人体粪便孵育液对酸枣仁皂苷A的代谢转化研究

目的:研究酸枣仁皂苷A在人体粪便孵育液中的代谢转化。方法:人体粪便孵育液与酸枣仁皂苷A在体外37℃厌氧条件下共同培养,通过ELSD对孵育液中酸枣仁皂苷A的含量进行检测。结果:酸枣仁皂苷A与人体粪便孵育液在体外37℃厌氧条件下共同培养24 h之后,19 min处酸枣仁皂苷A峰消失,并于22 min处出现一个新峰,经ELSD检测后鉴定代谢产物为酸枣仁皂苷B。结论:酸枣仁皂苷A在人体粪便孵育液中代谢转化为酸枣仁皂苷B。     

人体肠道菌群对人参皂苷Rg_3、白头翁皂苷D代谢转化的影响

目的考察人体肠道菌群对人参皂苷Rg_3、白头翁皂苷D代谢转化的影响。方法分别采集肝癌患者与健康人体的新鲜粪便,经处理后分别与人参皂苷Rg_3、白头翁皂苷D进行厌氧共孵育,UPLC-Q-TOF/MS法鉴定其肠菌孵育后的代谢产物差异,UPLC-QQQ-MS法检测原型及其代谢产物含有量随孵育时间的变化。结果肝癌患者与健康人体肠道菌群的人参皂苷Rg_3孵育液中均鉴定出了人参皂苷Rh2(脱糖基产物)、原人参二醇;肝癌患者肠道菌群的白头翁皂苷D孵育液中鉴定出了白头翁皂苷D脱鼠李糖产物、白头翁皂苷D脱葡萄糖产物、白头翁皂苷D羟基化产物、常春藤皂苷元,但健康人体肠道菌群的白头翁皂苷D孵育液中鉴定出了白头翁皂苷D脱鼠李糖产物、白头翁皂苷D脱葡萄糖产物、白头翁皂苷D脱鼠李糖和葡萄糖产物、白头翁皂苷D甲基化产物、常春藤皂苷元。人参皂苷Rg_3、白头翁皂苷D在肝癌患者肠道菌群中的代谢速率显著低于健康人体,人参皂苷Rh2和常春藤皂苷元在肝癌患者肠道菌群中的生成速率显著低于健康人体。结论在肝癌状态下,人体肠道菌群变化对人参皂苷Rg_3、白头翁皂苷D代谢转化有显著影响。     

大鼠肠道菌群对紫丁香苷体外代谢转化研究

目的观察大鼠肠道菌群对紫丁香苷的体外代谢转化作用。方法将紫丁香苷与离体大鼠肠道菌群的孵育液分别培养O、4、8、12、24、48 h后取样,经正丁醇萃取后采用HPLC和LC-MS法对代谢产物进行定性和定量分析;扩大培养24h的孵育液经正丁醇萃取后,采用ODS柱色谱和重结晶方法分离制备代谢产物NMR法鉴定其结构。结果大鼠肠道菌群对紫丁香苷具有显著的代谢转化作用。在0~48 h代谢组的孵育液中共检测到2个代谢产物芥子醇(M_1)和右旋丁香树脂酚(M_2)。12h时有81%的紫丁香苷被代谢转化,24 h时紫丁香苷已经完全被代谢转化;并且检测到12h之前的主要代谢产物为M_1,24h后的主要代谢产物为M2,且24h后未能检测到M_1。结论在离体条件下,大鼠肠道菌群可以在24h内将紫丁香苷完全代谢转化为M_1,然后再将M_1代谢转化为M_2,且8~12h内转化紫丁香苷的速率最快。     

基于肠道菌群转化的酸枣仁质量标志物预测分析

目的从肠道菌群代谢转化的角度,研究酸枣仁水提取物转化前后原型及代谢产物。方法酸枣仁水提取物与正常人肠道菌群在厌氧条件下分别共孵育0.083、1、4、12、24h。采用超高效液相色谱-高分辨质谱分析技术,对孵育液中的化合物进行鉴定并分析代谢途径,继而以化合物峰面积百分比为指标,绘制不同时间点孵育液中黄酮、皂苷和生物碱类成分的变化规律。结果酸枣仁水提取物中共表征了31种原型成分,转化后的提取物中鉴定了4个代谢产物。苄基异喹啉类生物碱转化24 h内无明显降解。黄酮类成分的代谢反应类型丰富且反应程度剧烈,在24 h内降解完全。酸枣仁皂苷A和B主要发生水解反应。乌药碱、酸李碱、山柰酚-3-O-芸香糖苷、斯皮诺素、维采宁、酸枣仁皂苷A和B可作为酸枣仁潜在质量标志物(Q-marker)。结论将肠道菌群体外转化作为逆向佐证体内研究结果的一种方式,为中药Q-marker的预测提供一种新思路和新途径。     

大鼠肠道菌群对芍药苷体外代谢转化的研究

为研究肠道菌群对芍药苷在体内吸收和代谢的影响,该课题在离体培养的大鼠肠道菌群中,加入芍药苷进行厌氧孵育,分析芍药苷在48 h内的变化过程,探讨体外大鼠肠道菌群对芍药苷的代谢转化。采用UPLC监测芍药苷在不同孵育时间点的变化,色谱条件为:WelchromTMC18色谱柱(4.6 mm×100 mm,5μm),流动相0.1%甲酸(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速0.4m L·min-1,柱温30℃;同时运用UPLC-Q-TOF-MS/MS对转化产物进行分析鉴定(ESI离子源,正离子模式检测),结合化合物精确相对分子质量和MS裂解碎片信息,并辅以保留时间及文献数据对代谢产物进行结构解析,分析芍药苷肠道代谢规律。结果发现孵育24 h后,芍药苷已经完全被代谢转化,得到的代谢产物包括芍药内酯苷、芍药内酯苷元、脱酰基-芍药内酯苷、脱酰基-芍药内酯苷元和芍药内酯B等。通过代谢途径分析发现,离体的大鼠肠道菌群先将芍药苷转化成芍药内酯苷,然后通过脱葡萄糖、脱苯甲酰基和四元环裂解重排等多个途径被进一步代谢,将芍药苷逐步转化生成相对分子质量更小、疏水性更强的代谢产物,从而更好被肠道吸收。     

大鼠肠道菌群对苦丁茶冬青皂苷D体外代谢的影响

目的观察大鼠离体肠道菌群对苦丁茶冬青叶中苦丁茶冬青皂苷D厌氧代谢的影响。方法健康SD大鼠新鲜粪便制备的肠道菌群混悬液与苦丁茶冬青皂苷D体外厌氧培养后,收集代谢产物,采用ACQUITY UPLC BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱;流动相水(含0.1%甲酸)-甲醇(含0.1%甲酸),梯度洗脱。应用LTQ-Orbitrap质谱正离子模式分析苦丁茶冬青皂苷D的代谢产物。结果根据精确相对分子质量数据和特征离子碎片,从肠道菌群培养液中检测出4个代谢产物,主要代谢途径是脱糖反应。结论离体培养的大鼠肠道菌群可对苦丁茶冬青皂苷D进行代谢,为进一步研究其体内代谢过程提供了科学依据。     

离体大鼠肠道菌对6种皂苷类成分代谢研究

为考察离体大鼠肠道菌群对6种皂苷类成分代谢转化的情况,将6种皂苷类成分单体(三七皂苷R_1,人参皂苷Rg_1,人参皂苷Rg_2,人参皂苷Re,人参皂苷Rd和人参皂苷Rb_1)分别与离体大鼠肠道菌群在厌氧条件下孵育8,24 h,通过乙腈沉淀蛋白和乙酸乙酯萃取处理后,采用LC-Q-TOF-MS/MS对代谢产物进行定性分析。通过比较空白对照样品和加药孵育样品的总离子流以及各个色谱峰的准分子离子和多级碎片离子,分析各皂苷类成分在大鼠粪便中可能的代谢产物。结果发现,大鼠肠道菌群对6种皂苷类成分具有显著的代谢转化作用,三七皂苷R_1主要被代谢为5个产物,代谢途径为三七皂苷R_1→人参皂苷Rg_1→人参皂苷Rh_1和人参皂苷F_1→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Rg_1主要被代谢为4个产物,代谢途径为人参皂苷Rg_1→人参皂苷Rh_1和人参皂苷F_1→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Rg_2主要被代谢为2个产物,代谢途径为人参皂苷Rg_2→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Re主要被代谢为4个产物,代谢途径为人参皂苷Re→人参皂苷Rg_2→人参皂苷F_1→原人参三醇→脱氢原人参三醇;人参皂苷Rd主要被代谢为4个产物,代谢途径为人参皂苷Rd→人参皂苷Rg_3和人参皂苷F_2→人参皂苷Rh_2→原人参二醇;人参皂苷Rb_1主要被代谢为5个产物,分别为人参皂苷Rb_1→人参皂苷Rd→人参皂苷Rg_3和人参皂苷F_2→人参皂苷Rh_2→原人参二醇。综上所述,6种皂苷类单体均能够被离体大鼠肠道菌群代谢,主要的代谢途径为脱糖基和脱氢。     

人肠道菌群对头花蓼提取物中3个单体成分体外代谢转化研究

目的:研究离体人肠道菌群对头花蓼提取物中槲皮素、槲皮苷和金丝桃苷3个单体成分在体外代谢转化的情况。方法:将3个成分与人肠道菌孵育液分别在37℃离体厌氧环境中培养24 h,采用超高压液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间串联质谱仪进行检测,运用Metabolite Predict、Metabolite Detect对样品中的代谢产物进行预测并检测分析,结合Mass Defect Filter技术进一步有效提取代谢产物信息,排除基质背景干扰,并应用Data Analysis中Smart Formula功能推测代谢产物化学式。结果:槲皮苷和金丝桃苷主要以脱糖反应为主,苷元槲皮素进一步发生羟基化、甲基化、开环、还原等反应。结论:该实验建立了人肠道厌氧菌群体外代谢研究模型,为头花蓼提取物在人肠道内转化吸收提供了科学依据。     

大鼠肠道菌群对羊耳菊提取物的代谢作用研究

考察大鼠肠道菌群对羊耳菊提取物中主要成分的代谢作用,将羊耳菊提取物与大鼠肠道菌液在厌氧条件下共同孵育24 h,通过正丁醇液液萃取处理后,采用色谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)对代谢产物进行定性分析,并结合布鲁克公司研发的数据处理工具Metabolite Tools,Data Analysis等对代谢信息进行综合分析。通过比较空白样品图谱,肠菌样品图谱以及两者的差异图谱,各色谱峰的准分子离子,碎片离子,分析羊耳菊提取物在大鼠肠道菌群作用下可能产生的代谢产物。结果提示,羊耳菊提取物在肠道菌群作用下,检测到14个代谢产物,主要包括单咖啡酰基奎宁酸的异构,水解的小分子化合物和咖啡酸的还原,甲基化和乙酰化等代谢产物,同时仅检测到1个二咖啡酰基奎宁酸的甲基化代谢产物。以此推测,咖啡酰基奎宁酸类成分在肠道菌群的作用下可能多数水解为分子量小,疏水性更强的代谢产物,使得其更容易被肠道吸收。     

大黄4种饮片水提液体外肠道菌群转化比较研究

目的:研究比较大黄4种饮片水提液在大鼠肠道菌群中的代谢转化情况。方法:在厌氧条件下,分别将大黄4种饮片水提液与大鼠肠道菌试液在37℃温孵,采用HPLC-DAD,HPLC-MS/MS对可被肠道菌群代谢转化的成分及代谢产物进行定性分析,并根据各母体化合物在不同孵育时间的色谱峰面积变化分析其代谢转化趋势。结果:蒽醌类化合物、没食子酰葡萄糖苷类化合物、萘苷类化合物能在肠道菌群的作用下发生代谢转化。其中,蒽醌类化合物占有绝对优势,在发现的17个代谢物中初步推测有12个由蒽醌类化合物转化而来。实验还发现,随着孵育时间的增加,不同饮片中同一成分代谢转化的趋势不尽相同。结论:炮制改变了大黄饮片所含成分的组合及比例关系,对它们的肠道菌群转化产生了影响。     

连翘酯苷A、连翘苷的体外肠道菌群代谢研究

目的 研究连翘酯苷A、连翘苷经肠道菌群转化后的代谢产物及其代谢途径.方法 将连翘酯苷A、连翘苷分别与大鼠肠道菌群培养液体外厌氧温孵培养后,进行UPLC-TOF/MS鉴定分析.结果 在温孵液中检测到原药、连翘酯苷A代谢产物连翘脂苷E、连翘苷代谢产物1,3,4,6-tetrahydro-1-(3,4-dimethoxyph...     

大鼠肠道菌群对短小蛇根草苷体外代谢转化研究

为分析短小蛇根草苷经体外大鼠肠道菌群代谢转化的产物,在离体培养的大鼠肠道菌群中,加入短小蛇根草苷,采用HPLC检测代谢进程,采用UPLC-Q-TOF-MS鉴定肠菌代谢转化产物。结果显示,短小蛇根草苷容易被大鼠离体肠道菌群代谢,随着代谢时间的延长,短小蛇根草苷被代谢转化成多个代谢产物,该实验初步鉴定了3个代谢产物。研究结果表明短小蛇根草苷能够在大鼠离体肠道菌群中发生广泛的代谢。     

UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS分析白头翁皂苷B3在大鼠肠道菌群中的代谢产物

目的:研究大鼠肠道菌群对白头翁皂苷B_3的代谢作用,为皂苷类物质在肠道菌群的代谢特征研究提供参考。方法:以连翘苷为内标物,建立UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS检测条件,流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0~8 min,10%~95%A;8~10 min,95%A;10~10.10 min,95%~10%A),流速0.3 m L·min~(-1),扫描方式为电喷雾(ESI)负离子模式,离子喷雾电压-3 500 V,碰撞电压130 V,干燥气流量12 L·min~(-1),温度350℃,鞘气流量12 L·min~(-1),温度350℃,碎裂电压分别为20,35,50 V。总离子流全扫描的范围m/z 100~1 100。采用负离子和多反应离子监测模式分析白头翁皂苷B_3与大鼠肠道菌群共孵育后的代谢产物。结果:从药物-菌群孵育液中鉴定出白头翁皂苷B3的3-位侧链脱糖代谢产物及苷元母核上羟化、羧化和脱羧、甲基化和去甲基化代谢产物共8种。结论:大鼠肠道菌群在实验条件下能有效代谢白头翁皂苷B3,提示上述代谢产物是其生物活性成分。     

刺五加苷B、苷E在大鼠体内肠道菌群中的代谢

目的：观察刺五加苷B、刺五加苷E等刺五加有效部位在大鼠体内肠道菌群中的代谢情况。方法：以10倍剂量给大鼠灌胃刺五加的有效部位,收集1、2、4、6、8、12h的大鼠肠道内容物和12h的大鼠粪便,加水使粪便与水的比例为1g：4ml,13000r/min离心,取上清液采用HPLC法检测刺五加苷B刺五加苷E的道谢情况。结果：在给大鼠灌胃刺五加有效部位后,12h内的大鼠粪便里检测不到刺五加的有效成分和代谢产物,经过对大鼠肠道内容物的研究得出,4h后刺五加的有效部位被完全代谢,但检测不到刺五加苷B、刺五加苷E的代谢产物。结论：绿原酸和异秦皮啶在大鼠肠道菌群中不发生代谢。体内研究显示,刺五加的有效部位在4h后被完全代谢吸收,但是检测不到刺五加苷B、刺五加苷E的代谢产物,推测其代谢产物可能直接被大鼠吸收。     

不同配伍对半夏泻心汤皂苷类成分的肠菌代谢影响研究

目的:比较肠道菌群对半夏泻心汤伞方组、甘补组及其单味人参和甘草中皂苷类成分代谢的影响.方法:利用体外肠道菌群厌氧孵育的技术,研究全方组、甘补组及其单味药提取液与大鼠肠道菌群37℃厌氧环境下培养,采集不同孵育时间点样品,利用LC-MS/MS分析方法进行各原型物及代谢产物的快速分离和含量测定,并求其降解速率K,比较不同配伍组的代谢差异和特征.结果:肠道菌群可将皂苷类成分转化为其代谢产物.根据SPSS单因素方差比较得知不同配伍组中皂苷成分代谢存在差异,甘草酸的降解速率甘补组＞全方组＞单方组(P＜0.05);Rb1在全方中降解最慢;Re的降解速率全方组＞单方组＞甘补组(P＜0.05);Rg1可由Re代谢产生,后降解为Rh1,且降解速率单方组＞甘补组＞全方组(P＜0.05).结论:全方、甘补组对人参皂苷肠菌代谢具有不司的诱导或抑制作用,全方组可以抑制Rb1,Rg1的代谢,促进甘草酸代谢为甘草欠酸,利于吸收发挥药效.复方配伍对Rd,Rg3的肠菌代谢没有影响.     

甘草酸在肝炎患者和肝癌患者肠道菌群参与下代谢差异研究

目的比较不同病理状态下(肝炎患者与肝癌患者)肠道菌群对甘草酸代谢处置的差异,探究同一制剂在不同患病人群的药效学差异因素。方法分别采集肝炎患者与肝癌患者的新鲜粪便,称重稀释后取上清与甘草酸进行厌氧共培养,采用UPLC-Q-TOF/MS技术对甘草酸分别与肝炎患者和肝癌患者肠道菌群共孵育后的代谢产物进行分析与鉴定。结果从肝炎患者和肝癌患者肠道菌群的含药孵育液中鉴定出甘草酸单糖水解产物、苷元、脱氢苷元、脱羧基苷元等6种相同的代谢产物,在肝炎患者肠道菌群的含药孵育液中还鉴定出2种脱羟基苷元,而在肝癌患者肠道菌群孵育液中未检测到甘草酸脱羟基产物。结论肝炎患者与肝癌患者肠道菌群对甘草酸的代谢处置有所不同,从代谢途径为甘草酸制剂在不同人群中的药效学差异提供解释途径。     

离体大鼠肠道菌群对类叶升麻苷代谢的研究

在离体培养的大鼠肠道菌群中加入类叶升麻苷进行厌氧孵育。采用HPLC监测类叶升麻苷在不同孵育时间点的变化,同时运用HPLC-Q-TOF-MS鉴定类叶升麻苷的代谢产物。结果表明离体的大鼠肠道菌群可以对类叶升麻苷进行代谢,代谢产物分别是3,4-二羟基苯乙醇、咖啡酸和3-(3'-羟苯基)丙酸。     

大鼠肠道菌群对三七总皂苷体外降解的研究

目的探究雌、雄大鼠肠道菌群对三七总皂苷中3种皂苷(三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1)的体外降解作用。方法将三七总皂苷分别与雌、雄大鼠肠道菌群孵育液在厌氧条件下共同培养24 h,测定不同时间点孵育液中3种皂苷的量。结果雌、雄大鼠肠道菌群对人参皂苷Rb1均有降解作用,雄鼠的降解较雌鼠稍快。雌、雄鼠肠道菌群对三七皂苷R1和人参皂苷Rg1均无明显降解作用。结论在离体条件下,三七总皂苷中人参皂苷Rb1会被肠道菌群降解,而三七皂苷R1和人参皂苷Rg1则较为稳定。     

离体人肠道菌群对柚皮苷的代谢动力学分析

目的:研究人肠道菌群对柚皮苷的代谢程度与速度,为该成分的新药开发提供参考。方法:采集健康志愿者新鲜粪便制备肠道菌群混悬液,与柚皮苷在厌氧环境下孵育,运用HPLC监测柚皮苷浓度变化,HPLC-MS鉴定代谢产物结构。柚皮苷HPLC色谱条件为检测波长288 nm,流动相甲醇-0.1%磷酸溶液梯度洗脱。结果:柚皮苷与人肠道菌群共同孵育15 min后,柚皮苷色谱峰后面可见1个代谢产物;孵育至120 min时,柚皮苷代谢率100%。经HPLC-MS鉴定代谢产物为柚皮素。柚皮苷代谢过程符合非线性动力学过程。HPLC监测发现柚皮素可被进一步代谢,导致柚皮素峰面积降低。结论:柚皮苷可被人肠道菌群代谢,代谢速度快,代谢产物主要为柚皮素,可能存在柚皮苷的二级代谢产物。     

大鼠肠道菌群对荭草花有效组分代谢转化的影响

目的:考察荭草花有效组分在大鼠肠道菌群中的代谢特征。方法:采用超高效液相色谱串联电喷雾四级杆飞行时间质谱联用技术(UPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS)检测荭草花有效组分在大鼠体外肠道菌群中的孵育样品,流动相0. 1%甲酸水溶液-0. 1%甲酸乙腈溶液梯度洗脱,流速0. 3 m L·min-1,电喷雾离子源(ESI),正、负离子模式扫描,使用Metabolite ToolsTM和质量亏损过滤(MDF)等代谢产物分析技术,并结合化合物精确相对分子质量、碎片离子信息及文献数据,分析荭草花有效组分在大鼠体外肠道菌群中的代谢产物,推测其可能的生物转化途径。结果:荭草花有效组分经离体大鼠肠道菌群孵育后共检出18个代谢产物色谱峰,其生物转化途径主要是以还原、氧化、水解为主的Ⅰ相反应,甲基化为主的Ⅱ相反应。结论:荭草花有效组分能够在大鼠肠道菌群作用下转化为多种代谢产物,提示荭草花用药时,应考虑代谢产物是否为其生物活性成分。