氟尿嘧啶对人胚肺成纤维细胞的抑制作用

观察氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）在体外条件下对人胚肺成纤维细胞增殖的影响。结果表明，５－Ｆｕ对人胚肺成纤维细胞呈剂量依赖的抑制作用，其ＩＤ（５０）为０．０２５ｍｇ／Ｌ。极低浓度５－Ｆｕ就具有明显抑制作用；且这种作用不受培养液中小牛血清浓度的影响。这提示有必要进一步观察５－Ｆｕ对实验性矽肺的疗效，以探索其用于治疗和预防人类矽肺进一步发展的可行性。     

百草枯致体外培养人胚肺成纤维细胞凋亡及氧化损伤

[目的]观察百草枯（PQ）对体外培养人胚肺成纤维细胞（MRC-5）的毒性作用,并探讨可能的损伤机制。[方法]不同浓度（0.00、0.15、0.30、0.60、1.20、2.40、4.80、9.60mmol／L）PQ处理MRC-5细胞24h后,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTF法）测定MRC-5细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况;同时用分光光度比色法测不同浓度（0.00、0.15、0.30、0.60、1.20mmol／L）PQ处理3、12、24h后,MRC-5细胞超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量和细胞上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活性。[结果]与对照组相比,PQ≥0.30mmol／L时开始明显抑制细胞生长,并随着染毒浓度的增加细胞存活率明显下降（P〈0.05）。与对照组相比,短时间、低剂量（3、12h,0.15mmol／L）作用下,SOD活性下降不明显,其他组别明显下降（P〈0.05）;与对照组相比,染毒后不同时点MDA含量均较自身对照上升,LDH含量较对照上升（除染毒3h,1.20mmol／L组）,且差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;0.60、1.20mmol／L组PQ染毒后MRC-5细胞凋亡率明显上升（P〈0.05）。[结论]PQ对MRC-5细胞活性的影响存在剂量依赖性,并可影响MRC-5细胞的抗氧化酶活性和细胞凋亡。     

染尘肺泡巨噬细胞上清液致人胚肺成纤维细胞蛋白谱改变

蛋白:热休克蛋白(HSP27)、Per-oxiredoxin Ⅱ亚型b、钙网蛋白-3和钙网蛋白-5类似物等.结论 应用蛋白质组学方法有助于筛选到经不同处理细胞间的蛋白表达差异,为进一步研究矽肺机制提供分子基础.     

TGF-β1对人腹膜间皮细胞转分化影响的探讨

目的探讨TGF-β1刺激对人腹膜间皮细胞(HPMCs)转分化的影响机制。方法用5ng/m l TGF-β1刺激第三代HPMCs培养细胞,采用免疫组化法观察细胞内磷酸化Sm ad-2(p-Sm ad-2)的蛋白表达,W estern b lot法观察细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(COL-1)和p-Sm ad-2的蛋白表达,ELISA观察上清液纤维连接蛋白(FN)的蛋白表达,以及RT-PCR观察α-SMA、FN和COL-1A1的mRNA表达水平。结果刺激组α-SMA、FN和COL-1A1的mRNA及α-SMA、FN、COL-1和p-Sm ad-2蛋白的表达显著增加,且均呈时间依从。结论TGF-β1能诱导HPMCs转分化为肌成纤维细胞,其可能的机制与激活了Sm ad信号通路有关。     

石英对人胚肺成纤维细胞DNA损伤作用

目的探讨石英粉尘对DNA及染色体的损伤作用,为尘肺病防治提供理论依据。方法标准α石英刺激人胚肺成纤维细胞(HELF),采用免疫荧光技术检测H2AX磷酸化(γH2AX)水平以及分析中性彗星实验Olive矩,作为DNA双链断裂(DSBs)损伤程度的指标,微核实验观察染色体损伤情况。结果依次用0、100、200、400μg/mL石英刺激HELF细胞,γH2AX水平呈增高趋势,半定量结果分别为(521.9±233.1)、(823.3±201.5)、(1 375.5±311.5)、(1 545.6±145.7);Olive矩亦呈增高趋势,分别为(1.74±0.24)%、(2.67±0.36)%、(9.23±0.72)%、(14.16±1.05)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。相同剂量的石英刺激下,微核率增加,但差异无统计学意义。结论石英粉尘可引起DNA双链断裂,且存在剂量-效应关系。     

氢醌处理人胚肺成纤维细胞致DNA损伤和微核形成

目的观察氢醌(HQ)对人胚肺成纤维(HLF)细胞DNA损伤和微核形成情况。方法分别用不同剂量的HQ处理HLF细胞1 h,继续培养24 h后进行微核试验;处理HLF细胞2 h后直接用彗星试验检测DNA损伤。结果各剂量组的微核率为2‰~9‰(P<0.05),核异常率为3‰~13‰(P<0.05)。相关分析表明,存在明显的剂量—效应关系,其中20、40和80μmol/L剂量组的微核率和核异常率显著增加(P<0.05)。各剂量组细胞DNA拖尾率和彗星尾长均有明显的剂量—效应关系,其中20~80μmol/L剂量组的拖尾率和彗星尾长明显增加(P<0.05);且随着HQ剂量的增加,高度、重度DNA损伤的比例也逐渐增加。结论似乎HQ可致HLF细胞DNA损伤和细胞微核形成。     

槲皮素对SiO_2介导人胚肺成纤维细胞增殖及TGF-β1表达的影响

目的探讨槲皮素抗硅肺纤维化的作用机制。方法以支气管肺泡灌洗法收集硅肺患者AM,在体外用含有SiO2(50μg/ml)的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培养基培养18h,然后收集培养的AM上清液,加入低、中、高浓度槲皮素(10、20和40μmol/L)作为刺激上清。用组织贴块法获取培养HELF,与刺激上清液共同孵育后,MTT法检测HELF增殖情况,免疫细胞化学法检测HELF中TGF-β1的表达。结果 (1)各槲皮素组能抑制HELF增殖,并且浓度愈大抑制作用愈强,三组与SiO2+AM组(0.620±0.096)相比、中浓度组(0.406±0.070)和高浓度组(0.334±0.050)与AM组(0.490±0.064)相比差异有显著性(P<0.01)。(2)三种浓度槲皮素均能降低HELF中TGF-β1的表达,与SiO2+AM组(0.542±0.095)相比差异有显著性(P<0.05),与AM组(0.394±0.109)和空白对照组(0.314±0.066)比较差异无显著性。结论槲皮素对硅肺纤维化有一定的防治作用。     

氯化镉对人胚肺成纤维细胞的恶性转化作用

为研究氯化镉致人胚肺成纤维细胞的恶性转化作用,用染色体分析,＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验和流式细胞术检测了转化细胞染色畸变,各细胞周期时相细胞的比例和ＤＮＡ合成情况。结果显示,氯化镉在０．００４μｍｏｌ／Ｌ、０．０２μｍｏｌ／Ｌ、０．０４μｍｏｌ／Ｌ３个实验浓度都可使人胚肺成纤维细胞生长排列紊乱。     

血小板激活因子对人胚肺成纤维细胞生长的调节

我们曾检测了矽肺患者体内ＰＡＦ（血小板激活因子）的含量，结果表明矽肺病人血浆ＰＡＦ含量升高，提示ＰＡＦ参与矽肺的发生发展。为了解ＰＡＦ对ＦＢ（成纤维细胞）的生长、调节作用，本研究采用体外细胞学研究的方法研究ＰＡＦ对ＦＢ生长的影响，结果表明ＰＡＦ能有效地促进ＦＢ的增殖、它与其它细胞因子如ＴＮＦ、ＩＬ－１等井同调控ＦＢ的增殖和胶原的生成。     

镍化合物对人胚肺成纤维细胞DNA的损伤

目的 研究不溶性镍盐(Ni3S2和Ni2O3)和水溶性镍盐(NiSO4)对细胞DNA的损伤状况,为镍致癌机制的研究提供科学依据.方法 使用不同浓度Ni3S2、Ni2O3和NiSO4处理人胚肺成纤维细胞(human lung fibroblast,HLF),通过单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测细胞DNA损伤程度.结果 镍处理各组的HLF细胞较阴性对照组细胞DNA损伤程度增高(P＜0.01),彗星尾矩增大(P＜0.01),有一定的剂量-反应趋势.结论 3种镍化合物均可引起细胞DNA损伤,不溶性镍盐的损伤强度大于水溶性的镍盐.DNA损伤是镍化合物致癌的可能机制.     

二氧化硅对大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞TGF-β1表达的影响

目的探讨二氧化硅(SiO2)是否通过影响肺泡巨噬细胞(AM)和肺成纤维细胞(FB)中转化生长因子β(TGF-β1)的表达而参与矽肺纤维化的发生发展。方法以支气管肺泡灌洗法收集大鼠AM,在体外用含有SiO2(50μg/ml)的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培养基培养2,6,12,18,24,36 h,然后收集培养18 h的AM上清液。用胰酶消化法分离培养大鼠FB,与AM上清液共同孵育6,12,18,24,36和48 h,用免疫细胞化学的方法检测AM及FB中TGF-β1的表达。结果经SiO2刺激的大鼠AM中TGF-β1的表达与空白对照组比较增加,在6,12,18 h 3个时间点差异有统计学意义(P<0.05,平均吸光度A值分别为0.118±0.008 vs 0.107±0.008,6 h;0.135±0.010 vs 0.119±0.015,12 h;0.143±0.012 vs0.125±0.015,18 h);AM上清液也可使FB中TGF-β1的表达上调,经体外再次染尘的AM上清液作用更为明显,与空白对照组比较,在各个时间点差异均有统计学意义(P<0.01)。结论在本试验条件下,经体外细胞培养,显示SiO2可通过上调AM和FB中TGF-β1的表达,增加胶原合成而参与矽肺纤维化的发展。     

人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞对其细胞周期的影响

目的研究人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）感染人胚肺成纤维细胞（human embryoniclung fibroblast,HELF）后对其细胞周期的影响,探讨HCMV感染的发病机制。方法用HCMV感染同步化的HELF作为感染组,同时设模拟感染组为对照组。用倒置相差显微镜观察两组细胞形态学变化至感染后7d。于感染后12h、24h、48h、72h和96h收获细胞,用免疫细胞化学法检测两组细胞核内HCMVIE172蛋白,流式细胞术检测细胞周期。结果模拟感染组未见细胞形态学改变,亦未出现HCMVIE172蛋白阳性产物。感染组感染后72h时即可见局部细胞变圆,膨胀,胞体及胞核巨大化,7d时可见所有细胞均发生病变;免疫细胞化学检测显示,其各时间点的细胞均在核内出现呈棕黄色颗粒的HCMVIE172蛋白。模拟感染组在感染后12h时有65.7%的细胞处于G1期,24h时有43.8%的细胞处于G1期;感染组在感染后12h时有70.4%的细胞处于G1期,24h时有69.9%的细胞处于G1期;两两比较,差异均有显著性（均P〈0.01）。结论HCMV感染HELF后在细胞核内进行复制、增殖,其影响了HELF周期,使大部分细胞停滞在G期。     

低剂量氢醌诱导人胚肺成纤维细胞适应性反应研究

目的通过研究低剂量氢醌(HQ)诱导人胚肺成纤维细胞(HLF)适应性反应的量效关系,建立氧化适应模式,探讨真核细胞过氧化适应性反应及其可能机理。方法应用HLF,以HQ为诱导剂,用不同剂量HQ对HLF细胞预处理12h后,再用80μmol LHQ攻击HLF1h,结合微核试验、彗星实验及细胞周期变化,观察低剂量HQ诱导的适应性反应。结果在细胞整体活力水平,0.001μmol L、0.01μmol LHQ预处理可以提高HLF对攻击剂量80.0μmol L的耐受性。与对照组比较,从0.5μmol LHQ剂量开始预处理的HLF的微核率和核异常率明显增加(P<0.05),细胞出现不同程度拖尾现象,拖尾率及彗星尾长显著增加(P<0.01),从0.1μmol L预处理剂量开始,随着预处理剂量的增加,属3级、4级DNA损伤细胞比例逐渐增加。细胞周期出现G2期阻滞,G1期比例减少。与细胞仅大剂量攻击比较,0～0.1μmol L预处理的HLF微核率和核异常率、尾长及拖尾率均明显减少、DNA重度损伤比例明显下降(P<0.05)。相关分析表明,预处理剂量从0.1μmol L开始,HLF的微核率、核异常率、拖尾率及彗星尾长与HQ预处理剂量间均存在剂量反应关系。结论低剂量HQ预处理HLF后再用高剂量去攻击,出现不同程度的适应性反应。     

P物质对人胚肺成纤维细胞作用及机制

目的 探讨P物质(SP)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)增殖与活化的作用及其调控机制.方法 体外培养MRC-5细胞,以P物质或与NK-1R抑制剂(L732138)及TGFβR1抑制剂(SB431542)联合培养细胞后,利用CCK8法检测细胞增殖活性,天狼猩红染色检测胶原纤维含量,Western blot检测α-SMA、...     

TGF-β1对人胚肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制因子表达的影响

目的探讨SiO2是否通过转化生长因子β(TGFβ-1)影响肺成纤维细胞(FB)中基质金属蛋白酶(MMPs)/金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)的表达而参与矽肺纤维化的发生发展。方法收集矽肺病人肺泡巨噬细胞(AM)培养上清,与人胚肺成纤维细胞(FB)共同孵育6 h和24 h,并用TGF-β1抗体进行干预,用免疫细胞化学的方法检测FB中MMP-1和TIMP-1的表达。结果经SiO2刺激的矽肺病人AM培养上清作用于FB,与对照组比较,可使FB中MMP-1的表达减少(吸光度A值0.062±0.008 vs 0.103±0.014,24 h),可使TIMP-1的表达增多(吸光度A值0.143±0.015 vs 0.108±0.012,24 h);加入TGF-β1抗体可逆转此作用。结论TGF-β1可影响AM介导的FB中MMP-1/TIMP-1系统的表达。     

锌和硒拮抗二氧化硅致人胚肺成纤维细胞羟脯氨酸合成的实验研究

目的:观察葡萄糖酸锌(ZnG)和亚硒酸钠(Na2SeO3)对人胚肺成纤维细胞羟脯氨酸(Hyp)合成水平的单独以及联合拮抗作用.方法:用RAW264.7细胞和人胚肺成纤维细胞分别于37℃、5%CO2培养箱进行培养,RAW264.7细胞在细胞生长对数期时加入二氧化硅(SiO2),同时加入不同浓度ZnG、Na2SeO3的溶液,24 h后取RAW264.7细胞培养液与人胚肺成纤维细胞共同培养,作用48 h后测人胚肺成纤维细胞培养液中Hyp含量.结果:ZnG、Na2SeO3单独与联合作用均可以显著降低人胚肺成纤维细胞Hyp合成水平(P＜0.05),其中以ZnG 2.25 mg/L和Na2SeO3 2.0 μmol/L浓度的单独与联合作用效果最明显.结论:一定剂量的ZnG、Na2SeO3对SiO2致人胚肺成纤维细胞Hyp合成水平具有单独以及联合拮抗作用.     

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1抑制剂对氢醌致人胚肺成纤维细胞凋亡的影响

目的探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)特异性抑制剂N-(6-氧-5,6-二氢菲啶-2-羟基)-N,N-二甲基乙酰胺-盐酸(PJ34)对氢醌(HQ)所致人胚肺成纤维细胞(HLF细胞)凋亡的影响及其作用机制。方法将离体传代培养的HLF细胞分为阴性对照组、阳性对照组(HQ组)、3个PJ34组和3个PJ34 HQ组。按PJ34不同浓度(0.5、1.0、2.0μmol/L)分为PJ34的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,作用4 h后检测结果;按PJ34的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组浓度及作用4 h后再分别加入HQ(80μmol/L)分为PJ34 HQ的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,作用24 h检测结果;HQ组仅用HQ24 h处理。采用PARP-1单克隆抗体荧光标记,流式细胞术检测HLF细胞中PARP-1蛋白表达、细胞凋亡和细胞复制后期(G2)细胞数情况,噻唑蓝(MTT)比色法测定HLF细胞相对存活率。结果各组给予不同剂量的PJ34 4 h后,HLF细胞的存活(增殖)明显受抑制(P<0.05),随着PJ34浓度的增加,其抑制作用进一步增强;PARP-1蛋白表达阳性的HLF细胞百分数均明显低于阴性对照组(P<0.01);流式细胞术检测显示HQ作用24 h后均可引起HLF细胞的调亡,可出现明显的亚二倍体峰,且随着PJ34预处理浓度的增加,其峰值也逐渐增加;HQ可导致细胞周期出现G2期阻滞,PJ34 HQⅠ、Ⅱ、Ⅲ组G2期阻滞减少且差异具有显著性(P<0.05或P<0.01)。结论PARP-l抑制剂PJ34明显抑制HLF细胞PARP-1表达,增加HQ所致细胞凋亡,并通过诱导HLF细胞凋亡抑制其增殖。     

锌和硒拮抗二氧化硅致人胚肺成纤维细胞羟脯氨酸合成的实验研究

目的:观察葡萄糖酸锌(ZnG)和亚硒酸钠(Na2SeO3)对人胚肺成纤维细胞羟脯氨酸(Hyp)合成水平的单独以及联合拮抗作用。方法:用RAW264.7细胞和人胚肺成纤维细胞分别于37℃、5%CO2培养箱进行培养,RAW264.7细胞在细胞生长对数期时加入二氧化硅(SiO2),同时加入不同浓度ZnG、Na2SeO3的溶液,24 h后取RAW264.7细胞培养液与人胚肺成纤维细胞共同培养,作用48 h后测人胚肺成纤维细胞培养液中Hyp含量。结果:ZnG、Na2SeO3单独与联合作用均可以显著降低人胚肺成纤维细胞Hyp合成水平(P<0.05),其中以ZnG 2.25 mg/L和Na2SeO32.0μmol/L浓度的单独与联合作用效果最明显。结论:一定剂量的ZnG、Na2SeO3对SiO2致人胚肺成纤维细胞Hyp合成水平具有单独以及联合拮抗作用。     

镉化物对人胚肺成纤维细胞转化作用的研究

本文应用人胚肺成纤维细胞转化试验,对氯化镉的致癌性进行研究。结果表明:氯化镉在浓度0.004～0.04μM/ml范围之内,可使人胚肺细胞形态发生改变,出现明显的转化灶,细胞与刀豆蛋白A的凝集作用加强,细胞失去接触抑制特性,获得在软琼脂培养基中生长能力及细胞在软琼脂中集落形成率增高,细胞的染色体数目出现变化,增多或减少,及结构的畸变、断裂、断片等。细胞的寿命明显延长。本文通过分析各种指标,较完整的反映了氯化镉使细胞恶性转化的多阶段的转化过程,证实了体外培养的细胞转化和肿瘤的演化,与它在体内的类似物的作用一样,是一个具有多步骤的变化过程。通过实验,初步建立了氯化镉致恶性转化体外培养的实验模型、为进一步研究癌变的分子基础提供条件。