硒化壳聚糖诱导急性早幼粒白血病细胞凋亡的研究

目的 研究硒化壳聚糖对体外培养的NB4细胞增殖和凋亡的影响,探讨这种作用与端粒酶活性和survivin蛋白的关系。方法MTT法检测细胞增殖;细胞形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡;PCR-ELISA法检测端粒酶活性;western blot法检测survivin蛋白含量。结果50~200mg/L硒化壳聚糖可时间剂量依赖性地抑制NB4细胞增殖,诱导其凋亡,降低端粒酶活性和下调survivin蛋白含量。结论 硒化壳聚糖可通过抑制端粒酶活性,下调survivin蛋白含量,诱导细胞凋亡从而抑制体外培养的NB4细胞增殖。     

硒化壳聚糖对NB4细胞血管内皮生长因子表达及分泌的影响

目的:探讨硒化壳聚糖对白血病细胞株NB4细胞VEGF mRNA表达及VEGF蛋白分泌的变化。方法:应用RT-PCR法和ELISA法研究硒化壳聚糖对NB4细胞VEGF mRNA表达及VEGF蛋白分泌的影响。结果:NB4细胞中有VEGF mRNA的表达及VEGF蛋白的分泌,硒化壳聚糖在体外能下调VEGF mRNA的表达和VEGF蛋白的分泌,呈剂量依赖关系。结论:硒化壳聚糖除可通过诱导NB4细胞分化或诱导其凋亡外,还可通过抑制促血管新生达到发挥抗白血病的效应。     

硒化壳聚糖与阿霉素联合及序贯给药对NB4细胞增殖的影响

目的研究硒化壳聚糖与ADM联合应用对NB4细胞增殖的影响,探讨两药序贯给药的不同效果。方法硒化壳聚糖（50,100mg／L）及ADM（0．5,1,2mg／L）同时或者序贯给药（先给予硒化壳聚糖后给予ADM或先给予ADM后给予硒化壳聚糖）作用于NB4细胞,MTT法检测药物对细胞增殖的影响;金氏公式评价两药的协同效果。结果硒化壳聚糖与ADM单独作用均可抑制NB4细胞增殖,二者联合应用呈协同作用;先给予硒化壳聚糖作用24h,再给ADM作用24h,对NB4细胞的抑制呈协同作用;先给予ADM作用24h,再给硒化壳聚糖作用24h,呈拮抗及单独相加作用。结论硒化壳聚糖与不同浓度的ADM（0．5—2mg／L）联合应用可协同抑制NB4细胞增殖;序贯应用硒化壳聚糖和ADM时,先给予硒化壳聚糖再给予ADM比先给予ADM再给予硒化壳聚糖协同效果好。     

Ca~(2+)、cAMP、cGMP在硒化壳聚糖诱导的NB_4细胞凋亡中的作用

目的研究硒化壳聚糖对NB4细胞第二信使的影响,探讨其抑制NB4细胞生长,诱导其凋亡的机制。方法流式细胞法观察药物对细胞内钙离子的影响;放免法检测药物对细胞内cAMP和cGMP含量的影响。结果硒化壳聚糖作用24h,NB4细胞内钙离子和cAMP含量明显升高,cGMP含量明显降低,cAMP/cGMP比值增大。结论硒化壳聚糖可通过升高细胞钙离子和cAMP含量,降低cGMP含量,增大cAMP/cGMP比值来抑制NB4细胞生长,诱导其凋亡。     

硒化壳聚糖诱导NB4细胞凋亡过程中下调了survivin的表达

目的:研究硒化壳聚糖对NB4细胞凋亡及周期阻断作用,探讨这种作用与survivin蛋白表达的关系。方法:细胞分为三个浓度组(空白对照组、50mg/L组、100mg/L组),激光共聚焦显微镜和流式细胞仪观察药物对细胞凋亡及周期阻断作用;Western blot法检测survivin蛋白含量的变化。结果:硒化壳聚糖可诱导NB4细胞凋亡并阻断细胞于G0G1期,还可降低细胞survivin蛋白含量。结论:硒化壳聚糖可通过下调NB4细胞survivin蛋白含量,进而诱导细胞发生凋亡。     

SiRNA稳定抑制肝癌细胞hTERT基因的表达

目的：利用RNA干扰稳定筛选-抑制技术,抑制人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因表达,探讨靶向hTERT基因RNAi与抑制肝癌细胞增殖的时-效关系．方法：设计靶向hTERT基因的小干扰RNA,构建重组表达质粒pGenesil—shRNA—hTERT并导入肝癌SMMC-7721细胞株,经G418筛选,建立稳定表达siRNA—hTERT的细胞株．采用real—time RT—PCR、MTF和PCR—TRAP法同时检测pGenesil—shRNA-hTERT稳定抑制组和未处理SMMC-7721细胞组hTERT基因表达、端粒酶活性及细胞增殖变化．结果：在稳定表达pGenesil—shRNA—hTERT的SMMC-7721细胞株中,RNAi效力持续、稳定存在,hTERTmRNA表达、端粒酶活性明显降低,瘤细胞增殖被抑制．结论：RNA干扰能持续、稳定地抑制靶基因hTERT mRNA表达及肿瘤细胞增殖,是有潜力的基因治疗肿瘤新方法．     

硒化壳聚糖对K562细胞的作用及其与NF-КB信号分子的关系

目的:研究硒化壳聚糖对慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖的影响,并且探讨这种影响与NF-КB信号分子的关系。方法:MTT法检测硒化壳聚糖对细胞增殖的影响,AO/EB荧光染色用来观察药物对细胞的凋亡作用。Westernblot的方法检测蛋白含量的变化。结果:硒化壳聚糖对K562细胞抑制作用呈量效、时效关系,硒化壳聚糖200mg/L作用48h对K562细胞的抑制率高达90.7±10%;并使细胞出现明显的凋亡现象。Westernblot的实验结果表明硒化壳聚糖使K562细胞NF-КB蛋白含量明显减少,且呈量效关系。结论:硒化壳聚糖可减少进入细胞核内NF-КB的蛋白含量从而下调其下游基因表达,最终抑制K562细胞增殖,诱导细胞发生凋亡。     

槲皮素对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的 观察槲皮素对肺腺癌A549细胞生长及对hTERT基因表达的影响. 方法以台盼蓝拒染法计数肺腺癌细胞的生长抑制率,透射电镜和DNA Ladder实验了解A549细胞凋亡的发生;PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT mRNA表达.结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用明显,且呈剂量和时间依赖性,槲皮素处理48 h后的IC50为22.5 μmol/L.DNA Ladder实验和透射电镜形态学检测显示出细胞凋亡的特征性变化,细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现.经槲皮素处理后肺腺癌A549细胞hTERT mRNA表达降低,端粒酶活性受抑制. 结论槲皮素能抑制肺腺癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导A549细胞凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT 基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关.     

稳定转染ShRNA-TRAP对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响

目的探讨稳定转染靶向端粒酶调节相关基因TRAP的小发夹RNA对胃癌细胞株SGC-7901的长效影响。方法构建特异性作用于TRAPmRNA的小发夹RNA质粒表达载体,转入SGC-7901细胞,筛选的阳性克隆细胞继续压力培养3个月,采用RT-PCR法检测TRAPmRNA的表达,MTT法检测细胞生长,同时检测细胞凋亡、hTERTmRNA、端粒酶活性。结果稳定转染ShRNA-TRAP后,SGC-7901细胞的TRAPmRNA表达明显下降,hTERTmRNA和端粒酶活性降低;细胞增殖能力降低,细胞凋亡率增加。结论ShRNA-TRAP能长效的抑制TRAPmRNA的表达,下调hTERTmRNA转录及端粒酶活性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,可作为抑制端粒酶的肿瘤基因治疗策略的补充。     

甘氨脱氧胆酸钠对人肝癌细胞端粒酶活性及其hTERTmRNA表达的影响

目的探讨甘氨脱氧胆酸钠（glycodeoxycholic acid,GDCA）对肝癌SMMC7721细胞端粒酶活性以及hTERTmRNA表达影响。方法采用PCR-ELISA法检测端粒酶活性;应用RT-PCR检测hTERTmRNA的表达。结果GDCA作用肝癌SMMC7721细胞后,端粒酶活性与hTERTmRNA表达均降低,GDCA200、400μmol／L处理组与对照组端粒酶活性（A450nmOD值）分别为（0．140±0．04）、（0．077±0．01）、（0．2484-0．05）,差异有统计学意义（P〈0．05）,抑制率为43．5％和69．0％。hTERTmRNA表达明显降低,相对表达率分别为1．33、0．59、1．89。结论甘氨脱氧胆酸钠抑制肝癌SMMC7721细胞端粒酶活性,且下调hTERTmRNA的表达。     

外周血hTERT mRNA表达与进展期结直肠癌术后复发及预后的关系

目的 探讨进展期结直肠癌（CRC）患者外周血人端粒酶逆转录酶（hTERT） mRNA表达量与术后复发及预后的关系.方法 以实时荧光定量RT-PCR定量检测85例进展期CRC患者根治术前、术后1个月及30例健康对照者外周血hTERT mRNA表达量;术后随访3年,CRC复发患者及未复发患者复查外周血hTERT mRNA表达量.结果进展期CRC组术前外周血hTERT mRNA表达量显著高于正常对照组[（6.22 ±5.85）2-△△Ct vs （0.45 ±0.27）2-△△Ct,P ＜0.01],术后1个月外周血hTERT mRNA表达量显著降低（P＜0.01）.术后复发组外周血hTERT mRNA表达量显著高于术后1个月组和未复发组[（5.07 ±2.87）2-△△Ctvs（1.83±1.08）2-△△Ct,（2.15 ±1.49）2-△△Ct,（P＜0.01）].单因素分析显示肿瘤分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移率及有无肝转移是影响进展期CRC患者术前外周血hTERT mRNA表达水平升高的因素（P＜0.05或P＜ 0.01）.Logistic多因素回归分析显示肿瘤分化程度、淋巴结转移及肝转移为影响进展期CRC术前外周血hTERT mRNA表达升高的独立危险因素;随着术前外周血hTERT mRNA表达量的升高,CRC患者术后3年复发率逐步升高,术后生存率逐步降低.结论术前外周血hTERTmRNA表达量与进展期CRC重要病理特征相关,是影响预后的重要因素,可作为预后评价指标;术后外周血hTERT mRNA表达量升高与术后复发相关.     

罗格列酮对肝癌细胞增殖的影响

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的配体罗格列酮（RSG）对肝癌细胞增殖的影响。方法：体外培养人肝癌HepG2细胞,应用CCK-8比色法检测不同浓度RSG（25、50、100、200μmol/L）和不同作用时间RSG（24h、48h、72h）对肝癌HepG2细胞增殖的影响;流式细胞仪（FCM）检测细胞周期;实时荧光定量PCR方法分析细胞周期蛋白CyclinD1的mRNA表达变化;免疫细胞化学法分析CyclinD1的蛋白表达变化。结果：RSG抑制肝癌HepG2细胞增殖,CCK-8比色法显示增殖抑制率与RSG的浓度-时间呈正相关;FCM检测发现,RSG使肝癌HepG2细胞的细胞周期被阻滞于G1期,而进入S期的细胞明显减少,且呈浓度依赖;RSG干预后,CyclinD1的mRNA及蛋白表达在肝癌细胞中下调。结论：RSG依赖激活PPARγ途径能在体外抑制肝癌细胞生长,提示PPARγ可能是肝癌治疗的一个新分子靶点。     

人端粒酶反转录酶反义寡核苷酸对胰腺癌细胞吉西他滨敏感性的影响

目的 通过体外实验探讨人端粒酶反转录酶(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)能否增强胰腺癌细胞对吉西他滨(健择)的敏感性.方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测hTERT mRNA表达情况;端粒重复序列扩增法(TRAP)、聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法检测端粒酶活性;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双染色法检测早期凋亡.结果 瞬时转染hTERT ASODN呈浓度依赖性下调细胞hTERT mRNA表达.0.2 μmol/L hTERT ASODN可显著下调端粒酶活性至0.47.健择在ASODN转染组中的IC50值为(0.8±0.2)μmol/L,而其在单纯脂质体转染对照组中为(7.3±0.9)μmol/L,差异具有统计学意义.ASODN可显著增加健择对肿瘤细胞的凋亡诱导作用,健择诱导的早期凋亡率在ASODN转染组中为60.28%,而其在脂质体对照组中为17.34%.结论 hTERTASODN可增强胰腺癌细胞对健择的敏感性,其机制可能与hTERT mRNA和端粒酶活性下调相关.