抑制NCL表达对慢性髓系白血病细胞K562及其耐药细胞的影响

目的:建立稳定下调核仁素(NCL)表达的K562细胞及耐阿霉素的K562细胞(KAR),研究下调NCL对K562及KAR细胞耐药作用的影响。方法:用慢病毒感染K562及KAR细胞,经嘌呤霉素筛选获得稳定转染的细胞克隆。采用MTS法检测各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Real-time PCR检测耐药相关基因的表达水平。结果:成功的构建了NCL表达下调的K562及KAR稳定转染细胞株。与对照组相比较,下调NCL的表达可以使细胞的增殖明显受抑(P 0.05),细胞的凋亡显著增加(P 0.05),细胞对阿霉素的耐药性降低。结论:抑制NCL的表达可以提高细胞对阿霉素的敏感性,这一作用可能与其促进细胞凋亡有关。     

CHIP基因稳定转染人慢性髓系白血病K562细胞诱发有丝分裂异常

本研究旨在建立可稳定高效表达E3泛素连接酶CHIP（carboxyl terminus of Hsc70／Hsp70—interacting protein）的慢性髓系白血病细胞株K562细胞模型，以观察过表达CHIP对细胞生物学特性的影响。采用脂质体介导的方法，经G418筛选及有限稀释法成功建立了可稳定表达野生型CHIP及其TPR及U—box结构域缺失突变体的慢性髓系白血病K562细胞克隆。对过表达CHIP的K562细胞用MTT法检测体外增殖，流式细胞术检测细胞周期，Western blot法检测相关蛋白表达，瑞氏一姬姆萨染色进行细胞形态学观测。结果表明，过表达野生型CHIP对K562细胞体外增殖能力没有明显影响，细胞周期中G2／M期细胞比率增加，CHIP对BCR—ABL激酶的稳定性没有影响，但却明显导致细胞形态异常，表现为细胞体积增大及异常核细胞数目增多，出现异常有丝分裂相等，提示CHIP分子对细胞有丝分裂过程可能具有调控作用。结论：野生型CHIP可诱导K562细胞发生有丝分裂异常。     

靶向沉默Gli1基因表达对K562细胞增殖的影响及其机制探讨

目的 探讨靶向沉默Sonic hedgehog(Shh)信号通路的转录因子Gli1基因表达对K562细胞增殖的影响及其机制.方法 将针对Gli1的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)通过脂质体(LipofectamineTM 2000)导入K562细胞作为实验组,并以非特异性siRNA为对照组.实时定量PCR和Western blot法检测Gli1 mRNA和蛋白表达,MTT检测细胞增殖,碘化丙锭(PI)检测细胞周期,实时定量PCR检测c-myc、p21基因的表达变化.结果 转染后24 h实验组Gli1 mRNA表达水平为对照组的(52.60±3.57)%(P<0.01),转染后48 h实验组Gli1的蛋白表达水平为对照组的 (79.31±5.58)% (P<0.01).转染后24 h实验组细胞增殖率为对照组的 (94.41±3.58)% (P<0.05),48 h为对照组的(90.22 ±3.34)% (P<0.01).转染后24、48 h 实验组细胞出现G2/M期阻滞且c-myc的表达水平下降,而p21的表达水平升高 (P值均<0.05).结论 靶向沉默Gli1基因表达抑制了K562细胞的增殖,该抑制作用是通过下调c-myc基因、上调p21基因的表达实现的.     

芒果甙诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡

本研究目的是探讨芒果甙对慢性髓系白血病细胞系K562细胞的作用及其作用机制。用噻唑蓝(MTT)法观察芒果甙时K562细胞生长的影响；应用细胞形态、DNA凝胶电泳和流式细胞术等观察芒果甙时K562细胞凋亡的诱导作用；用RT-PCR方法观察芒果甙作用K562细胞后ber／abl融合基因在转录水平的改变。结果发现。25—200μmol／L浓度的芒果甙均能显著抑制K562细胞的增殖，呈剂量和时间依赖性。并能诱导K562细胞凋亡。随着药物作用浓度的增加，ber/abl融合基因的转录下调。结论：芒果甙可抑制K562细胞的增殖。并可能通过抑制bcr／abl融合基因的表达诱导K562细胞凋亡。     

LRP16基因对慢性髓系白血病K562细胞促增殖作用的研究

本研究探讨超表达LRP16基因对人慢性髓系白血病K562细胞增殖的影响。采用RT—PCR法扩增人LRP16基因开放阅读框（open reading frame,ORF）片段,将其连接到pGEM—T质粒以构建LRP16基因ORF—pGEM—T重组载体。再将测序鉴定过的LRP16基因ORF插入pcDNA3．1^＋质粒以构建LRP16基因ORF—pcDNA3．1^＋重组表达质粒,转染K562细胞,建立稳定超表达LRP16基因的K562细胞系。用M1Tr法测定细胞存活率并绘制生长曲线,流式细胞术检测细胞周期。结果表明：成功扩增出人LRP16基因ORF片段,并构建LRP16基因ORF—pcDNA3．1^＋重组表达质粒;建立稳定超表达LRPl6基因的K562细胞系;超表达LRPl6基因具有促进K562细胞增殖的作用,且这种促增殖作用部分是通过促进细胞由G0期进入S期而实现的。结论：超表达LRP16基因可促进K562细胞增殖。     

尾静脉注射K562细胞建立慢性髓系白血病小鼠模型及其鉴定

本研究通过给NOD/SCID小鼠尾静脉注射K562细胞的方式,建立人慢性髓系白血病(CML)-NOD/SCID小鼠髓外浸润模型,并通过组织病理学检查及RT-PCR检测BCR-ABL融合基因等进行模型鉴定。将24只NOD/SCID小鼠经137Cs全身照射,剂量270 cGy,吸收剂量率80 cGy/min,之后随机分为实验Ⅰ组、实验Ⅱ组和对照组,每组8只。照射后24 h内,实验组小鼠经尾静脉注射K562细胞,实验Ⅰ组:5×106/只,实验Ⅱ组:1×107/只;对照组注射生理盐水0.2 ml/只。持续观察小鼠的一般情况和生存时间,应用组织病理学检查和RT-PCR方法检测白血病细胞髓外浸润表现。结果表明,注射4-8周后,2个实验组均发生白血病细胞髓外浸润,提示成功建立CML/NOD-SCID小鼠髓外浸润模型。结论:应用尾静脉注射K562细胞的方法可成功建立CML/NOD-SCID小鼠髓外浸润模型。通过组织病理学检查及RT-PCR检测BCR-ABL融合基因可对模型进行鉴定。     

WNK1通过磷酸化激活MAPK7对人慢性髓系白血病K562细胞的影响及相关机制

目的:探讨WNK1通过调控MAPK7对人慢性髓系白血病K562细胞的影响及相关机制。方法:通过体外培养不同肿瘤细胞,采用RT-qPCR和Western blot分析WNK1、MAPK7在不同血液肿瘤细胞系中的表达。通过慢病毒转染siRNA-WNK1至K562细胞,采用流式细胞术分析细胞凋亡情况,以及K562细胞中总MAPK7、磷酸化MAPK7表达的变化,通过CCK-8方法检测细胞增殖,并进行统计学分析。结果:WNK1的mRNA及蛋白在HL-60、THP-1、U266和K562细胞中均高表达,但是在K562细胞中表达水平最高(P<0.05),MAPK7的mRNA及总蛋白表达在HL60、THP-1、U266和K562细胞中均无明显变化(P>0.05),但是在K562细胞中磷酸化MAPK7的表达最高(P<0.05)。转染WNK1 siRNA的K562细胞增殖受到明显抑制、细胞凋亡增加(P<0.05)。转染WNK1 siRNA的K562细胞磷酸化MAPK7蛋白表达显著下降(P<0.05),但是总MAPK7蛋白无明显变化(P>0.05)。结论:WNK1在K562细胞中高表达,能够促进K562细胞增殖、抑制凋亡等恶性细胞生物学行为,其机制可能是促进了下游MAPK7的磷酸化。     

肝素对人髓系白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨肝素对长春新碱诱导的人髓系白血病K562细胞增殖及凋亡的影响。方法：肝素（5、25、50、100、200U／mL）处理K562细胞1h后，加入长春新碱（0．05μg／mL）24h，应用Trypan blue拒染法和MTT法检测不同浓度肝素对K562细胞增殖的影响，DNA琼脂糖凝胶电泳检测肝素对长春新碱诱导的K562细胞凋亡的影响。结果：肝素各组的细胞数量与对照组之间差异均无统计学意义（P均〉0．05），肝素各组的OD值与对照组之间差异均无统计学意义（P均〉0．05）；肝素在5～200U／mL的浓度时能够抑制长春新碱诱导的K562细胞凋亡及DNA凋亡梯带的形成。结论：不同浓度肝素对K562细胞无毒，无刺激或抑制作用，但可抑制由长春新碱诱导的K562细胞凋亡。     

OCT4A基因对K562细胞生物学活性的影响

目的:探讨OCT4A基因体外对K562细胞生物学行为的影响及与凋亡相关的分子机制。方法:克隆人OCT4A基因,构建靶向上调及下调OCT4A基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组慢病毒表达载体p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA,三质粒包装系统包装病毒,并测定滴度。实验分为空白对照、p LVX空质粒、p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA和非特异sh RNA共5组。Western-blot检测各组OCT4A蛋白表达。CCK-8法绘制各组细胞增殖曲线。采用Annexin V/7-AAD标记流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞分化抗原CD11b和CD15表达;实时定量PCR检测caspase3、BIM、BCL-x L和BAX m RNA表达变化。结果:成功克隆人OCT4A基因,并成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA。Western blot证实2种病毒感染后可分别有效上调及下调OCT4A蛋白的表达。CCK-8法检测显示,p LVX-OCT4A-Zs Green1组K562细胞体外增殖活性明显升高,而p LVX-OCT4A sh RNA组K562细胞增殖活性显著降低(P0.05)。感染后p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA 2组K562细胞凋亡率分别为(3.48±0.52)%和(7.25±0.57)%(P0.05),而OCT4A过表达及抑制后细胞表面分化抗原CD15、CD11b的表达无明显变化。OCT4A上调后Caspase-3、BIM、BAX较对照组均下调,但差异无统计学意义(P0.05),而BCL-x L基因表达则明显升高(P0.01)。结论:成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1及PLB-OCT4A sh RNA,它们可分别有效地上调及下调OCT4A蛋白表达。OCT4A基因可促进K562细胞的增殖、抑制凋亡,其抑制凋亡机制可能与BCL-x L基因上调有关。     

PANTR1与慢性髓系白血病细胞K562对伊马替尼耐药的关系及其相关机制

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)PANTR1与慢性髓性白血病细胞K562对伊马替尼耐药的关系及机制。方法:培养K562对照细胞(Control)及K562伊马替尼耐药细胞(ImR),采用慢病毒转染靶向PANTR1的2种siRNA载体及对照载体于K562-ImR细胞中,分别为ImR-siPA#1、ImR-siPA#2及ImR-siControl细胞;采用CCK-8实验检测各组细胞伊马替尼半抑制浓度(IC50);采用荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测PANTR1、BCR/ABL、MDR、CD44及CD133 mRNA表达水平;采用Western blot检测BCR/ABL、多耐药基因1(MDR)、CD44及CD133表达水平。结果:ImR细胞伊马替尼IC50显著高于Control细胞(P<0.01),ImR-siPA#1、ImR-siPA#2细胞伊马替尼IC50显著低于ImR-siControl细胞(P<0.01),但仍显著高于Control细胞(P<0.01);ImR细胞PANTR1、BCR/ABL、MDR、CD44及CD133 mRNA表达水平均显著高于Control细胞(P<0.01),ImR-siPA#1、ImR-siPA#2细胞PANTR1、MDR、CD44及CD133 mRNA表达水平显著低于ImR-siControl细胞(P<0.01),而BCR/ABL mRNA表达水平无显著差异(P>0.05);ImR细胞BCR/ABL、MDR、CD44及CD133蛋白表达水平明显高于Control细胞,而ImR-siPA#1、ImR-siPA#2细胞MDR、CD44及CD133蛋白表达水平明显低于ImR-siControl细胞。结论:LncRNA PANTR1可促进慢性髓系白血病细胞K562中MDR的表达及其干细胞标志物的表达,介导细胞对伊马替尼耐药。     

南瓜蛋白抗人慢性髓系白血病细胞系K562的作用研究

本研究观察南瓜蛋白(Cucurmosin,CUS)在人慢性髓系白血病(CML)K562细胞-NOD/SCID小鼠的皮下移植瘤和白血病模型体内抗肿瘤活性。采用建立K562-NOD/SCID小鼠皮下移植瘤和白血病模型,分别使用二种模型评价CUS在小鼠体内的抗K562活性。结果表明,给药剂量为0.5 mg/kg和1 mg/kg的CUS对人CML皮下移植瘤的抑瘤率分别为53.45%和59.43%;而剂量为0.25 mg/kg和0.5 mg/kg的CUS给药组小鼠的生存时间分别为39.8±5.5 d和43.4±6.6 d,抑瘤率分别为24.9%和36%。结论:CUS对小鼠体内人CML细胞系K562具有显著的抑制作用。     

利用慢病毒载体构建过表达人TCRP1基因的慢性髓系白血病K562细胞系及其生物学功能检测

目的 利用慢病毒载体构建过表达人舌癌耐药相关基因（TCRP1）的慢性髓系白血病（CML K562细胞系并检测其生物学功能。方法 将TCRP1的重组质粒与包装质粒共转染293T细胞,收集病毒液测定滴度后感染K562细胞,使用嘌呤霉素筛选TCRP1过表达的细胞株K562/TCRP1,荧光定量PCR和Western blot方法检测TCRP1的表达,采用连续细胞计数法和CCK-8法分别对K562/TCRP1及其对照细胞株的增殖情况进行检测,并分析2个细胞株对不同浓度的伊马替尼（IM）的药物敏感性。结果 TCRP1慢病毒表达载体成功转染进入K562细胞,荧光定量PCR和Western blot结果显示K562/TCRP1细胞株的TCRP1表达在mRNA水平和蛋白水平均显著高于对照组,连续细胞计数法和CCK-8法结果表明K562/TCRP1细胞的增殖能力和细胞活力增强,IM处理K562/TCRP1细胞的IC50值显著高于其对照细胞（P <0.05）。结论 利用慢病毒载体成功构建了TCRP1过表达的K562细胞株,并且发现TCRP1的过表达可能增强K562细胞的增殖能力和IM耐药能力,为进一...     

舒尼替尼对白血病细胞K562作用及其分子机制研究

本研究旨在探讨舒尼替尼对白血病K562细胞的作用及其机制.应用MTT法检测以IC50为3.2μg/ml的舒尼替尼作用不同时间后K562细胞的增殖情况;用凝胶电泳分析DNA片段化、用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测舒尼替尼对K562细胞凋亡的影响;应用RT-PCR检测3.2 μg/ml舒尼替尼作用于K562细胞后C-MYC、hTERT、BCR-ABL mRNA的表达变化;Western blot检测不同浓度舒尼替尼处理K562细胞后和3.2μg/ml舒尼替尼作用不同时间后Akt、p-Akt蛋白表达的变化.结果表明,舒尼替尼可明显抑制K562细胞增殖,呈时间依赖性;舒尼替尼诱导K562细胞呈现典型的DNA梯状带,促进细胞原位凋亡;3.2μg/ml舒尼替尼作用后K562细胞C-MYC、hTERT、BCR-ABL mRNA表达呈时间依赖性降低;Western blot显示,p-Akt蛋白呈时间和剂量依赖性降低,而Akt蛋白表达无明显变化.结论：舒尼替尼能有效地通过诱导凋亡抑制K562细胞增殖,其机制可能与下调BCR-ABL、C-MYC和hTERT的表达及抑制Akt磷酸化有一定的关系.     

残留冻存保护剂对慢性髓系白血病细胞株K562生存的影响

目的 研究冻存保护剂甘油、二甲亚砜(DMSO)、乙二醇和丙二醇对细胞生长的抑制作用.方法 常规进行细胞培养后,用台盼蓝拒染法、MTT法和流式细胞术检测不同浓度的冻存保护剂对慢性髓系血病K562细胞的生长抑制作用.结果 四种冻存保护剂终浓度为3%时,均会明显抑制K562细胞的生存;终浓度为1%的甘油和1%的DMSO对细胞的增殖无影响,其中甘油的安全性高于DMSO;而终浓度为0.5%的丙二醇会影响细胞的生存.结论 少量冻存保护剂残留可能影响K562细胞的生存,四种冻存保护剂中对细胞生长影响最小的是甘油.     

人白血病K562细胞红系分化的研究进展

K562细胞是一株分化极差、恶性程度较高的人白血病细胞株,在体外可被多种诱导剂诱导,并向红系终末分化且表现出相应成熟标志,为体外研究肿瘤细胞恶性表达调控的良好模型。该文将针对信号转导过程中癌基因、转录因子、受体机制、细胞因子等方面对近年来K562细胞红系分化的研究进展作一综述。     

沉默UVRAG对白血病细胞K562线粒体自噬的影响

目的：探讨紫外线抵抗相关基因（UVRAG）对白血病细胞K562线粒体自噬的影响。方法：用不同浓度线粒体自噬诱导剂羰基氰化物间氯苯腙（CCCP）诱导K562细胞6、12和24 h,利用CCK-8法检测细胞活力;将K562细胞分为NC、UVRAG-siRNA、UVRAG-siRNA+CCCP和CCCP共4组,采用Western blot检测UVRAG蛋白质表达情况;流式细胞学技术检测活性氧、线粒体结构完整性的变化情况;Western blot检测自噬相关蛋白P62、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达情况。结果：与NC组相比,UVRAG-siRNA转染组UVRAG蛋白表达显著下降（P<0.01）;与CCCP组相比,U VRAG-siRNA+CCCP组活性氧减少（P<0.05）,线粒体结构破坏减少（P<0.05）,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达下降（P<0.01）,P62蛋白表达上升（P<0.05）;与NC组相比,UVRAG-siRNA组P62蛋白、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白的表达,活性氧及线粒体结构完整性差异不显著（P>0.05）。结论：CCCP作用下,沉默UV...     

ST1571诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡信号通路的研究

本研究应用基因芯片探讨酪氨酸激酶抑制剂（STI571）对K562细胞生长、增殖的影响，研究STI571诱导细胞凋亡过程中基因表达的变化及STI571诱导K562细胞凋亡的机制。用RD—PCR技术制备基因芯片探针，然后制成飚62细胞表达谱芯片；用相差显微镜观察K562细胞在STI571处理前后的形态变化；用MIT法检测K562细胞的凋亡，用制备的K562细胞表达谱芯片分析基因表达水平。结果表明，在体外培养条件下用1．0μmol／L的STI571处理K562细胞达到一定时间（24小时）后，K562细胞生长明显变缓，出现凋亡细胞的特征。用自制的l（562细胞基因表达谱芯片检测显示，STI571诱导K562细胞凋亡前后的基因表达有差异。杂交检测后发现，经STI571诱导后基因表达下调的基因有9个，表达上调的基因有4个。这些表达变化的基因主要包括细胞周期相关基因、细胞代谢通路相关基因、信号转导和转录调节相关基因及抗凋亡基因。结论：STI571能有效抑制K562细胞生长，诱导K562细胞凋亡；筛选获得的靶基因在K562细胞恶性转化过程中发挥了重要作用，这为药物靶基因的筛选提供了理论基础。     

2-甲氧基雌二醇对慢性髓系白血病K562细胞Caspase-3及Survivin表达的影响

本研究探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对慢性髓系白血病（CML）K562细胞caspase-3和survivin表达的影响。实验分3组：对照组,培养基中不含2-ME;实验组,分别用1、2、4、8及16μmol／L的2-ME处理K562细胞;阴性对照组,培养液中以不合RNase的灭菌蒸馏水代替K562细胞。应用TUNEL、流式细胞术（FCM）、半定量RT—PCR分别检测K562细胞凋亡率、caspase-3及survivin蛋白及其基因表达水平。结果表明：2-ME在一定的浓度范围内呈剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）,且TUNEL和FCM方法检测的K562细胞凋亡率呈正相关（γ=0．845,P=0．034）。随着2-ME浓度增加,caspase-3蛋白表达量逐渐增加,而survivin蛋白表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;且caspase-3与survivin蛋白表达量之间呈负相关（γ=-0．956,P=0．001）。随着2-ME浓度增加,caspase-3基因表达量逐渐增加,而survivin基因表达量逐渐降低,两者与对照组比较差异均有统计学意义（p均〈0．01）,且caspase-3与survivin基因表达量之间呈负相关（γ=0．966,P=0．001）。结论：2-ME能够以剂量依赖形式诱导K562细胞凋亡,显示了其对CML有潜在的治疗价值。     

急性髓系白血病的分子靶向治疗

急性白血病是严重危害人类健康的造血系统的恶性肿瘤,急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是成年人急性白血病最常见类型。近年来新的化疗药物的应用、多药联合的强烈化疗及造血干细胞移植的开展已使AML的预后获得很大改善,但难治性和复发性病例仍缺乏有效的治疗方法,     

家蝇胚胎细胞抗菌肽对人髓样白血病细胞K562的杀伤作用

目的探讨家蝇胚胎细胞抗菌肽和高三尖杉酯碱(HHT)对人髓样白血病细胞K562的抑制、杀伤作用。方法采用脂多糖诱导家蝇胚胎细胞,提取抗菌肽。采用磷酸盐缓冲液(PBS)配制80、160、320及640μg/mL4个浓度,阴性对照组仅加入PBS和培养基。采用流式细胞术检测不同浓度抗菌肽对K562细胞周期和细胞凋亡率的影响。用处于对数生长阶段的K562和人脐静脉血管内皮细胞制备成浓度相同的2个药物组(HHT组和抗菌肽组),不加入药物的2种细胞作为正常对照组。采用流式细胞术检测正常对照组及2个药物组对2种细胞的有效杀伤率。结果 4个浓度组抗菌肽均使K562的S期降低,增殖指数降低,并引起G0/G1期升高,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。4个浓度组K562细胞凋亡率与阴性对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。HHT组和抗菌肽组对K562的有效杀伤率显著升高,HHT组和抗菌肽组与正常对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。HHT组对人脐静脉血管内皮细胞的有效杀伤率显著高于正常对照组和抗菌肽组(P0.05)。结论家蝇胚胎细胞抗菌肽能有效抑制肿瘤细胞的生长,对正常人体细胞无抑制、杀伤作用。