Mtb-Ag活化γδT细胞的扩增及对γδT细胞CD69分子表达的影响

目的 用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)激活和扩增γδT细胞,观察γδT细胞表面CD69分子表达的情况.方法 分离获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),用Mtb-Ag刺激PBMC,所得细胞用磁珠阳性分选,通过荧光单抗TCR γδPE染色及流式细胞仪检测γδT细胞所占比例.用γδPE/CD69FITC细胞双染检测初次刺激和再次刺激γδT细胞CD69分子的表达情况.结果 新鲜分离的PBMC中γδT细胞的比例仅为(4.9±1.85)％,Mtb-Ag刺激培养10d后升为(69.2±6.57)％,免疫磁珠阳性分选后达(99.3±8.92)％.Mtb-Ag初次刺激γδT细胞,CD69分子的表达24 h达高峰,为75.2％;Mtb-Ag再次刺激γδT细胞,CD69分子的表达6h达高峰,为72％.结论 Mtb-Ag能特异地刺激PBMC中的γδT细胞增殖,Mtb-Ag初次和再次刺激均可特异性活化γδT细胞.     

结核杆菌低分子多肽抗原再次刺激其活化的T细胞对诱导γδT细胞CD69分子再次表达的影响

目的 观察结核杆菌低分子多肽抗原（Mtb-Ag）再刺激Mtb-Ag活化的T细胞（Mtb-AT细胞）诱导γδT细胞CD69分子的再表达的情况.方法 分离获取健康人外周血单个核细胞（PBMC）,用Mtb-Ag刺激PBMC,采用直接免疫荧光染色法通过CD3PE/CD69FITC、γδPE/CD69FITC细胞双染检测γδT细胞0、6、12、24、48和72 h CD69分子的表达情况.PBMC经Mtb-Ag刺激活化扩增培养至10 d后再次加入Mtb-Ag,经培养0、6、12、24、48和72 h后收集细胞,再次检测CD69分子的表达情况.结果 培养0、6、12、24、48和72 h后,Mtb-Ag初次刺激γδT细胞后CD69分子的表达分别为0.91％、15.1％、35.2％、75.2％、59.4％和50％.再次刺激培养0、6、12、24、48和72 h后,γδT细胞CD69分子的表达分别为1.7％、72.3％、73.5％、50.3％、45.6％、41.7％.结论Mtb-Ag初次刺激γδT细胞表达CD69分子约在24 h达高峰,随后快速下降;Mtb-Ag再次刺激Mtb-AT细胞诱导γδT细胞CD69分子的再表达,6h时CD69分子达高峰,可维持到12 h.这为寻求γδT细胞迅速活化、CD69分子的迅速表达奠定了方法学基础.     

结核杆菌抗原特异性激发人γδT细胞活化信号涉及Ras/Erk途径

目的探讨Ras/Erk通路是否参与结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)启动的γδT细胞活化信号转导途径.方法分离获取PBMC,用佛波醇酯(PMA)和离子霉素(IM),CD3mAb或Mtb-Ag刺激不同时间,或PBMC先经PD98059处理后再刺激培养;用荧光单抗染色后在流式细胞仪测定细胞CD69分子的表达;计数培养扩增10天的细胞数量.结果PBMC用PMA+IM刺激6小时,总T细胞和γδT细胞中的CD69表达均达高峰(均＞99%),用CD3mAb刺激24小时,均达高峰(均在55%左右),用Mtb-Ag刺激24小时,亦均达高峰,但总T细胞和γδT细胞中CD69分别为16.0%和75.2%;用PD98059预处理PBMC,可明显抑制Mtb-Ag激活的γδT细胞CD69表达和γδT细胞的增殖.结论Mtb-Ag可特异性激活γδT细胞,其活化信号转导需通过Ras/Erk通路.     

纯化的结核杆菌多肽抗原刺激人γδT细胞的效应分析

目的：探讨从结核杆菌多肽抗原(Mtb-Ag)纯化的多肽(C主肽)对人新鲜外周血γδT细胞的促增殖效应以及对已活化扩增的T细胞再次刺激的激活效应。方法：采用不同剂量的C主肽体外刺激健康人外周血PBMC，培养10天时经流式细胞仪检测细胞表型；另外以γδT细胞活化标志分子CD69的表达为指标，分析C主肽对已被Mtb-Ag激活扩增13天的γδT细胞再次刺激的激活效应。同时以MTT法检测C主肽的再刺激对已活化扩增的γδT细胞的促增殖活性。结果：结核杆菌C主肽对人新鲜的γδT细胞具有显著扩增效应；当C主肽再刺激已经活化的γδT细胞时，可使其显著表达CD69分子，同时对γδT细胞具有显著促增殖活性。结论：结核杆菌C主肽可能是Mtb-Ag发挥特异性激活人γδT细胞的有效成分。     

MAPK信号转导途径在Mtb-Ag激活的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用

目的：探讨MAPK信号转导途径在结核杆菌抗原(Mtb-Ag)活化的γδT细胞杀伤肿瘤细胞中的作用。方法：用Mtb-Ag刺激正常人PBMC以诱导γδT细胞扩增，并用磁珠阳性分选法分离高纯度的γδT细胞；用MTT比色法测定γδT细胞对肿瘤细胞系K562和Raji的细胞毒活性，并观察MEK／Erk特异性抑制剂PD98059和p38 MAPK特异性抑制剂SB203580，对细胞毒活性的阻断作用：用流式细胞仪检测肿瘤细胞诱导γδT细胞上CD69的表达，并观察PD98059和SB203580对CD69表达的抑制作用。结果：新鲜分离的PB-MC，用Mtb-Ag刺激培养第10天，用磁珠阳性法分离的细胞中γδT细胞的比率，分别为3．56％、74．63％和98．20％。PD98059可抑制γδT细胞的杀瘤活性，且对γδT细胞杀伤Fas低表达的K562细胞的抑制率(39．27％)高于对γδT细胞杀伤高表达Fas的Raji细胞的抑制率(26．58％)。PD98059还能明显抑制肿瘤细胞诱导γδT细胞表达CD69；而SB203580对γδT细胞的杀瘤活性和肿瘤细胞诱导的CD69的表达均无影响。结论：MAPK途径中的Erk通路(而不是p38通路)参与了γδT细胞对肿瘤细胞细胞毒活性的启动，且可能对γδT细胞的颗粒外吐作用较大，而对Fas／FasL介导的细胞毒活性的作用较小。MAPK途径的Erk通路可能还参与肿瘤细胞诱导γδT细胞的活化。     

蛋白激酶Cθ信号途径在结核分枝杆菌抗原激活人γδT细胞增殖和分化中的作用

目的 研究蛋白激酶Cθ(protein kinase Cθ,PKCθ)信号途径在结核分枝杆菌抗原(Mycobacterium tuberculosis antigen,Mtb-Ag)激活人γδT细胞增殖和分化中的作用.方法 健康人外周血单个核细胞(PBMC)用Mtb-Ag和IL-2优势刺激和扩增γδT细胞,或预先用5.0μmol/L Rottlerin(楸毒素)预处理,培养不同时间后,用流式细胞术(FCM)检测γδT细胞表面活化分子和细胞因子表达;同时采用活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)标记细胞,流式细胞术分析Mtb-Ag刺激γδT细胞后的增殖和各子代细胞百分率.结果 PBMC经Mtb-Ag刺激后3d,γδT细胞CD69和CD25表达分别为46.2%和45.6%,而Rotderin预处理显著地抑制了CD69和CD25表达(P＜0.01);PBMC经Mtb-Ag激活培养5、10和15d,培养扩增细胞中的γδT细胞比例分别为9.6%、54.6%和82.4%,其中第5天已有少部分γδT细胞发生增殖,第10天和第15天时几乎全部γδT细胞分裂都在6代以上,用Rottlerin预处理,显著抑制了γδT细胞增殖反应,但在培养第10天后仍有少部分γδT细胞发生增殖反应;同时在培养第7天、14天和21天,用PMA(佛波酯)+Ionomycin(离子霉素)再刺激后,产生IFN-γ的γδT细胞均在80%左右;培养21d时,有2.6%的γδT细胞表达IL-4.在Rottlerin预处理组产生TH1型细胞因子IFN-γ的γδT细胞均显著减少(P＜0.05),而γδT细胞表达TH2型细胞因子IL-4则几乎完全抑制(P＜0.01).结论 PKCθ信号途径在Mtb-Ag刺激γδT细胞的增殖和分化中均起重要作用.     

可激活人γδT细胞的结核杆菌耐热多肽抗原的初步纯化与活性鉴定

目的：对结核杆菌耐热多肽抗原（Mtb-Ag)的蛋白组成进行定性分析。并观察Mtb-Ag及其纯化组分刺激人外周血γδT细胞和αβT细胞增殖反应的量效关系。方法：用快速蛋白液相色谱仪（FPLC）定性分析Mtb-Ag 的蛋白组成，并用不同剂量的Mtb-Ag及其纯化组分体外刺激健康人外周血PBMC，培养9d后经流式细胞仪检测细胞表型。结果：Mtb-Ag经FPLC Mono Q离子交换柱分析存在20种蛋白成分，Mtb-Ag在合适刺激剂量时对人γδT细胞发挥优势扩增，当剂量过大则对αβT细胞发挥优势扩增，其分离纯化的含大分子蛋白的蛋白峰Ⅰ随着刺激剂量增加而对αβT细胞的扩增表现显著增强趋势；而其分离的含低分子多肽的蛋白峰Ⅱ随着刺激量增加则对γδT细胞扩增表现显著增强趋势，并且其活性明显高于蛋白峰I，同时其对αβT细胞的扩增效应并不明显，并显著低于Mtb-Ag和蛋白峰I。结论：Mtb-Ag刺激γδT细胞扩增时应选择合适的刺激剂量，其所含的低分子多肽抗原能特异性激活γδT细胞，而其所含的大分子蛋白抗原则特异性激活αβT细胞。     

CD69分子在人外周血佛波醇酯+离子霉素活化的γδT细胞表面表达的实验研究

目的 观察CD69分子在人外周血佛波醇酯(PMA)+离子霉素(IM)活化的γδT细胞表面的表达情况.方法 分离获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),用PMA+ IM刺激,采用流式细胞术检测CD3+细胞和γδT细胞0、6、12、24、48和72 h CD69分子的动态表达情况.结果 PMA+ IM刺激PBMC 0、6、12、24、48和72 h,CD3+细胞CD69分子的表达分别为1.0％、99.5％、99.1％、98.0％、93.3％、92.1％;γδT细胞CD69分子的表达分别为0.91％、99.3％、98.6％、93.6％、88.7％、87.0％.结论 PMA+ IM的刺激后CD3+细胞和γδT细胞迅速活化,CD69的表达几乎为100％,6h达高峰,随后缓慢下降,两种细胞活化表达CD69基本一致.     

结核杆菌低分子多肽抗原诱导活化的γδ+T细胞的细胞毒活性研究

目的探讨选择性扩增人γδ+T细胞的方法及其细胞毒活性.方法用耐热性结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb)刺激正常人PBMC,并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδ+T细胞,通过MTT试验观察γδ+T细胞对人红白细胞白血病细胞株K562的细胞毒活性.结果 Mtb刺激及磁珠分选后的γδ+T细胞可达73%和98%,效靶细胞比例为10:1时其对K562细胞的杀伤率分别为59%和78.5%.结论 Mtb刺激及磁珠分选所获得的高纯度γδ+T细胞可介导对K562细胞的高效细胞毒活性.     

神经酰胺在γδ+T细胞活化及活化诱导的细胞死亡信号传导过程中的作用

目的研究神经酰胺在γδ+T细胞活化及活化诱导的细胞死亡信号传导过程中的作用。方法用结核杆菌耐热性多肽抗原(Mtb)刺激正常人PBMC,并用磁珠阳性分选 法获得γδ+T细胞。通过MTT试验观察Mtb、神经酰胺、鞘磷脂酶以及FumonisinB1对γδ+T细胞的活化作用;FACS检测其对γδ+T细胞活化诱导的细胞死亡作用。结果Mtb刺激获得的γδ+T细胞可达73％,磁珠分选后可高达98％;高浓度Mtb、神经酰胺及鞘磷脂酶能抑制γδ+T细胞的活化增殖,而出现活化诱导的细胞死亡,FumonisinB1则对γδ+T细胞的活化增殖及活化诱导的细胞死亡无明显影 响。结论Mtb可有效地调节γδ+T细胞活化及活化诱导的细胞死亡,水解鞘磷脂产生的神经酰胺参与了γδ+T细胞活化及活化诱导的细胞死亡信号传导。     

神经酰胺在γδ+T细胞活化及活化诱导的细胞死亡信号传导过程中的作用

目的 研究神经酰胺在γδ^ T细胞活化及活化诱导的细胞死亡信号传导过程中的作用。方法 用秸核杆菌耐热性多肽抗原（Mtb)刺激正常人PBMC，并用磁珠阳性分选法获得γδ^ T细胞。通过MTT试验观察Mtb，神经酰胺、鞘磷酯脂以及F B1cf γδ^ T细胞的活化作用；FACS检测其对γδ^ T细胞活化诱导的细胞死亡作用。结果 Mtb刺获得的γδ^ T细胞可达73％，磁珠分选后可高达98％；高浓度Mtb，神经酰胺及鞘磷脂酶能抑制γδ^ T细胞的活化增殖，而出现活化诱导的细胞死亡，Fumonisin B1则对γδ^ T细胞的活化增殖及活化细胞死亡无明显影响。结论 Mtb可有效地调节γδ^ T细胞活化及活化诱导的细胞死亡，水解鞘磷脂产生的神经酰胺参与了γδ^ T细胞活化及活化诱导的细胞死亡传导。     

甲基-β-环糊精对T细胞膜分子CD69和GM1表达的影响

目的：探讨甲基-β-环糊精（Methyl-β-eyclodextfin，MβCD）去除细胞膜胆固醇诱导人外周血T细胞CD69和单唾液酸四己糖神经节苷脂（GangliosideGMl，GMl）的表达及机理。方法：用高浓度MβCD（10mmol／L）处理PBMC，或预先加阻断剂PD98059或／和LY294002，用流式细胞术检测T细胞GMl及CD69的表达；免疫印迹法检测MβCD诱导的CD3^＋T细胞中ZAP-70的磷酸化。结果：MβCD（10mmol／L）处理PBMC30分钟，GMl在T细胞上即有高水平表达（〉90％），CD69于处理后2小时高水平表达（〉80％）；预先加入PD98059或LY294002均能够大部分阻断MβCD诱导的T细胞CIM9表达，部分阻断GMl表达，联合应用两种抑制剂也不能完全阻断GMl的表达；MβCD能够促进CD3^＋T细胞中ZAP-70分子的酪氨酸磷酸化。结论：MβCD能够促进T细胞GMl及CD69的表达；且这两种分子的表达可能与信号分子ZAP-70、MEK／ERK及PBK有关。     

一株健康人γδT细胞克隆的建立及鉴定

目的 建立健康人γδT细胞克隆并进行鉴定。方法 以60Co照射的同种异体PBMC作为饲养细胞,以有限稀释法对经过阳性分选的γδT细胞进行克隆化。用流式细胞术及分子生物学检测鉴定所获克隆,以MTT掺入法对所获克隆进行增殖实验检测。结果 获得一株γδT细胞单克隆,为Vγ9Vδ2亚型,CD4分子和CD8分子表达均为阴性。进一步的研究发现表位肽EP6不仅能够特异性结合γδT细胞单克隆,而且能够促进其增殖。结论 成功建立了健康人外周血γδT细胞克隆,为深入研究γδT细胞抗原识别机制、亚群及功能奠定了坚实的基础。     

蛋白激酶Cθ在γδT细胞表达L-选择素中的调控作用

目的 探讨蛋白激酶Cθ(PKCθ)信号转导途径在γδT细胞表达L-选择素(CD62L)中的凋控作用.方法 用结核分枝杆菌抗原(Mtb-Ag)刺激人外周血单个核细胞(PBMC)并培养6～8 d,获得富含γδT细胞的结核分枝杆菌活化T细胞(MtbAT),作为γδT细胞来源,分别加佛波醇酯(PMA)、PMA+离子霉素(IMN)培养3、6、12、24 h,或用培养8 d的MtbAT细胞分别加入Mtb-Ag、Rot-tlerin+Mtb-Ag、PMA、Rottlerin+PMA刺激4 h,收集细胞用荧光抗体染色后,流式细胞术(FCM)检测CD62L在γδT细胞表而的表达.结果 体外激活培养6～8 d的γδT细胞表面CD62L的表达率为75.0%～87.0%.PMA刺激γδT细胞3～12 h时CD62L表达逐渐下调,表达率为42.3%～23.5%;但在刺激后24 h时,又明显回升至53.2%.而PMA+IMN刺激3、6 h时,γδT细胞CD62L表达也下调,表达率分别为52.1%、39.3%;但在刺激12 h和24 h时CD62L表达率分别为52.9%和35.3%.在PMA刺激γδT细胞同时加入Rottlerin,则CD62L的表达率(47.9%)明显高于PMA单独刺激组(31.8%);MtbAT用Mtb-Ag再刺激4 h后,γδT细胞CD62L的表达率由70.0%降为54.8%,而在Mtb-Ag再刺激时加入Rottlerin,则CD62L表达率增加到63.1%.结论 γδT细胞在PMA或Mtb-Ag刺激后CD62L的表达下调可被PKCθ特异性抑制剂部分阻断,表明CD62L在γδT细胞表面的表达可能与PKCθ信号转导途径的调控相火.     

神经酰胺对结核杆菌低分子多肽抗原诱导的γδT细胞活化及凋亡作用

目的：研究神经酰胺对结核杆菌低分子多肽抗原（Ｍｔｂ）诱导的γδＴ细胞活化及凋亡作用。方法：用结核杆菌低分子多肽抗原刺激正常人ＰＢＭＣ，并用磁珠阳性分选法获得高纯度的γδＴ细胞。通过ＭＴＴ试验观察神经酰胺、鞘磷脂酰以及神经酰胺合成酶抑制剂ＦｕｍｏｎｉｓｉｎＢ１对γδＴ细胞的活化作用；ＦＡＣＳ检测其对γδＴ细胞的亡作用。结果：Ｍｔｂ刺激获得的γδＴ细胞可达７３％。磁珠分选后可高达９８％；高浓度神经酰胺及鞘磷脂酶能抑制γδＴ细胞的增殖。而出现凋亡，ＦｕｍｏｎｉｓｉｎＢ１则对γδＴ细胞的增殖及凋亡无明显影响。结论：鞘磷脂水解产生的社经酰胺对γδＴ细胞的有致凋亡作用。     

p38及PI3K在结核杆菌抗原再刺激诱导人γδT细胞凋亡信号转导中的作用

目的：建立结核杆菌抗原（Mtb-Ag）再刺激活化的人γδT细胞凋亡模型；应用信号分子阻断剂观察p38及PI3K信号传导途径在Mtb-Ag再刺激诱导γδT细胞凋亡中的作用。方法：用3种浓度Mtb-Ag分别再刺激培养15～25天的Mtb-Ag激活的人T细胞（MtbAT）24小时后，应用Annexin-V-FITC／PI染色流式细胞术（FCM）检测γδT细胞凋亡；用Mtb-Ag（10．0μg／ml）分别再刺激MtbAT3、6、12和24小时后，观察γδT细胞凋亡情况；预先用SB203580（p38途径抑制剂）及LY294002（PI3K途径抑制剂）分别处理MtbAT60分钟，观察Mtb-Ag（10．0μg／m1）再刺激3小时后γδT细胞凋亡情况。结果：与对照组相比，10．0和20．0μg／ml MtbAg均显著诱导γδT细胞凋亡（P〈0．01），凋亡细胞比例分别增加35．63％及38．83％，且此二种浓度MtbAg在诱导γδT细胞凋亡方面无显著性差异（P〉0．05）；与对照组相比，10．0μg/ml Mtb-Ag再刺激MtbAT3、6、12和24小时均可显著诱导γδT细胞凋亡（P〈0．01），凋亡细胞比例在44．21％～51．76％之间；且Mtb-Ag再刺激MtbAT3小时实验组与再刺激MtbAT 24小时实验组相比，在诱导γδT细胞凋亡方面无显著性差异（P〉0．05），后者的凋亡细胞比例仅比前者增加7．55％；Mtb-Ag再刺激诱导γδT细胞凋亡可被SB203580（80．0μmol／L）及LY294002（10．0μmol／L）抑制，凋亡抑制率分别为91．6％及43．1％。结论：采用Mtb-Ag（10．0μg／m1）再刺激活化的γδT细胞3小时的方法，可建立Mtb-Ag再刺激活化的人γδT细胞凋亡模型；信号分子阻断剂的实验证明，p38途径及PI3K途径均参与了Mtb-Ag再刺激已活化γδT细胞凋亡过程。     

流式细胞术检测CFSE标记人T细胞亚群增殖反应

目的探讨应用流式细胞术和活细胞荧光染料CFSE检测T淋巴细胞各亚群增殖反应的方法学。方法人外周血单个核细胞（PBMC）经CFSE染色后,分别用植物凝血素（PHA）、CD3 mAb和结核杆菌抗原（Mtb-Ag）刺激,加IL-2扩增后,用流式细胞术检测活化增殖后T细胞各亚群的比例,并用ModFit软件分析各亚群的增殖动力模型。结果PHA和CD3 mAb主要活化总T细胞,CD8^＋T细胞的增殖优于CD4^＋T细胞,但CD4^＋T细胞前4代细胞明显多于CD8^＋T细胞。Mtb-Ag主要刺激γδT细胞增殖。结论以CFSE标记淋巴细胞,结合流式细胞术可有效检测出不同T细胞亚群对不同刺激剂的增殖反应以及增殖动力学变化。     

双氢青蒿素对γδT细胞杀伤SW1990细胞的增强作用

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人外周血γδT细胞体外增殖及抗肿瘤活性的影响.方法 分离健康人外周血单个核细胞(PBMC),加入到含异戊烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate,IPP)和IL-2的RPMI 1640完全培养基中诱导培养γδT细胞.不同浓度的DHA作用于γδT细胞4δ h后,MTT法检测各药物浓度组γδT细胞的增殖能力,采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达,用CCK-8试剂盒检测各组γδT细胞对SW1990细胞的体外杀伤效应.结果 培养8d时各组γδT细胞纯度达到了75.46％ ±5.32％.浓度为50～100μmol/ml的DHA能显著促进γδT细胞的增殖.DHA处理后γδT细胞杀伤胰腺癌SW1990细胞能力及其穿孔素、颗粒酶B和CD107a的表达均显著高于对照组.结论 DHA可增强γδT细胞抗肿瘤活性,其机制可能与其促进γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达上调有关.     

卡介苗与ESAT-6激活的γδT细胞表达抗原提呈细胞表型和功能的研究

目的:探讨卡介苗(BCG)与ESAT-6激活的人外周血γδT细胞是否具有抗原提呈细胞的表型和功能。方法:用Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC)后,经尼龙毛柱法分离获得T细胞。将T细胞分别用卡介苗与ESAT-6刺激扩增γδT细胞后用流式细胞仪分选纯化γδT细胞,并检测其抗原提呈细胞表型。PBMC用贴壁法制备单核细胞后,诱导培养分化为成熟DC细胞,用流式细胞仪检测其成熟程度。T细胞用CFSE标记后分别按四种方法培养:①与结核分枝杆菌分泌性抗原(Mtb-Sag)共同培养;②与Mtb-Sag孵育2小时后的卡介苗激活的γδT细胞共同培养;③与Mtb-Sag孵育2小时后的ESAT-6激活的γδT细胞共同培养;④与Mtb-Sag孵育2小时后的成熟DC细胞共同培养;培养后检测T细胞及CD4+T细胞的增殖情况。结果:卡介苗与ESAT-6激活的γδT细胞CD80、CD86、HLA-DR的表达水平都增加,且后者显著高于前者。卡介苗与ESAT-6激活的γδT细胞培养组的T细胞增殖总数及CD4+T细胞的增殖有所增加;而后者显著高于前者,与成熟DC细胞培养组的增殖情况相似。结论:用卡介苗与ESAT-6激活的人外周血γδT细胞都具有抗原提呈细胞的表型和抗原提呈作用;但后者显著高于前者。     

PKC在结核杆菌抗原诱导入γδT细胞凋亡中的作用

采用Annexin—V—FITC／PI染色流式细胞术检测细胞凋亡的方法，分别观察Mtb—Ag（10．0μg／ml）刺激特异性激活的人γδT细胞不同时间凋亡情况，并研究Rottlerin（PKC抑制剂）预处理对Mtb-Ag诱导γδT细胞凋亡的影响。结果显示Mtb-Ag刺激3h、6h、12h、24h均可显著诱导γδT细胞凋亡（P〈0．01），凋亡细胞比例在44．21％-51．76％之间；Mtb-Ag诱导γδT细胞凋亡可被Rotflerin（40．0μmol／L）抑制，凋亡抑制率为98．6％。提示PKC途径参与Mtb-Ag激发活化的γδT细胞凋亡过程。