氟化物对成骨细胞增殖和分化的影响

目的研究不同浓度氟化物对体外培养大鼠成骨细胞增殖和分化的影响.方法经酶消化法从24h新生Wister乳鼠颅盖骨分离得到的成骨细胞经不同浓度的氟化钠(NaF)作用后,采用MTT法检测细胞增殖;PNPP法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;放射免疫法测定培养液中骨钙素(BGP)含量.结果低浓度NaF(10-7mol/L～10-5mol/L)可刺激细胞增殖;高浓度NaF(10-4mol/L～10-3mol/L)则抑制细胞增殖.NaF对成骨细胞分化的影响则呈多样性.ALP的活性改变基本与细胞增殖率的变化相同,即各浓度NaF均促进细胞骨钙素分泌,与对照组相比有统计学意义.结论氟化物对成骨细胞的增殖及早期分化呈双向调节,即小剂量促进,大剂量抑制.但对其晚期分化呈一致性,即促进作用.     

新型有序纳米介孔生物玻璃材料对体外培养成骨细胞的影响

目的探讨新型有序纳米介孔生物活性玻璃材料（mesoporous bioactive glass,MBG）对体外培养成骨细胞（osteoblast,OB）粘附、增殖、分化及矿化的影响。方法用混合酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养;成骨细胞与不同浓度的MBG浸提液作用后,MTT法测定细胞增殖;PNPP法检测碱性磷酸酶活性;矿化结节计数和面积测量分析MBG对成骨细胞矿化能力的影响。同时扫描电镜对直接在MBG材料上培养的OB进行细胞形态学和粘附情况分析。结果0.5%以下各浓度组MBG浸提液均对成骨细胞增殖无影响,而1%浓度组对细胞增殖有轻度抑制,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）;各浓度MBG浸提液均可以增强碱性磷酸酶活性,与对照组相比,其中0.0625、0.125、0.25%浓度明显提高ALP活性,差异有统计学意义（P〈0.01）;0.0625%浓度时,矿化结节数目差异无统计学意义（P〉0.05）,而矿化结节面积差异有统计学意义（P〈0.01）;扫描电镜下细胞形态分化良好,细胞相互之间及细胞与材料之间结合良好。结论不同浓度MBG浸提液对成骨细胞的增殖和分化有不同的作用,低浓度对成骨细胞的增殖和分化有更好的作用。MBG材料有良好的生物相容性,有望成为新型骨组织修复替代材料或骨组织工程支架材料。     

阿胶对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化功能的影响

目的 观察阿胶含药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化功能的影响.方法 应用MTT法观察阿胶对体外培养成骨细胞增殖功能的影响,ELISA法观察阿胶对体外培养成骨细胞ALP含量的影响.结果 三个剂量组的阿胶含药血清对体外培养大鼠成骨细胞的增殖无促进作用,但对体外培养大鼠成骨细胞内ALP的合成有明显的促进作用.结论 阿胶对体外培养大鼠成骨细胞的增殖无促进作用,但能促进体外培养大鼠成骨细胞的分化功能.     

雷洛昔芬对大鼠成骨细胞的增殖、分化和矿化的影响

目的初步探讨雷洛昔芬对成骨细胞骨形成作用机制。方法采用新生大鼠颅盖骨酶消化法体外培养成骨细胞,在培养液中加入不同浓度雷洛昔芬（0、10^-8、10^-7、10^-6mol/L）,在共同条件下培养。测定各项骨形成指标（增殖测定、碱性磷酸酶活性定量和矿化结节形态计量）。结果雷洛昔芬（10^-8mol/L组和10^-7mol/L组）的MTT、ALP测试结果及矿化结节形态计量高于对照组,且有统计学意义,P〈0.05。结论雷洛昔芬能够促进大鼠颅盖骨成骨细胞的增殖、分化及矿化,与雌激素作用类似。     

氟对体外培养的小鼠成骨细胞增殖活力的影响

目的 观察不同浓度氟对体外培养的小鼠成骨细胞增殖活力的影响。方法 采用胶原酶消化分离培养小鼠乳鼠颅盖骨成骨细胞，应用四唑盐(MTT)比色法，观察氟对培养的成骨细胞增殖活力的影响。结果 染氟0.5mg／L以下，细胞增殖活力变化不明显，染氟1．0～4．0mg／L时成骨细胞增殖活力明显增强，与对照组比较差异有显著意义，且此作用呈剂量和时间依赖性。结论 氟在一定剂量范围对体外培养的小鼠成骨细胞的增殖有促进作用。     

改良成骨细胞体外培养和鉴定方法

目的探讨理想的成骨细胞培养和罄定方法。方法同时采用多次胶原酶消化法及骨片贴附法获得成骨细胞，应用Gomori改良钙钴法和在此基础上苏木精复染法做成骨细胞鉴定，通过做成骨细胞动态形态学观察和生物学鉴定，比较不同细胞培养法和鉴定法。结果多次胶原酶消化法获得的成骨细胞数量更多，纯度更高，密度更均匀一致，多数细胞处于同一个生长周期；在改良钙钻法基础上做苏术精复染，成骨细胞结构更清楚，棕黑色颗粒分布位置更清晰可见，和阴性对照比较差异更罹著。结论多次胶原酶消化法获得的成骨样细胞更适于做体外实验研究模型；采用苏木精复染法做成骨细胞鉴定更有效。     

Preptin对人成骨细胞增殖和分化的影响及机制研究

目的 探讨preptin对人成骨细胞增殖和分化的影响及其信号途径.方法 体外培养人成骨细胞,用10-10、10-9、10-8和10-7mol/L preptin干预24 h,以[3H]脱氧胸腺嘧啶苷掺入法分析细胞增殖,用分光光度计法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性判断细胞分化程度.Western印迹法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化水平.并在preptin干预前以ERK抑制剂(PD98059)、p38 MAPK抑制剂(SB203580)和JNK抑制剂(SP600125)预处理,观察preptin诱导人成骨细胞增殖和分化的途径.结果 Preptin剂量依赖地增加人成骨细胞的增殖和ALP活性,10-9mol/L浓度时达最大效应(均P<0.01).Preptin刺激人成骨细胞ERK的磷酸化,对p38MAPK和JNK无作用.PD98059阻断preptin刺激的成骨细胞增殖及ALP活性增加(均P<0.05),而SP600125和SB203580无此效应.结论 Preptin通过ERK途径促进人成骨细胞的增殖和分化.     

氟剂对成骨细胞成骨功能表达的影响

目的　从不同剂量氟化钠 (NaF)对大鼠成骨细胞 (OB)功能表达的影响 ,研究氟剂促进成骨作用的机制及剂量效应关系。方法　经酶消化法从新生 2 4hSpregne Dawley (SD)种乳鼠头盖骨分离得到的成骨细胞。在 10 -7～ 5× 10 -4mol/LNaF中培养。用生化法测定细胞碱性磷酸酶 (ALP)活性 ,用放射免疫法测定培养液中骨钙素 (OC)含量。结果　NaF对细胞ALP活性的影响呈双向 ,即低浓度NaF(10 -7～ 10 -5mol/L)增加ALP活性 ,高浓度NaF (10 -4～ 5× 10 -4mol/L)则抑制ALP活性 ;对骨钙素产生和分泌的影响则呈单向 ,即各浓度NaF均刺激细胞骨钙素分泌 ,并与氟剂剂量呈正相关 ,其中 5× 10 -4mol/L组骨钙素水平最高 ,与对照组相比增加 6 7 14 % (P <0 0 5 )。结论　适量氟剂能增加成骨细胞ALP的活性及骨钙素的产生 ,促进成骨细胞的骨形成功能 ,但有效剂量范围狭窄     

肝基质鼠尾胶对日本血吸虫培养细胞AKP和ACP影响的研究

目的 研究肝基质、鼠尾胶对日本血吸虫成虫培养细胞碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)活性的影响,筛选适合日本血吸虫细胞培养的基质。方法 将虫龄28d的日本血吸虫成虫细胞,接种于预先铺敷有肝基质和鼠尾胶的小盖玻片上常规培养,未铺敷基质者作对照。运用酶细胞化学方法,分别于培养5、14、21、35d对日本血吸虫成虫培养细胞进行AKP和ACP染色,显微镜下观察并拍照,图像分析仪测定其含量,并作统计分析。结果 铺敷的基质不同,培养细胞的AKP和ACP活性不同。AKP、ACP着色深浅均按对照组、鼠尾胶组、肝基质组依次加深。定量分析显示,培养14d内,肝基质组与鼠尾胶组细胞AKP活性明显高于对照组(肝基质组P<0.01;鼠尾胶组P<0.05);两基质组培养细胞之间差异也有显著性(P<0.05)。培养21d后,肝基质组细胞AKP活性分别高于鼠尾胶组和对照组(P<0.01);后两者培养细胞之间的AKP活性无明显差异(P>0.05)。培养5d细胞的ACP活性,肝基质组与鼠尾胶组明显高于对照组(P<0.05),两基质组相互比较差异无显著性(P>0.05);培养14d后,各组之间两两比较均有差异(P<0.05),肝基质组培养细胞ACP活性最强,鼠尾胶组次之,对照组最弱。结论 肝基质较为适合日本血吸虫培养细胞的存活与生长。     

NO供体亚硝基化合物-18对大鼠成骨细胞的影响

目的 探讨NO供体亚硝基化合物-18(NOC-18)对大鼠成骨细胞增殖和分化、碱性磷酸酶(ALP)活性和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响。方法 采用酶消化法和骨组织块法联合分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞，然后将不同浓度的NOC-18作用于大鼠成骨细胞，采用噻唑蓝(MTY)比色法检测细胞增殖能力，测定细胞ALP活性。免疫细胞化学染色检测Ⅰ型胶原蛋白的表达，观察NOC-18对大鼠成骨细胞增殖和分化能力的影响。结果 NOC-18可显著促进大鼠成骨细胞增殖，提高成骨细胞ALP活性和Ⅰ型胶原蛋白的表达。结论 适量浓度的NOC-18可通过刺激成骨细胞的增殖和分化，促进骨形成，为预防和治疗骨质疏松提供了理论和实验依据。     

辛伐他汀对平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移及黏附能力的影响

目的：观察辛伐他汀对骨髓源性平滑肌祖细胞（SPC ）分化及增殖的影响,筛选新一代包被洗脱支架药物。方法：采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,接种于纤维连接素包被的培养板,培养8d后,以平滑肌肌动蛋白（α-SM A ）免疫荧光染色鉴定骨髓源性SPC ,并在倒置荧光显微镜下计数。收集培养8d单个核细胞、贴壁细胞,分别加入不同浓度辛伐他汀（0.01-10μmol/L ）培养8d、24h。分别采用氚标记胸苷（3 H-TdR）摄入法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察SPC的分化、增殖、迁移和黏附能力。结果：与对照组（无辛伐他汀干预）相比,0.01μmol/L辛伐他汀显著抑制骨髓单个核细胞向SPC分化[（85±4）个比（79±5）个]、增殖[（4070±184）个比（3833±126）个]、迁移[（44±3）个比（39±3）个]和黏附[（59±5）个比（52±4）个], P均＜0.05,且随辛伐他汀浓度增加S PC数量显著减少（ P＜0.01）。结论：辛伐他汀可抑制骨髓源性平滑肌祖细胞分化、增殖、迁移及黏附能力。     

乙型肝炎病毒X蛋白在体外和体内对SMMC-7721细胞生长与分化的影响

近年来,HBV对肝癌细胞生物学行为的影响受到越来越多的关注.我们前期研究结果表明乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)可以诱导肝癌细胞株SMMC-7721发生上皮-间质样表型转化(EMT),并显著增强肝癌细胞侵袭转移潜能[1].     

体外培养人成骨细胞随供体的增龄而改变

目的　观察体外培养的不同年龄组人成骨细胞形态、增殖与功能改变。方法　选取≤5岁 ,30～ 4 0岁 ,5 0～ 6 0岁和≥ 70岁四个年龄组的髂骨、股骨近端或股骨颈松质骨进行培养。培养期间应用相差倒置显微镜活体观察与碱性磷酸酶染色观察成骨细胞的生物学特性。一代成骨细胞生长至汇合时消化计数继续培养 ,二代成骨细胞分别于培养 1天 ,5天检测细胞增殖率 (MTT法 ) ,5天时检测碱性磷酸酶 (ALP)活性 ,14天时送电镜室进行透射电镜观察。结果　活体观察提示成骨细胞随增龄其胞体增大、变薄、空泡增多、突起拉长 ,汇合时趋向于长梭形 ,各年龄组成骨细胞碱性磷酸酶染色均呈阳性反应 ;电镜观察提示成骨细胞随增龄变得瘦长、细胞器减少、高尔基体不发达、糖原增多并呈堆积现象、溶酶体增多、出现空泡 ,细胞核内异染色质增多。成骨细胞生长至汇合时的细胞数与MTT相对比值随增龄而降低 (P <0 .0 1) ;ALP活性随增龄呈增高趋势 ,但差异无统计学意义。结论体外培养不同年龄组人成骨细胞的形态与增殖能力随年龄增加而发生衰老改变     

移植肝细胞增殖与分化的转录调控

近年来一系列动物及临床实验结果已肯定了肝细胞移植（hepatocy tetransplantation，HT）技术治疗急慢性肝功能衰竭及肝脏功能基因缺陷所致代谢性疾病的疗效，但移植肝细胞在体内较低的分化和增殖水平制约了HT的临床应用，已有研究表明利用基因修饰等技术可有效改善供体肝细胞某些功能。如何进一步提高肝细胞增殖和分化水平并提高移植肝细胞生物学活性已成为目前该领域研究的热点。     

雷帕霉素对内皮祖细胞增殖、黏附及迁移能力影响的实验研究

目的药物洗脱支架可抑制支架处血管内膜再内皮化,但对骨髓源性内皮修复作用的影响尚不清楚,为此观察了雷帕霉素对内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)增殖、黏附及迁移的影响。方法采用密度梯度离心法从大鼠骨髓获取单个核细胞,将其接种在纤维连接素包被培养板,加入不同浓度雷帕霉素(0.01～100ng/ml),培养12天后,激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染阳性细胞为正在分化的EPC,并在倒置荧光显微镜下计数。收集培养8天贴壁细胞,分别加入不同浓度雷帕霉素(0.1～200ng/ml)培养12～96h。然后分别采用MTT比色法、改良的Boyden小室和黏附能力测定实验观察EPC的增殖、迁移和黏附能力。结果雷帕霉素显著抑制骨髓单个核细胞分化为EPC,0.1ng/ml浓度雷帕霉素作用12天,EPC减少了(59.3±5.8)%(P<0.01)。雷帕霉素也显著抑制EPC增殖,其抑制作用随雷帕霉素浓度增加及作用时间延长而增加,1ng/ml浓度雷帕霉素作用24h使EPC数量减少(41.5±2.2)%(P<0.01)。雷帕霉素也显著抑制EPC的黏附和迁移能力。结论雷帕霉素可抑制骨髓单个核细胞分化为EPC,并抑制EPC的增殖及迁移能力。     

雌三醇对MG-63细胞增殖和分化的影响

目的 研究雌三醇（Estri01）对成骨肉瘤样细胞株MG-63的作用，并与雌二醇（17-β—estradiol）对MC-63细胞的作用进行比较，从而探讨雌三醇防治骨质疏松的作用机制。方法 用雌三醇或雌二醇处理成骨样细胞株MC-63，^3H掺入法（3H—TdR）测定细胞的增殖，通过测定细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性的变化和细胞分泌的骨钙素（osteocalcin）水平的变化来分析细胞功能。结果 以浓度为0mol／L的雌三醇为对照，10^-10、10、10^～8、10^-7、10^-6mol／L雌三醇分别增加MG-63细胞增殖达0．00％、18．10％、31．62％、23．81％、14．86％；以浓度为0mol／L的雌二醇为对照，10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-8mol／L雌二醇分别增加MG-63细胞增殖达16．95％、30．86％、62．48％、28．19％、24．76％。雌二醇促进MC-63细胞增殖的作用比雌三醇的作用强。不同浓度（10^-10～10^-6mol／L）的雌三醇或雌二醇对MG-63细胞内ALP活性及骨钙素分泌量均无显著影响。Western杂交法检测到雌激素受体α和β在MG-63细胞中均有表达，雌激素受体的拮抗剂ICI 182780可以消除雌二醇和雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用。结论雌三醇可以促进MG-63细胞的增殖，但对分化无影响；雌三醇对MG-63细胞增殖的促进作用由雌激素受体介导。     

抑癌基因kruppel样因子6及其剪接体蛋白对HepG2细胞增殖和分化的影响

目的 研究抑癌基因Kruppel样因子(KLF)6及其剪接体蛋白对肝癌细胞株HepG2细胞增殖和分化的影响. 方法 RT-PCR扩增肝细胞癌组织中KLF6剪接体cDNA并测定其序列;构建KLF6剪接体真核表达质粒pcDNA3.1A(-)/KLF6V.转染HepG2细胞后,经G418筛选获得稳定表达KLF6全长和其剪接体蛋白的HepG2细胞,分别命名为HepG2/KLF6和HepG2/KLF6V.四甲基偶氮唑盐法测定该两种HepG2细胞的增殖活性;同时分别以放射免疫法或Western blot技术测定白蛋白、甲胎蛋白或P21WAF1,细胞周期素D1蛋白在HepG2/KLF6或HepG2/KLF6V细胞中的表达情况.结果从肝细胞癌组织中扩增出一种KLF6剪接体,序列分析提示该剪接体缺失127 nt,引起KLF6蛋白近羧基端缺失42个氨基酸;KLF6V mRNA在肝癌及癌旁组织均有表达,但癌组织表达水平明显增高.HepG2/KLF6细胞生长速度较慢而HepG2/KLF6V细胞增殖较快,同时HepG2/KLF6细胞P21WAF1蛋白表达及白蛋白分泌水平明显高于HepG2/KLF6V细胞,而细胞周期素D1表达及甲胎蛋白分泌水平在HepG2/KLF6V细胞高于HepG2/KLF6细胞.结论 肝细胞癌组织中存在KLF6剪接体,该剪接体能对抗全长KLF6基因抑制细胞生长、促进细胞分化等的功能.