雷帕霉素对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响

目的探讨雷帕霉素对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡及Bax、Bcl-2表达的影响。方法体外培养人HL-60细胞,并将不同浓度(10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L)雷帕霉素(溶于DMSO)作用于HL-60细胞,另设空白对照组和相同体积的DMSO组。然后应用CCK8技术检测各组细胞增殖抑制率,应用荧光显微镜和Td T酶介导的末端缺失原位标记法观察其凋亡情况,应用QPCR、Western blot等方法观察48 h不同组别Bax、Bcl-2基因和蛋白表达情况。结果 CCK-8检测结果显示,不同浓度雷帕霉素处理组细胞生长抑制率明显大于对照组和DMSO组(P0.05),而且随着浓度的增加,其抑制率也明显增高。随着雷帕霉素浓度的增加,HL-60凋亡细胞逐渐增多,细胞凋亡率分别为(8.4±1.3)%、(14.7±1.9)%、(28.5±2.7)%、(51.6±5.4)%、(52.7±4.8)%,与对照组相比差异均有统计学意义(P0.01)。QPCR和Western blot结果显示,和对照组相比,随着雷帕霉素浓度的增加Bax mRNA和蛋白表达水平逐渐增高,且均远大于对照组(P0.01);然而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平却随着雷帕霉素浓度的增加逐渐降低,且均远小于对照组(P0.01)。结论雷帕霉素可以明显抑制HL-60细胞生长,并可能通过促进Bax表达,抑制Bcl-2生成来诱导HL-60细胞凋亡,且上述作用呈剂量依赖性。     

自噬激活如何影响大鼠内皮祖细胞凋亡、增殖和周期的变化?

背景：曾有报道雷帕霉素可以对内皮祖细胞的增殖能力、迁移能力、黏附能力产生影响,但是没有提到自噬在其中所起到的不可忽视的作用,以及自噬与凋亡之间的相互关系。目的：通过雷帕霉素激活自噬探讨自噬激活对大鼠内皮祖细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法：采用密度梯度离心法从骨髓获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7 d后收集贴壁细胞,即内皮祖细胞。加入不同质量浓度雷帕霉素(0.01,0.1,1,10μg/ L)分别培养24 h。Western blot检测LC3-Ⅱ蛋白表达监测自噬的诱导情况,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期进程的变化,MTT比色法观察其增殖能力的变化,同时在透射电镜下观察其超微结构的变化。结果与结论：雷帕霉素质量浓度为0.01μg/L时,内皮祖细胞的LC3-Ⅱ蛋白表达与对照组相比并没有明显的增高,当质量浓度为0.1μg/L时LC3-Ⅱ蛋白表达处在一个较高的水平,质量浓度为1μg/L和10μg/L时LC3-Ⅱ蛋白表达虽然也高于对照组,但却明显低于0.1μg/L时,据此推断雷帕霉素在质量浓度为0.1μg/L时自噬尤为活跃。内皮祖细胞的凋亡率呈现随着雷帕霉素质量浓度的升高而增加的趋势,增殖率呈现随雷帕霉质量浓度增加而降低的趋势。结果说明雷帕霉素激活自噬后能够促进细胞的凋亡,明显改变细胞的周期进程,抑制内皮祖细胞的增殖。     

Nucleostemin下调联合雷帕霉素对HL-60细胞自噬与凋亡影响的初步研究

目的：研究Nucleostemin(NS)下调联合雷帕霉素对HL-60细胞自噬和凋亡的影响并探讨其在HL-60细胞中的作用。方法：通过NS-RNAi-GV248重组慢病毒载体转染HL-60细胞后检测NS蛋白的表达。采用流式细胞术检测沉默NS和/或雷帕霉素处理24、48 h后HL-60细胞的凋亡变化;采用Western blot技术检测各组细胞中NS、LC3、p62、BCL-2、Bax蛋白的表达。结果：重组慢病毒载体成功下调HL-60细胞NS表达。经雷帕霉素处理后,细胞凋亡率均明显增加（P<0.05）,且48 h凋亡更明显。与NS敲低组、雷帕霉素组相比,NS下调联合雷帕霉素组处理48 h后,其凋亡明显增加（P<0.05）,LC3-II/LC3-I比值显著增加（P<0.05）,p62蛋白表达下降更显著（P<0.05）,并且BCL-2/Bax比值减低更明显（P<0.05）。结论：NS下调联合雷帕霉素可增强HL-60细胞的凋亡和自噬,并且其诱导HL-60细胞的凋亡可能与BCL-2、Bax蛋白的表达有关。     

吴门调脂颗粒对内皮细胞自噬的干预研究

目的研究调脂颗粒对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)在细胞、蛋白质、分子水平自噬的影响。方法运用血清药理学方法,以调脂颗粒含药血清、6-氨基-3-甲基嘌呤(3-MA)、雷帕霉素(Rapamycin)诱导处理HUVECs,通过MTT比色法检测调脂颗粒含药血清对细胞生长的影响,Western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的相对表达量变化,免疫荧光法检测细胞内自噬小体的数目变化。结果调脂颗粒含药血清处理HUVECs后,细胞活力无明显改变,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的相对表达上调,自噬小体数量显著增加(P0.05)。调脂颗粒含药血清联合雷帕霉素处理HUVECs后,细胞活力无明显改变,较雷帕霉素单独处理自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的相对表达显著下降,自噬小体数量显著减少(P0.05或P0.01)。结论调脂颗粒能抑制内皮细胞的过度自噬,促进内皮细胞适度自噬。     

Nucleostemin表达下调对p53缺失型HL-60细胞自噬活性的影响

目的:结合前期基因芯片和生物信息学分析结果,探讨下调Nucleostemin(NS)表达对p53缺失型白血病HL-60细胞自噬活性的影响,为更深入研究NS非p53依赖性信号通路的关键节点提供依据。方法:在NS-RNAiGV248重组慢病毒载体下调NS表达的基础上,采用吖啶橙染色、Western blot和透射电镜技术,检测HL-60细胞自噬活性的变化。结果:重组慢病毒载体成功抑制了HL-60细胞中NS蛋白的表达;与空白对照组(3.1±0.28)%和阴性对照组(6.2±0.64)%相比,实验组HL-60细胞内酸性小体数量(22.4±0.76)%明显增高(P0.05);与阴性对照组(1.010±0.039)和空白对照组(0.608±0.008)相比,实验组HL-60细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值(1.537±0.072)明显增高(P0.05);与阴性对照组(4.2±1.2)和空白对照组(2.3±0.5)相比,实验组中HL-60细胞内自噬性结构的数量(8.7±3.1)明显增高(P0.05)。结论:下调NS蛋白的表达可以增强p53缺失型HL-60细胞的自噬活性。     

SIRT2通过自噬机制逆转HL-60/A耐药性的研究

目的:探讨靶向沉默信息调控因子2同源蛋白2(SIRT2)表达对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)耐药细胞株HL-60/A凋亡的影响及其潜在机制。方法:采用Western blot分别检测HL-60/A及对药物相对敏感的亲代细胞株HL-60中SIRT2及自噬相关蛋白LC3、P62的表达。采用si RNA转染HL-60/A细胞,靶向抑制SIRT2表达后,采用Annexin V/PI双染法检测阿糖胞苷对HL-60/A细胞细胞凋亡的影响;采用Western blot和透射电子显微镜检测HL-60/A细胞的自噬影响。为明确自噬在SIRT2对HL-60/A耐药调节中的确切作用,在SIRT2沉默后加入自噬特异性激动剂雷帕霉素,再分别检测对HL-60/A细胞自噬与凋亡的影响。结果:HL-60/A细胞中SIRT2、LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量较HL-60细胞明显增高(P0.05),但P62表达显著降低(P0.05)。siRNA成功转染HL-60/A细胞后,SIRT2表达量显著降低(P0.05);LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显下降(P0.05),同时P62蛋白表达上升;自噬体数目显著降低(P0.05)。这提示,自噬受到抑制。SIRT2被沉默后, HL-60/A对阿糖胞苷的药敏性增加,细胞凋亡率显著上升(P0.05)。而当加入雷帕霉素后,siRNA转染组中受到抑制的细胞自噬被激活,HL-60/A细胞重新表现出对阿糖胞苷的耐药性,细胞凋亡率较其他组明显下降(P0.05)。结论:SIRT2的高表达激活了HL-60/A细胞保护性自噬机制,且与其耐药性密切相关。     

雷帕霉素对K562细胞survivin、caspase-3表达及超微结构的影响

目的:探讨雷帕霉素对K562细胞survivin、caspase-3在mRNA水平的表达和对K562细胞超微结构的影响。方法:用不同浓度雷帕霉素处理慢性髓系白血病K562细胞,应用CCK8的方法检测雷帕霉素对K562细胞的增殖抑制率,应用电子显微镜观察K562细胞形态学的改变,应用RT-PCR的方法检测不同浓度雷帕霉素作用K562细胞后survivin,caspase-3在mRNA水平的表达情况。结果:雷帕霉素对K562细胞的增殖有明显的抑制作用;电子显微镜显示,随着雷帕霉素浓度的增高K562细胞的凋亡程度加重;随着雷帕霉素浓度的增高caspase-3在mRNA表达水平上升,而survivin在mRNA水平表达下降。结论:雷帕霉素通过上调caspase-3的水平,可以降低survivin水平而促进K562细胞的凋亡。     

雷帕霉素对急性髓系白血病细胞系HL-60和HL-60/VCR生长的抑制作用

为了探讨mTOR抑制剂雷帕霉素对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia;AML）细胞的增殖和药物敏感性的影响。以AML细胞株HL-60和多药耐药HL-60/VCR细胞系为研究对象,采用MTT法测定生长曲线和流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测P糖蛋白（P-glycoprotein,Pgp）的表达。结果显示：与空白对照组细胞比较,雷帕霉素能抑制HL-60和HL-60/VCR细胞生长增殖（p〈0.05）,且随着浓度升高,增殖抑制率逐渐增高,24-72小时的细胞增殖抑制率随着时间的延长而有所增高（p〈0.05）,同时可阻滞细胞从G1期到S期的细胞周期转换。雷帕霉素抑制HL-60/VCR细胞的Pgp蛋白的表达。与柔红霉素单独应用相比,雷帕霉素50nmol/L、100nmol/L与柔红霉素联合应用使HL-60和HL-60/VCR细胞增殖抑制率明显增高（p〈0.05）,尤其是当先加雷帕霉素,而24小时后再加柔红霉素时。结论：mTOR抑制剂雷帕霉素对HL-60和多药耐药的HL-60/VCR细胞的生长均有抑制作用,除伴G0/G1期阻滞外,还增加细胞对柔红霉素的敏感性,这为临床难治性AML治疗提供新的治疗手段。     

雌激素受体β通过调节AMPK/mTORC1轴的作用诱导结肠癌细胞自噬

目的:探讨雌激素受体(ER)β诱导结肠癌细胞自噬的作用机制。方法:将ERβ质粒转染人结肠癌细胞株HCT116(p53野生型)和SW480(p53突变型)后,通过荧光显微镜观察自噬现象;采用蛋白印迹法检测LC3-Ⅱ蛋白、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、AMPK和p70S6K蛋白及相应磷酸化蛋白的表达变化;应用实时定量PCR法检测DRAM1、Sestrin1和Sestrin2的mRNA表达变化。结果:ERβ过表达能促进HCT116和SW480细胞发生自噬;LC3-Ⅱ和p-AMPK蛋白在HCT116细胞中分别上调了2.81倍和1.80倍(P<0.05);在SW480细胞中分别上调了1.70倍和2.48倍(P     

雷帕霉素对白血病细胞株的影响

本研究探讨雷帕霉素对白血病细胞株的增殖抑制作用及其对细胞周期的影响,并分析该药作用前后mTOR mRNA表达水平的变化。采用四唑氮蓝比色试验（MTT）观察雷帕霉素对白血病细胞株KG1、K562和U937的体外增殖抑制作用;应用流式细胞术（FCM）检测雷帕霉素干预后的白血病细胞株的细胞周期的阻滞情况;采用实时荧光定量PCR检测白血病细胞株的mTORmRNA表达。结果表明：不同浓度的雷帕霉素作用于KG1细胞株时,20nmol／L为最佳有效浓度,细胞被明显抑制,细胞周期阻滞在G0／G1期,细胞凋亡明显,mTORmRNA的表达水平亦显著降低。与雷帕霉素作用于KG1细胞株相比,雷帕霉素对K562和U937细胞株的作用相对较弱。结论：雷帕霉素与mTOR结合后可以抑制细胞增殖,KG1细胞株对雷帕霉素最为敏感。     

自噬调节药物对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡和自噬的影响

目的:探讨自噬调节药物包括自噬激活剂(雷帕霉素)、自噬抑制剂(羟氯喹和3-甲基腺嘌呤)对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖、凋亡和自噬的影响。方法:采用不同浓度雷帕霉素(RAPA)、羟氯喹(HCQ)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理RPMI 8226细胞,用CCK-8法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术检测药物作用24 h后细胞凋亡率,应用单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬小体数量,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC-3b和凋亡相关蛋白(caspase-3、PARP和BCL-2)的表达情况。结果:RAPA和HCQ可呈时间及剂量依赖性抑制RPMI8226细胞的增殖,并增加细胞的凋亡,而3-MA无明显抑制细胞增殖作用,也无诱导凋亡作用。MDC染色结果显示,细胞内自噬泡数量随着RAPA浓度的提高逐渐增多,而随着HCQ和3-MA浓度升高自噬泡数量却逐渐减少。Western blot结果显示,RAPA可诱导自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和凋亡蛋白caspase-3及PARP表达上调,但抑制抗凋亡蛋白BCL-2表达;HCQ抑制LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和BCL-2表达,但可上调caspase-3和PARP表达;3-MA可下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达,但对caspase-3、PARP及BCL-2表达均未显示明显影响。结论:RAPA能抑制RPMI8226细胞增殖,诱导RPMI8226细胞凋亡和自噬,HCQ则在抑制自噬和增殖的同时也可诱导凋亡,3-MA可抑制细胞自噬但对细胞增殖和凋亡影响不大。     

甲酸钠诱导视网膜光感受器细胞自噬

目的近些年来,发生过很多因饮用假酒致甲醇中毒的事件。本研究旨在探讨甲酸钠诱导视网膜光感受器细胞(661W细胞)损伤过程中对细胞自噬水平的影响。方法将15和30mM浓度的甲酸钠分别加入661W细胞培养基作用24h后,用MDC荧光染色来检测细胞自噬水平改变,透射电镜观察661W细胞自噬体的形成,Western blotting法检测LC3、p-mTOR、Beclin 1及JNK、p-JNK蛋白的表达,流式细胞仪分析检测细胞内活性氧的变化。结果与对照组比较,15或30mM甲酸钠处理661W细胞后,荧光显微镜下观察到细胞自噬水平增强,透射电镜下观察到自噬体形成,Western blotting法显示LC3-II,Beclin 1以及pJNK的蛋白表达水平上调,而p-mTOR的蛋白表达水平减少,流式细胞仪检测法显示甲酸钠处理的661W细胞内活性氧水平增加。结论甲酸钠可诱导661W细胞自噬,而自噬可能参与假酒中毒所致的视觉损伤过程。     

姜黄素诱导细胞自噬对人乳头瘤病毒复制的抑制研究

目的：研究姜黄素诱导细胞产生自噬对人乳头瘤病毒（HPV）复制的影响。方法用姜黄素处理人宫颈癌细胞 SiHa 12 h ,荧光酶标仪观察自噬小体形成,免疫印迹试验检测 SiHa 细胞自噬标志蛋白 LC3‐Ⅱ／LC3‐Ⅰ的表达水平;实时定量聚合酶链反应和免疫印迹试验分别检测 HPV E6基因 mRNA 表达和蛋白水平。加入自噬抑制剂3‐甲基腺嘌呤（3‐MA）,实时定量聚合酶链反应和免疫印迹试验分别检测自噬抑制后 HPV E6基因表达情况。结果姜黄素诱导后,与对照组相比,SiHa 细胞中自噬小体的荧光强度明显增高,LC3‐Ⅱ／LC3‐Ⅰ比值明显上升（P＜0．05）;细胞诱导自噬后 HPV E6 mRNA 和蛋白水平明显降低,而加入自噬抑制剂3‐MA 后,HPV E6 mRNA 和蛋白水平均明显增高。结论姜黄素可能通过诱导细胞自噬抑制 HPV 的复制。     

雷帕霉素对再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞生物学功能的影响

本研究探讨雷帕霉素对再生障碍性贫血（aplasticanemia,AA）患者的骨髓间充质干细胞的生物学功能和自噬现象的影响,为研究雷帕霉素应用于临床再生障碍性贫血的治疗提供资料。不同浓度雷帕霉素（0、10、50、100nmol／L）处理AA患者BM—MSC48h,然后用Westernblot检测自噬相关蛋白LC3B的表达,应用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的变化,CCK-8法测定细胞增殖情况,以BM—MSC成脂分化诱导2周后油红染色方法检测成脂分化能力,并且用real—timePCR检测成脂相关基因（LPL、CFD和PPART）的表达。结果显示：雷帕霉素引起AA患者的BM—MSC自噬增加,促进其凋亡（P〈0．05）,且呈剂量依赖性地将细胞阻滞于Go／G1期,阻止其进入S期（P〈0．05）;BM-MSC增殖率随雷帕霉素浓度增加而降低,并且雷帕霉素抑制AA患者BM—MSC的成脂分化,且呈剂量依赖性。结论：雷帕霉素诱导AA患者BM—MSC发生自噬和凋亡,明显促进G,期细胞周期阻滞,抑制细胞增殖和降低成脂分化,以上现象的机制可能与雷帕霉素通过抑制mTOR信号通路而激活自噬有关。     

体外诱导自噬对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响

目的 探讨诱导自噬对多发性骨髓瘤(MM)细胞株增殖的影响.方法 在无血清培养条件下诱导MM细胞株U266细胞自噬并分别加入雷帕霉素和3-甲基腺嘌呤(3-MA),观察其细胞增殖,以正常培养条件培养U266细胞、淋巴瘤细胞株Jurkat及无血清培养Jurkat为对照组.采用CCK8法检测细胞的增殖;用流式细胞术检测细胞凋亡;单丹(磺)酰戊二胺(MDC)法检测细胞自噬泡数量;RT-PCR法检测自噬基因mtor、Beclinl表达;Western blot方法分析自噬标志蛋白-微管相关蛋白轻链3Ⅰ/Ⅱ(LC3 Ⅰ/Ⅱ)及溶酶体相关膜蛋白1(LAMP 1)含量的变化.结果 正常培养条件下U266细胞有基础水平的自噬,无血清培养可诱导U266细胞上调自噬水平;雷帕霉素促进无血清培养条件下U266细胞自噬并刺激其增殖能力,至培养96 h无血清培养及雷帕霉素处理U266细胞内自噬水平下降;3-MA具有上调U266细胞自噬和促进增殖作用,但仅维持24 h;正常培养条件下雷帕霉素及3-MA可显著抑制U266细胞增殖;无血清培养24 h后细胞凋亡率[(17.90±1.46)％]高于正常培养细胞[(1.33±0.09)％](P＜0.01);加入雷帕霉素及3-MA可使血清饥饿诱导的细胞凋亡率分别降至(6.23±0.12)％和(6.97±0.03)％(P＜0.01);培养至72 h,各处理组细胞凋亡率趋于一致[(30.37±0.27)％、(30.13±1.93)％和(28.57±2.83)％](P＞0.05);去除雷帕霉素及3-MA后U266细胞凋亡率减低至18.7％和12.6％.结论 MM细胞内存在高于淋巴瘤Jurkat细胞株基础水平的自噬;在常规培养条件下雷帕霉素及3-MA均可下调MM细胞增殖水平;血清饥饿条件下U266细胞可通过上调自噬水平维持生存和增殖;雷帕霉素诱导血清饥饿条件下U266细胞自噬,但是具有自限性;3-MA对U266细胞自噬具有双重作用.     

雷帕霉素对大鼠深Ⅱ度烧伤创面自噬及创面早期加深的影响

目的 观察雷帕霉素对大鼠深Ⅱ度烧伤创面自噬的表达及对烧伤创面早期加深的作用.方法 Wistar大鼠背部深Ⅱ度烧伤,治疗组腹腔注射雷帕霉素,对照组腹腔注射等量溶媒,观察两组烫伤后6h、1d、2d、3d创面组织自噬体,自噬标志蛋白LC3、Beclin-1的表达及变化;TUNEL法检测创面凋亡;同时检测烧伤后创面局部多普勒血流（LDF）值,创面组织中IL-8、Na-K-ATP酶、髓过氧化物酶（MPO）活性和丙二醛（MDA）的含量变化,HE染色及Masson染色显示创面组织坏死及加深程度.结果 治疗组与对照组相比,电镜下可见自噬体增多,LC3、Beclin-1表达明显增高,创面凋亡率明显低于对照组;治疗组创面LDF值及Na-K-ATP酶活性比对照组明显升高,IL-8、MPO活性和MDA的含量较对照组明显下降,创面深度较对照组减轻.结论 雷帕霉素使大鼠深Ⅱ度烧伤创面自噬增强,抑制烧伤创面早期加深.     

雷帕霉素通过EZH2/Hedgehog信号通路诱导慢性髓系白血病细胞凋亡

目的:探讨雷帕霉素诱导慢性髓系白血病(CML)细胞凋亡的机制。方法:对CML细胞K562用雷帕霉素10(A组)、15(B组)和20(C组) nmol/L分别处理24 h,对照组不加雷帕霉素。采用MTT法检测雷帕霉素对K562细胞增殖的影响, AnnexinV-FITC/PI双染法检测雷帕霉素对K562细胞凋亡的影响, RT-PCR检测雷帕霉素对K562细胞EZH2/Hedgehog信号通路基因表达水平,Western blot检测雷帕霉素对K562细胞凋亡及相关信号通路蛋白表达水平。结果:MTT法检测发现,不同浓度雷帕霉素对细胞增殖有明显抑制作用,其中C组的细胞存活率37.6%±3.4%,显著低于其它各组(P0.05)。通过AnnexinV-FITC/PI双染法检测发现,C组细胞的凋亡率为93.1%±8.1%,显著高于其它各组(P0.05)。Western blot检测发现,K562细胞在雷帕霉素作用后,C组的Caspase-3和BAX蛋白相对表达水平分别为0.36±0.04、0.39±0.06,显著高于其它各组(P0.05);BCL-2蛋白水平0.17±0.03,显著低于其它各组(P0.05)。RT-PCR检测发现,K562细胞在雷帕霉素作用后,EZH2与Hedgehog基因mRNA水平明显下降(P0.05),而Ptch1基因m RNA水平明显上升(P0.05)。Western blot检测发现,K562细胞在雷帕霉素作用后,其EZH2与Hedgehog蛋白表达水平下降,而Ptch1蛋白水平上升(P0.05)。C组的EZH2与Hedgehog蛋白相对水平分别为0.21±0.03、0.16±0.05,显著低于其它各组(P0.05);Ptch1蛋白水平0.46±0.06,显著高于其它各组(P0.05)。结论:雷帕霉素可抑制白血病细胞中EZH2蛋白表达,从而干扰Hedgehog信号通路的激活,并促进凋亡蛋白的表达,减少抗凋亡蛋白水平,最终诱导白血病细胞的凋亡。     

雷帕霉素对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖、凋亡及趋化因子受体CXCR4表达的影响

本研究探讨雷帕霉素对骨髓瘤细胞系RPMI8226体外增殖、凋亡、细胞周期及对趋化因子受体CXCR4表达的影响。不同浓度雷帕霉素作用于RPMI8226细胞不同时间,应用MTT检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,半定量PCR检测雷帕霉素干预RPMI8226后细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、CXCR4mRNA表达,荧光定量PCR检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）mRNA表达的影响。结果表明：雷帕霉素对RPMI8226细胞有增殖抑制作用,细胞周期显示细胞阻滞于G0／G1期,G2／M期比例降低,cyclinD1、CXCR4和mTORmRNA表达下调。结论：雷帕霉素呈时间一剂量依赖性抑制RPMl8226细胞增殖,诱导细胞凋亡,并通过下调mTOR及cyclinD1表达,使细胞周期阻滞于G0／G1期,同时通过下调细胞CXCR4的表达,减少骨髓瘤细胞与基质细胞间的黏附及趋化作用达到抗肿瘤的效果。     

抗肿瘤药物雷帕霉素调控子宫内膜癌细胞增殖、分化、凋亡的研究机制

目的雷帕霉素对子宫内膜癌细胞增殖、分化、凋亡的影响及机制。方法 5 nmol/L、10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的雷帕霉素作用于子宫内膜癌HEC-1B细胞24 h、48 h、72 h后,CCK8检测细胞增殖,计算IC50;36 nmol/L的雷帕霉素作用于HEC-1B细胞0 d、1 d、3 d、5 d、7 d后,RT-PCR检测细胞中ALP的mRNA表达;36 nmol/L的雷帕霉素作用于HEC-1B细胞48 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Cleaved caspase3、m TOR、p-p70S6K蛋白表达。结果随着时间及浓度的增加,10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的雷帕霉素组细胞存活率均显著低于对照组(P0.01),根据IC50值选择36 nmol/L的雷帕霉素作为后续研究对象;ALP在1 d、3 d、5 d、7 d的mRNA表达均显著高于对照组(P0.01);与对照组比较,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达均显著升高,m TOR、p-p70S6K蛋白表达显著下调(P0.01)。结论雷帕霉素能显著抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖,诱导细胞分化及促进细胞凋亡,其机制与抑制m TOR/p70S6K信号通路有关。     

丙戊酸诱导白血病HL-60细胞凋亡及其对h-tert基因表达的影响

为了探讨丙戊酸（valproic acid,VPA）对白血病HL-60细胞诱导凋亡的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验（CCK-8法）观察不同浓度VPA在不同作用时间对HL-60细胞增殖的影响,采用荧光显微镜检及流式细胞术检测细胞凋亡,并观察VPA作用后HL-60细胞端粒酶亚单位h-tert基因、凋亡相关蛋白表达和caspase-3活性的变化。结果表明：VPA呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖（r=-0.87）.,诱导细胞凋亡;同时,抗凋亡蛋白BCL-2表达明显下降,促凋亡蛋白BAX表达上调,caspase-3活性增强,h-tert mRNA表达逐渐下降,HL-60细胞的凋亡率与h-tert mRNA表达呈负相关。结论：VPA可抑制白血病HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;VPA可能通过下调h-tert mRNA、BCL-2蛋白表达,上调BAX表达及增强caspase-3活性而发挥抗白血病作用。