H_(22)腹水型肝癌患鼠血清中一种高分子量DNA结合蛋白的分离

本实验室曾从艾氏腹水癌患鼠血清和腹水DNA结合蛋白(DBP)中分离纯化出一种高分子量DNA结合蛋白(简称HDBP)。经2-巯基乙醇还原后,用SDS-PAGE测得其分子量为41000,为了研究这种HDBP在患其与类型肿瘤的小鼠血清中是否也存在,我们采用同样的方法从H_(22)腹水型肝癌患鼠血清中,分离纯化出一种分子量较高的DBP,并对其进行了初步鉴定。     

小鼠补体C3抗血清的制备

制备兔抗小鼠补体Ｃ３抗血清,为小鼠血清Ｃ３含量的测定提供试剂。利用菊糖非特异性吸附小鼠血清Ｃ３,制备兔抗小鼠补体Ｃ３抗血清免疫复合物,以此作为免疫原免疫健康雄兔,制得兔抗小鼠Ｃ３抗血清。与小鼠血清进行免疫电泳出现一条补体Ｃ３的沉淀线。     

体液脱氧核糖核酸结合蛋白的研究——Ⅲ.非癌疾患小鼠血清脱氧核糖核酸结合蛋白

本实验以DNA亲和层析柱为手段分离提取Ehrlich腹水癌及各种非癌疾患小鼠的血清DNA结合蛋白(DBP),并采用了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法对之进行了比较分析。发现患癌小鼠血清DBP中含有一种表观分子量为30,000的蛋白质。核DBP在正常小鼠血清DBP中则难以见到,在实验性再生肝、无菌性炎症、四氯化碳中毒的血清DBP中也难以见到此一表观分子量为30,000的蛋白质。因此,这种DBP有可能成为恶性肿瘤的标记物。     

日本血吸虫感染对1,2—二甲肼诱发小鼠大肠癌过程中血清DNA—结合蛋白含量的影响

自从1971年 kubinski 和 Javid 报道人血清存在 DNA-结合蛋白(简称 DBP)以来,其他学者陆续介绍在恶性肿瘤患者血清中某些 DBP 含量有一定的改变,如在大肠癌、胃癌、乳腺癌、肺癌等的恶性肿瘤患者血清中有 C_3 补体片段的 DBP;纤维粘合蛋白冷不溶球蛋白的酶解物的 DBP 和分子量为64000的 DBP 等的升高,以及分子量为45000的 DBP 和博来霉素抑制蛋白等的 DBP 的减少;童坦君等人发现腹水癌、S_(180)肉瘤和腹水型肝癌鼠血清皆出现一条正常小鼠血清不易见到的分子量为3000的     

小鼠ZP2抗体的制备及其免疫活性研究

目的制备抗小鼠ZP2（mZP2）抗体并研究抗血清的免疫活性。方法利用Rosetta宿主菌诱导表达mZP2重组蛋白,电泳
分离重组ZP2蛋白,切胶制备免疫抗原;利用乳化抗原主动免疫新西兰雄兔制抗血清;通过ELISA测定抗体应答水平;以免疫组
化测定抗血清特异性;通过精卵结合实验检测抗血清对小鼠卵子结合顶体反应后精子的影响。结果ELISA结果说明用重组蛋
白免疫新西兰雄兔诱发产生了抗血清。免疫组化实验证明抗血清与小鼠卵巢透明带发生了特异性反应,精卵结合实验显示抗
ZP2抗体能抑制顶体反应后精子与卵子结合。结论重组mZP2蛋白诱发产生了抗ZP2抗体,抗体能抑制顶体反应后的精子与
卵子结合。
     

妊娠特异性β1糖蛋白的分离纯化及特异抗血清的制备

本文采用硫酸铵盐析、DE-52离子交换层析、Sephadex G-200凝胶过滤及抗SP_1免疫亲和柱层析等方法从胎盘后血分离妊娠特异性β_1民糖蛋白(SP_1)所得SP_1纯化约207倍.纯化的SP_1与德国Behringwerke AG的SP_1抗血清在双向免疫扩散时有沉淀反应;免疫电泳时纯化SP_1移动的位置与β蛋白相当.聚丙烯酰胺凝胶电泳时纯化的SP_1呈现一条主带其分子量为90,000左右.免疫家免所得的抗血清经血浆蛋白吸收后得特异SP_1抗血清在双向免疫扩散时与正常男子或非孕妇女血清均无沉淀反应;与孕血反应形成的沉淀线与德国Behring werke AG的SP_1抗血清所形成的沉淀线相连;交义免疫电泳时呈现一个峰.此抗血清已成功地用于建立酶联免疫法测定SP_1含量     

乌鳢血清免疫球蛋白IgM的分离纯化及其兔抗血清的制备

目的分离纯化乌鳢血清免疫球蛋白,并制备其兔抗血清。方法用Protein A亲和层析的方法纯化乌鳢血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,测定其重链、轻链的分子量,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价。结果纯化了乌鳢血清免疫球蛋白,SDS-PAGE测定其重链和轻链的相对分子质量分别为78×103和27×103左右,免疫双扩散法测定兔抗乌鳢免疫球蛋白抗血清效价为1∶32。结论成功纯化了乌鳢免疫球蛋白,制备了兔抗乌鳢IgM抗血清,为研究乌鳢的免疫机制、建立乌鳢的血清学检测系统奠定了基础。     

人血清载脂蛋白A-I的分离纯化及其抗血清的制备

用超速离心法分得高密度脂蛋白,经琼脂糖平板电泳检定为一条区带。用甲醇/氯仿(1:2V/V)脱脂。然后经SephadexG-150层析及DEAE-纤维素(DE-52)离子交换柱所得蛋白在280nm有一吸收峰。做PAGE仅出现一条区带,电泳双扩散未见交叉沉淀线,说明所得载脂蛋白A-I(apoA-I)是纯的。PAGE测得分子量为28,000,其氯基酸组成与文献报道基本一致。用纯化的apoA-I免疫新西兰兔,获得效价为1:32的特异性抗人血清apoA-I抗血清。     

黄鳝IgM的分离纯化及兔抗黄鳝IgM抗血清的制备

目的分离纯化黄鳝血清免疫球蛋白,制备其兔抗血清,并检测抗血清的特异性。方法用Protein A亲和层析的方法纯化黄鳝血清免疫球蛋白,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的纯度,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散检测抗血清的效价,通过western blotting检测抗血清的特异性。结果纯化了黄鳝血清免疫球蛋白,免疫双扩散法测定兔抗黄鳝免疫球蛋白血清效价为1∶32,western blotting结果显示抗血清具有很好的特异性。结论成功纯化了黄鳝免疫球蛋白,制备了兔抗黄鳝IgM抗血清,为建立黄鳝的血清学检测系统奠定了基础。     

癌患者胸腹水中分离抑癌因子的初步报导

有人已经指出,艾氏腹水癌小鼠的腹水液中存在着拮抗肿瘤生长的抑素和溶癌因子。1976年以来,北医生化教研室陈明等首先从艾氏腹水癌小鼠的腹水中分离到一种抑癌因子,并与有关单位协作相继进行了报导。本文主要从人癌患者的胸腹水中分离到抑癌因子,并对其活性进行检测,现初步报导如下。     

牛血清白蛋白的抗血清在免疫学沉淀反应实验中的应用

目的 :制备牛血清白蛋白 (BSA)抗血清 ,以探讨获取高效价抗血清的方法。方法 :用BSA配制一定的浓度 ,免疫家兔 ,以制备兔抗 -BSA血清。利用免疫电泳、双向琼脂扩散试验分析和测定抗血清的效价。结果 :双向琼脂扩散在BSA 0 . 5g/mL的浓度时 ,测得抗血清效价为 1∶32 ,对流免疫电泳结果显示BSA 0. 5g/mL与抗BSA在 1∶16时形成一条清晰可见的沉淀线。结论 :BSA免疫家兔可获取效价较高的抗血清。     

人血清Lp(a)的抗血清制备

用分离纯化的人血清Lp(a)免疫兔得到兔抗人Lp(a)抗血清,用免疫双扩散测定其效价为1:4。     

亲和层析法提纯甲胎蛋白

利用抗人ＡＦＰ多抗亲和层析和抗人ＡＦＰ大鼠单抗亲和层析，从人脐带血和ＡＦＰ阳生肝癌病人腹水中提纯ＡＦＰ，多抗亲和层析纯化ＡＦＰ的回收率为３６％，单抗亲和层析回收率为６０％。两法提纯的ＡＦＰ产物与抗正常人血清抗体在对流免疫电流和双向琼脂扩散中无沉淀线出现，与人ＡＦＰ多抗出现明显的沉淀线，在免疫电泳中两法提纯的ＡＦＰ与抗ＡＦＰ出现沉淀线与抗正常人血清不出现沉淀线，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上显示一条分子量约６８     

貉血清IgG纯化及抗血清的制备

目的制备高纯度貉血清IgG和兔抗貉IgG抗血清,作为建立多种动物抗体检测技术的储备。方法采用Hitrap Protein A亲和层析及盐析再沉淀法纯化貉血清IgG,通过PAGE电泳和Western-Blot免疫印迹法对IgG作纯度及免疫活性检测;常规免疫法制备兔抗貉IgG血清。结果貉血清IgG与Protein G虽有较强的结合力,但同时也结合血清中其他杂蛋白;用二步纯化法可从5 mL貉血清中纯化IgG约7 mg,电泳和免疫印迹测定显示,IgG纯度大于95%,常规免疫法制备抗血清免疫双扩散效价达1∶32。结论建立了可行的貉血清IgG的纯化方法和高效价的兔抗貉血清IgG抗血清,为貉血清IgG二级抗体酶联物的制备储备了资源。     

三种组织来源的特异性γ—谷氨酰转肽酶同功酶Ⅱ的纯化…

为进一步探讨肝癌特异性γ－ＧＴⅡ的性质，从肝癌、胎肝和肾脏组织中纯化的肝癌特异性γ－谷氨酰转肽酶同功能Ⅱ（γ－ＧＴⅡ），经１０％聚丙烯酰胺凝胶电泳分别显示单一蛋白区带，以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳显示均由大小两个亚基组成，其分子量分别为５７０００和２３０００。用此酶作抗原免疫兔获得抗γ－ＧＴⅡ抗血清，酶免疫抑制试验表明该抗血清对三种组织来源的γ－ＧＴⅡ、Ⅱ′具有抑制作用。双扩散免疫试验产生单一沉淀线，并     

小鼠血管内皮生长因子受体2胞外片段重组蛋白的制备及其初步应用

目的 :用基因工程方法获得小鼠VEGFR - 2 (Flk - 1)胞外段与配体结合区域的重组蛋白 ,并对其应用进行初步的探讨。方法 :将经PT -PCR扩增的目的序列组建到原核表达载体并诱导目的蛋白的表达 ,经纯化后的重组蛋白制备成疫苗 ,免疫兔 ,获得抗血清 ,用ELISA和Westernblot方法对抗血清进行分析。结果 :目的蛋白在原核表达系统中得到了高效的表达 ,该疫苗能刺激兔产生抗重组蛋白和天然Flk - 1的抗体。结论 :该抗血清可用于Flk - 1的免疫学检测 ,也为该疫苗用于抗肿瘤血管生成治疗奠定了基础。     

正常人脑胶质纤维酸性蛋白的提取及鉴定

经匀浆反复沉淀,DEAE—Sephadex A50 柱层析等多步骤,从正常成人脑白质中提取了胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。提取物与兔抗人GFAP抗血清存在有特异性沉淀反应,提取物纯度为91％,分子量为43kd。用提取物免疫动物制备抗血清,以此作为第一抗体进行免疫细胞化学染色,结果可显示出胶质瘤细胞内GFAP的分布,证明提取物确为人GFAP。GFAP的提取为进而解决其抗体来源问题打下了基础。     

人偏肺病毒分离株蛋白质特性的初步探讨

目的:初步明确人偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)主要蛋白质的基本特性.方法:以纯化的hMPV重庆分离株CHN05-01灭活病毒为抗原,免疫家兔获得抗血清.用此抗血清为一抗通过免疫印迹法检测hMPV蛋白.用NetNGlyc 1.0 Server、NetOGlyc 3.1 Server、NetPhos 2.0 Server分析hMPV A型标准株CAN97-83氨基酸序列,预测hMPV蛋白氨基酸序列中可能的糖基化、磷酸化位点.结果:ELISA检测显示所制备的抗血清与hMPV的蛋白反应效价达1:500以上,可有效识别hMPV蛋白.软件分析示G蛋白糖基化位点最多,而P蛋白磷酸化位点最多.以兔抗hMPV血清为一抗的免疫印迹法提示CHN05-01的G蛋白糖基化水平较一致,与CAN99-80和CAN99-81不同,其分子量介于55至72ku之间,约68ku;F蛋白F1亚单位分子量介于40至55ku,约为48ku.结论:初步明确了hMPV两个主要膜表面糖蛋白的分子量和糖化特点,为后续蛋白功能研究奠定了基础.     

小鼠IgG抗体的制备——IgG—SPA菌体免疫法

本文介绍制备小鼠IgG抗体的一种简便方法,即IgG-SPA菌体免疫法。首先制备10％(w/v)Cowan I 株菌体稳定液,按一定比例与正常小鼠血清制备IgG-SPA菌体免疫原。然后以9—12亿/ml菌体免疫原静脉注射于年青健康家兔,数次免疫后,即得兔抗小鼠IgG抗体(RAM-IgG),其血清效价达1:32～1:64(双扩法);其抗体纯度高,与正常小鼠血清只出现一条沉淀线。经鉴定,其血清不含有鼠IgM抗体。本文又把该法与IgG常规乳化佐剂免疫法作了比较。     

利用DNA免疫技术制备抗登革2型病毒NS2B蛋白多克隆抗体

目的构建登革2型病毒(dengue virus serotype2,DV2)非结构蛋白NS2B的真核表达质粒pCAGGS-P7/NS2B,进行DNA免疫,制备小鼠抗NS2B特异性多克隆抗体。方法PCR扩增DV2-NS2B基因片段,构建真核表达载体pCAGGS-P7/NS2B,采用脂质体介导的方法转染Vero细胞,检测目标蛋白的表达。用该表达质粒免疫BALB/c小鼠,制备抗NS2B抗血清。结果成功构建真核表达重组质粒pCAGGS-P7/NS2B,该重组质粒具有良好的免疫原性,免疫小鼠后所获的抗血清,抗体效价达1∶3200,Western blot和间接免疫荧光证实抗血清能特异性地识别DV2-NS2B蛋白。结论通过DNA免疫所制备小鼠抗DV2-NS2B抗血清能特异性地识别DV2-NS2B蛋白。