多重和套式聚合酶链反应检测血液,腹膜透析患者血清中HBV D…

利用免疫学和聚合反应（ＰＣＲ）方法，对３５例血液透析（血透），１４例腹膜透析（腹透）患者的８４份血清进行了检测。血透组抗－ＨＣＶ阳性率８２．９％，ＨＣＶ ＲＮＡ ＰＣＲ阳性率５１．４％；腹透组抗－ＨＣＶ阳性率仅７．１％，ＨＣＶ ＲＮＡ ＰＣＲ均阴性。ＨＢｓＡｇ和（或）ＨＢｅＡｇ在二组的阳性率分别为２５．７％和２１．４％；ＨＢＶＤＮＡＰＣＲ阳性率分别为４５．７％和６４．２％。透析患者ＨＣＶ和ＨＢＶ感     

聚合酶链反应检测乙型肝炎患者心肌组织中HBV DNA

应用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１８例乙型肝炎（乙肝）患者石蜡包埋心、肝组织中的ＨＢＶ ＤＮＡ，并与其免疫组化及原位杂交结果作了比较。二组引物检测的结果表明：在肝组织中均有ＨＢＶ感染，其中５例有ＨＢＶ复制。心肌组织中ＨＢＶ ＤＮＡ的检出率为５５．６％，不存在ＨＢＶ的复制。心脏病理检查可见一些非特异性改变，如脂变、水肿和纤维素样坏死等。病理变化与心电图、临床症状、体征及ＰＣＲ检测结果无相关性     

逆转录－套式－聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞癌的关系

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链；用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ。结果发现：５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性；１例三者均阴性；１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性的癌组织和癌旁组织均检出了ＨＣＶＲＮＡ负链，但血清中未检出负链。在２２例ＨＣＣ中１３例血清、８例癌组织和１５例癌旁组织中检出ＨＢＶＤＮＡ。５例有ＨＣＶＲＮＡ和／或抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者血清、和／或癌组织、和／或癌旁组织中均伴随ＨＢＶＤＮＡ和／或ＨＢ－ＶＭ阳性。提示ＨＣＶ可在癌旁肝细胞或肝癌细胞中感染并复制；ＨＢＶ感染与肝癌发生的关系比ＨＣＶ感染更密切。     

聚合酶链反应检测HBV DNA的临床意义

应用ＰＣＲ对１７１例肝病血清检测结果，ＨＢＶＤＮＡ阳性率５９．１％，ＥｌｉＳＡ检测ＨＢｓＡｇ阳性率４３．２７％，二者比较有显著性差异（Ｐ〈０．０１），ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（＋）组ＨＢＶＤＮＡ阳性率７９．５％，而ＨＢｓＡｇ（＋）抗－ＨＢｅ（＋）组主５７．９％，ＨＢｓＡｇ（－）／抗－ＨＢｓ（＋）组，ＨＢＶＤＮＡ阳性率３６．８％。     

套式PCR法检测HIV感染者血清中HCV RNA

用套式ＰＣＲ法对２５例人类免疫缺陷病毒Ｉ型（ＨＩＶ－Ｉ）感染者和１７例对照组血清作了ＨＣＶ－ＲＮＡ检测。ＨＣＶＲＮＡ阳性者９例，其中４例有输血或接受过血制品史，３例为静脉药瘾者（ＩＶＤＵＳ），另２例与ＨＩＶ阳性患者有ＩＶＤＵＳ和性接触史，对照组无１例阳性。有输血／血制品和ＩＶＤＵＳ危险因素的患者的ＨＣＶＲＮＡ检测的阳性率最高（８０％和５０％）。在ＨＩＶ伴ＨＣＶ感染的全部病例中，仅２例曾有ＡＳＴ和ＡＬＴ轻度升高。本研究表明，这两种病毒伴随感染率之高是与其相同的传播途径危险因素有关，而未发现此两种病毒间可能相互影响的证据。     

套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA

为了更准确、简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的技术，结合丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标的检测，对ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者的病因进行了研究。发现套式ＰＣＲ能将单次ＰＣＲ的敏感性稳定地提高１０００倍；免疫套式ＰＣＲ可检测到０．１～０．０１ｐｇ／Ｌ水平。检测ＨＢｓＡｇ阴性肝硬化２２例（Ａ组）、ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝炎１３例（Ｂ组）、ＨＢｓＡｇ阴性和乙型肝炎病毒核心抗体（抗－ＨＢｃ）阳性正常对照组３０例（Ｃ组）及ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（－）肝硬化患者１２例（Ｄ组），分别有４５．５％、３０．８％、１３．３％和１００％患者血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性。ＨＢＶＤＮＡ在一些抗－ＨＢｓ（＋）肝病患者和所谓健康人的血清中也存在。Ａ、Ｂ两组检出有ＨＢＶ和（或）ＨＣＶ感染患者分别占８１．８％和５３．８％。提示套式和免疫套式ＰＣＲ是简便、快速而又高度敏感的检测方法；ＨＢＶ感染可能是引起ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝病的重要原因，且ＨＢｓＡｇ阴性肝病病因大多与病毒感染有关；应该重新认识自然感染者血清中抗－ＨＢｓ的临床意义。     

套式聚合酶链反应检测伤寒杆菌DNA及其临床应用

应用套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）技术，建立了扩增伤寒杆菌鞭毛蛋白基因多变区特异核苷酸序列的方法。对９株沙门氏菌及７株其他临床分离菌进行检测，结果仅伤寒杆菌扩增出３４８ｂｐ特异性片段，以γ－３２ｐＡＴＰ标记的为伤寒杆菌特异的寡核苷酸探针对扩增产物做ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，证实上述结果可靠。扩增灵敏度为３０ｆｇ伤寒杆菌ＤＮＡ（约１０个菌体）。对６９例发热待查患者的７８份血标本进行检测，其敏感性（１００％）明显高于传统（血，骨髓）培养法（７３％），Ｐ＜０．０１；特异性均为１００％。另外，其检出敏感性不受预先抗菌治疗的影响，整个实验在１０～ｌ２小时内完成。以上表明ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ是一种快速、敏感、特异诊断伤寒的方法。     

28例HCV RNA阳性血清聚合酶链反应产物的酶切分析

为了探讨广州地区ＨＣＶ感染的基因型，作者对广州地区不同人群中１０５例抗－ＨＣＶ阳性血清用逆转录聚合酶链反应（ＴＲ－ＰＣＲ）进行了ＨＣＶ ＲＮＡ的检测，对其中８２例ＨＣＶ ＲＮＡ阳性患者血清做了ＰＣＲ产物的限制性内切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，结果显示：ＨＣＶⅡ型感染７８例（９２．１％），ＨＣＶⅢ型１例，ＨＣＶⅡ／Ⅲ型混合感染３例，４例ＨＣＶⅢ型感染均是肝病患者，初步表明广州地区ＨＣＶ感染大多数     

逆转录—套式—聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞…

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５′－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链，用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ，结果发现，５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性，１例三者均阴性，１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ存在情况及有其临床意义，方法 应用套式ＰＣＲ检测４６例急性丙型肝炎（丙型肝炎以下简称丙肝）和４２例慢性丙型肝炎患者血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。结果 慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙型患者（Ｐ〈０．００１），急，慢性丙型肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性     

套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

目的 建立套式PCR（NPCR）和DNA探针技术用于检测Q热立克次体。方法 依据已知的Cb 23s rRNA基因序列,设计两对引物用于建立套式PCR技术,并将扩增片段制成探针进行斑点杂交。结果 9株Cb分离株均可扩增出阳性产物带,而对照菌均为阴性,扩增灵敏度可达0.1pg Cb DNA,实验感染第6天的豚鼠血、小鼠血、小鼠脾脏均可扩增出阳性带;用七医株扩增片段制成的探针与9株Cb分离株的全DNA呈阳性杂交,对照菌为阴性,探针杂交灵敏度为0.5ng Cb DNA,感染的豚鼠血、小鼠血、小鼠脾脏均可呈阳性反应。结论 我们的NPCR和DNA探针技术具有很好的特异性和灵敏度,可将二者联合用于Q热的病原学诊断。     

非淋球菌性尿道炎中生殖支原体的检测

为了探讨生殖支原体（Ｍｇ）与非淋球菌性尿道炎（ＮＧＵ）的关系,我们建立了套式ＰＣＲ法对２１６例ＮＧＵ病人尿道（阴道）分泌物标本做了Ｍｇ检测。分别扩增得到２９６ｂｐ和３７１ｂｐ片段。套式ＰＣＲ扩增片段经Ｅ．ｃｏＲＩ酶切和与γ３２Ｐ－ＡＴＰ标记的ＭＧＳ－Ｉ探针做斑点杂交,均证明扩增片段为Ｍｇ－Ｐａ。此方法灵敏度为１０３ｃｆｕ／ｍｌ。用此引物对其它８种支原体扩增均为阴性,具有高度的特异性。实验结果表明,ＮＧＵ患者Ｍｇ－ＰａＤＮＡ总阳性率为７．８％（１７／２１６）正常人群阳性率１．２％（１／８１）,两组有显著性差异（ｘ２＝３．９８５,Ｐ＜０．００５）。从不同性别比较,男性ＮＧＵＭｇ－ＤＮＡ检测阳性率１０．２％（７／６８）,女性６．７％（１０／１４８）,男性略高于女性。成人与儿童比较,成人ＮＧＵＭｇ－ＤＮＡ检测阳性率１０．３％（１１／１０６）儿童检测阳性率５．４％（６／１１０）,成人略高于儿童,统计学亦无显著性差异。结果提示Ｍｇ是ＮＧＵ病原体之一,在正常人群中也检测出阳性,说明它有正确寄居的可能性。     

聚合酶链反应评价原位杂交检测慢性HBV感染者肝内HBVDNA的结果

用地高辛素探针原位杂交检测慢性ＨＢＶ感染者肝内ＨＢＶＤＮＡ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＢＶＤＮＡ评价病毒复制状态。发现肝内ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，在１４例肝组织病变不活动的ＨＢｅＡｇ阳性慢性无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）呈弥漫性分布；而在ＨＢｅＡｇ阳性或阴性活动性肝病病人均聚合分布于肝细胞坏死区。上述慢性感染者９８％血清ＨＢＶＤＮＡ阳性。说明ＨＢＶ复制与肝组织病变有关但非肝损伤直接原因。１６例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ中，９例肝内仅见局灶性ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，其中４例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性，说明部分ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ也存在极低水平病毒复制。     

儿童上呼吸道感染者的生殖支原体套式PCR检测与DNA测序研究

目的　生殖支原体（Ｍｇ）是从人体分离到的第１２ 种支原体,并认为与男女性泌尿生殖道的炎性相关。１９８８ 年,国外学者曾从４ 例肺炎患者的咽部分离到Ｍｇ。我们检测了２０ 例正常儿童和６０ 例上呼吸道感染儿童的咽试子标本中的Ｍｇ１６ ＳｒＲＮＡ基因。目的在于探讨Ｍｇ 与儿童上呼吸道感染的关系。方法　本文采用灵敏、特异的套式ＰＣＲ检测技术,并对１例阳性标本和Ｍｇ（Ｇ－３７Ｔ）典型株作了ＤＮＡ测序分析。结果　６０ 例儿童上呼吸道感染者中有１３ 例Ｍｇ 阳性,其中１ 例经ＤＮＡ测序与Ｍｇ（Ｇ－３７Ｔ）典型株完全一致。结论　Ｍｇ 可能是儿童上呼吸道感染的病因之一     

套式PCR检测不同地理株间日疟原虫及部分SSU rRNA基因序列鉴定

为了确定扩增的特定 Ｓ Ｓ Ｕｒ Ｒ Ｎ Ａ 基因片段是否适用于不同地理株间日疟原虫的检测,在以往工作的基础上,用同一套式 Ｐ Ｃ Ｒ 体系对 ２２ 例四川和 ３０ 例云南患者及１ 例在印度感染疟疾的归国患者进行间日疟筛查,并从 Ｐ．ｖ 阳性的四川和云南血样中任取 １ 例,与 Ｐ．ｖ 阳性的印度血样分别扩增,用 Ｐ Ｃ Ｒ 产物测序,结果显示３ 者序列完全一致;与美国 Ｎ Ｃ Ｂ Ｉ的网上基因数据库比较,发现这３ 者又与萨尔瓦多等其他５ 个间日疟原虫不同地理株的小亚单位核糖体核糖核酸相应基因片段完全一致。该结果进一步证实了所扩增的片段确为目的片段,并提示该诊断体系可以适用于不同地区的间日疟原虫地理株的检测。     

病毒性肝炎血清HBV DNA和HCV RNA同时检测的探索

本文对ＨＢＶ ＤＮＡ和ＨＣＶ ＲＮＡ用ＰＣＲ方法一次性同时检测技术进行了探索，经过９２例患者血清的检测的结果显示，与同份血清单一ＰＣＲ方法所检测的ＨＢＶ和ＨＣＶ感染阳性总鹰率为９８．１６％，说明此种多重套式ＰＣＲ方法对临床诊断ＨＢＶ和ＨＣＶ感染具有实用价值。     

复式PCR检测恶性疟原虫与间日疟原虫的研究

目的： 建立在同一次扩增中即可鉴别患者感染的疟原虫虫种的复式ＰＣＲ检测方法。方法： 根据恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）中度重复基因序列ｐＢＲＫ１－１４ 和间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）线粒体细胞色素Ｃ氧化酶基因ＣＯＩＩＩ合成引物,采用经优化的ＰＣＲ反应体系, 对疟原虫ＤＮＡ模板进行扩增。结果： Ｐ．ｆ．与Ｐ．ｖ．分别被扩增出２０６ 和３７０ ｂｐ 大小的ＤＮＡ片段,与人白细胞ＤＮＡ 无交叉;用该反应体系至少可检测出原虫血症为５×１０－ ７的Ｐ．ｆ．感染和１．０２×１０－ ６ Ｐ．ｖ．感染; 自云南疟疾流行区采集的７８３份滤纸干血滴样本中, 复式ＰＣＲ法阳性检出率为８５．８％ , 误诊率为０, 漏诊率为０．１％ , 而镜检法依次分别为８４．９％ 、３．１％ 和１．０％ , 两者符合率为９５．８％ 。结论： 本复式ＰＣＲ检测疟原虫较镜检敏感、特异, 适用于我国恶性疟与间日疟混合流行区的疟疾诊断、流行病学调查、药物的疗效考核和献血员的筛选等。     

乙型肝炎患者肝活动指数与血清HBV DNA含量关系初探

为了研究肝组织活动性积分(HAI)与血清HBV DNA含量之间的关系,我们对21例CHB患者行肝穿活检、计算HAI,采用信号引物能量转移定量PCR测定患者血清HBV DNA水平。结果显示随着肝功能损害程度增加,HAI增加、患者血清HBV DNA含量有降低趋势,但均无显著性差别(P>0.05)。结果显示,肝脏组织学损害程度与血清HBV DNA含量无明显相关。血清HBV DNA水平测定并不能准确判断患者病情。     

PCR技术检测石蜡包埋肝癌、癌旁组织中HBV DNA及与血清学标记之间关系

本文应用先进的聚合酶链反应(PCR),检测了27例原发性肝癌（HCC）患者肝癌及癌旁双份组织中的乙肝病毒DNA（HBV DNA），并探讨了与血清学标记物（HBV－M）之间的关系。检测结果表明：癌组织中HBV DNA检出率较癌旁组织中检出率低，且差异有统计学意义（P＜0．05）。HBsAg阳性合并HBeAg阳性者检出HBV DNA最高，癌旁组织中慢活肝中HBV DNA检出率最高。