Oridonin对急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨冬凌草甲素(oridonin)对脂多糖/D-氨基半乳糖氨(LPS/D-Gal)联合诱导的急性肝衰竭(ALF)小鼠肝细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法取25只小鼠,随机分成5组,每组5只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、LPS/D-Gal诱导模型组、LPS/D-Gal诱导和不同剂量oridonin干预组及oridonin处理组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肝细胞凋亡,采用real-time PCR法检测肝组织TNF-αm RNA水平,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的变化。结果模型组小鼠肝细胞凋亡率为(36.4±1.8)%,显著高于两个oridonin干预组的[(19.4±3.3)%和(11.4±0.3)%,P0.01];模型组小鼠肝组织TNF-αm RNA水平显著高于正常对照组(P0.01),而两个oridonin干预组肝组织TNF-αm RNA水平显著低于模型组(P0.01);模型组小鼠线粒体凋亡通路相关的促凋亡蛋白c-Jun氨基末端激酶(JNK)、bax、细胞色素C、cleaved caspase9/3活化水平显著高于两个oridonin干预组(P0.01),模型组小鼠抗凋亡蛋白bcl-xl水平显著低于两个oridonin干预组(P0.01),模型组小鼠死亡受体凋亡通路相关的促凋亡蛋白caspase8活化水平与两个oridonin干预组并无明显差异(P0.01)。结论 Oridonin可抑制LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠肝细胞凋亡,其机制可能与下调促凋亡细胞因子TNF-α水平和抑制JNK介导的线粒体凋亡信号通路有关。     

Urotensin Ⅱ在急性肝衰竭小鼠肝组织中的表达及损伤作用

目的:探讨Urotensin Ⅱ(UⅡ)在急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)小鼠肝组织中的表达及损伤作用.方法:♂Balb/c小鼠随机分成4组(每组6只):正常对照组(A组)、预处理对照组(B组)、模型组(C组)和预处理模型组(D组).模型动物以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/D-半乳糖胺(D-galactosamine,D-GalN)腹腔注射,预处理动物在造模前30min,用UⅡ受体拮抗剂Urantide0.6mg/kg尾静脉注射.LPS/D-GalN攻击12h后,采集血清和肝组织标本,并观察24h小鼠存活情况;采用Reitman-Frankel法检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate amino-transferase,AST)活性水平;采用HE染色显微镜观察肝组织损伤程度;RT-PCR法检测UⅡ及其受体UTmRNA的表达;ELISA法检测血清UⅡ多肽分泌水平;免疫组织化学方法检测肝组织UⅡ多肽及其UT受体蛋白质表达.结果:C组小鼠死亡率为66.7%,A、B和D组所有动物均存活;LPS/D-GalN攻击引起C和D组小鼠血清ALT和AST水平显著升高(P<0.01),而D组较C组显著降低(2271.09U/L±102.24U/Lvs1160.67U/L±258.32U/L,1569.42U/L±204.04U/Lvs1030.31U/L±108.09U/L,P<0.01);C组小鼠肝组织结构破坏明显,见大片出血性坏死及炎症表现,D组肝组织结构保持完整,仅有局灶性出血坏死,炎症明显减轻;C和D组小鼠血清UⅡ多肽水平较A和B组高(P<0.01),但D组较C组明显降低(3.73g/L±0.52g/Lvs1.90g/L±0.27g/L,P<0.01);LPS/D-GalN诱导了C和D组小鼠肝组织UⅡ和UT的mRNA及蛋白质高水平表达,而D组的表达水平较C组显著降低(P<0.01).结论:LPS/D-GalN可诱导ALF小鼠肝组织表达和分泌UⅡ,并促进肝组织UT受体的表达;UⅡ的表达与分泌可能存在正反馈调控机制;UⅡ/UT受体介导了LPS/D-GalN诱导的ALF的发生.     

Orionin对急性肝衰竭小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响

目的探讨冬凌草甲素(Oridonin)对脂多糖/D-氨基半乳糖氨(LPS/D-Gal)联合诱导的急性肝衰竭(ALF)小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响。方法取150只小鼠,随机分成5组,每组30只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、Oridonin对照组、LPS/D-Gal诱导模型组和LPS/D-Gal处理及不同剂量Oridonin干预组。采用Real-time PCR法检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平。结果模型组小鼠48 h存活率为0.0%(0/30),而两个Oridonin干预组小鼠48 h存活率分别提高至64.5%(19/30)和80.6%(24/30,P0.01);组织病理学检查显示模型组小鼠肝细胞呈大块或/和亚大块坏死,肝小叶结构消失,残存肝细胞肿胀、空泡变性,肝窦肿胀充血,炎细胞浸润。Oridonin干预组小鼠肝细胞坏死、空泡变性和炎细胞浸润等较模型组有明显的改善;模型组小鼠血清ALT和AST水平分别为(345.3±54.1)U/L和(500.2±53.5)U/L,明显高于对照组的[(42.3±0.6)U/L和(117.1±9.8)U/L,P0.01],两个Oridonin干预组分别为(303.9±39.5)U/L和(340.6±2.8)U/L及[(130.2±38.3)U/L和(209.8±36.2)U/L,P0.05];模型组小鼠肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平显著高于正常对照组(P0.01),而两个Oridonin干预组肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 m RNA水平显著低于模型组(P0.01)。结论 Oridonin对LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠具有显著的保护作用,其作用机制可能与降低肝组织细胞因子水平有关。     

米诺环素对黑质急性炎症的保护作用及与自噬相关性研究

目的观察米诺环素对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)模型小鼠黑质急性炎症的保护作用,并探讨其作用机制。方法选取3月龄C57BL雄性小鼠,设立对照组、LPS组、中剂量米诺环素组(50 mg M组)、高剂量米诺环素组(75 mg M组)及75 mg M+LPS组、50 mg M+LPS组、25 mg M+LPS组,其中LPS组为单次腹腔注射LPS(5 mg/kg)。随后进行爬杆试验的行为学检测;并采用免疫组化法观察黑质部位小胶质细胞数量,免疫印迹法检测小鼠黑质部位α-突触核蛋白(α-synuclein)、LC3-Ⅱ、P62和HDAC6蛋白表达量。结果与LPS组相比,75mg M+LPS组小鼠爬杆速度下降更显著(P0. 05),25 mg M+LPS组及50 mg M+LPS组小鼠爬杆速度则较LPS组明显加快(P0. 01); 25 mg M+LPS组及50 mg M+LPS组小鼠黑质部位小胶质细胞的活化数量减少,且α-synuclein、LC3-Ⅱ、p62、HDAC6蛋白水平下降(P0. 01),而75 mg M+LPS组α-synuclein、LC3-Ⅱ、p62、HDAC6蛋白水平有所增加(P0. 05)。结论低、中剂量米诺环素不仅能减轻LPS单次腹腔注射造成的小鼠黑质部位急性炎症反应,而且能缓解该部位出现的自噬功能障碍,减少p62和α-synuclein黑质部位的积聚,改善小鼠的运动能力。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215对急性肝衰竭小鼠肝脏炎症反应的影响

目的观察D-氨基半乳糖/脂多糖(D-Gal N/LPS)诱导的急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)模型小鼠在组蛋白去乙酰化酶抑制剂ACY1215的作用下,炎症相关指标降钙素原(procalcitonin,PCT)、高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)、微小RNA-141(microRNA-141,miR-141)的表达情况。方法将18只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组(n=6)、ALF模型组(n=6)、ACY1215干预组(n=6),ALF模型组和ACY1215干预组采用D-Gal N/LPS联合诱导ALF小鼠模型,其中ACY1215干预组在造模前2 h腹腔注射ACY1215。24 h后检测各组血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平,取肝组织进行HE染色观察肝组织结构变化并检测肝组织PCT、HMGB1、miR-141的表达情况。结果与ALF模型组相比,ACY1215干预组小鼠肝组织结构破坏程度明显减轻,炎性细胞浸润明显减少;血清AST、ALT、TBIL水平显著下降,肝组织HMGB1及PCT表达显著降低,miR-141表达显著升高。结论 ACY1215对ALF小鼠肝组织具有保护作用,可能与其能减轻肝组织炎症反应有关。     

清肠利肝方对D-氨基半乳糖/脂多糖所致急性肝衰竭小鼠的防护作用

目的:探讨中药组方清肠利肝方对D-氨基半乳糖/脂多糖(D-Gal N/LPS)所致急性肝衰竭小鼠的防护作用并探究其相关机制。方法:将野生型健康C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、急性肝衰竭模型组(简称模型组)和清肠利肝方干预组(简称干预组)。模型组和干预组小鼠腹腔注射D-Gal N(700 mg/kg)LPS(10μg/kg)诱导肝衰竭;干预组小鼠注射D-Gal N/LPS前3天以清肠利肝方灌胃,1次/d。D-Gal/LPS给药6小时后收集小鼠肝脏组织和血清。观察各组小鼠肝脏损伤变化及相关炎症分子的变化情况。结果:模型组小鼠肝脏损伤严重,大片肝组织充血坏死;干预组小鼠肝脏损伤较模型组减轻,促炎因子水平低于模型组,MAPK通路炎症相关蛋白表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:清肠利肝方对D-Gal N/LPS所致小鼠急性肝衰竭有明显防护作用,其机制可能与调节MAPK通路而发挥抗炎作用有关。     

细胞自噬在D-氨基半乳糖/脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤模型中的保护作用及机制

目的利用D-氨基半乳糖(D-Gal N)/脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝损伤模型研究细胞自噬在急性肝损伤中的作用及机制。方法以C57BL/6小鼠为研究对象,腹腔注射D-Gal N/LPS建立小鼠急性肝损伤模型。动物实验分组:对照组、DGal N/LPS组、雷帕霉素+D-Gal N/LPS组、三甲基腺嘌呤(3-MA)+D-Gal N/LPS组、Atg7 siRNA+D-Gal N/LPS组。观察不同分组中小鼠的生存情况,观察肝组织病理变化评价肝损伤情况,全自动生化分析仪检测血清ALT、AST水平,实时荧光定量PCR检测肝组织中TNFα和IL-6基因表达,荧光显微镜观察肝组织中肝细胞凋亡情况。多样本组间比较采用One-way ANOVA分析,进一步两两比较,方差齐时采用LSD-t检验,方差不齐时采用Games-Howell法。结果与D-Gal N/LPS组相比,应用自噬激活剂雷帕霉素干预后,小鼠生存率明显升高(80%vs 40%),肝脏出血、炎症和坏死明显减轻,肝细胞凋亡明显减少,血清ALT、AST水平明显降低[ALT:(427.4±195.5)U/L vs(977.7±247.3)U/L,P=0.002;AST:(378.2±169.7)U/L vs(1100.0±438.0)U/L,P=0.004],肝组织中炎症因子TNFα和IL-6 mRNA表达水平明显降低[TNFαmRNA:0.288±0.010 vs 1.136±0.267,P=0.003;IL-6mRNA:0.272±0.061 vs 0.869±0.317,P=0.010];应用自噬抑制剂3-MA和Atg7 siRNA干预后,小鼠生存率明显降低(0、10%vs 40%),肝脏出血、炎症和坏死明显加重,肝细胞凋亡明显增多,血清ALT、AST水平明显升高[ALT:(1836.0±560.5)、(1654.0±627.6)U/L vs(977.7±247.3)U/L,P值分别为0.006、0.034;AST:(1948.0±645.5)、(1804.0±492.6)U/L vs(1100.0±438.0)U/L,P值分别为0.029、0.033],肝组织中TNFα表达水平明显升高[2.026±0.342、1.994±0.286 vs 1.136±0.267,P值分别为0.006、0.005]。结论在D-Gal N/LPS诱导的小鼠急性肝损伤中,细胞自噬发挥着重要的保护性作用,其调控机制可能与自噬抑制炎症因子和肝细胞凋亡有关。     

外周血自噬相关炎症因子表达水平与代谢综合征的相关性

目的探讨外周血自噬相关炎症因子表达水平与代谢综合征(MS)的相关性。方法选取2018年7月—2019年6月于中国人民解放军陆军第958医院收治的MS患者96例作为研究组,另选取同期在该院进行健康体检的人群96例作为对照组,对比两组体格检查指标、胰岛素抵抗(IR)、空腹血糖、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和白介素-1β水平,并测定两组自噬相关炎症因子LC3、p62和Atg5蛋白表达水平,并分析其与MS患者临床指标的相关性。结果研究组Atg5、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达水平明显高于对照组(P0.05),p62表达水平明显低于对照组(P 0.05);相关性分析结果显示,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Atg5的表达与体重指数、收缩压、舒张压、空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、IR和白介素-1β均呈正相关性(P0.05),与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关性(P0.05);而自噬相关炎症因子p62则相反;进一步多元线性回归分析发现,LC3表达量的重要相关因素为IR、甘油三酯和白介素-1β; p62和Atg5表达量的重要相关因素为IR和白介素-1β。结论 MS患者自噬相关炎症因子LC3、p62和Atg5蛋白均呈现高表达,并与患者一般临床指标存在明显相关性,对于研究MS的发病机制和评估患者病情具有一定的指导价值。     

Oridonin对急性肝衰竭小鼠肝细胞凋亡的影响及其机制研究*

目的 探讨冬凌草甲素（oridonin）对脂多糖/D-氨基半乳糖氨（LPS/D-Gal）联合诱导的急性肝衰竭（ALF） 小鼠肝细胞凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 取25只小鼠,随机分成5组,每组5只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、LPS/D-Gal诱导模型组、LPS/D-Gal诱导和不同剂量oridonin干预组及oridonin处理组。采用末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测肝细胞凋亡,采用real-time PCR法检测肝组织TNF-α mRNA水平,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白的变化。结果 模型组小鼠肝细胞凋亡率为（36.4±1.8） %,显著高于两个oridonin干预组的[（19.4±3.3）%和（11.4±0.3）%,P<0.01];模型组小鼠肝组织TNF-α mRNA水平显著高于正常对照组（P<0.01）,而两个oridonin干预组肝组织TNF-α mRNA水平显著低于模型组（P<0.01）;模型组小鼠线粒体凋亡通路相关的促凋亡蛋白c-Jun氨基末端激酶（JNK）、bax、细胞色素C、cleaved caspase9/3活化水平显著高于两个oridonin干预组（P<0.01）,模型组小鼠抗凋亡蛋白bcl-xl水平显著低于两个oridonin干预组（P<0.01）,模型组小鼠死亡受体凋亡通路相关的促凋亡蛋白caspase8活化水平与两个oridonin干预组并无明显差异（P>0.01）。结论 Oridonin可抑制LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠肝细胞凋亡,其机制可能与下调促凋亡细胞因子TNF-α水平和抑制JNK介导的线粒体凋亡信号通路有关。     

小鼠短散布核元件B1反义RNA通过激活TFEB途径介导自噬水平抗小鼠衰老

目的 探讨小鼠短散布核元件B1反义RNA(B1as RNA)抗小鼠衰老的分子机制及是否通过激活老年小鼠转录因子(TF)EB进而提高小鼠的自噬水平。方法 将老年BALB/c小鼠(≥14月龄)分成3组：B1as RNA治疗(治疗组),LacZ3F3R RNA无关RNA对照(无关对照)组和生理盐水对照(空白对照)组;每周注射1次,注射4 w,然后二氧化碳安乐处死小鼠。6～8周龄、同品系年轻正常小鼠不用任何药物处理作为实验对照(年轻对照)组。透射电镜观察小鼠肝脏细胞中自噬溶酶体。Western印迹检测小鼠肝脏和脾脏细胞中微管相关蛋白轻链(LC)3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白表达;Western印迹检测小鼠肝脏和脾脏细胞质与细胞核中TFEB蛋白表达。实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测小鼠肝脏和脾脏细胞中TFEB基因及自噬相关基因Beclin-1,Sqstm1/p62,Map1lc3b, Atg10,Atg12和Ppargc1A mRNA水平。结果 透射电镜检测到治疗组及年轻对照组肝脏细胞自噬溶酶体的形成。治疗组肝脏及脾脏LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、细胞核TFEB蛋白表达明显高于空白对照组(P...     

内源性二氧化硫抑制血管紧张素Ⅱ致心肌肥厚小鼠心肌细胞自噬的研究

目的探讨内源性二氧化硫(SO_2)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致心肌肥厚小鼠心肌细胞自噬的抑制作用。方法 9周龄健康C57BL小鼠16只,按随机数字表法随机分为野生型对照组(WT Con组)、野生型+AngⅡ组(WT AngⅡ组);心肌特异性天冬氨酸氨基转移酶2(AAT2)转基因小鼠16只,按随机数字表法随机分为AAT2对照组(AAT2 Con组)、AAT2+AngⅡ组(AAT2 AngⅡ组)。每组8只。每只小鼠在背部皮下植入预装生理盐水或AngⅡ的胶囊渗透压泵,连续给药4周。检测4组小鼠全心重/体重(HW/BW)比值;HE染色观察心肌细胞结构变化;免疫组织化学染色检测心肌标志分子α重链肌球蛋白(α-MHC)的表达;高效液相色谱检测心肌组织SO_2含量;Western blot检测内源性SO_2生成酶AAT1和AAT2、心肌表型标志分子α-MHC和β-MHC以及心肌自噬标志分子Beclin-1、LC3、Atg4B以及p62蛋白表达变化。结果与WT Con组相比,WT AngⅡ组心肌组织SO_2含量显著降低(P0.01),AAT1蛋白表达无明显变化(P0.05),AAT2蛋白表达显著减少(P0.05),HW/BW明显增加(P0.01),心肌纤维明显增粗,免疫组织化学法显示心肌细胞浆中α-MHC蛋白表达明显减弱,Western blot结果显示心肌细胞α-MHC蛋白表达显著降低(P0.01),β-MHC蛋白表达显著升高(P0.01),心肌组织LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著升高,Beclin-1和Atg4B蛋白表达显著升高,p62蛋白表达显著降低(均P0.01)。与WT Con组相比,AAT2 AngⅡ组小鼠心肌组织SO_2含量和AAT2蛋白表达显著升高(P0.01),AAT1的蛋白表达无显著变化(P0.05),HW/BW显著降低(P0.05),心肌纤维的增粗显著减轻,α-MHC蛋白向β-MHC蛋白的转化显著降低(P0.01),心肌细胞自噬水平显著降低。结论内源性SO_2/AAT2体系可抑制AngⅡ致小鼠心肌肥厚及心肌细胞自噬。     

七氟醚后处理对慢性砷中毒成年大鼠心肌细胞超微结构的影响

目的分析研究七氟醚后处理对慢性砷中毒成年大鼠心肌细胞超微结构的影响。方法抽取48只雄性SD大鼠,随机分为健康组、七氟醚干预组、砷中毒组,各16只。对各组大鼠心脏组织砷含量、心肌梗死范围、线粒体膜电位和Parkin、p62、Beclin-1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平进行检测对比。结果试验后砷中毒组大鼠体重与其余两组比较,差异有统计学意义(P0.05);与健康组比较,砷中毒组线粒体膜电位明显下降,心肌梗死范围明显增加,差异有统计学意义(P0.05);与砷中毒组比较,七氟醚干预组线粒体膜电位明显增高,心肌梗死范围明显缩小,差异有统计学意义(P0.05);与健康组比较,砷中毒组Parkin、Beclin-1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平明显上升,p62表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05);与砷中毒组比较,七氟醚干预组Parkin、p62、Beclin-1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达水平均明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论七氟醚后处理可有效缓解慢性砷中毒大鼠心肌损伤,减轻其心肌细胞超微结构破坏程度。     

姜黄素激活自噬对非酒精性脂肪性肝病大鼠线粒体途径凋亡的影响

目的探讨姜黄素对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠的治疗作用及机制。方法油红O染色观察各组大鼠肝内细胞脂滴分布,透射电镜观察肝组织中自噬泡形成情况。蛋白印迹检测P62、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、自噬相关蛋白(Beclin-1)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、相关x蛋白(Bax)、线粒体内细胞色素C(mCytc)、半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3、Caspase-9)标记蛋白的表达水平。结果与正常对照组比较,肝组织脂质沉积在模型组中明显增加;姜黄素明显抑制模型组大鼠肝组织脂质沉积,自噬抑制剂削弱姜黄素的治疗作用;透射电镜观察发现正常对照组可见散在自噬泡,模型组自噬泡数量显著减少,姜黄素可明显增加自噬体数量。蛋白印迹结果提示,模型组大鼠肝组织中Bax、Caspase-3、Caspase-9、P62蛋白表达均升高,而mCytc、Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均降低;经姜黄素治疗后肝组织中Bax、P62、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达均降低,而mCytc、Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高;自噬抑制剂可以部分抑制姜黄素对自噬和凋亡相关蛋白的影响。结论姜黄素对NAFLD大鼠模型的抗凋亡作用与诱导自噬有关。     

解耦联蛋白2在急性肝功能衰竭大鼠肝脏中的动态表达和意义

目的 探讨急性肝功能衰竭(ALF)大鼠肝脏线粒体解耦联蛋白(UCP)2的表达趋势及意义.方法 健康雄性SD大鼠36只,分为对照组和模型组,模型组冉分为6、12、24、36和48 h 5个亚组,每组6只.模型组腹腔内注射D-氨基半乳糖(D-Gal)和脂多糖(LPS)诱导大鼠ALF模型.采用HE染色,光学显微镜下观察肝组织损伤情况,采用RT-PCR和免疫组织化学检测不同时间点肝脏UCP2 mRNA转录及其蛋白表达,同时测定各时间点血清ALT、AST和肝组织丙二醛(MDA)的变化.各实验组问数值比较采用SNK检验.结果 模型组肝组织呈炎性细胞浸润和明显坏死的ALF特征;模型组ALT、AST、MDA值均明显高于对照组[(24.0±2.0)U/L,(82.3士16.9)U/L,(2.55±0.22)μmol/g],且造模24 h达高峰[(8346.7±1363.1)U/L,(9766.7±1274.1)U/L,(8.34±1.13)μmol/g;均P<0.05];UCP2蛋白和UCP2 mRNA在正常肝组织中几乎不表达,D-Gal和LPS处理后6 h表达均硅著增加(P<0.05),24 h表达最强,且模型组相邻时间点之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建大鼠ALF模型,大鼠ALF时UCP2蛋白和UCP2mRNA的表达水平与肝损伤程度及氧化应激水平有关.     

Orionin对急性肝衰竭小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响*

目的 探讨冬凌草甲素（Oridonin）对脂多糖/D-氨基半乳糖氨（LPS/D-Gal）联合诱导的急性肝衰竭（ALF）小鼠的保护作用及其对肝组织细胞因子水平的影响。方法 取150只小鼠,随机分成5组,每组 30 只。采用LPS/D-Gal腹腔注射建立小鼠ALF模型,设生理盐水对照组、Oridonin对照组、LPS/D-Gal诱导模型组和LPS/D-Gal处理及不同剂量Oridonin干预组。采用Real-time PCR法检测肝组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1α、IL-1β和IL-6 mRNA水平。结果 模型组小鼠48 h存活率为0.0% （0/30）,而两个Oridonin干预组小鼠48 h存活率分别提高至64.5% （19/30）和80.6% （24/30,P<0.01）; 组织病理学检查显示模型组小鼠肝细胞呈大块或/和亚大块坏死,肝小叶结构消失,残存肝细胞肿胀、空泡变性,肝窦肿胀充血,炎细胞浸润。Oridonin干预组小鼠肝细胞坏死、空泡变性和炎细胞浸润等较模型组有明显的改善;模型组小鼠血清ALT和AST水平分别为（345.3 ± 54.1） U/L和（500.2±53.5） U/L,明显高于对照组的[（42.3±0.6）U/L和（117.1±9.8）U/L,P<0.01],两个Oridonin干预组分别为 （303.9±39.5） U/L和（340.6±2.8） U/L及[（130.2±38.3） U/L和 （209.8±36.2） U/L,P<0.05];模型组小鼠肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 mRNA水平显著高于正常对照组（P<0.01）,而两个Oridonin干预组肝组织TNF-α、IL-1α、IL-1β和IL-6 mRNA水平显著低于模型组 （P<0.01）。结论 Oridonin对LPS/D-Gal诱导的ALF小鼠具有显著的保护作用,其作用机制可能与降低肝组织细胞因子水平有关。     

丹参酮ⅡA通过调节自噬小体对ox-LDL诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的基于自噬小体形成信号通路探讨丹参酮ⅡA对ox-LDL诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法体外培养EA.hy926细胞,随机分为正常组、模型组、丹参酮ⅡA组、丹参酮ⅡA+模型组、3-MA组、模型+3-MA组、丹参酮ⅡA+模型+3-MA组。比色法检测各组细胞氧化应激损伤丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,Western blot技术检测细胞自噬小体形成信号通路相关蛋白表达情况。结果与正常组比较,模型组MDA含量增高(P0.01),SOD活力降低(P0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量增多(P0.01);3-MA组LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量无明显变化(P0.05)。与模型组比较,丹参酮ⅡA+模型组细胞中MDA含量降低(P0.01),SOD活力增高(P0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量增多(P0.01);模型+3-MA组MDA含量增高(P0.01),SOD活力降低(P0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量减少(P0.01)。与丹参酮ⅡA+模型组比较,丹参酮ⅡA+模型+3-MA组MDA含量增高(P0.01),SOD活力降低(P0.01),LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ蛋白含量减少(P0.01)。与正常组比较,模型组Atg3、Atg4b、Atg7蛋白表达水平明显增高(P0.05,P0.01);与模型组比较,丹参酮ⅡA+模型组Atg3、Atg7、Atg5-Atg12蛋白表达水平明显增高(P0.05,P0.01);与丹参酮ⅡA+模型组比较,丹参酮ⅡA+模型+3-MA组Atg3、Atg7、Atg5-Atg12蛋白表达水平均明显降低(P0.05,P0.01)。结论丹参酮ⅡA可能通过调节EA.hy926细胞自噬小体形成信号通路即Atg12-Atg5通路和LC3-PE通路相关蛋白,发挥其保护EA.hy926细胞抗氧化应激损伤的生物学活性,进而防治动脉粥样硬化的发生发展。     

苯并(a)芘通过降低突触融合蛋白17和溶酶体关联膜蛋白2表达阻抑人脐静脉内皮细胞自噬流

目的 研究苯并(a)芘(BaP)影响人脐静脉内皮细胞(HUVEC)自噬的机制。方法 HUVEC经BaP(2.5、5、10 μmol/L)处理24 h后,分别采用间接免疫荧光法、Western blot、吖啶橙染色和单丹磺酰尸胺染色等技术方法,检测自噬体及其内容物降解、目标蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、选择性自噬接头蛋白p62、Beclin-1、自噬相关蛋白5(Atg5)、Atg7、Atg12、组织蛋白酶B(CTSB)、组织蛋白酶D(CTSD)、突触融合蛋白17(STX17)、溶酶体关联膜蛋白2(LAMP2)表达、溶酶体数量与功能,及相关上游关键调控蛋白丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、转录因子EB(TFEB)磷酸化水平。结果 BaP暴露组HUVEC内,检测结果显示:(1)LC3 puncta水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比率增加,自噬起始关键蛋白(Beclin-1、Atg5、Atg7、Atg12)表达升高,Akt蛋白磷酸化则明显降低;(2)p62 puncta和p62蛋白水平明显升高;(3)溶酶体数量增加,并伴随着溶酶体特征性水解酶(CTSB、CTSD)表达升高,相应地ERK、TFEB磷酸化水平增加;(4)调控自噬体与溶酶体融合的关键蛋白STX17与LAMP2降低。结论 BaP通过降低STX17与LAMP2表达水平,阻抑了HUVEC正常的自噬流。     

组蛋白乙酰化酶抑制剂(DCH36_06)对小鼠急性肝损伤的保护作用及机制研究

目的探讨P300/CBP组蛋白乙酰化酶抑制剂DCH36_06对LPS/D-Gal诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法 75只C57BL/6小鼠随机分成4组,正常对照组20只、ALI模型组20只、药物干预组20只和药物对照组15只,分别予腹腔注射0.9%氯化钠溶液、LPS/D-Gal、LPS/D-Gal+DCH36_06和DCH36_06处理。前3组小鼠于LPS/D-Gal刺激4 h后每组各处死5只,采集小鼠血清和肝组织,检测肝功能指标并进行HE、TUNEL染色评估肝组织病理学变化和肝细胞凋亡。RT-PCR和ELISA检测肝组织中促炎细胞因子的表达水平。余小鼠继续饲养至24 h,以观察各组小鼠24 h生存率。结果急性肝损伤模型组15只小鼠24 h存活6只,DCH36_06药物干预组15只小鼠24 h存活13只。LPS/D-Gal诱导4 h后模型组肝组织中可见显著肝细胞变性坏死,炎症细胞浸润并见散在肝细胞凋亡,与模型组相比,干预组小鼠肝组织坏死性炎症及凋亡均明显减轻。干预组小鼠血清AST、ALT和TBil水平分别为(281.4±48.1)U/L、(175.2±32.5)U/L和(9.8±0.7)μmol/L,模型组小鼠分别为(1151.0±111.1)U/L、(921.5±47.9)U/L和(21.0±0.4)μmol/L差异有统计学意义(P0.05)。RT-PCR和ELISA检测结果显示,与模型组肝组织中促炎细胞因子TNFα、IL-1β和IL-6的mRNA(72.0±9.3、91.4±4.6、175.5±19.6)及蛋白表达量[(25.9±2.3)pg/mL、(816.5±60.8)pg/mL、(305.6±20.1)pg/mL]相比,干预组肝组织内促炎细胞因子TNFα、IL-1β和IL-6的mRNA(15.4±0.2、6.0±1.6、21.5±0.9)及蛋白表达量[(7.9±1.2)pg/mL、(211.4±22.4)pg/mL、(53.2±7.3)pg/mL]均显著下调(P0.05)。结论 DCH36_06对LPS/D-Gal诱导的小鼠急性肝损伤具有显著保护作用,其机制可能与下调肝内促炎细胞因子表达,减轻肝组织炎性损伤相关。     

糖原合酶激酶3β抑制剂TDZD-8对急性肝衰竭小鼠肝组织炎症的保护作用研究

目的 探索糖原合酶激酶3β(GSK3β)抑制剂TDZD-8对急性肝衰竭(ALF)小鼠的保护作用。方法 将24只小鼠随机分为对照组、模型组和TDZD-8处理组,给予D-Gal和LPS腹腔注射,制备ALF模型,分别给予生理盐水或TDZD-8干预。采用ELISA法检测肝组织匀浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)水平,采用蛋白印迹法检测肝组织IL-18、IL-1β、UNC-51样激酶1(ULK1)、Beclin 1和P62蛋白表达。结果 模型组血清ALT、AST和TBIL水平分别为(3460.8±105.2)U/L、(2710.4±84.3)U/L和(93.8±1.1)μmol/L,显著高于对照组【分别为(28.1±4.2)U/L、(25.78±2.5)U/L和(3.4±0.4)μmol/L,P<0.05】,而TDZD-8处理组各指标均显著降低【分别为(370.1±7.1)U/L、(277.3±20.3)U/L和(35.1±0.8)μmol/L,P<0.05】;模型组肝组织匀浆TNF-α、IL-1β和血清无细胞游离(cf)-DNA水平分别为(3004.6±2...     

BET抑制剂(+)-JQ1通过调节NF-KB信号通路保护小鼠急性肝衰竭实验研究*

目的 探讨溴结构域和额外末端结构域(BET)抑制剂(+)-JQ1对脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-Gal)诱导的小鼠急性肝衰竭(ALF)的保护作用及其作用机制。方法 将47只C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=15)、模型组(n=17)和(+)-JQ1干预组(n=15),采用腹腔注射LPS/D-Gal联合诱导ALF模型,其中在干预组造模前2 h腹腔注射(+)-JQ1。在造模4 h后每组处死5只小鼠,其余小鼠继续喂养至72 h,观察存活率。采用ELISA法检测血清TNF-α,采用RT-qPCR法和Western bloting法分别检测mRNA和蛋白表达。结果 模型组72 h小鼠存活率为16.7%(2/12),(+)-JQ1干预组为60.0%(6/10,P>0.05);ALF组血清ALT水平为(2779.0±200.6)U/L,显著高于对照组【(44.9±2.5) U/L,P＜0.05】,血清AST水平为(2885.0±143.6)U/L,显著高于对照组【76.0±5.7) U/L,P＜0.05】,而(+)-JQ1干预组血清ALT和AST水平较模型组显著降低 【分别为(948.7±46.3)U/L和(1704.0±42.1)U/L,P＜0.05】;ALF组肝组织TNF-αmRNA水平为(103.7±23.0),显著高于对照组【(1.2±0.2),P＜0.05】,IL-6 mRNA水平为(73.4±15.8) ,显著高于对照组【(1.1±0.1),P＜0.05】,IL-1B mRNA水平为(13.5±2.7) ,显著高于对照组【(1.0±0.1),P＜0.05】,而经(+)-JQ1干预后,三种细胞因子mRNA水平均较模型组显著降低【分别为(12.8±1.2)、 ( 11.7±0.7) 和 (1.5±0.3),P＜0.05】;ALF组血清TNF-α水平(631.6±57.5)U/L,显著高于对照组【(2.5±0.5)U/L,P＜0.05】,而(+)-JQ1干预组血清TNF-α水平为(139.8±8.1)U/L,显著低于ALF组(P＜0.05);ALF组肝组织P65和IKB蛋白表达显著增强,而(+)-JQ1干预后显著减弱。结论 (+)-JQ1对ALI小鼠肝脏具有保护作用,可能通过调节NF-KB信号通路下调促炎细胞因子的表达,从而减轻肝组织炎症反应。