月腺大戟素A干预CXCR4表达对间充质干细胞向心肌梗死区迁移的影响

目的观察月腺大戟素A对CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达的影响,探讨其调节间充质干细胞(MSCs)向心肌梗死区迁移的作用机制。方法采用双荧光素酶报告基因检测技术评价月腺大戟素A增强CXCR4启动子活性的量效关系,采用CCK-8试剂盒检测月腺大戟素A干预MSCs细胞活力,采用Transwell实验检测月腺大戟素A干预MSCs迁移能力,采用Western blot检测月腺大戟素A干预MSCs的CXCR4表达,采用小干扰RNA(siRNA)技术检测月腺大戟素A干预CXCR4表达MSCs的迁移。建立大鼠心肌梗死模型,在体评估月腺大戟素A干预绿色荧光蛋白(GFP)标记MSCs的迁移,同时采用Western blot检测月腺大戟素A干预MSCs中蛋白激酶B(Akt)活性和基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达。结果月腺大戟素A增强CXCR4启动子活性的作用呈剂量依赖性。0～20μmol/L月腺大戟素A对MSCs无明显细胞毒性,能促进基质细胞衍生因子-1的MSCs迁移,上调MSCs的CXCR4表达水平。采用siRNA下调CXCR4表达可明显减弱月腺大戟素A促进MSCs的迁移。在体实验显示,月腺大戟素A预处理能增加心肌梗死区域内GFP-MSCs的细胞数量,增加MSCs中Akt活性,MMP2表达明显升高。结论月腺大戟素A通过上调CXCR4/Akt/MMP2信号通路促进MSCs向心肌梗死区迁移。     

基于肺部苦味受体抗哮喘天然活性成分筛选模型的建立与应用

目的构建以肺部苦味受体TAS2R14为靶点的高通量筛选细胞模型,为寻找高效、低毒的新型抗哮喘天然药物奠定基础。方法利用同源重组技术将TAS2R14受体基因插入p LVX-basic质粒,构建p LVX-Ac GFP1-N1-TAS2R14重组载体,并将其转染入HEK293T细胞,建立特异性高表达TAS2R14受体基因的细胞株。利用该细胞模型对120种苦味中药提取物和单体化合物进行高通量筛选。结果建立的模型Z′因子为0.69和0.66,筛选发现陈皮提取物及其药效物质柠檬苦素,白果提取物及其药效物质芦丁、奎宁对TAS2R14受体具有显著的激动作用。结论建立的TAS2R14受体激动剂高通量筛选模型稳定性好、灵敏度高,筛选得到的3种中药单体具有潜在的TAS2R14受体激动活性。     

利用干细胞筛选中药神经保护作用活性成分的新方法

目的：利用干细胞构建可用于药物筛选的细胞模型,初步建立寻找中药活性成分的新方法。方法：首先,克隆神经生长因子（NGF）启动子的序列,连接到含有荧光素酶报告基因/E2红色荧光蛋白的质粒上,并将合成得到的质粒转入HEK-293细胞中,构建基于启动子的初步筛选稳定的细胞模型。使用阳性药进行验证细胞模型的准确性,并用该模型筛选来自中药的小分子化合物。然后使用筛选得到的化合物诱导大鼠的骨髓间充质干细胞,检测相关神经营养因子的转录水平,验证待测小分子化合物可能对神经生长的生物活性。结果：来自中药益智的三种化合物,白杨素、圆柚酮和杨芽黄素均可以激活NGF启动子。白杨素、圆柚酮诱导MSC不同时间后,细胞表面神经标志物:神经生长因子（NGF）、半乳糖神经酰胺（GalC）、巢蛋白（Nestin）、神经元特异烯醇化酶（NSE）、波形蛋白（Vimentin）对应RNA的转录水平均有不同程度的提高。而杨芽黄素没有明确促进神经细胞分化的活性。结论：白杨素、圆柚酮可以促进干细胞向神经细胞分化,是中药益智发挥神经保护作用物质基础的组成部分。     

基于报告基因的化学预防剂细胞筛选模型的建立

目的:建立基于报告基因和抗氧化反应元件(anti-oxidative response element,ARE)的药物筛选细胞模型,为化学预防剂的筛选奠定基础.方法:构建重组报告基因表达载体p4ARE-TK-GFP/neo,并将其转入HepG_2细胞中,利用已知化学预防剂检测该细胞模型,并观察白藜芦醇、原儿茶醛、熊果酸和齐墩果酸4种中药单体不同浓度(0,12.5,25,50,100,200 μmol·L~(-1))对GFP报告基因表达活性的影响.结果:表达载体p4ARE-TK-GFP/neo中GFP的表达受ARE的调控,其表达水平高于对照载体且在一定范围内与化学预防剂的浓度呈剂量效应关系.4种中药单体中白藜芦醇有较好的诱导效果.结论:利用此模型通过测定GFP报告基因的诱导表达水平可筛选得到新结构的化学预防剂.     

缺氧预处理MSCs移植对脑缺血再灌注损伤大鼠SDF-1/CXCR4表达的影响及清热化瘀方的干预作用

目的：观察缺氧预处理骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对脑缺血再灌注损伤大鼠SDF-1/CXCR4 mRNA和蛋白表达的影响及清热化瘀方的干预作用。方法：采用线栓法制备局灶性脑缺血大鼠（MCAO）模型，将216只SD大鼠随机分为6组：假手术组（SO）、模型组（MCAO）、MSCs移植对照组(N-MSCs)、经HP处理后的MSCs移植组(HP-MSCs)、MSCs移植联合清热化瘀方组(MSCs QRHY)、HP-MSCs移植联合清热化瘀方组(HP QRHY)。每组大鼠36只，每组根据取材时间点7d、14d、28d又可分为每组3个亚组，每个亚组12只大鼠。采用qRT-PCR和Western blot观察3个时间点SDF-1/CXCR4 mRNA及其蛋白的表达变化，并以TUNEL法检测神经细胞凋亡。结果：各组缺血半暗带SDF-1/CXCR4 mRNA及其蛋白的表达均于7d达到高峰，14d，28d表达逐渐下降。其中7d、14d同一时间点组间比较，HP-MSCs组、MSCs QRHY组及HP QRHY组二者的表达均明显优于N-MSCs组（P＜0.01或P＜0.05），而以HP QRHY组增高最为明显（P＜0.05或P＜0.01），28d后，各移植组的表达趋势趋同，但仍高于模型组（P＜0.05）。结论：缺氧预处理MSCs移植能够显著提高脑缺血再灌注损伤大鼠SDF-1/CXCR4的表达，清热化瘀方能够进一步上调SDF/1CXCR4的表达，减少细胞凋亡。     

一种基于抗氧化反应元件的抗氧化药物筛选模型的制备

目的 利用抗氧化反应元件(ARE)调控荧光素酶(Luc)报告基因的表达水平,建立抗氧化药物筛选细胞模型.方法 构建由ARE调控Luc表达的重组质粒载体pARE-Luc-Neo,使用FuGENE@HD转染剂将重组质粒转染人胚肾上皮Hek293细胞,通过G418进行筛选,使用稀释法挑选阳性单克隆细胞,经抗氧化蛋白诱导剂TBHQ诱导,检测细胞中Luc的活性,筛选Luc高活性的单克隆细胞株.利用白藜芦醇和姜黄素评价阳性克隆的筛选效果,观察5个中药单体穿心莲内酯、隐丹参酮、水飞蓟素、苦参碱和虎杖苷在不同浓度(0、3.125、6.25、12.5、25、50、100μmol/L)时对Luc表达水平的影响.结果 通过检测Luc活性,筛选获得Hek293-ARE,该细胞中的Luc的表达水平受ARE调控,且在一定范围内与诱导剂的浓度呈相关性.穿心莲内酯、隐丹参酮与水飞蓟素有较好的诱导效果.结论 建立的抗氧化药物细胞筛选模型可有效地、高通量地用于抗氧化药物的初步筛选.     

基于Myh6启动子的药物筛选系统在中药有效成分诱导P19向心肌细胞分化中的应用

目的通过构建重组双荧光素酶报告基因质粒Myh6-Luc,筛选诱导小鼠畸胎瘤细胞P19向心肌细胞分化的最佳中药有效成分,并对诱导效果进行验证。方法将Myh6基因的启动子区域(～1 507 bp)插入pGL6报告质粒荧光素酶基因的上游,构建心肌细胞特异启动子荧光素酶报告基因系统。通过阳性药物0.005%二甲基亚砜对该荧光素酶报告基因系统进行验证。通过双荧光素酶检测方法筛选诱导P19细胞向心肌细胞分化的最佳中药有效成分,经心肌细胞标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT)免疫荧光染色对该有效成分的诱导作用进行验证,并通过RT-qPCR检测mi R-1和mi R-25的表达。结果经双酶切鉴定质粒构建成功,并通过阳性药物诱导证实该系统的有效性。一定浓度的三七皂苷Fe、三七皂苷R1(NGR1)和人参皂苷Rh1均能对P19细胞产生诱导作用,其中1μmol/L NGR1诱导效果最明显。1μmol/L NGR1对P19细胞进行诱导后,大部分细胞可表达c TnT,且mi R-1表达上调,mi R-25表达下调。结论基于Myh6启动子的药物筛选系统可用于发现诱导干细胞向心肌细胞分化的中药有效成分,1μmol/L NGR1是诱导P19细胞向心肌细胞分化的有效药物,其机制可能与上调mi R-1、下调mi R-25的表达有关。     

丹酚酸B干预对移植骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化相关基因表达的影响

目的探讨中药单体丹酚酸B预处理对急性心肌梗塞（AMI）大鼠移植骨髓间充质干细胞（MSCs）向心肌细胞分化相关基因表达的影响。方法体外分离、培养和纯化大鼠MSCs,含0.3μg／mL丹酚酸B的低糖DMEM培养液培养MSCs24h后,结扎大鼠左冠状动脉,制作大鼠AMI模型,40只大鼠随机分为假手术组,模型组,丹酚酸B预处理细胞移植组,细胞移植组。PT-PCR检测心肌分化相关基因NKX2．5和GATA-4mRNA的表达。结果丹酚酸B预处理细胞移植4w后,NKX2．5和GATA-4mRNA表达量分别为2．256、0．524、1．567、0．287,与模型组比较差异显著。结论丹酚酸B预处理骨髓间充质干细胞移植上调了心肌分化基因NKX2．5和GATA-4mRNA的表达,有可能改善心功能。     

PPARs激动剂体外筛选模型的建立及其在泽泻活性成分筛选中的应用

利用酵母GAL4 BD-UAS反式激活分析(transactivation assay)系统在哺乳动物细胞中建立以过氧化物酶体增殖物受体的配体结合结构域(PPARs-LBD,包括PPARα,PPARβ和PPARγ)为靶点的体外筛选模型,并应用该模型对泽泻化学成分进行筛选,研究泽泻14种化学成分对PPARs的激活作用。首先构建GAL4 BD-PPARs LBD融合表达质粒p Bind-PPARs-LBD,采用Lipofectamine将表达质粒p Bind-PPARs-LBD与含有UAS:luciferase报告质粒p GL4.35共转染293T细胞。以PPARs的激动剂(PPARα:非诺贝特;PPARβ:L165041;PPARγ:罗格列酮)为阳性对照,通过测定萤火虫荧光素酶活性来验证系统是否构建成功,并用该系统来考察泽泻中14种化学成分对PPARs靶点激活的影响。PPARs的阳性激动剂结果显示系统构建成功,用该系统分析泽泻化学成分结果显示泽泻单体化合物5,6,7,8,13,14对PPARα有激活作用,化合物5,7对PPARβ有激活作用,而化合物6,7,8,12对PPARγ有激活作用,其中化合物12对PPARγ有显著激活能力。该研究在哺乳动物293T细胞中成功构建以PPARα/β/γ配体结合结构域为靶点的体外筛选细胞模型,并成功应用于泽泻PPARα/β/γ的天然激动剂的筛选。     

柔肝化纤颗粒促进BMSC向肝脏归巢及其机制研究＊

目的 研究柔肝化纤颗粒促进骨髓来源间充质干细胞（BMSC）向肝脏归巢的作用及其机制。方法 动物实验部分，大鼠分为肝纤维化模型加BMSC移植组，及肝纤维化模型加BMSC移植联合柔肝化纤干预组，BMSC细胞实验分为对照组，柔肝化纤含药血清（低、中、高浓度）干预组。分别采用qPCR，WesternBlot法检测SDF-1、CD62P、CD62E、CD44、CXCR4、VCAM-1和CD49D mRNA及蛋白表达情况，冷冻切片检测携带绿色荧光蛋白的BMSC向肝组织归巢情况。结果 与单独BMSC移植组相比，柔肝化纤颗粒联合干细胞干预组大鼠肝脏干细胞粘附相关基因和干细胞归巢相关基因mRNA及蛋白表达量显著上调（P < 0.05），与单独BMSC移植组相比，柔肝化纤颗粒联合干预组大鼠肝脏内携带绿色荧光蛋白的BMSC数量明显增加。细胞实验部分，与对照组相比，添加高浓度柔肝化纤含药血清能够显著上调干细胞归巢相关基因mRNA及蛋白表达量（P < 0.05）。结论 柔肝化纤颗粒能够促进BMSC向纤维化肝组织归巢，并能够提高肝脏募集干细胞聚集水平，其作用机制可能与SDF-1/CXCR4轴有关。     

补肾活血汤提取物促进大鼠骨髓间充质干细胞体外迁移及CXCR4表达的研究

目的筛选补肾活血汤促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外迁移的活性部位并研究其对CXCR4蛋白表达的影响。方法补肾活血汤采用索氏提取法,得到石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇及水提物4个部位。全骨髓贴壁培养法培养BMSCs,取第三代(P3)BMSCs进行实验。补肾活血汤4个部位按照10,50,100μg·mL~(-1)浓度梯度对BMSCs进行Transwell实验,筛选出有效部位。使用Western blot和细胞免疫荧光检测补肾活血汤有效部位对CXCR4蛋白表达的影响。结果 Transwell结果显示,补肾活血汤石油醚部位具有明显促进大鼠BMSCs体外迁移的作用,以100μg·mL~(-1)浓度最佳(P0.05)。Western blot、细胞免疫荧光结果显示,补肾活血汤石油醚部位呈浓度依赖性上调大鼠BMSCs的CXCR4蛋白表达(P0.05)。结论补肾活血汤促进大鼠BMSCs体外迁移的有效部位为石油醚部位,其相关机制可能与上调CXCR4蛋白表达,激活SDF-1/CXCR4信号轴有关。     

健脾解毒方介导p38MAPK信号转导下调幽门螺杆菌诱导的胃癌细胞环氧合酶2启动子活性

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)对人胃癌MKN45细胞环氧合酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)启动子荧光素酶报告基因重组质粒(pGL3-Basic-COX-2-promoter)活性的影响和健脾解毒方对其的调控作用及可能的机制。方法:将构建的pGL3-Basic-COX-2-promoter转染MKN45细胞,观察H.pylori对其活性的影响。运用p38MAPK特异性抑制剂SB203580阻断p38MAPK信号通路,观察H.pylori对MKN45细胞COX-2启动子活性的影响。Western blot法检测健脾解毒方对H.pylori感染的MKN45细胞p38MAPK信号通路及其下游激活转录因子-2(ATF-2)表达的影响。结果:H.pylori可增加COX-2启动子活性;抑制p38MAPK信号通路后,COX-2启动子活性明显下调;健脾解毒方能够抑制H.pylori诱导的p38MAPK及ATF-)的活性。结论:H.pylori通过p38MAPK信号通路上调胃癌细胞COX-2启动子活性;健脾解毒方通过调控p38MAPK/ATF-2信号通路,抑制COX-2启动子活性,是其防治H.pylori诱发胃癌的机制之一。     

参苓白术散与痛泻要方对溃疡性结肠炎大鼠BMSCs向结肠黏膜组织归巢作用的影响

目的探究参苓白术散与痛泻要方对溃疡性结肠炎大鼠BMSCs向结肠黏膜组织归巢作用的影响。方法采用TNBS/乙醇法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,120只SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、参苓白术散组(生药22.6 g/kg)、痛泻要方组(生药7.8 g/kg),1次/d,连续灌胃给药28 d。灌胃结束后,分离纯化模型组外周血中的BMSCs,各组大鼠尾静脉注射以DAPI标记的BMSCs混悬液。在第7、14天用激光共聚焦显微镜观察BMSCs在大鼠结肠黏膜组织的分布,HE染色观察结肠组织形态,Western blot检测各组大鼠结肠黏膜组织SDF⁃1、CXCR4蛋白表达。结果与模型组比较,参苓白术散组和痛泻要方组能改善大鼠结肠组织病理状态,增加大鼠结肠黏膜组织BMSCs分布,促进SDF⁃1、CXCR4蛋白表达(P<0.05)。痛泻要方组明显优于参苓白术散组(P<0.05)。结论参苓白术散与痛泻要方具有促进外周血来源BMSCs归巢到结肠黏膜组织的作用,痛泻要方优于参苓白术散,其促进归巢的机制可能与提高SDF⁃1和CXCR4蛋白的表达相关。     

甘草与白术配伍对IEC-6细胞p53,p21基因表达的影响

通过研究不同剂量甘草与白术配伍对DFMO模型小肠上皮细胞(IEC-6)增殖及p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,探讨甘草与白术配伍对细胞增殖影响的分子基础.采用流式细胞术分别检测药物对IEC-6细胞分裂速度及细胞周期的影响,qRT-PCR检测药物对IEC-6增殖相关基因p53,p21 mRNA的影响,Western blot检测药物对IEC-6细胞p53,p21蛋白表达的影响.白术颗粒可上调DFMO模型IEC-6细胞内p53,p21 mRNA和蛋白的表达水平;而甘草颗粒与白术颗粒不同比例配伍均能显著下调单独白术颗粒作用对DFMO模型IEC-6细胞p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,促进IEC-6细胞的增殖.对于DFMO模型IEC-6细胞,配伍用药甘草能调和白术对小肠上皮细胞的影响.     

淫羊藿苷对大鼠骨髓间充质干细胞迁移作用的影响

目的探讨淫羊藿苷调控大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)迁移作用机制。方法 CCK-8法检测细胞增殖。建立体外细胞缺糖缺氧模型,Hoechst33342染色观察细胞凋亡。Western blot检测淫羊藿苷处理后MSC表面基质细胞衍生因子l(SDF-1)受体趋化因子受体4(CXCR4)的蛋白表达。Transwell小室跨膜实验观察淫羊藿苷对MSC迁移的作用。结果 0.01、0.1、1μmol/L淫羊藿苷可明显促进MSC增殖,10μmol/L淫羊藿苷抑制MSC增殖。经体外缺糖缺氧处理后,0.1、1μmol/L淫羊藿苷可明显抑制MSC凋亡。淫羊藿苷可显著促进MSC CXCR4的蛋白表达,同时可提高MSC跨膜迁移的数量。加入CXCR4拮抗剂AMD3100后,各组间细胞迁移数量无明显差异。结论一定浓度淫羊藿苷可促进MSC的增殖、存活和迁移,SDF-1/CXCR4信号通路参与淫羊藿苷调控MSC迁移的作用。     

中药干预移植骨髓基质细胞的心肌再生和分化过程中基因表达的研究

最近几年细胞生物学及干细胞研究的进展,干细胞移植治疗心肌梗死及其促心肌再生方面的研究已经成为国内外相关领域研究者们关注的焦点,具有广阔的临床应用前景.本课题总结国内外经验,结合中医药基础理论,利用现代实验方法,通过复制在体急性心肌梗死大鼠模型,探讨中药改善骨髓基质细胞(MSCs)移植后"微环境",提高移植细胞生存率,促进其增殖、定向分化及其分化过程中基因的表达.本课题通过离体细胞培养观察中药对MSC的诱导作用和分化过程中相关基因的表达.     

爵床抑制肾炎细胞增殖的物质基础及作用机理

目的探讨爵床抑制肾炎细胞增殖的物质基础及作用机理。方法以LPS(脂多糖)诱导大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)构建肾炎细胞模型,MTT(噻唑蓝)法和ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒对爵床的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物以及水提取物进行活性筛选,分离纯化活性提取物,得到单体化合物,对其进行活性筛选,得到活性单体。采用Western blot(免疫印迹试验)法研究单体化合物对TLR4(Toll样受体4)/NF-κB(核因子-κB)通路炎性蛋白表达的影响。结果石油醚提取物和乙酸乙酯提取物均为活性提取物,化合物爵床脂定A能在一定程度上抑制肾炎细胞的增殖和炎性因子的释放,为活性单体。结论爵床可能是通过抑制TLR4/NF-κB信号通路炎性蛋白的表达来达到抑制肾炎细胞增殖的作用。     

棕榈酸靶向调控趋化因子受体4促进骨髓间充质干细胞体外迁移的研究

目的研究中药红花有效成分棕榈酸是否通过靶向调控C-X-C趋化因子受体4促进大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)体外迁移。方法通过全骨髓贴壁培养法培养rBMSCs,取第三代(P3)rBMSCs进行实验。棕榈酸按照低、中、高浓度梯度(5g/L、10g/L、20g/L)干预处理rBMSCs,并进行Transwell实验,确定最佳促迁移浓度为10g/L。应用RT-qPCR检测不同浓度的棕榈酸对CXCR4 mRNA表达的影响,同时运用CXCR4 siRNA质粒转染rBMSCs,并分为棕榈酸组(10g/L)、CXCR4 siRNA组、棕榈酸(10g/L)+CXCR4 siRNA组及空白对照组(10g/L),进一步通过Transwell实验、RT-qPCR实验、Western Blot实验,验证棕榈酸靶向调控C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)对干细胞迁移的影响。结果不同浓度的棕榈酸均可促进rBMSCs的迁移并上调rBMSCs的CXCR4 mRNA的表达,其中以中浓度10g/L最佳(P0.05)。转染CXCR4 siRNA后rBMSCs的Transwell实验表明,棕榈酸促进rBMSCs迁移的能力与提高C-X-C趋化因子受体4表达相关。结论棕榈酸通过上调C-X-C趋化因子受体4的表达促进大鼠骨髓间充质干细胞体外迁移。     

何首乌中THSG和蒽醌类成分对人孕烷X受体介导的CYP3A4的调控作用

该文探讨何首乌主要化学成分2,3,5,4'-四羟基芪-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2,3,5,4'-tetrahydroxystilbene-2-O-β-Dglucopyranoside,THSG)、蒽醌类(大黄素、大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚)对人孕烷X受体(human pregnant X receptor,PXR)介导的CYP3 A4的转录调控作用。利用前期建立的PXR介导的CYP3 A4药物诱导快速筛选技术,采用MTS细胞检测方法考察何首乌中主要化学成分对细胞活性的影响,计算IC50;利用双荧光素酶报告基因系统,将PXR表达载体和含CYP3 A4转录调控区的报告基因载体共转染Hep G2细胞,10μmol·L~(-1)利福平(RIF)为阳性对照,10μmol·L–1酮康唑(TKZ)为阴性对照,用THSG(2.5,5,10μmol·L~(-1))和蒽醌类成分(2.5,5,10μmol·L~(-1))分别处理24 h,进行双荧光素酶活性检测。结果表明,空载质粒pc DNA3.1与p GL4.17-CYP3A4共转染时,THSG、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素对CYP3A4的调控多为抑制效应,大黄素对CYP3A4产生诱导作用;pc DNA3.14-PXR与p GL4.17-CYP3A4共转染时,THSG、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酸、芦荟大黄素均产生诱导效应。综上,THSG和蒽醌类成分均可对CYP3A4产生抑制或激活效应,PXR参与后,上述成分对CYP3A4均产生诱导效应,提示何首乌中主要成分对CYP3A4的诱导作用是通过PXR实现的。以上结果提示在与何首乌联合用药时应注意潜在的药物相互作用,提高中药的安全性和有效性。     

雷公藤甲素通过调控VEGFA,SDF-1,CXCR4通路改善强直性脊柱炎患者血小板活化的机制

通过体外实验研究雷公藤甲素(triptolide,TP)对VEGFA,SDF-1,CXCR4通路的影响,探讨其改善强直性脊柱炎(AS)患者血小板活化的机制。外周血单核细胞(PBMC)用于实验。分为4组:正常组(NC)、模型组(MC)、雷公藤甲素组(TP)、AMD3100组。MTT法检测TP最佳浓度。ELISA法检测TNF-α,IL-1β,IL-4,IL-10,VEGFA,VEGFR的表达,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测SDF-1,CXCR4,VEGFA的表达,Western blot法检测SDF-1,CXCR4,VEGFA,VEGFR蛋白的表达,免疫荧光法检测CD62p,CD40L,PDGFA的表达水平。MTT结果显示中剂量TP在24 h时对细胞抑制作用最强。ELISA及PCR法结果显示TP可抑制IL-1β,TNF-α,VEGFA,VEGFR,SDF-1,CXCR4,VEGFA mRNA的表达; Western blot结果说明TP可抑制SDF-1,CXCR4,VEGFA,VEGFR蛋白的表达;免疫荧光结果说明TP可抑制CD62p,CD40L,PDGFA的表达。TP可能通过下调SDF-1,CXCR4,VEGFA,VEGFR mRNA,进而下调IL-1β,TNF-α,上调IL-4,IL-10细胞因子的表达,从而调节血小板活化。