应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术筛选肝细胞性肝癌血清标志物的研究

目的：应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）和蛋白质芯片检测肝细胞性肝癌患者血清蛋白质指纹图谱，筛选特异性候选标志物。方法：应用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术检测50例肝细胞性肝癌患者和50例性别、年龄匹配的正常健康人血清，获得WCX2蛋白质芯片蛋白表达图谱。用Bio Marker Wizard软件分析差异蛋白并经数据库搜索初步鉴定。结果：应用弱阳离子交换芯片（WCX2类）在未经治疗肝细胞性肝癌患者、经介入治疗后的肝细胞性肝癌患者和正常人血清中检测到在不同质荷比处有7个差异蛋白质峰．其蛋白质含量差异有显著性（P〈0．01），经蛋白质数据库搜索，与这七种差异蛋白质分子量最接近的蛋白质分别为：Galanin相关肽、Pro-neuregulin-4蛋白、小诱导细胞因子A15前体、9kDa蛋白、CSL型锌指包涵蛋白1、线粒体铰链蛋白、Actin相关蛋白。结论：应用SELDI-TOF-MS筛选肝细胞性肝癌患者血清特异性生物标志物的方法快速、有效，操作自动化，检测到的这7个差异蛋白质可能是肝细胞性肝癌患者血清特异性生物标志物。     

SELDI蛋白芯片技术筛选卵巢癌血清肿瘤标志物的研究

目的寻找卵巢癌患者血清中新的肿瘤标志物。方法采用表面增强激光解吸/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,选用WXC2蛋白质芯片对53例卵巢癌及50例对照血清标本进行检测以筛选卵巢癌患者血清中差异表达蛋白质。结果在分子量0~50 000 D范围内,检测出275个差异蛋白峰。卵巢癌差异表达明显的蛋白峰6个(P<0.05),其中低表达的5个,相对分子量分别为6 432、6 879、8 554、8 682、13 726 D,高表达的1个,相对分子质量为11 450 D。早期与晚期卵巢癌比较,发现差异表达明显的蛋白峰2个,相对分子量分别为6 190、6 448 D,均在早期卵巢癌中高表达。将发现的差异蛋白峰在Swiss蛋白数据库中搜索,发现11 450 D蛋白峰与S100 Z protein相符。S100 Z protein属于S100蛋白家族,可能通过与S100 P相互作用,促进卵巢癌的发生。其它的差异峰在数据库中没有与之相匹配的蛋白,提示可能为新的蛋白质。结论SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术是1种快速、简单易行、用量少和高通量分析方法,能够直接检测出卵巢癌患者血清中相对特异的肿瘤标志物,其对于卵巢癌的早期诊断具有一定的临床意义。     

蛋白质芯片技术应用于肝癌诊断的初步研究

 【摘要】　目的　应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术和蛋白质芯片从肝癌患者血清中筛选可用于肝癌诊断的标志蛋白质。方法　运用SELDI-TOF-MS技术及CM10蛋白质芯片检测46例原发性肝癌患者和64名健康人血清,获得蛋白质指纹图谱,采用Biomarker Wizard软件选出肝癌患者与健康人血清中的表达差异蛋白质,评价其灵敏度、特异度和诊断效能,确定最佳标志蛋白质。结果　肝癌组与健康对照组血清中有16个蛋白质的表达差异在2倍以上,并且差异有统计学意义（P＜0.05）。其中质荷比为6845.70的蛋白诊断效能最高,其灵敏度为89.1 %（41／46）,特异度87.5 %（56／64）,且该蛋白质与肿瘤大小有相关性（r＝-0.363,P＜0.05）。经数据库搜索该蛋白质很可能是免疫球蛋白重链可变区片段。结论　应用SELDI-TOF-MS技术诊断肝癌,具有灵敏度高,特异性好,快速简便的优点,质荷比为6845.70的蛋白质可能是肝癌患者血清中的特异性标志物。     

LTQ和SELDI-TOF质谱对弱阳离子磁珠捕获的血清多肽和蛋白的鉴定

[目的]鉴定弱阳离子磁珠捕获的血清多肽和蛋白峰。[方法]收集经弱阳离子磁珠从人血清中捕获后洗脱下来的蛋白,然后经过HPLC分离,各组分的一部分跑SDS-PAGE胶并用LTQ质谱鉴定,另一部分采用SELDI-TOF检测,最后结合参考文献信息初步确定部分峰的鉴定结果。[结果]通过SELDI-TOF检测结果发现5个组分有比较明显的峰,基于LTQ质谱鉴定了这5个组分分子量在30kD以下的蛋白,数据库搜索结果显示评分在100分以上共鉴定出66个单一蛋白。并初步确定了13个SELDI-TOF上峰的蛋白结果。[结论]HPLC分离富集结合SELDI-TOF和LTQ质谱能比较有效地鉴定丰度比较高的差异峰,是各种差异峰鉴定策略的有益补充。     

血清蛋白质谱模型对胃腺癌诊断的应用性研究

[目的]探讨用蛋白质芯片技术筛选胃腺癌患者血清蛋白质表达谱，寻找血清中的标志性蛋白。[方法]采用蛋白质生物芯片表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI）技术，运用SAX2（Strong Anionic Exchanger）蛋白质芯片检测胃腺癌患者，胃炎患者和健康者血清，建立诊断模型，然后进行单盲模型验证。[结果]发现5910Da,5084Da和8691Da的三个蛋白质荷比峰（M/Z）在胃腺癌和健康组比较中具有显著性差异。5910Da,6440Da的两个蛋白质荷比峰（M/Z）在胃腺癌和胃炎组中比较具有显著性差异。[结论]建立了胃腺癌的血清蛋白指纹质谱，为以后的胃癌蛋白质组学研究奠定了一定的基础，建立了以5910Da,5084Da,8691Da和6440Da四个蛋白质峰为模型区分胃腺癌与非胃腺癌的血清蛋白表达质谱诊断模型，为胃腺癌的临床诊断提供了一条崭新的途径和方法。     

鼻咽癌移植瘤cyclin D1表达与化疗相关性

[目的]通过比较化疗前后裸小鼠CNE-2鼻咽癌移植瘤cyclin D1蛋白表达的变化．评价化疗对cyclin D1蛋白表达的影响。[方法]将荷瘤小鼠随机分成3组：5-Fu组、DDP组和对照组，取肿瘤组织活检后开始化疗。化疗后测体重及肿瘤大小。一周后再次活检。用Western Blot方法检测活检组织cvclin D1蛋白表达。[结果]两化疗组化疗后肿瘤生长抑制明显，与对照组比较差异显著。随着时间的延长和肿瘤体积的逐渐增大，3组cyclin D1表达均逐渐增强，但两化疗组与对照组比较差异无显著性（P〉0．05）。3组中cyclin D1高、低表达者化疗后肿瘤体积均无显著差异（P〉0．05）。[结论]鼻咽癌组织cyclin D1表达高、低不能预测化疗的敏感性：表达程度在化疗前后是稳定的。     

SELDI-TOF-MS技术检测肺腺癌血清生物标志物

[目的]用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术寻找肺腺癌病人血清蛋白标志物，探讨吸烟与肺腺癌血清中蛋白质组谱变化的关系。[方法]收信肺腺癌病人和正常对照人群血清各50例，按照年龄、性别、吸烟史进行一一配对，采用WCX2芯片技术对血清蛋白进行捕获，用蛋白芯片阅读器PBSⅡ对芯片进行扫描、分析。[结果]肺腺癌病人血清蛋白图谱与正常对照组相比，存在10个差异表达蛋白（P＜10^5），其中包括6个高表达蛋白，分子量分别是4050Da、4205Da、5329Da、5899Da、7761Da、9285Da，4个低表达蛋白，分子量分别是2564Da、2932Da、3082Da、3442Da。肺腺癌病人有吸烟史的与不吸烟的进行比较，血清蛋白表达差异无显著性（P＞0.01）。[结论]SELDI-TOF-MS技术能筛选出灵敏度和特异性较好的差异蛋白，为肺腺癌的早期发现提供了一种新的、无创实验方法。     

应用SELDI-TOF-MS技术筛选肾细胞癌患者血清标志物

背景与目的:表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术有助于筛选肾细胞癌相关的分子变化.本研究探讨人肾细胞癌患者血清和正常人血清之间蛋白质表达的差异,筛选特异性生物标志物.方法:采用SELDI-TOF-MS技术,选用WCX2蛋白质芯片对28例肾透明细胞癌及28例正常对照组血清标本进行检测以筛选肾癌患者血清中差异表达蛋白质.结果:在分子量1.5×103～30×103(1.5～30 kD)范围内,检测出170个差异蛋白峰.肾透明细胞癌差异表达明显的蛋白峰7个(P＜0.01),其中低表达的3个,相对分子量分别为4.098×103、5.917×103、6.643X 103,高表达的4个,相对分子质量为5.572×103、6.344×103、6.529×103、8.518×103.结论:人肾肿瘤血清中特异性蛋白质的发现,对肿瘤临床特异性生物标志物的检测及进一步研究肿瘤发生机制等具有重要意义.     

前列腺癌的差异蛋白及其临床意义的研究

目的应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）和蛋白质芯片技术,探讨前列腺癌差异蛋白表达及其与病理分级和临床分期的关系。方法以病理确诊的前列腺癌和良性前列腺增生各45例为研究对象,采用SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术检测血清的蛋白表达图谱,用Biomarker Wizard软件分析差异蛋白,对所得差异蛋白进一步分析。结果在前列腺癌和良性前列腺增生患者血清中检测到9个差异蛋白（P〈0.01）,前列腺癌患者血清差异蛋白7个高表达,2个低表达。各差异蛋白在不同病理分级间表达差异有统计学意义。结论通过SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术检测前列腺癌的特异蛋白可以提高前列腺癌诊断的敏感性和特异性。差异蛋白在前列腺癌不同病理分级间表达差别可能与前列腺癌分化、肿瘤侵袭生长有关,检测差异蛋白可以明确诊断,评估预后,指导治疗。     

SELDI-TOF-MS技术在检测肺癌化疗敏感性相关蛋白质中的研究

[目的]应用SELDI-TOF-MS技术探索肺癌患者血清中与化疗敏感性相关的蛋白质。[方法]收集2005年4月至2008年11月初治晚期肺癌28例化疗前血清标本,以CM10芯片（阳离子交换蛋白芯片）为检测介质,经表面加强激光解吸电离—飞行时间—质谱（SELDI-TOF-MS）测定蛋白质质谱,筛选出各化疗方案CR、PR、SD、PD的患者血清中蛋白表达的肽链指纹图谱,寻找与肺癌患者化疗敏感相关的差异蛋白峰,用人工神经网络建立肺癌血清蛋白质指纹图谱化疗敏感相关模型,并做交叉验证评估其诊断的敏感度和特异性。[结果]通过化疗获益组与化疗抗拒组比较,得到7个差异蛋白峰,并以此建立诊断预测模型,其敏感度为92.31%,特异性为100%。验证结果敏感度为76.92%,特异性为87.50%。其中m/z为5482、4969的蛋白质峰在化疗获益组中表达明显高于化疗抗拒组,而m/z为4140的蛋白质峰在化疗抗拒组中表达明显高于化疗获益组。[结论]运用SELDI-TOF-MS技术所建立的肺癌血清蛋白质指纹图谱模型在预测肺癌化疗敏感性中具有较好敏感度与特异性,可望成为较好的预测工具。     

Experimental Aspergillosis in Mice

The untreated mice and the mice treated with cortisone, antibiotics and both cortisone and antibiotics, were exposed individually to the spores of A. fumigatus, A. flavus and A. niger. The cortisone but not the antibiotics seemed to enhance susceptibility of the mice to infection with Aspergillus species. The species of Aspergillus also affected the severity and progress of the lesion.     

Reduced Glioma Infiltration in Src-deficient Mice

Summary Malignant brain tumors, such as glioblastoma, are characterized by extensive angiogenesis and permeability of the blood-brain barrier (BBB). The infiltration of glioma cells away from the primary tumor mass is a pathological characteristic of glial tumors. The infiltrating tumor cells represent a significant factor in tumor recurrence following surgical debulking, radiation, and chemotherapy treatments. Vascular endothelial growth factor (VEGF)-mediated vascular permeability (VP) has been associated with the progression of glioma tumor growth and infiltration into surrounding normal brain parenchyma. While VEGF induces a robust VP response in control mice (src^+/+ or src^+/−), the VP response is blocked in src^−/− mice that demonstrate a ‘leakage-resistant phenotype’ in the brain. We used the Src-deficient mouse model to determine the role of Src in the maintenance of the BBB following orthotopic implantation and growth of glioma cells in the brain. Although solid tumor growth was the same in control and src^−/− mice, the infiltrating component of glioma growth was reduced in src^−/− mice. Characterization of the expression and localization of the extracellular matrix (ECM) protein fibrinogen was evaluated to determine the effect of a Src-mediated VP defect in the host compartment. These studies indicate that the reduced VP of host brain blood vessels of src^−/− mice mediates a reduction in glioma cell invasion in a mouse brain tumor xenograft model. These authors contributed equally to these studies     

硝酸羟胺对小鼠胚胎毒性的初步研究

背景与目的:探讨硝酸羟胺对小鼠的胚胎毒性、致畸作用和致畸特性.材料与方法:采用小鼠致畸试验,测量孕鼠体重、胎鼠体重、胎盘重量,统计胎鼠死亡率和吸收率,观察内、外部畸形,并对胎鼠的胸骨、指骨、骶尾椎等骨骼的骨化点的骨化程度进行计数;运用方差分析、χ2检验等方法对所得数据进行统计分析.结果:低剂量组(7 mg/kg),中剂量组(20 mg/kg)高剂量组(60mg/kg)的孕鼠体重、胎鼠体重、胎盘重量、胎鼠死亡率和吸收率、胎鼠畸形率、骨骼骨化数,与阴性对照组差异无显著性,而阳性对照组与阴性对照差异有显著性.结论:在7～60mg/kg剂量范围内硝酸羟胺对小鼠没有胚胎毒性和致畸作用.     

Aspirin Intake Suppresses MMC-induced Genotoxicity in Mice

The genotoxicity induced by mitomycin C (MMC) was found to be decreased by aspirin on alkaline single cell gel electrophoresis (SCG) assay in multiple organs of mice. Aspirin at doses of 0.5, 5 and 50 mg/kg and MMC at 2 mg/kg were administered and then liver, lung, kidney, spleen, colon and bone marrow were sampled after 3 h. Significant protective effects of aspirin against MMC-induced genotoxicity were observed in all but the bone marrow, where no change was evident. The results suggest that the radical scavenging ability of aspirin prevents damage by MMC-induced reactive oxygen species (ROS) in multiple organs.     

Mice transgenic for NPM-ALK develop non-Hodgkin lymphomas

BACKGROUND: The t(2;5)(p23;q35) translocation is associated with a high percentage of anaplastic large-cell lymphomas (ALCL) of T- or null-cell phenotype. The translocation produces an 80 kDa hyperphosphorylated chimeric protein (p80) derived from the fusion of the anaplastic lymphoma kinase (ALK) with nucleophosmin (NPM). The NPM-ALK chimeric protein is an activated tyrosine kinase that has been shown to be a potent oncogene and presumably plays a causative role in lymphomagenesis. MATERIALS AND METHODS: A transgenic mouse line was generated, where the human NPM-ALK cDNA is driven by the lck promoter conferring transgene expression to early T-cells. RESULTS: Mice rapidly developed large cell lymphoblastic lymphomas with a median latency of 8 weeks, primarily involving the thymus, with lymph node as well as histologically evident extranodal organ infiltration by large tumor cells. CONCLUSION: The transgenic approach described provides direct evidence for the strong transforming potential of NPM-ALK in T-cells and furthermore represents a system for the analysis of the oncogenic events mediated by NPM-ALK in vivo, which might be instrumental in the development of tyrosine kinase inhibitor therapies of potential clinical use.