多发性骨髓瘤患者骨髓液中miRNA-21、miRNA-15a和miRNA-16的表达及其临床意义分析

目的观察和分析多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓液中微小RNA(miRNA)-21、miRNA-15a和miRNA-16的表达及其临床意义。方法选取50例MM患者作为病例组,根据治疗效果将其分为初治组(19例)、难治组(18例)和缓解组(13例),选取20例非恶性血液疾病患者作为对照组。对各组患者骨髓液中的miRNA-21、miRNA-15a和miRNA-16表达水平和血清β2微球蛋白(β2-MG)水平进行检测和比较。结果各组患者骨髓液中miRNA-21、miRNA-15a、miRNA-16表达水平的差异均有统计学意义(F=37.839、419.707、445.998,P0.05)。其中,难治组患者骨髓液中miRNA-21表达水平显著高于其他三组,miRNA-15a、miRNA-16表达水平显著低于其他三组,初治组患者骨髓液中miRNA-21表达水平显著高于缓解组或对照组,miRNA-15a、miRNA-16表达水平显著低于缓解组或对照组,以上差异均有统计学意义(P0.05);直线相关分析显示,MM患者血清β2-MG水平与骨髓液中miRNA-21表达水平呈正相关关系(r=0.599,P0.05),与miRNA-15a表达水平(r=-0.829)、miRNA-16表达水平(r=-0.698)呈负相关关系(P0.05),多元线性回归分析结果显示,MM患者的血清β2-MG水平与骨髓液中miRNA-15a表达水平呈负相关关系(标化相关系数=-0.976,t=-5.838,P0.05)。结论 MM患者骨髓液中的miRNA-15a、miRNA-16和miRNA-21表达水平与患者对化疗的反应性和肿瘤负荷具有相关性,可用于评价患者病情的进展、预测治疗效果和患者的预后。     

多发性骨髓瘤患者B细胞激活因子表达水平研究

目的：探讨B细胞激活因子（BAFF）在多发性骨髓瘤（MM）中的表达水平。方法：用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对31例MM患者和30名健康人血清BAFF含量进行检测;并比较MM患者血清BAFF含量与乳酸脱氢酶（LDH）、β2-微球蛋白（β2M）的相关性。结果：MM患者血清BAFF含量明显高于健康对照组,并与LDH、β2M浓度呈正相关性。结论：MM患者的血清BAFF蛋白表达水平有异常改变,说明BAFF可能参与MM的发病;BAFF表达水平也许可作为预后的一个指标。     

多发性骨髓瘤中BAFF-R表达及其对细胞存活影响的研究

目的 研究多发性骨髓瘤（MM）中B淋巴细胞刺激因子受体（BAFF-R）基因、蛋白表达水平;并进一步研究BAFFR对MM细胞生长存活的影响.方法 应用RT-PCR,ELISA,Western Blot等技术检测BAFF-R在MM细胞中的表达;WST-1,TUNEL凋亡实验,Western Blot检测BAFF-R对MM细胞增殖、凋亡的影响.结果 BAFF-R mRNA和蛋白表达于MM细胞中;与对照组相比,BAFF-R阻断性抗体（1,5,15 μg/ml）可抑制KM3细胞增殖,t值分别为79.78,72.21,76.88;P值均为0.000,即BAFF-R促进KM3细胞增殖;同时,BAFF-R阻断性抗体组（15 μg/ml）细胞凋亡明显高于对照IgG组;BAFF-R阻断性抗体组抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低18％,促凋亡蛋白Bax表达增加43％,说明BAFF-R能够抑制MM细胞凋亡.结论 BAFF-R对MM细胞生长存活有一定影响,BAFF-R对多发性骨髓瘤的发生发展发挥一定作用.     

miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达对多发性骨髓瘤细胞自噬及凋亡的影响

目的:探讨多发性骨髓瘤细胞miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达与自噬和凋亡的关系。方法:选取人骨髓瘤细胞株U266及正常CD138+浆细胞为研究对象,临床研究对象分为骨髓瘤组45例,健康对照组40例。实时定量PCR测定细胞中miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达水平,Western blot测定自噬相关蛋白(LC3-Ⅱ,LC3-Ⅰ、P62、Beclin-1)表达量,凋亡相关分子(cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase7、BCL-2、BAX)表达量;流式细胞术测定细胞凋亡率。分析miRNA表达水平与临床相关指标包括M蛋白、血红蛋白、β2-MG、乳酸脱氢酶、白蛋白、肌酐、血清钙的相关性。结果:与正常浆细胞对比,骨髓瘤细胞的miRNA-132和miRNA-125b表达显著增加(P 0.05),miRNA-143,miRNA-145表达显著降低(P 0.05);LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著增加(P 0.05),Beclin-1表达显著增加(P 0.05),P62表达显著降低(P 0.05);BAX、cleaved-Caspase3、cleaved-Caspase7表达显著降低(P 0.05),BCL-2表达显著增加(P0.05);细胞凋亡率降低(P 0.05)。阳离子脂质体转染miRNA-125b mimic和miRNA-143 inhibitor后,正常浆细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著增高(P 0.05),Beclin-1表达显著增高(P 0.05),P62表达也显著增加(P 0.05),细胞凋亡率降低(P 0.05);上述反应体系加入自噬抑制剂3-MA后,细胞凋亡率则无明显改变(P 0.05)。miRNA-132、miRNA-125b、miRNA-143和miRNA-145表达在不同DS与ISS分期组,染色体核型异常组与正常核型组间均有显著性差异(P 0.05)。miRNA-125b和miRNA-143与β2-MG、白蛋白、血红蛋白水平均有显著相关性(P 0.05)。结论:miRNA-132、 miRNA-125b、 miRNA-143和miRNA-145表达与多发性骨髓瘤患者临床特征密切相关,miRNA-125b过表达和miRNA-143表达下调通过上调自噬水平抑制骨髓瘤细胞凋亡。     

miRNA-19a对结肠癌LoVo细胞生物学特性影响的机制研究

目的探讨微小RNA(miRNA)-19a对结肠癌LoVo细胞生物学特性影响的可能机制。方法采用脂质体介导的转染方法将miRNA-19a模拟物转染到人结肠癌细胞系LoVo细胞;检测转染后miRNA-19a基因的表达;利用CCK8试剂盒检测细胞的增殖能力,TUNEL法检测细胞凋亡影响,细胞侵袭小室法检测细胞的体外侵袭力,RT-PCR和Western blot检测Hsp90/Akt信号通路的变化。结果转染miRNA-19a的结肠癌LoVo细胞,miRNA-19a表达上调,细胞体外增殖能力增强,细胞凋亡减少,细胞的侵袭力增强;细胞Hsp90和Akt的基因和蛋白表达升高。结论 miRNA-19a可通过上调Hsp90/Akt信号通路表达,促进LoVo细胞增殖,减少细胞凋亡,增强LoVo细胞的侵袭能力。     

miRNA-19b过表达对P19细胞分化的影响

目的通过过表达miRNA-19b,研究miRNA-19b对P19细胞分化的影响。方法脂质体2000转染miRNA-19b过表达质粒与空载质粒进入P19细胞,通过杀稻瘟菌素筛选出稳定株;实时定量聚合酶链反应检测miRNA-19b表达水平以及分化基因(c Tn T、ANP、GATA4)的表达水平。结果 miRNA-19b过表达载体与细胞系成功建立(P0.05);在P19细胞分化过程中,miRNA-19b过表达组心肌标志物均显著高于对照组(P均0.05)。miRNA-19b显著促进P19细胞向心肌细胞分化。结论 miRNA-19b可以显著促进P19细胞向心肌细胞的分化,为以后其用于心脏发育的进一步研究奠定基础。     

难治性多发性骨髓瘤患者T细胞亚群与NK细胞表达水平

选取2011年1月~2013年12月我院收治的64例初治淋巴癌患者,通过流式细胞术了解其化疗前、中和结束后外周T淋巴细胞亚群和NK细胞的表达水准。化疗后随访分完全缓解组6例,部分缓解组35例,难治性患者23例,另选58例健康者为健康对照组。结果(1)与正常对照组相比,完全缓解组MM患者Th(CD3+CD4+)细胞、Ts(CD3+CD8+)细胞和NK(CD3-CD16+CD56+)细胞虽均略有下降,但差别均无统计学意义(P0.05)。(2)部分缓解组的患者中,Th(CD3+CD4+)细胞下降明显,差别有统计学意义(P0.05);Ts(CD3+CD8+)细胞与NK(CD3-CD16+CD56+)细胞虽亦有所降低,但差别不具有显著性(P0.05)。(3)难治组的MM患者中,Th(CD3+CD4+)细胞、Ts(CD3+CD8+)细胞和NK(CD3-CD16+CD56+)细胞均呈明显下降。Th(CD3+CD4+)细胞、Ts(CD3+CD8+)细胞和NK(CD3-CD16+CD56+)细胞如果在治疗过程中和治疗后下降与否直接影响到疾病预后。     

多发性骨髓瘤细胞和正常浆细胞miR-373表达水平及其对肿瘤生长的影响

目的分析多发性骨髓瘤细胞和正常浆细胞microRNA-373(miR-373)表达水平及其对肿瘤生长的影响。方法回顾性收集江苏大学附属句容医院收治的36例多发性骨髓瘤患者为病例组,另同期选取30例于该院健康体检者为对照组。采用实时荧光定量PCR法测定病例组细胞与对照组正常浆细胞中miR-373的表达量。通过Lipofectamine-2000将miR-373模拟物(转染miR-373组)或相应的阴性对照(阴性对照组)转染为H929细胞。分析H929细胞中细胞增殖、细胞周期和凋亡及肿瘤生长的情况。结果实时荧光定量PCR法检测结果显示,病例组细胞中miR-373的相对表达量(0. 40±0. 04)较对照组正常浆细胞的水平(1. 02±0. 05)显著下降(P 0. 01)。细胞增殖实验表明,相比阴性对照转染的H929细胞,经转染miR-373模拟物的H929细胞中miR-373表达明显升高(P 0. 01)。细胞周期实验结果发现,相比阴性对照组,转染miR-373组的H929细胞在S期的细胞百分比较低,而在G0/G1期的细胞百分比较高(P 0. 01)。细胞凋亡实验结果发现,相比阴性对照组,转染miR-373组的H929细胞凋亡率明显增高(P 0. 01)。小鼠成瘤实验表明,miR-373的过表达可通过下调叉头框蛋白M1(FOXM1)表达以明显阻滞肿瘤生长(P 0. 01)。结论 miR-373可通过调节FOXM1表达以发挥有效阻滞多发性骨髓瘤肿瘤生长的作用,提示其对多发性骨髓瘤的临床治疗具有重要意义。     

miRNA-192-5p在多发性骨髓瘤中的表达水平及其调控机制研究

目的 探讨miR-192-5 p在多发性骨髓瘤中的表达水平及其调控机制.方法 选取骨髓瘤细胞株U266作为研究对象,利用荧光定量PCR检测多发性骨髓瘤细胞中miR-192-5 p的表达水平;使用生物信息学网站预测miR-192-5 p潜在靶基因USP1并利用双荧光素酶报告实验验证其靶向关系;利用细胞转染实验对多发性骨髓...     

肺鳞癌患者血清miRNA-181a的表达及其对肺癌细胞功能的影响

【目的】探讨肺鳞癌患者血清中microRNA-181a（miR-181a）水平的变化及其对人肺鳞癌细胞生物学功能的影响。【方法】选择56例肺鳞癌患者和50名健康成人,采用stem-[oop定量PCR的方法检测其血清中miR-181a的表达变化;体外实验采用CCK8和Transwell小室实验检测miR-181a对人肺鳞癌细胞株NCI-H226增殖、侵袭和迁移能力的影响。【结果】miR-181a在肺鳞癌患者血清中表达较健康成人显著降低（P〈0．05）;miR181a可明显抑制肺鳞癌细胞NCI—H226的增殖、侵袭和迁移。【结论】在肺鳞癌患者miR-181a是一种保护性的微小RNA,具有较好的诊断和治疗前景。     

多发性骨髓瘤患者B淋巴细胞刺激因子及其受体的表达水平

目的 探讨B细胞激活因子(BLyS) 及其受体在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用机制.方法 用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR),对31例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞(PBMCs) 中BLyS及其受体mRNA含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平和β2微球蛋白(β2M)的相关性.结果 MM患者血清BLyS含量(6.99±3.28 g/L)明显高于健康对照组(2.70±1.09 g/L,P<0.01),并与β2M浓度呈正相关性(r=0.954,P=0.000);77.42%(24/31),93.55%(29/31),90.32%(28/31)的MM患者血清BLyS蛋白和PBMCs中BLyS,B细胞成熟抗原(BCMA) mRNA表达水平较正常人明显增高,并且也与β2M的含量呈正相关;而64.52%(20/31)患者穿膜蛋白活化物(TACI) mRNA表达水平降低.结论 MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变,说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.     

多发性骨髓瘤患者血浆相关细胞因子水平及临床意义

目的：通过检测多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者血浆中相关细胞因子的水平,探讨其在MM中的临床意义。方法：回顾性分析59例初诊MM患者（MM组）和30名健康体检者（对照组）血浆中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和干扰素-γ(IFN-γ)的水平以及免疫表型。流式微球技术定量检测血浆中6种细胞因子的水平。各组的细胞因子水平的差异采用Wilcoxon检验。结果：MM患者血浆中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ的浓度均明显高于健康对照组（P<0.05）。根据ISS分期,不同分期的MM患者间细胞因子水平差异均无统计学意义（P> 0.05）。具有CD56高表达的MM患者血浆中IL-6水平明显高于CD56低表达组（41.74±62.73vs6.31±5.60 pg/ml）(P<0.05)。CD117高表达的MM患者血浆中IL-6水平高于CD117低表达组,但差异无统计学意义（P> 0.05）。MM患者化疗后,IL-6水平降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：IL-6在...     

沙利度胺对多发性骨髓瘤细胞Survivin表达的影响

多发性骨髓瘤(MM)是一种恶性浆细胞增殖性疾病,由于致病机制不十分清楚和缺乏有效的治疗手段,其中位生存率仅3年,完全缓解率不到10%。沙利度胺作为新一代抗肿瘤药物[1],近年来已广泛用于治疗MM,并取得了较好疗效。目前细胞淍亡的明显受抑被认为是此病的原因之一,而Survivin是新     

多功能蛋白聚糖及其相关分子在多发性骨髓瘤患者中的表达及其临床意义

目的:探讨多功能蛋白聚糖及其相关分子在多发性骨髓瘤(MM)患者中的表达及其临床意义。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离25例多发性骨髓瘤患者治疗前、后骨髓单个核细胞,并通过实时定量PCR检测细胞中VCAN及其相关分子m RNA的表达水平,采用Western blot法测定其蛋白表达。结果:MM患者治疗有效后,VCAN、FAK、FN的表达量较治疗前均明显下降(P0.05),而MK及HAS治疗前、后差异无统计学意义(P0.05);未缓解组VCAN、FAK、FN、MK、HAS的表达量较正常对照组均明显升高(P0.05),未缓解组FAK、FN较初诊组表达量均明显升高(P0.05);VCAN mRNA相对表达量在ISS分期Ⅲ期较正常对照组显著升高(P0.05),较Ⅰ期明显升高(P0.05),但较Ⅱ期无明显差异(P0.05)。Spearman相关分析结果显示,初诊MM患者骨髓单个核细胞中VCAN与FAK(r=0.69)、MK(r=0.67)、FN(r=0.67)的相对表达水平均呈正相关(P0.05),而VCAN与HAS相关性无统计学意义(r=0.259,P0.05)。生存分析结果显示,VCAN mRNA相对表达水平与患者的总生存期(OS)(P0.05)及无进展生存期(PFS)(P0.05)相关。结论:VCAN及其相关分子在多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞中高表达,其在多发性骨髓瘤的发生、发展及预后中可能起重要作用。     

多发性骨髓瘤患者化疗前后骨髓单个核细胞中Blimp-1 mRNA的表达水平

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞(BMMNCs)中B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1(Blimp-1)基因的表达水平及化疗治疗对其的影响。方法以30例缺铁性贫血(IDA)患者为相关疾病对照组,60例初诊MM患者为实验组。收集相关疾病对照组及MM患者化疗前后的骨髓标本,对其临床生化指标进行检测,荧光定量PCR分析各组BMMNCs中Blimp-1mRNA的表达水平,并分析其与临床病理参数的相关性。结果与相关疾病对照组比较,MM患者治疗前Blimp-1 mRNA的表达水平升高,差异有统计学意义(q=32.54,P0.01);MM患者经过化疗后,Blimp-1 mRNA的表达水平显著低于化疗前,差异有统计学意义(q=26.15,P0.01);相关性分析结果显示,MM患者Blimp-1 mRNA的表达水平与β2-MG、LDH、CRP水平呈正相关(P均0.05),与Alb水平呈负相关(P0.05)。结论检测BMMNCs中Blimp-1 mRNA表达水平可反映MM患者体内肿瘤负荷,化疗可降低其表达水平。     

多发性骨髓瘤患者T细胞亚群CD28表达及其临床意义

目的通过检测多发性骨髓瘤(MM)患者T细胞亚群CD28表达,探讨其T细胞免疫功能状态及临床意义。方法采用流式细胞术检测38例MM患者及20例健康对照外周血T细胞亚群CD28表达。结果①Ⅲ期MM患者CD4 T细胞较对照组及Ⅰ、Ⅱ期患者降低,为(29.1±7.7)%vs(37.2±5.9)%(、36.7±7.6)%、(36.4±6.4)%(P<0.05或<0.01);Ⅱ、Ⅲ期患者CD8 T细胞均高于对照组,为(38.0±6.4)%、(37.1±9.7)%vs(31.8±5.4)%(均P<0.05);Ⅲ期患者CD4 /CD8 比值较对照组及Ⅰ期患者降低,为0.8±0.3 vs 1.2±0.3、1.2±0.3(P<0.05或<0.01);CD4 CD28 、CD8 CD28 细胞在Ⅲ期患者均显著低于对照组及Ⅰ、Ⅱ期患者,分别为(25.0±8.2)%vs(35.3±5.6)%、(35.1±8.0)%(、33.8±5.7)%;(10.8±4.1)%vs(17.0±4.3)%、(18.3±4.8)%(、18.2±4.6)%(均P<0.01)。②进展期MM患者CD4 T细胞及CD4 /CD8 比值均低于对照组,分别为(32.0±8.3)%vs(37.2±5.9)%;0.9±0.3 vs 1.2±0.3(P<0.05或<0.01);CD8 T细胞比对照组增高,为(36.8±8.6)%vs(31.8±5.4)%(P<0.05),而其CD4 CD28 、CD8 CD28 细胞在进展期MM患者均低于对照组和稳定期,分别为(28.3±8.6)%vs(35.3±5.6)%(、35.6±7.4)%;(13.1±4.9)%vs(17.0±4.3)%(、20.5±5.9)%(P<0.05或<0.01)。③CD4 CD28 细胞百分率与β2微球蛋白水平呈负相关(r=-0.401,P<0.05)。结论MM患者存在T细胞亚群CD28表达缺陷,并与临床分期、病情进展及预后相关。     

多发性骨髓瘤患者血清APRIL表达水平的初步研究

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者血清增殖诱导配体(APRIL)蛋白水平,并分析它们和临床指标的相关性,初步探讨APRIL对MM发病和预后的意义。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测MM患者(19例)血清APRIL水平,以健康志愿者(23例)作为对照;同时将患者血清APRIL水平与乳酸脱氢酶(LDH)、β2微球蛋白(β2M)、轻链和免疫球蛋白(Ig)进行相关性分析。结果MM患者血清APRIL水平明显低于健康对照组(P<0.01);MM患者血清APRIL的表达水平与血清β2M、轻链及Ig含量呈负相关(r=-0.381、-0.473、-0.407,P值均<0.05)。结论MM患者血清APRIL水平与健康对照组存在显着性差异,提示APRIL可能与MM的发病及预后有关。     

苦参碱诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡及其对细胞黏附分子表达的影响

为了探讨苦参碱诱导多发性骨髓瘤（MM）RPMI8226细胞凋亡及其对细胞黏附分子表达的影响,将苦参碱与RPMI8226细胞共培育,采用CCK-8法观察细胞生长,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,PI单染色法检测细胞周期,双染色流式细胞仪检测细胞膜表面CD44、CD44v6、CD54和CD106的表达。结果表明,苦参碱对RPMI8226细胞具有明显的生长抑制作用,呈量效和时效关系;苦参碱能诱导RPMI8226细胞凋亡,其发生率随着药物浓度增加而增加;细胞周期分析显示G0/G1期细胞相对增多,S期相对减少,但G2/M期细胞数无明显改变;苦参碱作用于RPMI8226细胞48小时导致CD44和CD54表达减少,但CD44v6和CD106表达无明显改变。结论：苦参碱通过诱导凋亡和细胞周期阻滞抑制RPMI8226细胞的生长,同时降低CD44、CD54等细胞黏附分子表达。