健脾养正消癥方对胃癌细胞MGC-803粘附和侵袭能力的影响

目的观察健脾养正消癥方体外对胃癌细胞MGC-803粘附和侵袭能力的影响。方法采用MTT法检测该方对MGC-803细胞粘附能力的影响,细胞划痕实验检测对细胞迁移能力的影响;使用Transwell小室观察该方对趋化因子CXCL12的诱导作用的干预情况;使用Real-time PCR方法检测该方对CXCR4表达的影响。结果该方对MGC-803细胞的粘附和迁移有明显的抑制作用,并能明显抑制CXCL12诱导的胃癌细胞穿透Transwell小室的能力,下调CXCR4的表达。结论健脾养正消癥方可抑制人胃癌细胞MGC-803的的粘附侵袭,其机制有可能是通过CXCL12-CXCR4轴来调控的。     

肺瘤平膏及其拆方含药血清对人外周血树突状细胞迁移功能影响及机制研究

目的 :探讨中药肺瘤平膏及其拆方对树突状细胞(dendritic cell,DC)迁移功能的影响及分子机制。 方法 :采用transwell小室法测定DC的迁移能力;realtime-PCR法测定DC表面CCR7,CXCR4等趋化因子受体 mRNA的表达。 结果 :解毒中药有抑制DC迁移的趋势,而肺瘤平膏、益气药物、活血药物则可促进DC迁移;在不同趋化因子作用下,药物对DC迁移的影响不同;不同药物作用下,DC表面趋化因子受体表达不同,益气组CCR7表达最高,活血组、肺瘤平组次之,解毒组最低,益气组、活血组与解毒组比较,P<0.05;CXCR4在益气组、肺瘤平组表达最高,活血组次之,解毒组最低,肺瘤平组、益气组、解毒组与对照组比较,P<0.01,解毒组与其他各组比较,P<0.01。 结论: 肺瘤平膏及益气组分、活血组分对DC的迁移有促进作用,解毒组分则明显抑制DC的迁移,不同中药作用下DC趋化能力的改变可能与趋化因子受体的表达有关。     

苍术酮对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及机制研究

目的 探讨苍术酮对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及机制。方法 体外培养人肝癌细胞MHCC97-H,采用CCK-8法检测细胞活性,计算苍术酮的半数抑制浓度(IC₅₀)。将MHCC97-H细胞分为对照组和苍术酮5、10、20μmol·L^-1浓度组,分别干预24 h。采用克隆形成实验(培养2周)检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;Western Blot法检测细胞上皮-间质转化(EMT)及凋亡相关蛋白的表达情况。结果 苍术酮干预MHCC97-H细胞24 h的IC₅₀为24.97μmol·L^-1。与对照组比较,苍术酮10、20μmol·L^-1组的MHCC97-H细胞集落数显著减少(P<0.01),细胞凋亡率显著升高(P<0.01),MHCC97-H细胞E-钙黏蛋白(E-cad)表达显著上调(P<0.01);苍术酮5、10、20μmol·L^-1组的MH...     

荷包牡丹碱对人肝癌MHCC97-H细胞转移、侵袭的影响及机制研究

目的探讨荷包牡丹碱对人肝癌MHCC97-H细胞转移、侵袭的影响及潜在机制。方法体外培养MHCC97-H细胞至对数生长期,分别经5、10、25、50、100μmol/L荷包牡丹碱处理24、48、72 h,MTT法检测细胞增殖能力。5、10、25μmol/L荷包牡丹碱处理MHCC97-H细胞24h,MTT法检测细胞黏附能力,细胞划痕实验检测细胞转移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)实验检测VEGF、MMP-2及MMP-9基因表达水平,蛋白免疫印迹实验检测p-JAK2及p-STAT3蛋白表达水平。结果 25μmol/L荷包牡丹碱处理MHCC97-H细胞48、72 h及50、100μmol/L荷包牡丹碱处理24、48、72 h后的细胞活力下降明显,与对照组比较,差异显著(P0.05、0.01);5、10、25μmol/L荷包牡丹碱处理MHCC97-H细胞24 h,细胞黏附能力、伤口愈合能力、穿膜数均明显下降(P0.05、0.01),VEGF、MMP-2、MMP-9基因表达及p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均明显下降(P0.05、0.01)。结论荷包牡丹碱可以抑制人肝癌MHCC97-H细胞的转移及侵袭,该作用与下调VEGF、MMP-2、MMP-9基因表达及抑制JAK2/STAT3信号通路的活化有关。     

基于PI3K/mTOR通路益气化瘀解毒方对人肝癌细胞SMCC-7721自噬流的影响

目的观察益气化瘀解毒方对人肝癌细胞SMCC-7721自噬流的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法实验分为空白对照组、重楼皂苷Ⅰ组、益气化瘀解毒方组、雷帕霉素组及索拉非尼组,各给药组给予相应药物。体外实验观察人肝癌细胞SMCC-7721自噬流发生情况并检测细胞微管相关蛋白1轻链3(LC-3Ⅱ)、类胰岛素样生长因子2的m RNA结合蛋白质(p62)及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)的表达。结果重楼皂苷Ⅰ、益气化瘀解毒方及索拉非尼均能阻断人肝癌细胞SMCC-7721自噬流,导致细胞内自噬小体的蓄积,上调LC-3Ⅱ、p62的表达,同时可下调PI3K、m TOR蛋白的表达。结论益气化瘀解毒方可改变人肝癌细胞SMCC-7721形态;重楼皂苷Ⅰ、益气化瘀解毒方及索拉非尼均能阻断人肝癌细胞SMCC-7721自噬流,增加自噬体数量,其机制可能与抑制PI3K/mTOR信号通路有关。     

青海地区汉族、藏族、回族乳腺癌患者中CXCL12和CXCR4的表达及意义

目的探讨青海地区汉族、藏族、回族乳腺癌患者中趋化因子CXCL12及其受体CXCR4表达情况及其意义。方法收集青海大学附属医院乳腺甲状腺外科收治的汉族、藏族、回族各30例乳腺癌患者的组织标本,应用免疫组化SP法检测癌组织和癌旁正常组织中CXCL12和CXCR4表达情况,结合术后Ki-67、EGFR结果,分析CXCL12和CXCR4表达与患者Ki-67、EGFR、TNM分期、病理分级、淋巴结转移情况的关系。结果癌组织中CXCL12、CXCR4表达水平均明显高于癌旁正常乳腺组织(P均0. 05),但汉、藏、回族乳腺癌患者癌组织中CXCL12、CXCR4表达阳性情况比较差异均无统计学意义(P均0. 05); CXCL12、CXCR4表达与Ki-67、EGFR阳性表达、TNM分期和腋窝淋巴结转移有关(P均0. 05),与病理学分级无关(P均 0. 05)。结论青海地区汉族、藏族、回族乳腺癌患者间CXCL12、CXCR4表达情况无明显差异,而CXCL12、CXCR4表达情况与乳腺癌发展和转移密切相关,可作为合理预测乳腺癌浸润、转移等生物学行为的标记物。     

化瘀解毒方含药血清通过JAK2/STAT3通路抑制人肺癌H1299细胞侵袭迁移

目的:探讨化瘀解毒方含药血清(HJRMS)对人肺癌细胞(H1299细胞)的增殖、侵袭与迁移的影响及其机制。方法:通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测化瘀解毒方含药血清对肺癌细胞增殖的抑制能力;利用划痕实验和Transwell小室法检测肺癌细胞的侵袭与迁移作用;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测蛋白酪氨酸激酶2(JAK2),信号传导及转录激活因子3(STAT3),磷酸化JAK2(p-JAK2)和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测JAK2,STAT3 mRNA表达水平。结果:(1)与空白组比较,1%~16%化瘀解毒方含药血清分别处理24,48 h,H1299细胞增殖能力受到显著抑制(P<0.01),并呈一定的浓度依赖性。(2)H1299细胞在经化瘀解毒方含药血清处理24 h,与空白组比较,4%,8%化瘀解毒方含药血清组细胞划痕愈合能力受到抑制(P<0.05,P<0.01)。(3)在侵袭实验和迁移实验中,与空白组比较,2%,4%,8%化瘀解毒方含药血清肺癌细胞透膜数均明显减少(P<0.05,P<0.01)。(4)Western blot显示,与空白组比较,4%,8%化瘀解毒方含药血清组均对肺癌H1299细胞中JAK2/STAT3信号通路相关蛋白(JAK2,p-JAK2,STAT3,p-STAT3)表达具有抑制作用(P<0.05,P<0.01)。(5)与空白组比较,使用8%化瘀解毒方含药血清处理肺癌H1299细胞24 h,JAK2,STAT3mRNA表达水平均下降(P<0.05)。结论:化瘀解毒方含药血清能够抑制肺癌H1299细胞的增殖、侵袭与迁移,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。     

补肾活血汤对骨髓间充质干细胞迁移及趋化因子受体4,趋化因子13表达的影响

目的:探讨补肾活血汤及其拆方对骨髓间充质干细胞(BMSCs)迁移及趋化因子(CXCL)13及趋化因子受体(CXCR)4表达的影响。方法:以大鼠BMSCs为研究对象,制备含药血清,采用全骨髓贴壁法培养BMSCs。通过Transwell实验观察补肾活血汤(全方组)及其拆方(补肾组、活血组)含药血清干预BMSCs体外迁移的能力,采用PCR法检测CXCL13及CXCR4RNA表达水平,采用WesternBlot法检测CXCR4蛋白表达水平。结果:通过培养获得高纯度的BMSCs.Transwell实验显示:全方含药血清干预的大鼠BMSCs,其迁移能力显著增强,与其它4组对比差异均有统计学意义(P0.05)。PCR结果显示:补肾活血汤全方含药血清能显著上调大鼠BMSCs的CXCL13及CXCR4RNA表达水平,与其它4组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示:补肾活血汤全方含药血清能显著上调大鼠BMSCs的CXCR4蛋白表达水平,与其它4组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:全方组含药血清促BMSCs体外迁移的影响较显著,结合其影响CXCL13和CXCR4的表达水平,较其单纯的活血或补肾组效果更显著,其促进BMSCs体外迁移机制可能与同时上调CXCL13及CXCR4表达,从而激活CXCL13/CXCR5信号轴及SDF-1/CXCR4信号轴有关。合理配伍促进了补肾活血汤促BMSCs体外迁移的能力。     

化瘀解毒方对过表达PDK1和Akt人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的影响

目的:利用细胞瞬时转染技术,探讨过表达PDK1和Akt后化瘀解毒方抑制人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的机制。方法:先后将SGC-7901细胞瞬时转染PDK1质粒和Akt质粒,采用matrigel基质胶观察细胞黏附作用;利用Transwell细胞培养系统检测细胞迁移、侵袭作用;利用免疫共沉淀观察PDK1和Akt的结合力。结果:过表达Akt可以阻止化瘀解毒方提取物诱导的SGC-7901细胞黏附能力、迁移、侵袭能力下降。免疫共沉淀显示化瘀解毒方提取物通过抑制PDK1和Akt的结合进而抑制Akt磷酸化。结论:化瘀解毒方抑制胃癌细胞黏附、迁移、侵袭,其作用机制与抑制PI3K/Akt通路有关。     

从CXCL12/CXCR4生物学轴探讨乳移平配伍引经药抗乳腺癌肺转移机理体外研究

目的:探讨"乳移平"配伍肺经引经药"桔梗"对人乳腺癌肺高转移细胞株MDA-MB-231HM的增殖、趋化、迁移能力的影响及作用机制。方法:乳移平组、乳移平配伍桔梗组、乳移平配伍川牛膝组、阿霉素组和对照组SD大鼠含药血清的制备,MTT法测不同组含药血清对细胞增殖能力的影响,Transwell小室测细胞趋化活性的影响,实时定量PCR法测细胞CXCL12、CXCR4、PI3K的表达。结果:与乳移平单方比,乳移平配伍桔梗后可进一步抑制MDA-MB-231HM的增殖能力(P0.01)和趋化活性(P0.01)。实时定量PCR结果提示,与乳移平单方比,乳移平配伍桔梗后能进一步下调MDA-MB-231HM细胞株CXCL12、CXCR4基因(P0.05)。结论:乳移平配伍桔梗通过进一步下调CXCL12/CXCR4生物学轴及其介导的PI3K信号转导通路,发挥进一步的抑制乳腺癌肺高转移细胞株增殖能力和趋化活性的作用。     

基于CXCR12/CXCR4/CXCR7轴研究熊果酸诱导人甲状腺乳头状癌细胞线粒体凋亡的作用机制

目的 考察熊果酸对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 TPC-1细胞分别加入不同浓度（0.8、1.6、3.2、3.6、4.0 μmol/L）的熊果酸处理，采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖；采用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力；采用流式细胞术检测细胞凋亡率；采用Fura-3/AM、JC-1探针分别检测细胞内Ca²⁺水平和线粒体膜电位；采用Western blotting和PCR检测线粒体凋亡相关蛋白和趋化因子受体12（C-X-C chemokine receptor type 12，CXCR12）/CXCR4/CXCR7轴相关基因表达。结果 熊果酸显著降低TPC-1细胞增殖和克隆形成能力（P<0.01），显著降低线粒体膜电位（P<0.05、0.01），显著升高细胞内Ca²⁺水平和细胞凋亡率（P<0.01），显著下调B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）蛋白表达和CXCR12/CXCR4/CXCR7轴相关基因表达（P<0.01），显著上调细胞色素C（cytochrome-C，Cyt-C）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9（cystein-asparate protease-9，Caspase-9）和Caspase-3蛋白表达（P<0.05、0.01）。结论 熊果酸可能通过抑制CXCR12/CXCR4/CXCR7轴活化进而诱导TPC-1细胞线粒体凋亡，从而发挥抗甲状腺乳头状癌的作用。     

肠胃清介导CXCR4/CXCL12信号转导通路干预小鼠结肠癌肝转移

目的:观察中药复方肠胃清对小鼠结肠癌肝转移的抑制作用,从趋化因子受体4(CXCR4)/趋化因子12(CXCL12)信号转导通路及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达探讨肠胃清抑制结肠癌肝转移的作用机制。方法:采用原位瘤块接种法建立小鼠结肠腺癌细胞CT26肝转移模型,实验共分为4组,即假手术组、模型组、肠胃清低剂量组和高剂量组。假手术组和模型组均给予生理盐水,肠胃清低、高剂量组小鼠每日给药量分别为10.37,20.74 g·kg-1。HE染色法判断肝转移;免疫组织化学和实时荧光定量PCR实验方法检测CXCR4,CXCL12和MMP9的表达。结果:肠胃清低、高剂量组小鼠结肠癌原位瘤的质量抑制率分别为24.73%,45.91%;体积抑制率分别为27.93%,63.48%。模型组与肠胃清低、高剂量组肝转移率分别为75%,37.5%,12.5%。模型组结肠癌组织中CXCR4,CXCL12,MMP9的蛋白和mRNA表达显著高于假手术组(P<0.05);与模型组比较,肠胃清低剂量组和高剂量组CXCR4的蛋白和mRNA表达显著减低(P<0.05);肠胃清低剂量组和高剂量组CXCL12的蛋白表达显著降低(P<0.05);肠胃清高剂量组CXCL12的mRNA表达显著降低(P<0.05);肠胃清高剂量组MMP9的蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论:肠胃清抑制小鼠结肠癌原位瘤的生长和肝转移的发生率,肠胃清抑制结肠癌肝转移可能与其下调小鼠结肠癌原位瘤组织中CXCR4,CXCL12,MMP9的表达有关。     

益气化瘀解毒方联合索拉非尼对人肝癌索拉非尼耐药细胞移植瘤及缺氧诱导因子1α与血管拟态表达的影响

目的:探讨益气化瘀解毒方对人肝癌Sorafenib(索拉非尼)耐药细胞裸鼠移植瘤大小及瘤组织HIF-1α与VM表达的影响。方法:培养Sorafenib获得性耐药人肝癌QGY7702细胞株(QGY7702/Sora),通过皮下种植的方法建立人肝癌Sorafenib耐药细胞裸鼠移植瘤模型,药物干预21d后取瘤组织,测瘤净重,免疫组化方法检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达,CD31/PAS双重染色观察血管拟态(VM)的表达。结果:成功建立耐药细胞裸鼠移植瘤模型,药物干预耐药细胞裸鼠模型提示,益气化瘀解毒方联合Sorafenib对瘤体具有明显的抑制作用(P<0.05),Sorafenib可促进VM的表达(P<0.05),益气化瘀解毒方联合Sorafenib可显著降低HIF-1α及VM的表达(P<0.05)。结论:益气化瘀解毒方联合Sorafenib不仅可以抑制耐药细胞裸鼠移植瘤生长,亦可抑制其瘤组织HIF-1α与VM的表达,改善瘤组织乏氧微环境状态,拮抗机体Sorafenib耐药。     

化瘀解毒方对过表达PDK1和Akt人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响

目的:利用细胞瞬时转染技术,探讨过表达PDK1和Akt后化瘀解毒方对人胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用。方法:采用Elisa检测化瘀解毒方提取物对PDK1激酶活力的影响,先后将SGC-7901细胞瞬时转染PDK1质粒和Akt质粒,采用Western blot检测PI3K/Akt通路关键分子p-Akt,Akt活性变化;MTT法检测化瘀解毒方提取物对过表达PDK1或者Akt细胞增殖抑制作用。结果:化瘀解毒方提取物剂量依赖性的抑制PDK1蛋白激酶活性。免疫印迹结果显示过表达PDK1或者Akt可以阻止化瘀解毒方提取物或者LY294002抑制SGC-7901细胞中Akt蛋白的磷酸化。MTT结果显示,化瘀解毒方提取物剂量依赖性的抑制转染空质粒组中SGC-7901细胞增殖。结论:化瘀解毒方通过PI3K/Akt通路抑制胃癌增殖作用。     

健脾化瘀方体外通过外泌体影响肝癌细胞的迁移、侵袭及上皮间质转化

目的探讨健脾化瘀方（JHD）通过外泌体对肝癌细胞迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 利用转化生长因子β1（TGF-β1）刺激MHCC97H 细胞,构建肝癌细胞EMT 模型。根据处理条件,将细胞分为 4 组,①对照组：不进行干预;②模型组：TGF-β1（10 ng·mL-1）;③JHD 低浓度组：TGF-β1（10 ng·mL-1）+健 脾化瘀方（2 mg·mL-1）;④JHD 高浓度组：TGF-β1（10 ng·mL-1）+健脾化瘀方（4 mg·mL-1）。干预48 h 后,采用 超速离心法提取各组细胞培养上清液的外泌体,通过透射电镜（TEM）、纳米颗粒追踪分析（NTA）、Western Blot 法检测外泌体标志蛋白（CD63、CD81、HsP70、CD9）,以及外泌体内吞实验对外泌体进行鉴定。将提取的 4 组外泌体分别与MHCC97H 细胞共培养24 h/48 h 后,分离MHCC97H 细胞,进行划细胞划痕实验、Transwell 细胞侵袭实验及Western Blot 法检测EMT 相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）。结果透射电镜下观 察到外泌体的形态呈囊泡状,分布不一,有单个分布,也有聚集成组,背景清晰,无明显污染物,各组外泌体 形态相近,无明显差异,直径在30~140 nm 之间;纳米颗粒追踪分析仪检测到4 组外泌体粒径的峰值在130~ 150 nm 之间,与电镜观察结果基本一致;各组均可检测到外泌体标志蛋白CD63、CD81、HsP70、CD9 表达。 被PKH26 标记的外泌体可被MHCC97H 细胞重新吸收内化。与对照组比较,模型组的MHCC97H 细胞迁移能 力（24、48 h）及侵袭能力均显著增强（P＜0.01）, E-cadherin 蛋白表达显著下调（P＜0.01）, Vimentin、 N-cadherin 蛋白表达显著上调（P＜0.01）。与模型组比较,JHD 高、低浓度组的MHCC97H 细胞迁移能力（24、 48 h）及侵袭能力显著减弱（P＜0.01）,E-cadherin 蛋白表达显著上调（P＜0.01）,Vimentin、N-cadherin 蛋白表 达显著下调（P＜0.01）。结论健脾化瘀方体外可通过外泌体抑制MHCC97H 细胞的迁移、侵袭及上皮间质 转化。     

健脾疏肝抗毒方对三阴性乳腺癌荷瘤鼠抗肿瘤作用的研究

目的研究健脾疏肝抗毒方对三阴性乳腺癌荷瘤鼠抗肿瘤作用及其可能的机制。方法建立稳定高表达的p Ac GFP MDA-MB-231细胞株,采用皮下接种法建立MDA-MB-231-p Ac GFP细胞异种移植瘤裸鼠,应用免疫组化法检测不同组别:对照组(A组)、健脾疏肝抗毒方组(B组)、ADM3100(CXCR4抑制剂)组(C组)、健脾疏肝抗毒方联合ADM3100组(D组)肿瘤微环境中的肿瘤相关巨噬细胞、肿瘤相关成纤维细胞浸润,蛋白印迹方法检测各组肿瘤组织CXCR4/CXCL12轴相关分子的表达。结果健脾疏肝抗毒方能显著抑制肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞、肿瘤相关成纤维细胞的浸润,抑制CXCR4/CXCL12轴相关分子CXCR4、CXCL12、HIFα,NF-κB,VEGF的表达,且与ADM3100联合后抑制作用显著增强。结论健脾疏肝抗毒方可以通过改变肿瘤微环境,调节CXCR4/CXCL12轴相关分子的表达而发挥抑制乳腺癌荷瘤鼠异种移植瘤的生长的作用。     

益气化瘀散结方对胃癌SGC-7901细胞PI3K/AKt/Mtor信号通路的影响

目的:通过观察益气化瘀散结方干预后胃癌SGC-7901细胞PI3K/AKt/mTOR信号通路分子的表达变化,探讨益气化瘀散结方影响胃癌细胞增殖的作用机制。方法:体外培养SGC-7901细胞,采用益气化瘀散结方含药血清干预,细胞分为空白血清组及5%、10%、20%益气化瘀散结方含药血清组,药物干预后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期变化,Western-blot、Real-time PCR技术检测PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA的表达变化。结果:与空白血清组比较,不同浓度益气化瘀散结方含药血清均能不同程度抑制SGC-7901细胞的增殖,其中10%,20%更为明显,差异有统计学意义(P<0.05),时间上以48 h最为明显;与空白血清组比较,10%,20%益气化瘀散结方含药血清组G0/G1期细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P<0.05);与空白血清组比较,不同浓度益气化瘀散结方含药血清组PI3K、AKT、mTOR蛋白及mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制PI3K/AKt/mTOR信号通路可能是益气化瘀散结方抑制胃癌细胞增殖、调节胃癌细胞生长周期的重要作用机制之一。     

雷公藤甲素对RA患者T-bet/GATA3及CXCL10/CXCR3表达的影响

[目的] 考察雷公藤甲素（TP）对类风湿关节炎（RA）患者外周血单个核细胞（PBMC）中转录因子T-bet/GATA3和趋化因子（CXCL）10及CXCL受体3（CXCR3）表达的影响。[方法] 使用L929细胞考察TP的细胞毒性,确定实验药物浓度。CCK-8法检测TP对RA患者PBMC细胞增殖活性的影响,流式细胞仪分析TP对PBMC中Th细胞亚群比例及CXCR3受体表达调节,Luminex技术检测RA患者PBMC分泌干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素（IL）-17/IL-17A、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-4、IL-6、IL-10及CXCL10的表达水平。实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法分析T-bet、GATA3、CXCL10及CXCR3的mRNA表达水平。[结果] 当TP浓度<25 nmol/L,培养时间为48 h时,TP对L929没有显著的细胞毒性（P>0.05）。在此浓度范围内,当TP浓度为5 nmol/L时即表现出对PBMC细胞增殖具有显著抑制作用（P<0.05）。Th、Th1细胞亚群比例以及CXCR3受体表达均受到TP抑制（P<0.05）,但对Th2细胞亚群比例没有显著调节作用（P>0.05）。抗炎因子IL-4、IL-10,促炎因子IFN-γ、IL-6、TNF-α、IL-17/IL-17A,以及CXCL10表达均显著降低（P<0.05）。RT-qPCR结果显示,仅CXCL10表达显著降低,T-bet、GATA3以及CXCR3表达无显著变化（P>0.05）。[结论] TP对Th1细胞增殖及其相关细胞因子具有抑制作用,并且能显著降低CXCL10及CXCR3的表达,但未观察到对T-bet、GATA3表达的调节作用。     

白头翁总皂苷调控CXCR4/CXCL12信号通路抑制小鼠结肠癌肝转移的机制研究

目的 观察白头翁总皂苷对小鼠结肠癌肝转移的抑制作用,并探讨其通过调节趋化因子受体4(CXCR4)/趋化因子12(CXCL12)通路发挥作用的机制.方法 将50只BALB/c裸小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组、白头翁总皂苷低剂量、高剂量组(100、200 mg/kg),每组10只.以希罗达组(267 mg/kg)作为阳性对照药,采用结肠癌细胞脾脏注射法制备小鼠CT26细胞肝转移模型.白头翁总皂苷低剂量、高剂量组和希罗达组每日灌胃给药,连续治疗3周,假手术组和模型组均给予等量生理盐水灌胃.小鼠处死后取肝、脾组织及瘤组织,比较各组小鼠肝脏、脾脏质量和抑瘤率;ELISA实验检测小鼠血清中白介素-6(IL-6)、转化生长因子-α(TNF-α)水平,免疫组化检测小鼠肝组织中血管内皮生长因子(VEGF)、血小板内皮细胞黏附分子(CD31)的蛋白阳性表达;Western-blot及RT-PCR检测脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的蛋白和mRNA表达.结果 与假手术组相比,模型组小鼠肝、脾质量明显上升(P<0.01),小鼠血清中IL-6、TNF-α 水平及肝组织中VEGF、CD31的阳性表达明显升高(P<0.01),小鼠脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、MMP-9、MMP-2的蛋白和mRNA表达均显著增多(P<0.01).白头翁总皂苷低、高剂量组小鼠肝、脾质量显著低于模型组,抑瘤率分别为45.8％、52.3％;血清IL-6、TNF-α 水平、肝组织VEGF、CD31阳性表达以及脾脏瘤组织中CXCR4、CXCL12、MMP-9、MMP-2的蛋白和mRNA表达较模型组均明显降低(P<0.05,P<0.01).结论 白头翁总皂苷可显著抑制小鼠CT26细胞结肠癌肝转移,其机制可能与下调瘤组织中CXCR4/CXCL12信号通路的表达相关.     

益气解毒方上调miR-34a抑制鼻咽癌细胞生长增殖研究

目的：研究益气解毒方调控的miR-34a变化在抑制鼻咽癌细胞增殖中发挥的作用。方法：采用qRT—PCR法,分别检测鼻咽癌细胞株（益气解毒方处理组和DMSO对照组）中miR-34a的表达水平;采用MTT法研究益气解毒方调控的miR-34a抑制人鼻咽癌CNE2细胞生长增殖的能力。结果：MTT结果显示,与DMSO对照组细胞相比,益气解毒方处理组的CNE2细胞的增殖能力明显受到抑制,抑制效应呈剂量依赖关系。qRT—PCR结果发现,益气解毒方处理组中的miR-34a表达量较DMSO对照组显著升高,差异具有统计学意义（P％0．01）。结论：益气解毒方可通过上调miR-34a表达而抑制鼻咽癌细胞增殖。