、-29、CD_(71-72)、βE、IVSI-1、CD_(27-28))。结果208例就诊者中地中海贫血基因变异总变异率达到29.81%(62/208)。其中α-地贫基因变异率12.50%(26/208),β-地贫基因变异率15.38%(32/208),αβ复合型地贫基因变异率为0.48%(1/208)。儿童25.64%(20/78),孕妇29.57%(34/115),其他人群53.33%(8/15)。结论渝北区儿童α-地中海贫血和β-地中海贫血基因变异率较高,应开展地贫基因筛查,特别把好婚、孕、产检三道关口地贫基因筛查,防止重型地中海贫血患儿的出生,提高人口素质。     

顺德区新生儿血红蛋白电泳及地中海贫血基因检测结果分析

目的 对顺德地区新生儿干血斑标本进行血红蛋白电泳分析,通过基因诊断确诊地中海贫血,探讨全自动毛细管电泳技术联合基因检测在新生儿地中海贫血筛查中的应用。方法 选取我院2019年1月至2020年3月干血斑标本9992例,通过全自动毛细管电泳分析血红蛋白,对疑似地中海贫血患儿召回进行基因确诊。结果 血红蛋白电泳初筛阳性率为14.52%,α地贫基因确诊阳性率与符合率分别为5.33%、87.81%,主要基因型为--SEA(51.41%)、-α3.7(27.02%)和-α4.2(10.51%);β地中海贫血基因确诊阳性率与符合率分别为1.71%、69.51%,主要基因型为βCD41-42(43.86%);当Hb Bart's含量 1.0%时,基因确诊符合率为98.12%;结合运用综合分析法可提高β地中海贫血检出率,减少假阳性率;应用Hb A指标筛查β地中海贫血做接受者操作特征曲线,AUC=0.923,HbA最佳截断值为13.15,约登指数为0.703;其他异常血红蛋白初筛阳性率为0.77%。结论 全自动毛细管电泳法联合地贫基因检测,能快捷有效检出本地区新生儿地中海贫血患儿,可为本地区新生儿地中海贫血疾病的早期筛查、及时治疗和遗传咨询提供科学数据,该项目适合全区推广。     

96例地中海贫血基因突变研究

目的 研究96例地中海贫血基因突变类型。方法 采用跨断裂点（gap-PCR)双重PCR技术对α地贫进行基因分析，PCR/反向斑点杂交（PCR/RDB）技术进行β地贫基因分析。结果 本组病例共检出61例α地贫，其中55例标准型α地贫均为α地贫1杂合子，基因型αα/--SEA，6例HbH病基因型α-/--缺失型，检出β地贫35例，30例轻型β地贫。5例重型β地贫，发现4种基因突变常见类型，3种罕见类型，30例轻型β地贫中，28例为基因突变杂合子，2例是双重基因突变子；5例重型β地贫中，均为基因双重突变子。结论 地中海贫血基因突变复杂。α地贫基因突变以大片段缺失为主；β地贫基因突变以点突变为主，双重基因突变子多为重型β地贫，亦见于少数轻型α地贫，基因分析技术，具有快速，特异的特点，对于地贫基因诊断和研究，有重要价值。     

G6PD升高与地中海贫血的关系

目的了解G6PD升高与地中海贫血的关系,探讨G6PD活性在地中海贫血(地贫)检测中的应用价值。方法用全自动生化仪器定量检测G6PD活性,分为正常组、G6PD升高组。用全自动血红蛋白电泳系统检测地中海贫血,用基因分型确诊地中海贫血。结果 G6PD活性升高组的血红蛋白电泳异常结果明显升高,经基因检测分析证实α地贫阳性率为90.4%,β地贫为72.6%。结论所有G6PD活性升高者,应高度怀疑地贫,对地中海贫血有辅助诊断价值。     

韶关市城镇人群α-地中海贫血的分子流行病学调查

目的 调查广东韶关市城镇人群中的α-地中海贫血(简称α-地贫)的携带率、基因突变类型及其分布特征。方法 抽取韶关市户籍人口的脐带血随机大样本，用血红蛋白电泳法检测Hb Bart’s作为诊断α-地贫的阳性参考指标。对所有Hb Bart’s阳性样品用PCR的分析法进行α-地贫基因分型，并在所有被检样品中进行两种常见静止型α-地贫基因(α-^3.7和α-^4.2)的分子筛查。结果 在1006例脐带血样本中，检出Hb Bart’s阳性样品64例；经基因分析，100例被确定了α-地贫基因型，韶关市户籍人群中的α-地贫基因携带率为10．23％(103／1006)，共检出4种α-地贫等位基因，其构成比依次为50．48％(--SEA)、40．00％(α-^3.7)、4．76％(α-^4.2)、2．86％(α^CSα)。其中缺失型占95．24％，非缺失型占2．86％。结论 由于α-地贫发生率较高，该研究结果为在该地区进行遗传咨询和产前诊断提供了有价值的基础资料。     

广东省东莞地区地中海贫血产前筛查及产前诊断体系的建立

目的 减少东莞地区中重症α和β地中海贫血儿的出生率,提高出生人口素质.方法 采用红细胞平均体积测定对2 218例育龄夫妇进行地中海贫血的筛查,并用跨越断裂点聚合酶链反应(Gap-PCR)技术及随机双盲试验(RDB)法分别对α及β地中海贫血进行基因诊断.结果 检出地中海贫血277例,发生率12.49％.α地中海贫血220例,基因携带率为9.92％;其中:--SEA/αα198例,-α3.7/αα11例,-α4.2/αα7例.检出β地中海贫血57例,基因携带率为2.57％.检出β基因突变类型依次为CD41/42(-TTCT) 27例,IVS2nt-654(C→T)14例,CD17(A→T)10例,-28(A→G)4例,TATAbox29(A→G)1例,CD71/72(+A)1例.对42对夫妇均为地中海贫血携带者的胎儿进行产前诊断,3例为Bart水肿胎终止妊娠,7例为β地中海贫血纯合子而终止妊娠.结论 通过产前筛查地中海贫血及基因诊断,可确诊重症患儿并及时终止妊娠.建立切实可行的人群筛查-高风险夫妇产前诊断-选择性流产体系,可有效避免重症患儿的出生,对提高人口素质具有重要意义.     

α地中海贫血基因携带者血常规参数临床观察

目的探讨α地中海贫血基因携带者血常规参数变化情况。方法采用回顾性分析的方法,分析深圳市龙岗区大鹏人民医院收治的70例α地中海贫血患者、30例缺铁性贫血患者、100例健康体检人员的血常规参数资料。结果α地中海贫血组Hb、MCV及RDW与健康对照组、缺铁性贫血组均有明显差异,P<0.05,-αα/-α3.7组的Hb、MCV结果均明显高于-sea/αα组,P<0.05;RDW明显低于-sea/αα组,P<0.05。地中海贫血组患者MCV、红细胞脆性实验、血红蛋白电泳阳性率均明显高于缺铁性贫血组,P<0.05,-αα/-α3.7组患者血红蛋白电泳阳性率略低于-sea/αα组,P<0.05,差异均有统计学意义。结论 Hb、MCV、RDW及红细胞脆性实验、血红蛋白电泳阳性率可以作为临床筛查α地中海贫血的有效诊断方法,值得临床推广。     

汕尾市育龄人群中α、β地中海贫血基因型的分布调查

目的 了解汕尾市育龄人群中α、β地中海贫血基因型的分布情况.方法 采用整群抽样方法选择2013年1月1日至2013年12月31日各地区部分住院分娩和引产的孕产妇、配偶共计1200例作为研究对象,分别进行α-地中海贫血和β-地中海贫血调查.结果 在1200份血液标本中共计检测出6种α-地中海贫血基因型,共计62例,63个等位基因,α-地中海贫血基因携带率为5.25％（63/1200）.其基因型构成比：-a3.7/aa 31个,占总数的49.21％;-aSEA/aa 18个,占总数的28.57％;-a4.2/aa 7个,占总数的11.11％;-aTHAI/aa 2个,占总数的3.17％;--SEA/--SEA 3个,占总数的4.76％;--aCSa/aa2个,占总数的3.17％.有13例患者检测出携带β-地中海贫血基因,β-地中海贫血基因携带率为1.08％.基因类型共有5种,其构成比：IVS-2-654（C→T）和-28（A→G）各23.08％,CD41/42（-TCTT）30.77％,CD17（A→T）15.38％,βECD26（C→A）7.69％.结论 汕尾市区α-地中海贫血基因携带率和β-地中海贫血基因携带率从整个省份来讲相对较低,但分析自身数据来看携带率还是较高,主要发生在遗传背景较复杂的地区,并主要以本地人群为主.     

某省户籍孕妇地中海贫血的产前筛查及产前诊断的实验研究

目的探讨贵州省户籍孕妇地贫的分子缺陷情况,探索可用于临床一线的地贫产前筛查指标和产前诊断技术,并将其应用于贵州省地贫孕妇的产前筛查和产前诊断中,以降低我省重症地贫患儿出生率,提高人口质量。方法选择在贵州省人民医院进行产前检查孕18周以前的贵州省户籍孕妇1089例,分析红细胞指标(RBC、Hb、MCV、MCH)和血红蛋白电泳(Hb A2)值,异常者纳入疑似病例;筛查出双方均有地贫表型阳性的夫妇,提取基因组DNA,gap-PCR法同时检测-α3.7、-α4.2和--SEA/αα3种最常见的α-地贫缺失突变类型,RDB法检查中国最常见的17种β-地贫突变基因和3种α-地贫突变基因,确定基因型;双方确定为同型地贫的夫妇,经知情同意后,孕妇于16~24周行羊膜穿刺抽取羊水20 m L,常规提取胎儿基因组DNA,用上述基因检测方法检测胎儿是否地贫。如胎儿为轻型地贫,可向孕妇提出合理化建议。如胎儿为中重型地贫,建议孕妇终止妊娠;分娩后取胎儿组织提基因组DNA,检测地贫基因型以进一步证实产前诊断的结果。结果 1红细胞指标和血红蛋白电泳初步筛查地贫孕妇78例,初筛阳性率7.16%(78/1089);基因诊断确诊53例,筛查阳性确诊率67.9%(53/78)。2两种地贫孕妇的RBC均高于正常孕妇(P<0.01)。3两种地贫的Hb、MCV、MCH均低于正常孕妇(P<0.01)。4α-地贫孕妇的Hb高于β-地贫孕妇(P<0.01),而Hb A2低于β-地贫孕妇(P<0.01)。5α-地贫20例,发生率1.84%(20/1089),β-地贫33例,发生率3.03%(33/1089)。6本实验中贵州户籍孕妇α-地贫最常见的基因型是--SEA/αα,β-地贫最常见的基因型是17/N。7 7例孕妇羊水穿刺检测胎儿地贫基因,6例与胎儿脐血检测结果一致(1例仍在妊娠)。结论 1孕早中期的孕妇进行红细胞指标和血红蛋白电泳检查可以初步筛查地贫并初步区分地贫类型。2贵州省户籍孕妇β-地贫发生率较α-地贫发生率高,β-地贫最常见的基因型是17/N,α-地贫最常见的基因型是--SEA/αα。3地贫羊水基因诊断符合率高,我省孕妇可以将地中海贫血的筛查作为常规产前检查。     

不孕不育患者地中海贫血基因分布特征及HbA、HbA2、MCV、MCH参数分析

目的 了解不孕不育患者地中海贫血(地贫)基因携带情况和分布特征,分析红细胞参数在地贫诊断中的应用价值.方法 对受检者进行血常规、血红蛋白电泳和地贫基因检测(PCR+膜杂交法),同时设置本院同期体检健康者作为对照组,分析受检者不同类型地贫基因携带情况和分布特征,分析不同类型地贫基因携带者HbA、HbA2、MCV、MCH的变化情况.结果 3 106例受检者中,共检出α和β地贫基因携带者299例,占比9.63％,其中α地贫196例,β地贫102例,复合型地贫1例,最常见类型为--SEA/α α、CD41-42(-TCTr)和IVS-2-654(C→T).血红蛋白电泳检测结果显示,α地贫、β地贫及健康对照组HbA含量分别为(97.75±0.19)％、(94.07±0.25)％和(97.15±0.13)％,与健康对照组相比,差异均有统计学意义;HbA2含量分别为(2.25±0.21)％、(5.09±0.33)％和(2.85±0.14)％,与健康对照组相比,差异均有统计学意义.血常规检测结果显示,α地贫、β地贫及健康对照组MCV分别为(73.56±5.35) fl、(64.68±3.18)n和(87.47±4.29) fl,与健康对照组相比,差异均有统计学意义;MCH含量分别为(23.37±1.53) pg、(20.42±1.27) pg和(30.25±2.04) pg,与健康对照组相比,差异均有统计学意义.结论 不孕不育患者地贫基因携带占比9.63％,最常见类型为--SEA/αα、CD41-42(-TCTr)和IVS-2-654(C→T);在不同类型地贫携带者中,HbA、HbA2、MCV、MCH均有不同程度变化,可在一定程度上作为地贫的筛查指标.     

产前生化筛查检验对地中海贫血的临床价值分析

目的:评价产前生化筛查检验对地中海贫血的临床价值。方法:2013年9月~2015年9月,医院产科门诊共收治婴儿地贫68例,同期目前诊断为β地贫基因阳性578例,α地贫基因阳性914例,取同期正常孕妇500例。结果:正常孕妇与α地贫基因阳性孕妇、β地贫基因阳性孕妇、娩出地贫儿孕妇Hb、MCH、RBC、MCV、RDW、HbA2差异具有统计学意义(P0.05);娩出地贫儿孕妇与α地贫基因阳性孕妇、β地贫基因阳性孕妇Hb、MCH、RBC、MCV、RDW、HbA2差异具有统计学意义(P0.05);血常规与红细胞脆性检查阳性率58.56%、血红蛋白电泳阳性50.92%(1382/2714),检出胎婴儿地贫84例,活产66例,占97.06%。结论:分层产前生化筛查检测可检出绝大多数地中海贫血胎儿。     

3975例孕检地中海贫血筛查结果分析

目的了解河源地区地中海贫血患病率及其类型,为该地区地中海贫血的防治及优生优育的宣教工作奠定基础。方法采用回顾性分析的方法,分析我院3975例妊娠妇女筛查情况,通过MCV、红细胞脆性、血红蛋白电泳和基因诊断,对表型阳性和基因阳性进行研究。结果在筛查3975例妊娠妇女中,检出地贫携带者511例,检出率为12.85%,其中α-地贫356例（8.95%）,β-地贫138例,占3.47%,异常血红蛋白17例（0.43%）。结论河源地区地中海贫血检出率高,开展婚前、产前遗传咨询和诊断,对指导优生优育具有重大意义。