再生障碍性贫血外周血Th17和CD4~+ CD25~+ Treg细胞表达情况研究

本研究旨在探讨成人再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)外周血Th17和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)表达情况。45例初发AA患者分为轻型AA(n=25)和重型AA(n=25)两组,15例正常人作为对照。应用流式细胞术检测AA患者外周血中Th17和CD4+CD25+Treg的比例,ELISA检测血清及刺激后外周血单个核细胞(PBMNC)上清液中的白介素(IL-17)、γ干扰素(IFN-γ)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并与正常对照组比较。结果表明:重型AA(SAA)组外周血Th17细胞比例,血清中IL-17及IFN-γ表达高于轻型AA(MAA)和正常人组,而重型AA组外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例降低。与轻型AA和正常对照相比,重型AA患者单个核细胞培养后上清液中IL-17及IFN-γ表达水平显著增加。AA患者血红蛋白计数与Th17细胞及血清IL-17表达呈负相关,与CD4+CD25+Treg表达成正相关。结论:重型AA患者外周血Th17细胞应答增强,而CD4+CD25+Treg细胞缺乏,贫血的严重程度与外周血Th17/Treg免疫应答失衡密切相关。     

胃癌区域淋巴结中CD4~+CD25~+Foxp3~+T水平与细胞因子相关性分析

目的观察胃癌区域淋巴结中CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞(Treg细胞)分布及与外周血白介素(IL)-10和转化生长因子(TGF)-β_1的关系。方法采用流式细胞术检测48例胃癌患者(淋巴结转移26例,无转移22例)区域引流淋巴结中Treg细胞频数;ELISA方法检测外周血血清TGF-β_1和IL-10水平。分析Treg细胞与TGF-β_1、IL-10相关性。结果 Treg细胞在淋巴结转移患者阳性淋巴结中水平为(18.16±2.51)%,显著高于阴性淋巴结[(13.51±2.48)%],差异有统计学意义(P0.05),且阴性淋巴结Treg细胞比例显著高于无转移患者淋巴结[(9.27±2.16)%],差异有统计学意义(P0.05)。ELISA结果提示淋巴结转移患者外周血TGF-β_1和IL-10水平显著高于无转移患者,差异有统计学意义(P0.05)。胃癌患者引流区淋巴结Treg细胞分布比例与外周血血清TGF-β_1(r=0.73,P0.01)和IL-10水平(r=0.81,P0.01)呈明显正相关。结论胃癌患者区域引流淋巴结中Treg细胞分布与淋巴结转移密切相关,Treg细胞可能通过分泌TGF-β_1和IL-10导致胃癌淋巴结微环境发生免疫抑制,是胃癌发生淋巴结转移的重要因素之一。     

强化阿托伐他汀对急性冠状动脉综合征行介入治疗患者内皮细胞微粒和CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的影响

目的 探讨强化剂量阿托伐他汀治疗对急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)行经皮冠状动脉介入术(percutaneous coronary intervention,PCI)治疗患者外周血内皮细胞微粒(endothelial microparticles,EMP)水平和CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞及细胞因子水平的影响。方法 行PCI治疗的ACS患者104例,根据治疗方法分为阿托伐他汀强化治疗组(强化组)和阿托伐他汀常规治疗组(常规组)各52例。常规组PCI术前、术后均口服阿托伐他汀20mg/d,强化组PCI术前口服阿托伐他汀80mg/d,术后40mg/d。分别于术前、术后1周检测2组外周血EMPs水平、CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞百分率、Foxp3mRNA和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达水平,分析EMPs与CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞百分率、Foxp3mRNA和TGF-β1水平的相关性。结果 强化组和常规组术后CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞百分率[(4.62±0.51)%、(3.85±0.60)%]、Foxp3 mRNA[(224.2±10.9)%、(173.7±11.6)%]和TGF-β1[(305.2±33.9)、(214.6±36.1)ng/L]均高于术前[(3.19±0.55)%、(3.25±0.49)%,(99.9±8.2)%、(101.2±9.4)%,(159.8±32.8)ng/L、(167.3±38.2)ng/L],EMPs水平[(1 062.2±336.8)个/μL、(1 387.8±353.6)个/μL]低于术前[(1 661.9±346.5)个/μL、(1 647.4±368.2)个/μL](P0.01),且强化组较常规组变化更明显,差异有统计学意义(P0.01);EMPs与CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞百分率、Foxp3mRNA和TGF-β1水平均呈负相关(r=-0.526,P=-0.000;r=-0.487,P=-0.001;r=-0.581,P=0.000)。结论 强化剂量阿托伐他汀治疗可能通过下调EMPs水平,从而上调CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞和TGF-β1水平,进而减轻炎症反应,稳定斑块。     

胸腺基质淋巴细胞生成素诱导重症肌无力患者胸腺CD4~+CD25~-T细胞向CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞分化

目的:探索胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对重症肌无力(MG)合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞诱导生成CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞的研究。方法:以磁珠分选的方法得到胸腺CD4+CD25-T细胞及树突状细胞(DC)细胞,通过不同浓度(0.1、1、10、20 ng/m L)的TSLP活化DC后诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,以流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比率;RT-PCR检测Foxp3 m RNA表达;Western blot法检测上调的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的Foxp3蛋白表达;ELSIA法检测培养上清IL-10的含量。结果:10 ng/m L TSLP组、20 ng/m L TSLP组经诱导后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比例均明显升高,Foxp3的表达水平也相应增加,IL-10水平升高,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:TSLP可以诱导MG合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,并促进Foxp3的表达。     

淋巴结核患者外周血CD4~+CD25~(high)FoxP3~+调节性T淋巴细胞以及血浆IFN-γ和IL-10水平及其临床意义

目的研究淋巴结核患者外周血CD4+CD25highFoxP3+调节性T淋巴细胞(Treg)和干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)水平的变化及临床意义。方法采用流式细胞仪对100例淋巴结核患者及30名正常人外周血CD4+CD25highFoxP3+Treg和IFN-γ、IL-10水平进行检测。结果淋巴结核患者组与正常对照组比较,外周血CD4+CD25highFoxP3+Treg和IL-10水平均升高(P0.05),而IFN-γ水平则降低(P0.05)。在干酪样型、增殖型和混合型3种类型的淋巴结核病之间各指标差异均无统计学意义(P0.05)。结论淋巴结核患者细胞免疫功能明显异常。CD4+CD25highFoxP3+Treg和IFN-γ、IL-10在淋巴结核的发病过程中发挥了重要作用。     

原因不明复发性流产病理妊娠患者外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3mRNA的表达

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)病理妊娠患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA的表达。方法采用流式细胞术测外周血CD4+CD25+Treg,半定量、实时荧光定量PCR分析外周血单个核细胞Foxp3转录水平;检测70例原因不明复发性流产史妇女(URSA未孕组)、20例病理妊娠妇女(URSA病理妊娠组)、22例正常妊娠妇女组(正常妊娠组)、20例正常非孕妇女组(对照组)外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA的表达情况。采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-10(IL-10)水平。结果 URSA未孕组外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA、IL-10比例明显低于正常非孕妇女组,两组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.61、4.18、2.71,P均<0.05);URSA病理妊娠组外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA、IL-10低于正常妊娠妇女组,两组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.79、12.56、4.42,P均<0.05)。结论外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA和IL-10表达水平降低可能与URSA病理妊娠患者的发病有关。     

桥本甲状腺炎患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞及IL-10的检测及临床意义

目的评价检测桥本甲状腺炎(HT)患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)及白细胞介素-10(IL-10)的临床意义。方法选择30例临床确诊初次发病HT患者作为观察组,另选择30例同时期年龄、性别匹配的健康体检者作为对照组,均抽取空腹静脉血,采用流式细胞术测定外周血CD4~+CD25~+Treg占CD4~+T细胞的百分比、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比以及CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+CD25~+Treg的百分比,采用酶联免疫吸附实验检测IL-10水平。结果两组的外周血CD4~+CD25~+Treg占CD4~+T细胞的百分比差异无统计学意义(P0.05);观察组的外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+CD25~+Treg的百分比均明显低于对照组(P0.05);观察组的IL-10水平显著低于对照组(P0.05)。结论桥本甲状腺炎患者的外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞比例、IL-10水平低于健康人群;推测CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg、IL-10可能参与了桥本甲状腺炎的发病。     

调节性T细胞在小鼠ITP发病中的作用

目的:探讨Treg细胞在ITP发病中的作用。方法:构建ITP小鼠模型,应用流式细胞术检测外周血及脾脏中的Treg细胞比例,应用免疫磁珠法分选出脾脏CD4+CD25+T细胞,采用RT-PCR方法测定Treg细胞相关转录因子(Foxp3,Smad7,STAT5和Akt-1)和细胞因子(IL-10,TGF-β)的mRNA表达水平。结果:与对照组相比,ITP小鼠外周血及脾脏的Treg细胞比例均显著下降(P0.01);同时,Foxp3、IL-10,TGF-βmRNA表达水平降低(P0.05);而Smad 7的mRNA表达水平升高。结论:Treg细胞数量及其功能下降可能是ITP免疫功能紊乱的直接原因之一,而Foxp3 mRNA低表达及Smad 7 mRNA高表达可能抑制Treg的增殖和分化,参与ITP的发生。     

胃癌CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的异常增高与患者免疫抑制状态的相关性分析

目的:探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞在胃癌患者血清及腹腔冲洗液(或积液)中异常增高与机体免疫状态的关系。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胃癌患者血清和腹腔冲洗液中IFN-γ、IL-4细胞因子的水平。利用多参数流式细胞仪分析56例胃癌患者术前的外周血和肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)中Treg细胞及CD8+T细胞[又称细胞毒T淋巴细胞(CTL)]的比率。另检测12例胃癌患者手术前后外周血Treg细胞的比率变化。结果:相对于健康对照组,胃癌患者血清Th1/Th2比例降低,差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌患者外周血中的Treg细胞比率明显高于健康对照组,晚期患者高于早期患者,差异有统计学意义(P均<0.05);TIL中Treg比率明显高于外周血(P<0.05)。12例患者肿瘤切除后Treg细胞比率明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:胃癌患者血清及肿瘤组织中Treg细胞的比率随肿瘤进展而升高;Treg细胞比率升高和CTL降低可能参与肿瘤细胞的免疫逃逸。     

过继妊娠诱导的CD4+CD25+调节性T细胞治疗不明原因复发性流产

目的 观察过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)对不明原因流产的作用机制及妊娠预后的影响.方法 以雌性CBA/J×雄性BALB/c为正常妊娠模型,以雌性CBA/J×雄性DBA/2J为自然流产模型,磁珠分选雌性CBA/J小鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞并流式细胞术(flow cytometry,FCM)分析细胞纯度.将未孕CD4+CD25+Treg细胞和正常妊娠孕14d的CD4+CD25+Treg分别转输至流产模型孕4d(着床期)的雌性CBA/J孕鼠,于孕14d分别观察宿主孕鼠的胚胎吸收率并测定宿主外周血和母胎界面组织体外培养上清液中Th1Th2/Th3型细胞因子(IFN-γ/TGF-βI/IL-10)水平.结果 与对照组比较,过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+Treg细胞的宿丰孕鼠的胚胎吸收率(11.32%)显著下降;外周血TGF-β 1/IFN-γ中位数(438)和IL-10/IFN-γ中位数(14)显著增加;母胎界而上TGF-β 1中位数(5899.02pg/mL)和IL-10中位数(158.85pg/mL)显著增加,IFN-γ中位数(18.46 pg/mL)显著下降.结论 孕早期过继转输正常妊娠诱导的CD4+CD25+Treg细胞疗法能诱导宿主母胎免疫耐受并调节细胞因子表达,有利于妊娠维持的Th2、Th3应答偏移.     

CD4~+CD25~(high)CD127~(low)调节性T细胞促进上皮性卵巢癌转移机制的初步探讨

目的探讨CD4~+CD25~(high)CD127~(low)调节性T细胞(Treg)在上皮性卵巢癌(EOC)转移中的作用及相关细胞因子涉及的信号机制。方法采用流式细胞术检测34例EOC患者(EOC组)、26例卵巢良性肿瘤患者(卵巢良性肿瘤组)和34名体检健康者(正常对照组)外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg的比例。收集所有患者的临床资料,包括年龄、病理类型、国际妇产科联合会(FIGO)分期、组织学分化情况、淋巴结转移情况。建立正常对照者CD4+T细胞与EOC细胞株OVCAR3的共培养模型,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β1(TGF-β1)水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测OVCAR3细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-2 mRNA和基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-2 mRNA的表达。采用抗IL-10受体抗体和抗TGF-β1受体抗体作为阻断剂,预处理OVCAR3细胞后再进行共培养,并检测MMP-2 mRNA和TIMP-2 mRNA的表达。结果 EOC组外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg明显高于卵巢良性肿瘤组和正常对照组(P0.05),而卵巢良性肿瘤组与正常对照组之间差异无统计学意义(P0.05)。淋巴结转移阳性EOC患者外周血CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg比例明显高于淋巴结转移阴性患者(P0.05),而不同年龄、病理类型、FIGO分期及组织学分化情况的EOC患者之间CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg比例差异均无统计学意义(P0.05)。共培养后CD4+T细胞分泌的IL-10和TGF-β1水平明显高于CD4+T细胞单独培养(P0.05)。与OVCAR3细胞单独培养相比,共培养后的OVCAR3细胞中MMP-2 mRNA表达明显升高(P0.05),TIMP-2 mRNA明显降低(P0.05)。采用阻断剂预处理后共培养的OVCAR3细胞MMP-2 mRNA表达下调(P0.05)、TIMP-2 mRNA表达上调(P0.05)。结论 CD4~+CD25~(high)CD127~(low)Treg可增强IL-10和TGF-β1的表达,并作用于EOC细胞的相关受体,可能对EOC侵袭、转移起重要作用。     

Th9、Th17、CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞在慢性淋巴细胞白血病患者外周血中的变化

目的探讨慢性淋巴细胞白血病患者外周血中Th9、Thl7和CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞及相关细胞因子的表达水平及意义。方法采用流式细胞仪检测36例CLL患者和45例健康对照组外周血Th9、Th17和Treg细胞的表达率,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测外周血中细胞因子IL-9、IL-17、TGF-β的表达水平。结果 1)CLL组患者外周血Th9、Th17细胞比例及细胞因子IL-9、IL-17浓度均明显高于健康对照组[(1.29±0.35)%vs(0.74±0.23)%,P0.05;(2.15±0.46)%vs(1.08±0.37)%,P0.05;(24.25±7.05)%vs(16.35±5.42)%,P0.05;(11.47±3.99)%vs(7.36±2.85%),P0.05]。CD4~+CD25~+FoxP3~+细胞比例及细胞因子TGF-β浓度明显低于对照组[(4.76±0.89)%vs(7.26±1.95)%,P0.05;(3.82±1.39)%vs(6.82±2.01)%,P0.05]。2)相关性分析:患者Th9、Th17细胞比例及IL-9、IL-17浓度与淋巴细胞计数负相关(γ_s=-0.374,P=0.034;γ_s=-0.382,P=0.032;γ_s=-0.445,P=0.011;γ_s=-0.413,P=0.024);患者Treg细胞比例及TGF-β浓度与淋巴细胞计数正相关(γ_s=0.416,P=0.023;γ_s=0.403,P=0.028)。结论慢性淋巴细胞白血病患者Th9、Th17与CD4~+CD25~+FoxP3~+调节性T细胞比例失衡,血清IL-9、IL-17和TGF-β水平变化,这些原因可能参与慢性淋巴细胞白血病的免疫发病过程。     

反复喘息幼儿外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T淋巴细胞、IL-10及IgE水平的研究

目的 研究CD4⁺CD25⁺叉头样转录因子3阳性（Foxp3⁺）调节性T淋巴细胞（Treg）及相关细胞因子、总IgE（TIgE）、特异性IgE（sIgE）在有或无特应征反复喘息幼儿外周血介导的免疫应答差异,为幼儿喘息性疾病的发展预测及治疗提供新思路。方法 选择反复喘息幼儿45例,分为特应征组22例和非特应征组23例,另选20名健康幼儿作为健康对照组,分别检测3组幼儿外周静脉血Treg计数和血清IL-10、IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ、TGF-β及TIgE、sIgE水平。结果 特应征组吸入及食入变应原sIgE阳性率高于非特应征组（P均<0.05）。特应征组外周血Treg计数和血清IL-10、IFN-γ水平低于非特应征组,而非特应征组低于对照组（P均<0.05）;特应征组血清IL-4、IL-5、IL-13、TIgE水平高于非特应征组,而非特应征组高于对照组（P均<0.05）。特应征组及非特应征组血清TGF-β水平比较差异无统计学意义（P>0.05）,均高于对照组（P均<0.05）。反复喘息患儿外周血Treg计数与血清IL-10水平呈正相关（r=0.875,P<0.001）。结论 Treg、IL-10、IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β及IFN-γ可能参与了幼儿喘息,在过敏性疾病中发挥免疫调节作用。反复喘息幼儿外周血Treg计数与血清IL-10水平呈正相关。Treg与IL-10未来可能作为幼儿反复喘息早期预测及治疗的新靶点。     

胃癌CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞数量和分布及Foxp3基因表达与肿瘤分期的相关性

目的 研究胃癌患者CD4+CD25highFoxp3+调节性T淋巴细胞(Treg)的存在数量、分布情况,及其功能基因Foxp3的表达变化与胃癌临床国际肿瘤淋巴转移分类(TNM)分期的关系.方法 用四色流式细胞术以Foxp3-FITC/CD25-PE/CD4-PerCP/CD3-PC7抗体组合分析20名健康对照者及47例胃癌患者(临床TNM分期Ⅰ期11例、Ⅱ期18例、Ⅲ期10例、Ⅳ期8例)外周血、腹腔积液、肿瘤组织浸润淋巴细胞(TIL)及癌旁淋巴结中CD4+CD25highFoxp3+Treg的数量及分布情况.实时荧光定量PCR技术检测Treg Foxp3 mRNA表达水平.结果 胃癌患者外周血CD4+CD25highFoxp3+Treg占CD4+T淋巴细胞的百分比为(8.03±3.47)%,高于正常健康对照组(5.83±2.93)%,差异具有统计学意义(P＜0.05).胃癌患者腹腔积液、肿瘤浸润淋巴细胞、癌旁淋巴结中Treg占CD4+T淋巴细胞比例均高于外周血,差异有统计学意义(分别为P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01).胃癌组织局部TIL和癌旁淋巴结中Treg的Foxp3平均荧光强度显著高于外周血和腹腔积液(P＜0.05).Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者Treg比例分别为(5.72±1.95)%、(6.45±2.23)%、(9.58±3.13)%、(11.70±2.30)%,这提示Treg与肿瘤TNM分期显著相关(r=0.784,P＜0.01).胃癌患者外周血单个核细胞Foxp3基因mRNA表达水平明显高于健康对照组(P＜0.01).Foxp3基因表达水平与胃癌TNM各分期呈显著相关性(r=0.623,P＜0.05).结论 胃癌患者CD4+CD25highFoxp3+Treg的比例升高,其增高程度与肿瘤临床分期呈显著正相关.胃癌患者外周血和癌组织局部Treg的数量、分布情况及特异性转录因子Foxp3的表达强度均有所不同,提示肿瘤局部免疫抑制功能增强,这可能是产生肿瘤免疫抑制的重要机制,CD4+CD25highFoxp3+Treg将来可作为胃癌患者病情进展的重要判断指标之一.     

骨髓间充质干细胞上调再生障碍性贫血患者CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的临床研究

目的:初步探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的表达及临床意义;探讨临床使用异体骨髓间充质干细胞(MSC)治疗对CD4+CD25+Foxp3+Treg表达的影响。方法:(1)流式细胞仪检测13例重型再生障碍性贫血(SAA),17例慢性再生障碍性贫血(CAA)及10例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达;(2)检测7例AA患者MSC治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达。结果:(1)AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达明显低于健康对照者(P<0.01);(2)SAA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达较CAA者低(P<0.05);(3)MSC治疗后AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达升高(P<0.05)。结论:(1)AA患者存在外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达减低,其表达异常可能参与AA的发病;(2)CD4+CD25+Foxp3+Treg表达在SAA患者更低,提示其表达水平可能可以作为判断AA病情轻重的指标;(3)MSC治疗可上调AA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达,为MSC纠正AA患者的免疫异常提供了临床依据。     

CD4~+CD25~+CDl27~(low)调节性T细胞、TGF-β及Notch1基因在特发性血小板减少性紫癜发病机制中作用研究

目的:探讨CD4~+CD25~+CDl27lowTreg、TGF-β及Notch1 mRNA在特发性血小板减少性紫癜(ITP)发病机制中作用。方法:收集30例初发ITP患者治疗前及治疗后和20例正常对照组的外周血,采用流式细胞术检测CD4~+CD25~+Treg和CD4~+CD25~+CDl27lowTreg数量;ELISA法检测TGF-β浓度;实时荧光定量PCR检测Notch1基因相对表达量。结果:ITP初治组外周血中CD4~+CD25~+CDl27low Treg和CD4~+CD25~+Treg比例均明显低于对照组,治疗后为(5.17%±0.74%)和(4.16%±0.68%),较初治组显著增高;初治组外周血中TGF-β浓度明显低于对照组,治疗后为(961.53±60.10 ng/l),较初治组显著增高;初治组外周血中Notch1 mRNA表达量明显低于对照组,治疗后为(1.35±0.10),较初治组显著增高。经治疗后,显效组Treg比例、TGF-β水平及Notch1 mRNA表达水平明显高于良效组和改善组、无效组,其差异均有统计学意义(P0.01)。TGF-β、Notch1表达均与CD4~+CD25~+CDl27lowTreg比例呈正相关性关系(P0.01)。结论:ITP患者中CD4~+CD25~+CDl27lowTreg、TGF-β及Notch1明显低于正常对照组,预示ITP患者存在明显细胞免疫调控异常;CD4~+CD25~+CDl27lowTreg与Notch1表达存在正相关性,提示Notch信号可能参与了Treg细胞免疫抑制作用途径,此结果为临床治疗提供新的思路。     

重度子痫前期患者外周血Th17和Treg细胞及相关细胞因子的表达及意义

目的探讨重度子痫前期(sPE)患者外周血Th17及CD4+CD25+Treg细胞及相关细胞因子白细胞介素(IL)-17、IL-21、IL-10和转化生长因子β(TGF-β)的水平变化及意义。方法选取30例sPE患者(sPE组)及30例正常妊娠者(对照组)作为研究对象。采用流式细胞术检测外周血单个核细胞中Th17及CD4+CD25+Treg细胞水平。采用QRT-PCR检测维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)mRNA和Foxp3 mRNA的表达水平。采用ELISA法检测血浆IL-17、IL-21、IL-10和TGF-β水平。结果 sPE组外周血Th17细胞水平为(1.16±0.78)%,显著高于对照组的(0.68±0.35)%,差异有统计学意义(t=3.447,P=0.002)。sPE组外周血CD4+CD25+Treg细胞水平为(1.65±0.49)%,显著低于对照组的(2.42±0.91)%,差异有统计学意义(t=-4.25,P=0.000)。sPE组RORγt mRNA表达水平为0.190±0.063,高于对照组的0.136±0.037,差异有统计学意义(t=3.776,P=0.001)。而sPE组Foxp3mRNA表达水平为0.069±0.025,低于对照组的0.127±0.027,差异有统计学意义(t=-8.218,P=0.000)。sPE组IL-17、IL-21、IL-10水平分别为(82.03±37.61)、(63.29±27.42)、(56.89±17.28)ng/L,高于对照组的(30.81±21.87)、(33.87±13.73)、(33.24±11.93)ng/L,差异有统计学意义(P0.01),TGF-β水平为(24.34±6.51)ng/L,低于对照组的(46.97±15.81)ng/L,差异有统计学意义(t=-7.781,P=0.000)。sPE患者血浆IL-17、IL-21水平与Th17细胞水平呈正相关(r分别为0.695、0.586,P0.01)。结论 sPE患者Th17细胞数量升高,CD4+CD25+Treg细胞数量减少,以及相关细胞因子的紊乱在sPE的发病机制中可能起到重要作用。     

全反式维甲酸对川崎病患儿外周血Th17/Treg细胞平衡的影响研究

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)对川崎病患儿外周血Th17/Treg细胞平衡的影响。方法研究纳入10名川崎病患儿为病例组,选择10名健康儿童作为对照组,采取外周静脉血后,无菌分离、制备外周血单个核细胞(PBMC),给予不同浓度ATRA诱导培养PBMC72h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液的细胞因子IL-10、IL-17A、TGF-β以及IL-6水平,实时PCR检测RORγt mRNA和FOXP3 mRNA表达水平,流式细胞术检测Th17/Treg占外周CD4+T细胞百分比。结果未加ATRA作用下,病例组Th17细胞比例,转录因子RORγt的mRNA表达水平以及相关细胞因子IL-10、IL-17A均高于对照组(P均0.01),而Treg细胞比例,FOXP3mRNA表达水平以及相关细胞因子TGF-β、IL-6低于对照组(P均0.01)。给予不同浓度ATRA作用后,病例组以及对照组Th17比例、IL-10、IL-17A、RORγt的mRNA均有所下降,而Treg细胞比例、FOXP3mRNA表达水平、TGF-β、IL-6均有所上升(P均0.01)。结论 ATRA在体外可促进川崎病患儿外周血Treg分化,同时抑制Th17分化,改变川崎病患儿外周血Th17/Treg失衡状态,该研究为阐明川崎病的免疫学发病机制及探索新疗法提供实验依据以及思路。     

风湿性心脏病患者外周血调节性T细胞与IL-10、TGF-β1的关系及意义

目的探讨风湿性心脏病(RHD)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞变化及与IL-10、TGF-β1血清浓度变化之间的关系。方法选取24例RHD患者作为实验组,24例年龄相当的健康人作为对照组。清晨空腹采集经肝素抗凝的外周静脉血标本,流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例,用ELISA方法检测血清中IL-10、TGF-β1的浓度,分析研究Treg细胞、IL-10、TGF-β1血清浓度变化与临床意义。结果流式细胞术检测显示RHD患者外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞的比例为(1.454±0.606)%,低于对照组的(2.858±0.318)%(P<0.01);RHD患者血清中IL-10、TGF-β1的浓度低于正常对照组(P<0.01)。CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞与IL-10、TGF-β1的变化呈明显正相关。结论外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg的数量变化及血清IL-10、TGF-β1的浓度变化参与了RHD患者免疫异常的病理过程,检测外周血IL-10、TGF-β1浓度变化与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的变化对RHD诊治具有重要意义。     

慢性乙型肝炎患者CD4+CD25+调节性T细胞及部分细胞因子的变化

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞和血清IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ和TGF-β的变化,探讨其与乙型肝炎慢性化的关系。方法选择24例CHB患者作为CHB组、8例急性乙型肝炎(AHB)患者作为AHB组,12例健康体检者作为正常对照组,流式细胞仪检测各组CD4+CD25+调节性T细胞的百分率,ELISA双抗体夹心法检测慢性乙型肝炎组和正常对照组上述5种细胞因子的水平。结果 CHB组CD4+CD25+调节性T细胞百分率均明显高于AHB组和正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。CHB组和AHB组的CD4+CD25+Treg百分率与血清HBV-DNA及ALT之间无相关关系(P>0.05)。CHB组血清IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ和TGF-β水平均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。CHB组IL-2及IFN-γ分别与ALT正相关(P<0.05)。结论慢性乙型肝炎患者存在免疫紊乱,CD4+CD25+调节性T细胞和Th1/Th2细胞的失衡与乙型肝炎慢性化有关。