苯及苯系物暴露和DNA甲基化与儿童急性淋巴细胞白血病的关联性

目的了解苯及苯系物暴露、全基因组DNA甲基化与儿童急性淋巴细胞白血病(cALL)之间的关联性,为预防cALL提供参考依据。方法 2015年1月—2016年5月,采用1∶1匹配的病例-对照研究的方法,选取67例就诊于深圳市儿童医院的0~14岁确诊的初发cALL,选取同期骨科与病例同年龄、同性别的儿童为对照。对两组儿童进行问卷调查,获取基本信息资料并收集儿童的尿液标本。采用高效液相色谱法测定苯、甲苯、二甲苯(反-反式黏糠酸、马尿酸、2-甲基马尿酸、3-甲基马尿酸、4-甲基马尿酸)代谢产物量,所得暴露量用尿肌酐进行校正,以此作为环境化学物内暴露指标;采用免疫荧光法测定血液全基因组DNA甲基化。采用多因素logistic回归模型分析苯及苯系物暴露、全基因组DNA甲基化水平与cALL发病风险的关联,及各内暴露对全基因组DNA甲基化水平的影响。结果共收集初发cALL病例和对照各67例。病例组中苯的内暴露浓度的P_(50)(3.20μg/g肌酐)高于对照组(1.05μg/g肌酐),差异有统计学意义(Z=-2.33,P0.05)。多因素logistic回归模型分析结果显示,全基因组DNA甲基化(OR=0.76,95%CI:0.01~0.73)和家族肿瘤史(OR=13.26,95%CI:1.17~150.56)是cALL发病的危险因素。结论全基因组DNA低甲基化和家族肿瘤史是cALL发病的危险因素。     

NET基因启动子区DNA甲基化在职业紧张所致高血压中的研究

目的研究去甲肾上腺素转运体(NET)基因启动子区DNA甲基化水平与职业紧张性高血压的相关性。方法 2013年1月—2015年12月,通过调查问卷、体格检查和实验室检测获取一般资料及生化指标。采用亚硫酸氢盐克隆测序法检测NET基因启动子区各CpG位点的甲基化水平。结果高血压病例组与对照组均衡可比。高血压组与对照组相比CpG1(49.98±7.57 vs 53.39±5.13)及CpG7(14.29±3.92 vs 12.28±1.49)DNA甲基化水平差异均有统计学意义(均P0.05),高血压患者中高度职业紧张组和低度职业紧张组NET基因DNA甲基化不同位点比较,CpG1(55.71±6.98 vs 49.14±6.38)水平差异有统计学意义(P0.05)。结论 NET基因启动子区DNA甲基化水平在职业紧张与高血压相关性中起到一定的调控作用。     

外周血全基因组DNA甲基化在甲基供体与乳腺癌关系中作用的研究

目的 探讨外周血全基因组DNA甲基化在甲基供体（叶酸、蛋氨酸、总胆碱、甜菜碱）与乳腺癌发病关系中的作用。方法 采用病例对照研究设计,共纳入300例乳腺癌病例和300例对照。采用食物频数问卷调查研究对象的膳食摄入并计算甲基供体的摄入量。采集研究对象外周血提取DNA,使用MethylFlash^TM Methylated DNA Quantification Kit（Colorimetric）进行全基因组DNA甲基化分析。运用路径分析表现甲基供体摄入、全基因组DNA甲基化程度和乳腺癌发病之间的相互关系。结果 病例组和对照组外周血全基因组DNA甲基化率分别为0.46% ± 0.25%和0.53%±0.34%,病例组低于对照组,差异有统计学意义（P< 0.01）。路径分析结果显示,蛋氨酸摄入与外周血全基因组DNA甲基化程度呈正相关（β=0.065,P< 0.05）,而外周血全基因组DNA甲基化程度与乳腺癌发病风险呈负相关（β=-0.027,P< 0.05）。结论 乳腺癌病例外周血全基因组DNA甲基化程度低于对照组人群。外周血全基因组DNA甲基化在蛋氨酸摄入与乳腺癌发病风险之间起了中介作用。     

急性砷暴露对C57BL/6J和129X1/SvJ小鼠肝脏全基因组DNA甲基化的影响

目的研究常用近交系品系C57BL/6J(B6)和129X1/SvJ(129)小鼠急性砷暴露后肝脏全基因组DNA甲基化的差异。方法将健康成年清洁级雄性野生型B6和129小鼠各18只按体重随机分别分为3组,分别为对照组(生理盐水,24 h),亚砷酸钠(5 mg/kg)染毒后6 h、24 h组,每组各6只。采用一次性灌胃方式进行染毒,采用ELISA法检测肝脏中全基因组DNA甲基化水平,采用Western blot法检测肝脏中DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3a、DNMT3b以及砷甲基化相关酶亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR)、甲硫氨酸合成酶(methionine synthetase,MTR)、砷甲基转移酶(CYT19)蛋白的表达水平。结果与对照组相比,亚砷酸钠处理后6 h的129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平降低,亚砷酸钠处理后24 h的B6小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。在基础水平下,129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平高于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05);亚砷酸钠处理后24 h时,129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平低于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,亚砷酸钠染毒后24 h的B6小鼠肝脏中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平均较高,而亚砷酸钠染毒后6 h的129小鼠肝脏中DNMT1、DNMT3a的蛋白表达水平均较低,差异有统计学意义(P0.05)。基础水平下的129小鼠肝脏中DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的蛋白表达水平及亚砷酸钠染毒后24 h的129小鼠肝脏中DNMT3b的蛋白表达水平均高于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,仅亚砷酸钠染毒后24 h的B6小鼠肝脏中MTHFR、MTR的蛋白表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);而亚砷酸钠染毒129小鼠肝脏中MTHFR、MTR、CYT19的蛋白表达水平均无明显变化。基础水平下的129小鼠肝脏中MTHFR、MTR的蛋白表达水平及亚砷酸钠染毒后6 h的129小鼠肝脏中MTHFR的蛋白表达水平均高于B6小鼠,差异有统计学意义(P0.05)。结论急性亚砷酸钠染毒可升高B6小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平以及DNA甲基转移酶和砷甲基化相关酶蛋白的表达,而降低129小鼠肝脏中全基因组DNA甲基化水平以及DNA甲基转移酶和砷甲基化相关酶蛋白的表达。     

基因组甲基化异常与儿童原发性肾病综合征相关性研究

目的探讨基因组总体甲基化水平与儿童原发性肾病综合征的关系。方法收集本院儿童肾内科诊断为原发性肾病综合征患儿20例为肾病组,另收集本院儿童保健科体检儿童20例为健康对照组,采用ELISA法检测肾病患儿缓解前后的总体甲基化水平变化。结果肾病组的总体甲基化水平为(0.343±0.054)%,健康对照组的总体甲基化水平为(0.870±0.116)%,2组差异有统计学意义(P0.01)。同时检测18例激素敏感型肾病综合征患儿肾病缓解前后的总体甲基化水平,肾病缓解前总体甲基化水平为(0.340±0.058)%,肾病缓解后总体甲基化水平为(0.395±0.049)%,2组差异无统计学意义(P0.05)。结论原发性肾病综合征患儿的总体甲基化水平降低,激素敏感型肾病综合征患儿肾病缓解前后的总体甲基化水平无明显差异。     

厨师人群基因组DNA总甲基化水平及影响因素分析

目的探讨烹饪油烟(cooking oil fume,COF)对机体基因组DNA总甲基化水平的影响。方法选取哈尔滨市内宾馆、酒楼等餐饮业从业人员,以120名中餐厨师作为COF暴露人群,以120名从事后勤、市场采购、客房、前台等人员作为对照人群,进行流行病学问卷调查,并采集血液进行基因组DNA总甲基化水平检测。结果 COF暴露组和对照组人群的年龄、受教育程度、吸烟情况、二手烟暴露、工龄等因素差异无统计学意义(P0.05)。两组人群DNA均有不同程度甲基化,但暴露组人群DNA总甲基化水平显著高于对照组(P0.05)。多元回归分析表明COF暴露量是影响厨师DNA总甲基化水平的危险因素,COF暴露量越大,DNA总甲基化水平越高。结论在本研究条件下,长期暴露于COF的厨师人群DNA总甲基化水平显著高于一般人群,DNA总甲基化水平与COF暴露量成正相关,DNA总甲基化水平可作为COF暴露的候选效应生物学标志物,应用于厨师人群肿瘤的早期筛查。     

Th22/IL22与职业性甲醛所致变应性接触性皮炎发病关系

目的研究Th22细胞及其细胞因子IL22在职业性低水平甲醛接触人群中的表达,并探讨其与甲醛所致职业性变应性接触性皮炎(OACD)发病的关系。方法选取104例职业性甲醛接触人群(接触量职业接触限值OEL)及90例健康对照人群纳入研究,通过流式细胞术(FCM)检测外周血IL22~+T细胞亚型及其比例,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL22水平,分析两组之间的差异,及其与嗜酸性粒细胞(EOS)计数的关系。结果职业甲醛接触组外周血CD3~+CD8~-IL22~+细胞百分比高于健康对照组,差异有统计学意义(1.95±0.225%vs 0.64±0.081%,P0.05);外周血中尚存在少量CD3~+CD8~+IL22~+细胞,职业甲醛接触组CD3~+CD8~+IL22~+细胞百分比也高于健康对照组,差异有统计学意义(0.53±0.053%vs 0.15±0.024%,P0.05)。外周血CD3~+CD8~-IL22~+细胞百分比与EOS计数呈正相关(r=0.460,P0.05)。职业甲醛接触组血清IL22水平高于健康对照组,但差异无统计学意义(6.05±0.834pg/ml vs 5.65±1.310pg/ml,P0.05)。结论职业性低水平甲醛接触人群外周血IL22~+T细胞增多,包括CD8~-T细胞及CD8~+T细胞,但血清IL22水平无明显升高,IL22~+T细胞增多可能为甲醛所致的早期改变,可能与甲醛所致OACD发病有关。     

基于全基因组水平的维吾尔族多囊卵巢综合征患者卵巢组织的特异性甲基化谱改变

目的在全基因组水平上,探讨维吾尔族多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢组织的特异性甲基化谱改变。 方法选择2014年5月至2016年6月,于喀什地区第一人民医院进行诊治的60例维吾尔族PCOS患者的卵巢组织(PCOS组)及60例维吾尔族卵巢囊肿患者的正常卵巢组织(对照组)为研究对象。采用甲基化DNA免疫共沉淀结合芯片(MeDIP-chip)技术,对2组卵巢组织的基因组DNA进行全基因组胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(CpG)岛和启动子区域甲基化扫描。将MeDIP-chip结果中,峰值得分≥2的区域,判定为阳性甲基化区域,以筛选甲基化基因;对PCOS卵巢组织峰值得分≥5的特异性高甲基化基因,进行基因本体(GO)分析及Pathway分析,以探讨这些特异性高甲基化基因对机体相关功能的影响。对2组卵巢组织的甲基化谱差异,采用配对t检验及χ²检验进行统计学比较。本研究遵循的程序符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》的要求,所有受试者均自愿参加本研究,并签署知情同意书。 结果① MeDIP-chip结果显示：PCOS组全基因组CpG岛和启动子的甲基化率,分别为12.9%(3 633/28 226)和3.8%(687/18 028),对照组分别为13.3%(3 759/28 226)和3.6%(643/18 028)。2组卵巢组织全基因组整体甲基化水平,以及甲基化片段在基因组各区的分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。②2组卵巢组织全基因组转录调控区的上游调控区和核心启动子区域甲基化水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。PCOS组转录调控区的基因编码区甲基化水平为(3.14±0.21),显著低于对照组的(3.96±0.23),并且差异有统计学意义(t＝2.653,P＝0.010)。③2组卵巢组织全基因组高甲基化启动子的高-CpG含量启动子(HCP)、中-CpG含量启动子(ICP)及低-CpG含量启动子(LCP)的分布比较,差异有统计学意义(χ²＝3.208,P＝0.002),其中PCOS组卵巢组织全基因组HCP比例最高(40.1%),对照组HCP比例则最低(13.3%)。PCOS组卵巢组织全基因组HCP甲基化水平为(0.68±0.08),低于对照组的(0.71±0.09),而ICP及LCP甲基化水平分别为(0.74±0.13)和(0.76±0.11),则高于对照组的(0.61±0.07)和(0.32±0.03),并且差异均有统计学意义(t＝1.686,P＝0.049;t＝1.992,P＝0.028;t＝3.361,P＝0.002)。④ GO分析及Pathway分析结果显示：维吾尔族PCOS患者卵巢组织的特异性高甲基化基因,主要参与受体结合、蛋白质结合、激素活性、转录调节活性、转录因子活性和DNA结合等过程。 结论维吾尔族PCOS患者卵巢组织的基因编码区甲基化水平,较正常卵巢组织低;全基因组高甲基化启动子的HCP比例最高,但是甲基化水平较正常卵巢组织的低,ICP及LCP的甲基化水平,较正常卵巢组织的高。这些特异性甲基化改变,可能与维吾尔族女性的PCOS发生、发展有关系。     

孤独症谱系障碍患者基因组DNA甲基化水平的初步研究

目的检测孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder,ASD)患者基因组DNA甲基化的水平,探讨其在ASD发病中的意义。方法采集2014年1月-2016年2月在儿童保健所门诊就诊及训练的30例ASD患者和正常对照组外周静脉血,分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMCs),抽提DNA,采用Methyflash~(TM)总体DNA甲基化试剂盒检测外周血单个核细胞基因组DNA甲基化水平,实时荧光定量PCR技术检测DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)mRNA表达水平,分析两者之间的相关性及其与儿童孤独症行为量表(Autism Behavior Checklist,ABC)得分的相关性。结果与正常对照组相比,20例ASD患者外周血单个核细胞基因组总体DNA甲基化水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05);两组间DNMT1基因mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。ASD患者基因组DNA总体甲基化水平与DNMT1的mRNA表达水平无明显相关性(r=0.311,P=0.182);ASD患者基因组DNA总体甲基化水平与ABC量表得分呈负相关(r=-0.504,P=0.038)。ASD患者DNMT1的mRNA表达水平与ABC量表得分无显著相关性(r=-0.112,P=0.645)。结论 ASD患者基因组DNA甲基化水平降低。     

镉亚急性暴露对小鼠肝肾功能及甲基化水平的影响

[目的]初步探讨氯化镉(cadmium chloride,CdCl2)亚急性暴露(4周染毒)对小鼠肝肾功能、全基因组甲基化水平及去甲基化酶Tet1表达的影响. [方法]将48只SPF级KM小鼠(昆明小鼠,雌雄各半)随机分为4组:对照组(ddH2O)、CdCl2 17.5 mg/kg组、25 mg/kg组、35 mg/kg组.经口灌胃染毒(每天1次、每周5d),共染毒4周,CO2麻醉法处死动物.测定肝脏和肾脏的脏器系数、血液常规及血液生化检查、肝肾组织病理学检查、全基因组DNA甲基化水平及Tet1酶表达水平. [结果]35 mg/kg染毒组小鼠活动度及精神状态较差.小鼠体重在各染毒周期和染毒剂量组间差异均有统计学意义,且存在交互作用(P＜ 0.05).与对照组相比,雄性小鼠肝脏质量和肝脏脏器系数在25 mg/kg和35 mg/kg剂量组差异具有统计学意义(P＜0.05);血液常规检查结果显示,雌、雄性小鼠35 mg/kg染毒组血液白细胞(WBC)、血小板(PLT)、淋巴细胞(LYM)计数,均高于对照组(P＜0.05);雄性小鼠在各个染毒剂量组间,WBC、PLT、LYM、RBC计数差异有统计学意义(P＜0.05).此外,血生化实验结果显示,各剂量组雄性和雌性小鼠中肝功能的主要指标谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)差异有统计学意义(P＜0.05),肾功能的主要指标尿酸(UA)、血尿素氮(BUN)、肌酐(CR)差异均有统计学意义(P＜0.05).组织病理学分析发现25 mg/kg和35 mg/kg组雄性小鼠肝脏及肾脏呈现明显的病理性改变.Tet1 mRNA及其蛋白表达水平仅在雄性小鼠的肝脏、肾脏中表达的差异有统计学意义(P＜0.05).焦磷酸测序结果显示,雄性小鼠肝脏、肾脏甲基化水平表达差异有统计学意义(P＜0.05),且其与Tet1 mRNA表达呈负相关(r=-0.473,P＜0.05;r=-0.134,P＜0.05). [结论]CdCl2亚急性染毒可以诱导小鼠肝肾功能损伤,且对全基因组甲基化水平和去甲基化酶Tet1表达呈现出性别差异影响,雄性小鼠的肝肾组织Tet1表达参与调控全基因组DNA甲基化水平改变.     

甲状腺癌患者血DNA甲基化分子标志物

[目的]探讨甲状腺癌患者血液中DNA甲基化情况,筛选出与甲状腺癌相关的甲基化分子标志物。[方法]收集上海地区14例甲状腺癌患者血液样本,10份正常对照血液样本,利用Illumina 27K甲基化芯片检测全血基因组DNA样本,得到甲状腺癌血液DNA甲基化谱,采用Fisher、Pearson和Wilcoxon检验等进行统计学和生物信息学分析。[结果]经病例组和对照组之间位点的甲基化差异分析,统计学筛选阈值选择P≤5×10-4时,29个基因在病例组中显著高表达（高甲基化）;11个基因在病例组中低表达（低甲基化）。统计学筛选阈值选择P≤1×10-4时,则筛选出的差异甲基化基因（位点）总计8个,其中7个基因在病例组中显著高表达（高甲基化）;1个基因在病例组中显著低表达（低甲基化）。构建甲状腺癌疾病诊断预测模型,在阈值为P≤1×10-4时筛选出来的8个差异甲基化基因对于疾病预测平均准确度达91.67%。[结论]血液中甲基化修饰异常的基因与甲状腺癌的发生发展有关,其有可能成为甲状腺癌血液诊断的分子标志物。     

焦炉工人周围血细胞p16基因甲基化研究

目的分析焦炉工人周围血细胞中p16基因启动子区CpG岛异常甲基化状态,寻找焦炉工人肺癌辅助筛查的生物标志物。方法以74名男性焦炉工人为接触组,以47名供水厂男性职工为对照组。采集2组人员的班后尿,用高效液相色谱法检测其内暴露指标1-羟基芘(1-OH-Py)的水平;同时采集晨起空腹肘静脉血,分离周围血单个核细胞,用彗星实验检测DNA损伤情况;并提取基因组DNA,用甲基化特异性聚合酶链反应技术检测p16基因启动子区CpG岛甲基化发生情况。结果接触组尿1-OH-Py水平[(0.46±0.12)μmol/mol Cr]和DNA拖尾的Olive尾距[(0.41±0.25)μm]高于对照组[(0.17±0.06)μmol/mol Cr、(0.32±0.12)μm],差异有统计学意义(P<0.05)。接触组p16基因的异常甲基化的检出率(36.49%)高于对照组(4.26%),差异有统计学意义(P<0.01);并且p16基因的异常甲基化检出率随着尿1-OH-Py的水平升高逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论周围血p16基因异常甲基化可能是焦炉工人肺癌早期筛查有效的生物标志物。     

香烟烟雾对小鼠卵母细胞染色质构型、DNA甲基化及相关基因表达的影响

目的探讨香烟烟雾暴露对小鼠卵母细胞染色质构型、全基因组DNA甲基化及相关基因表达的影响。方法将清洁级健康ICR雌鼠分成3组(对照组和香烟烟雾低剂量组、高剂量组),分别置于点燃0、1、2支香烟的染毒柜(容积18 L)中,每天2次,每次1 h,共4周。利用Hoechst 33342对细胞核染色,观察卵母细胞质量及染色质构型;间接免疫荧光法分析卵母细胞全基因组DNA甲基化模式,实时荧光定量PCR测定卵母细胞DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMT)1、DNMT3a及DNMT3b基因的mRNA表达水平。结果随着烟雾浓度的升高,去透明带卵母细胞直径显著减小(P0.05),核仁未包围(non surrounded nucleolus,NSN)染色质构型比例明显升高(P0.05)。高剂量组卵母细胞DNA甲基化水平显著下降(P0.05)。随烟雾浓度升高DNMT1表达量降低,DNMT3b在高剂量组中表达水平显著降低(P0.05)。结论香烟烟雾暴露可能通过改变卵母细胞染色质构型,降低DNA甲基转移酶的表达,使DNA甲基化水平下降,从而降低卵母细胞质量。     

子痫前期胎盘全基因组DNA甲基化水平研究

目的:探讨子痫前期(pre-eclampsia PE)胎盘全基因组DNA甲基化水平。方法:收集子痫前期患者胎盘标本21例,分为足月组(9例)和非足月组(12例),另选择正常孕妇胎盘19例作为对照。检测胎盘全基因组DNA甲基化水平,并收集患者的临床资料进行回顾性研究。结果:子痫前期足月组胎盘与正常胎盘全基因组DNA甲基化水平差异无统计学意义(P>0.05),非足月组较正常胎盘差异有统计学意义(P<0.05);非足月组子痫前期胎盘全基因组DNA甲基化水平仅与收缩压存在相关性,与24 h尿蛋白定量无关。结论:表观遗传修饰异常存在于非足月分娩的子痫前期胎盘中,可能参与了子痫前期发生发展。     

甲醛累积接触对工人外周血淋巴细胞微核率的影响

目的 探讨职业性甲醛接触对工人外周血淋巴细胞微核率(CBMN)的影响.方法 选择山东省某人造密度板厂2个有代表性的车间,使用高效液相色谱法测定空气甲醛浓度,采集236名工人的外周静脉血,酶联免疫分析法测定内暴露标志物血清甲醛-白蛋白加合物(FA-HSA)的含量,根据内暴露标志物的三分位数将人群分为低、中、高水平3个接触组,用胞质分裂阻滞法微核试验检测外周血淋巴细胞遗传物质的损伤情况.结果 低甲醛接触车间和高甲醛接触车间的平均空气甲醛含量分别为(0.58:±-0.20)、(1.48±0.61)mg/m3,接触工人血清中FA-HSA平均水平分别为(69.22±15.37)、(136.29±89.49)pg/ml,差异均有统计学意义(P＜0.01).低、中、高接触组工人外周血淋巴细胞CBMN分别为1.94‰±1.72％、2.10‰±1.92‰、2.10‰±1.70‰,各组间CBMN的差异无统计学意义(P＞0.05).低、中、高累积接触水平组CBMN分别为1.36‰±1.36％o、2.31o±:1.81‰、2.49‰±1.92‰,不同累积接触水平组工人外周血淋巴细胞CBMN的差异有统计学意义(P＜0.01).Spearman相关分析发现人群CBMN与甲醛接触量呈明显正相关(r=0.321,P＜0.01).Logistics回归分析显示,甲醛累积接触量是接触工人高CBMN的危险因素(Ptrend=0.002).结论 血清FA-HSA能够用作内暴露指标评价甲醛接触工人的个体接触水平;甲醛的累积接触导致接触工人外周血淋巴细胞CBMN增加.     

AGTR1基因启动子区DNA甲基化与原发性高血压的相关性研究

目的研究血管紧张素Ⅱ-1型受体(AGTR1)基因启动子区DNA甲基化水平与原发性高血压(EH)的相关性。方法选取在宁波市居住3代及以上的35~70岁汉族居民3 000人,分为新发病例组、既往病例组和对照组;按年龄、性别1∶1∶1匹配后有96对(共288人)进入病例对照研究。通过调查问卷、体格检查和实验室检测获取研究对象的基线资料及血生化指标。采用焦磷酸测序法检测AGTR1基因启动子区Cp G1~Cp G5位点的甲基化水平。采用条件Logistic回归模型对混杂因素进行校正,分析抗高血压药物治疗敏感的Cp G位点。结果三组研究对象的BMI、三酰甘油(TG)、空腹血糖(FPG)、高密度脂蛋白(HDL)、尿酸(UA)水平差异均有统计学意义(P0.05)。条件Logistic回归分析结果显示,与对照组的Cp G1甲基化水平(9.66±5.45)%比较,新发病例组(6.74±4.32)%(OR=0.888,95%CI:0.792~0.995)和既往病例组(4.99±3.97)%(OR=0.454,95%CI:0.226~0.913)均偏低,而新发病例组与既往病例组间,未见有差异的Cp G位点(均P0.05)。结论 AGTR1基因Cp G1的低甲基化是EH的影响因素,抗高血压药物治疗可能对AGTR1基因DNA甲基化水平无影响。     

康复训练联合高压氧治疗脑外伤患儿的临床效果及对神经功能的影响

目的探讨康复训练联合高压氧治疗脑外伤患儿的临床效果及对神经功能的影响。方法纳入于2020年3月—2023年3月收治于丽水市中心医院的脑外伤患儿共96例,随机分为观察组和对照组,每组均48例。对照组患儿给予常规术后治疗和高压氧治疗,观察组患儿在对照组患儿治疗基础上联合康复训练,所有患儿均连续治疗1月。对比两组患儿血清中髓鞘碱性蛋白(MBP)、脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、超氧化歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及丙二醛(MDA)的表达水平。对比两组患儿治疗效果和不良事件发生率。结果治疗后两组患儿血清MBP(观察组:0.94±0.18 vs.0.37±0.08;对照组:0.88±0.24 vs.0.52±0.08)及MDA(观察组:14.08±2.71 vs.8.78±1.94;对照组:14.68±2.38 vs.10.58±2.07)水平较治疗前均显著降低,血清BDNF(观察组:4.33±0.93 vs.8.58±1.73;对照组:4.44±1.03 vs.7.14±2.13)、GDNF(观察组:2.14±0.50 vs.4.52±0.87;对照组:2.06±0.43 vs.3.68±1.17)、SOD(观察组:45.30±4.47 vs.67.82±5.15;对照组:45.47±4.20 vs.58.67±4.22)及CAT(观察组:41.24±3.84 vs.60.34±4.96;对照组:41.32±3.83 vs.54.23±3.46)水平均显著升高(P<0.05),且观察组患儿较对照组患儿各指标变化更显著(P<0.05)。观察组患儿治疗总有效率显著高于对照组患儿(97.92%vs.87.50%,P<0.05),两组患儿不良事件发生率差异无统计学意义(6.25%vs.10.42%,P>0.05)。结论康复训练联合高压氧治疗能够显著降低脑外伤患儿神经损伤程度和体内氧化应激水平,同时改善患儿神经营养状态,有利于提高脑外伤患儿治疗总有效率,且该治疗方案临床安全性较高,具有较广阔的临床应用前景。     

雌激素受体2基因5'近端调控区DNA甲基化与男童孤独症的关联研究

探讨雌激素受体2基因(Estrogen Receptor beta,ESR2)的表观遗传修饰作用与孤独症发病的关联性,为孤独症的病因学研究提供依据.方法 收集哈尔滨医科大学儿童发育行为研究中心的孤独症男性患儿54例,并按年龄-性别匹配原则随机收集正常对照男性儿童54名,运用亚硫酸盐测序法(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)检测外周血细胞ESR2基因5,近端调控区的DNA甲基化.通过Mann-Whitney U检验比较病例组和对照组的DNA甲基化水平.结果 ESR2基因5,近端调控区的整体甲基化水平在孤独症组和对照组间的差异无统计学意义(P>0.05),但启动子区甲基化岛(Prom CGI)所包含的15个CpG位点中,有7个位点(CpG 5,6,8,9,10,11和12)的甲基化水平在孤独症组明显升高(P值均<0.05),部分位点存在于转录因子结合位点的保守序列中,包括USF2,ZBTB33,REL,ESR2和TFEC.此外,外显子区甲基化岛(Exon CGI)包含26个CpG位点,其中CpG41位点的甲基化水平在孤独症组(31.30±2.74)%高于对照组(24.07±2.59)%(P<0.05).结论 ESR2基因5’近端调控区的表观遗传修饰与孤独症的发病有明显关联.     

DNA低甲基化相关基因mbd2、CD11a在系统性红斑狼疮患者中表达水平

目的探究DNA低甲基化状态相关的基因在系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞(PBMC)中的表达水平。方法选取湘雅三医院于2015年1-12月收治的SLE患者40例,分为缓解期组(SLEDAI5)与活动期组(SLEDAI≥5),每组各20人。同时选取健康志愿者20例作为对照组。测定其PBMC中mbd2、CD11a基因表达水平,分析结果并探究其表达水平对DNA低甲基化状态的影响。结果缓解期mbd2、CD11a基因表达水平分别为(0.210±0.040、0.812±0.214);活动期组mbd2、CD11a基因表达水平分别为(0.368±0.055、1.214±0.374)。缓解期组与活动期组mbd2、CD11a基因表达水平明显高于对照组(0.061±0.013、0.413±0.103),活动期组CD11a基因表达水平明显高于缓解期组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 mbd2、CD11a基因在患者PBMC中存在过度表达,并且与患者发病状况关系密切。     

结晶型硫化镍诱发细胞恶性转化过程中基因组总体DNA甲基化的改变

目的 探讨结晶型硫化镍(NiS)对体外培养细胞基因组总体DNA甲基化水平的影响.方法 分别以0.25、0.50、1.00、2.00 μg/cm2结晶型NiS处理人支气管上皮细胞系(16HBE)24 h,隔天再次进行相同处理,共处理3次;以3μmol/L DNA甲基化转移酶抑制剂5-脱氧杂氮胞苷(DAC)处理72 h的正常细胞为阳性对照.应用免疫荧光法和SssI甲基转移酶法定性、定量分析结晶型NiS处理细胞和恶性转化细胞(NSTC)基因组DNA总体甲基化的变化.结果 结晶型NiS处理细胞DNA甲基化免疫荧光的强度均有不同程度降低,转化细胞DNA甲基化免疫荧光的强度明显降低.定量分析结果显示,对照组基因组总体甲基化率(mCpG%)为(81.9±7.3)%,0.25、0.50、1.00、2.00 μg/cm2的结晶型NiS处理3次的细胞(NiS0.25、NiS0.50、NiS1.00、NiS2.00)基因组总体mCpG%则分别为(77.9±6.2)%、(75.3±6.8)%、(59.5±4.9)%、(67.4±5.1)%.经单因素方差分析显示,不同组间总体mCpG%差异有统计学意义(F=124.95,P＜0.01),两两比较发现NiS1.00和NiS2.00组与对照组相比,差异均有统计学意义(t值分别为7.64、4.89,P值均＜0.01);恶性转化细胞(NSTC1、NSTC2)基因组总体mCpG%分别为(46.2 ±4.1)%、(43.6±4.3)%,低于对照组,差异有统计学意义(t值分别为12.79、13.56,P值均＜0.01).结论 结晶型NiS诱发细胞恶性转化过程中,整体基因组DNA甲基化水平降低.