抗酸分枝杆菌菌种鉴定的快速、微量、直视方法

目的创建一种经济、适用、快速、微量、直视的抗酸分枝杆菌菌种鉴定系统(以下简称"本法")。方法利用对硝基苯甲酸(PNB)对结核分枝杆菌有抑菌作用而对非结核分枝杆菌无抑菌作用的原理,对分枝杆菌标准菌株及临床分离菌株进行PNB抑菌试验,以改良罗氏法(L-J法)对照,确定药敏试验最适的PNB应用浓度。利用自行研制的电脑控制无级连续超倍放大、微量培养和图象采集系统,建立分枝杆菌菌种快速、微量、直视鉴定系统。结果本法PNB的应用浓度为400μg/L;检出时间平均5.6d。每实验孔仅需培养基100μl。本法结果与L-J法结果符合率达94.6%。结论本法明显缩短了分枝杆菌鉴定的报告时间,节省试剂,简单、经济、实用。     

分枝杆菌药物敏感试验快速荧光检测法的研究

目的 建立一种Mycobacterium(分枝杆菌)药敏试验的快速荧光检测法。方法 用自己研制的荧光检测管检测异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EB)、丁胺卡那霉素(AMK)、左旋氧氟沙星(LVFX)对分枝杆菌的体外抑菌活性,并用41例临床菌株与改良罗氏法进行了配对比较,确定各药物在药敏试验中的应用浓度：结果 5种药物的应用浓度分别确定为INH：0．1μg/ml、RFP;1μg/ml、EB：2μg/ml、AMK：2μg/ml、LVFX：2μg/ml;本法进行分枝杆菌的药敏试验仅需7—10d,较改良罗氏法的28d缩短了18—21d。2种方法的药敏试验结果无显著性差异。结论 本法经济实用并缩短了分枝杆菌药敏的报告时间。     

结核分枝杆菌快速微量直视培养药敏试验方法的研究

目的建立一种经济、适用、快速的微量结核分枝杆菌（MTB）直视培养药敏方法。方法研制电脑控制无级连续超倍放大、微量培养和图像采集组成的MTB快速培养药敏及鉴定系统;用该系统进行MTB标准菌株H37Rv及临床分离菌株药敏试验;以改良罗氏法（L—J法）为对照,确定药敏试验药物最适浓度。结果本法药敏试验的药物：硫酸链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇、硫酸阿米卡星、硫酸卷曲霉素、盐酸左氧氟沙星及对氨基水杨酸异烟肼应用浓度分别为：1、0．1、1、5、5、10、4、1μg／ml;检出时间H37Rv为3d;临床分离菌165株平均5．6d。每实验孔仅需培养基100μl。结论快速法显著缩短了MTB药敏试验时间,节省试剂,操作简便,适合基层单位应用。     

分枝杆菌快速变色液体培养基系统的临床应用评价

目的 评价一种快速检测分枝杆菌的培养、鉴定和药敏系统。方法 采用分枝杆菌快速变色液体培养基系统检测200份标本，并与改良L-J培养基法进行比较。结果快速变色液体培养基系统阳性率（37．5％）明显高于改良L-J培养基（17％）。变色液体培养基和改良L-J培养基涂阳平均检出时间分别为8天和19天．涂阴平均检出时间分别为13天和26天；污染率分别为3％和2．5％。与异烟肼、链霉素、利福平、乙胺丁醇一致率分别为87％、61％、93％和92％。且MTBC和MOTT的鉴定和MTBC的药敏只需要2—6天。结论 这种新型变色液体培养基系统具有快速、操作简便、实用等特点．培养分枝杆菌阳性率高，鉴定和药敏系统快速准确，且可进行多种抗结核药物药敏检测和药物最小抑菌浓度测定，值得临床推广应用。     

结核分枝杆菌mRNA在利福平快速药敏试验中的初步应用

目的　建立一种Mycobacteriumtuberculosis(结核分枝杆菌 ,MTB)mRNA快速敏感的检测方法并初步探讨其在利福平快速药敏试验中的应用。方法　用超声粉碎和Tripure试剂提取MTB总RNA ,针对α抗原 85B的特定编码序列建立MTBmRNA的RT PCR检测方法 ;观察MTB在含 1、2、4 μg/ml利福平的液体培养基中生长时 ,85BmRNA的动态改变 ,确定快速检测利福平耐药菌株的最佳药物浓度和时间点 ,比较RT PCR和快速培养法对 2 0株临床分离菌株利福平耐药性检测的差异性。结果　 85BmRNA的RT PCR最低检测下限为 10 0 0个细菌。 85BmRNA的动态结果表明 ,在 4 μg/ml利福平中培养 2 4h为最佳药物浓度和时间点。RT PCR和快速培养法对 2 0株临床菌株利福平药敏试验检测结果无显著差异 (χ2 =0 .5 ,P >0 .0 5 ) ,但前者能显著缩短药敏检测周期。结论　检测结核分枝杆菌mRNA的RT PCR方法可望应用于利福平快速药敏试验     

BacT/ALERT 3D在结核分枝杆菌快速培养和药敏试验中的应用

目的探讨BacT/ALERT 3D在结核分枝杆菌快速培养中的应用。方法应用BacT/ALERT 3D检测结核分枝杆菌,并与传统L-J法比较。结果 523份痰标本BacT/ALERT 3D法检出阳性217份(41.52%),阳性报告时间平均14.05 d;L-J法检出阳性178份(34.03%)。BacT/ALERT法培养结核分枝杆菌的阳性率明显高于L-J法(P<0.05);阳性报告时间提前14.66 d,差异有统计学意义(P<0.05)。BacT/ALERT 3D快速药敏法表明总耐药率为56.2%,药敏报告时间平均8.5 d,L-J法则为30 d,两种方法药敏符合率为96.38%(213/221);使用BacT/ALERT 3D快速法进行结核分枝杆菌的培养和药敏试验,报告时间比L-J法总计提前35 d以上。结论 BacT/ALERT 3D法是目前较理想的一种快速检测结核分枝杆菌的方法。     

分枝杆菌快速变色液体培养基系统的临床应用评价

目的评价一种快速检测分枝杆菌的培养、鉴定和药敏系统.方法采用分枝杆菌快速变色液体培养基系统检测200份标本,并与改良L-J培养基法进行比较.结果快速变色液体培养基系统阳性率(37.5%)明显高于改良L-J培养基(17%).变色液体培养基和改良L-J培养基涂阳平均检出时间分别为8天和19天,涂阴平均检出时间分别为13天和26天;污染率分别为3%和2.5%.与异烟肼、链霉素、利福平、乙胺丁醇一致率分别为87%、61%、93%和92%.且MTBC和MOTT的鉴定和MTBC的药敏只需要2～6天.结论这种新型变色液体培养基系统具有快速、操作简便、实用等特点,培养分枝杆菌阳性率高,鉴定和药敏系统快速准确,且可进行多种抗结核药物药敏检测和药物最小抑菌浓度测定,值得临床推广应用.     

BACTEC MGIT960在二线抗结核药物药敏试验应用中的效果评价

目的 评价BACTEC MGIT 960进行4种二线抗结核药物药敏试验的效果.方法 用MGIT 960对结核分枝杆菌临床分离菌株进行二线抗结核药物卷曲霉素、卡那霉素、氧氟沙星和乙硫异烟胺的药敏检测,并将结果与L-J比例法结果进行比较分析.结果 111 株结核分枝杆菌临床分离株用MGIT960法与L-J比例法卷曲霉索、卡...     

结核分枝杆菌链霉素耐药性的噬菌体检测技术研究

目的 建立结核分枝杆菌（结核菌）链霉素耐药性的噬菌体快速检测技术，并探讨其临床应用价值。方法 应用分枝杆菌噬菌体感染结核菌建立链霉素耐药性的噬菌体检测技术，并对最佳测定条件进行探讨；将所建立的方法用于38株世界卫生组织药敏质控株和372株临床分离株链霉素耐药性测定，并与绝对浓度法和Bactec 960药敏结果比较，对不符合菌株进行最低抑菌浓度（MIC）和rpsL耐药基因检测。结果 链霉素终浓度5μg／ml作用24h、噬菌体10^8噬菌体形成单位／ml感染60min、杀毒剂5％室温作用5min为选择的检测条件。噬菌体法检测38株药敏质控株结果完全符合。372株临床分离株链霉素耐药性检测结果表明，如以绝对浓度法药敏结果为判断标准，则本法敏感性为97.4％、特异性为91．0％、阳性预测值为81.7％、阴性预测值为98.9％、准确性为92.9％；如以Bactec 960药敏结果为判断标准，则本法敏感性为97.2％、特异性为97.1％、阳性预测值为94.6％、阴性预测值为98.5％、准确性为97．1％。有22株噬菌体法药敏结果与常规药敏试验结果不符，其中的11株噬菌体法检测结果与MIC和rpsL耐药基因检测结果相同。结论 噬菌体法检测链霉素耐药性快速、简便，具有很高的敏感性和特异性，可作为结核菌链霉素耐药性的快速检测方法。     

免疫色谱法抗-MPB64单克隆抗体检测结核分枝杆菌菌群方法学评价

目的 用免疫色谱法抗-MPB64单克隆抗体快速检测和诊断结核分枝杆菌结核菌群的方法学评价。方法 共收集20株临床标本分离菌株、11株参考菌株和1株结核分枝杆菌标准菌株，应用免疫色谱法检测在培养基上生长的细菌，并和传统鉴定方法、实时荧光探针定量PCR法（FQ-PCR）作比较研究。结果 用免疫色谱法检测1株标准菌株为阳性，检测11株参考菌株发现用该法能完全区分结核和非结核分枝杆菌。对20株临床分离的标本用免疫色谱检出11株结核菌菌群，检出率为55％；用传统鉴定方法检出10株，其中未能检出的一株为混合菌感染；用FQ-PCR法检出10株，其中未能检出的一株为牛结核菌。免疫色谱法能检测到的最低菌浓度为10^5CFU／ml。免疫色谱法、FQ-PCR法和传统鉴定方法的平均耗时分别为15min，1～2d和30d。结论 免疫色谱法是一种简便、快速、准确、敏感和特异性鉴别结核和非结核分枝杆菌的方法，适合在临床推广使用。     

噬菌体法直接检测痰中结核分枝杆菌敏感性的研究

目的探讨噬菌体生物扩增法结合痰涂片在快速测定结核药敏中的可行性和实用性。方法收集痰厚涂片抗酸染色3＋阳性标本与一定浓度的利福平作用后，加入结核分枝杆菌噬菌体，观察噬菌体斑数量，来测定对利福平的敏感性，同时以改良罗氏法作结核药敏对照。结果从收到标本到药敏报告需时仅3d，93份标本中85份噬菌体生物扩增药敏试验成功，污染2份，6份失败，有效率91．4％（85／93），与改良罗氏法药敏试验比较，敏感性96．9％（31／32），特异性92．5％（49／53），报告时间缩短了近20倍。结论应用噬菌体法直接测定痰中结核分枝杆菌利福平敏感试验，快速、敏感、特异性高，适宜基层正常开展。     

结核分枝杆菌快速药敏方法学研究进展

在结核病防治过程中 ,结核分枝杆菌耐药尤其是多重耐药结核分枝杆菌 (ＭＤＲ ＴＢ)问题已成为有效控制结核病的重要障碍[1] 。ＭＤＲ ＴＢ的产生与临床不规范治疗密切相关 ,而规范的治疗需要快速敏感的药敏试验为指导。建立快速敏感的结核分枝杆菌药敏试验方法已成为有效控制结核病的首要条件[2 ] 。然而目前分枝杆菌药敏试验仍多采用传统方法即绝对浓度法、比例法和抗性比例法 (ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｒａｔｉｏｍｅｔｈｏｄ) ,这些方法均具有生长依赖性 ,在得到分离菌株后需要 3～ 4周才能获得药敏试验结果[3 ] 。建立于 2 0世纪 80年代的…     

免疫色谱法抗-MPB64单克隆抗体检测结核分枝杆菌菌群方法学评价

目的：用免疫色谱法抗-MPB64单克隆抗体快速检测和诊断结核分枝杆菌结核菌群的方法学评价。方法：共收集20株临床标本分离菌株、11株参考菌株和1株结核分枝杆菌标准菌株，应用免疫色谱法检测在培养基上生长的细菌，并和传统鉴定方法、实时荧光探针定量PCR法(FQ—PCR)作比较研究。结果：用免疫色谱法检测1株标准菌株为阳性，检测11株参考菌株发现用该法能完全区分结核和非结核分枝杆菌。对20株临床分离的标本用免疫色谱检出11株结核菌菌群，检出率为55％；用传统鉴定方法检出10株，其中未能检出的一株为混合菌感染；用FQ-PCR法检出10株，其中未能检出的一株为牛结核菌。免疫色谱法能检测到的最低菌浓度为10^5CFU／ml。免疫色谱法、FQ—PCR法和传统鉴定方法的平均耗时分别为15分钟，1～2天和30天。结论：免疫色谱法是一种简便、快速、准确、敏感和特异性鉴别结核和非结核分枝杆菌的方法，适合在临床推广使用。     

变色液体培养基快速检测分枝杆菌

目的评价变色液体培养基快速检测分枝杆菌的应用价值.方法利用变色液体培养基接种痰标本培养,并与改良酸性罗-琼氏(Lowenstein-Jensen,L-J)培养基平行比较.结果 911例痰标本的涂阳检测率为29.1%,变色液体培养阳性率为43.4%,略高于改良罗-琼氏(L-J)培养阳性率40.1%,变色液体培养基和改良罗-琼培养涂阳平均检出时间分别为6和18 d,涂阴平均检出时间分别为15和28 d,污染率分别为2.7%和2.1%.结论变色液体培养基检测结核分枝杆菌,具有快速、简便、可靠和实用性好的特点.     

两种方法在结核分枝杆菌培养中的比对研究

目的比较MGIT960系统液体培养法与改良罗氏(L-J)培养法在结核分枝杆菌培养中的效果。方法选择2015年1月至2017年12月到该所就诊的活动性肺结核患者3 685例,对每份病例标本分别进行痰涂片抗酸染色(萋-尼法)镜检、改良罗氏(L-J)培养法和MGIT960系统液体培养法,并分别计算抗酸染色镜检与改良罗氏(L-J)培养法和MGIT960系统液体培养法的阳性符合率;统计改良罗氏(L-J)培养法和MGIT960系统液体培养法的阳性率、污染率及培养时间。结果痰涂片镜检与改良罗氏(L-J)培养法和MGIT960系统液体培养法的阳性符合率分别为94.21%(114/121)和82.64%(100/121)。改良罗氏(L-J)培养法和MGIT960系统液体培养法结果符合率为93.70%(3 197/3 412),所需的培养时间分别为28.0(25.0～31.0)d和16.5(14.0～19.0)d。结论 MGIT960系统液体培养法阳性率与传统的改良罗氏(L-J)培养法基本一致,报告时间平均缩短至16.5d,比改良罗氏(L-J)培养法提前10.0d以上,为临床早诊断、早治疗提供了可靠依据,而且为后续进行的药敏试验提供了菌株。     

分枝杆菌快速培养鉴定及耐药性检测的结果分析

目的评价变色液体培养基快速一步法检测试剂对分枝杆菌培养、鉴定和药敏测定的效果。方法采用快速变色液体培养基和传统酸性罗氏培养法对198例痰标本进行结核分枝杆菌检测。结果快速变色液体培养法和酸性罗氏培养法,整个试验完成平均检出时间分别为28、62 d。与传统酸性罗氏培养基相比,快速一步法可缩短30~60 d完成;两法阳性检出率(37.9%和37.4%)与初治耐药率结果(35.6%和36.9%)之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论变色液体培养基快速一步法是一种快速、简便、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,具有重要的应用价值。     

三磷酸腺苷发光法快速鉴定非结核分枝杆菌技术的研究

目的探讨运用三磷酸腺苷发光法区分结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的可行性。方法用不同PNB浓度的培养液分别对标准人型分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌进行检测,根据结果选择合适的PNB浓度界值,然后运用传统L-J法和三磷酸腺苷发光法对55例临床标本同时进行检测,并对结果比较。结果 （1）三磷酸腺苷发光法结果的准确率为98.2%,比L-J PNB法的96.4%略高。（2）三磷酸腺苷发光法的检测时间只需6.16±1.62天,比传统L-J方法的17.87±5.73天快了很多,两者比较有统计学差异（P〈0.001）。结论三磷酸腺苷发光法鉴定非结核分枝杆菌快速准确且操作简便,在实验室诊断应用上存在巨大的潜力。     

综合医院 BD BACTECTMMGITTM 960仪快速分枝杆菌培养与医院感染控制

目的：证明使用全自动快速分枝杆菌培养仪（BD960）能用于肺内、肺外临床标本（除血液、尿液）快速培养分枝杆菌,除传染科外其他科室执行危急值报告制度确保医疗安全。方法收集临床标本共596份,根据不同的标本,进行标本预处理后,分别接种于BBLTM Prepared Culture Media分枝杆菌培养管,放入全自动快速分枝杆菌培养仪（BD960）培养,并将标本同步进行抗酸染色及接种血平板。经培养,如仪器报警阳性,且培养物抗酸染色阳性,将培养物用荧光聚合酶链反应（PCR ）方法进行菌株鉴定,鉴定分为结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌。结果596份临床标本中,共培养出61株分枝杆菌,阳性率为10．2％（61/596）,其中结核分枝杆菌占82．0％（50/61）;非结核分枝杆菌占18．0％（11/61）。全自动快速分枝杆菌培养仪（BD960）阳性标本检出时间较快,阳性标本最早4 d ,平均检出时间为10 d。结论综合医院使用全自动快速分枝杆菌培养仪（BD960）能快速培养分枝杆菌,做到早诊断、早隔离、早治疗,控制结核病传染,控制综合医院医院感染,确保医疗安全。     

变色液体培养基系统快速鉴定结核分枝杆菌和耐药性测定

由于固体培养基鉴定结核分枝杆菌(结核菌)及药敏试验均需28 d,其制作过程需加热,且培养基中蛋白质对药物有吸附作用,故仅用于常规抗结核药敏试验,不适合用于分枝杆菌最低抑菌浓度(MIC)测定.多耐药结核菌和非结核菌对常用抗结核药物耐药,因此急需一种快速测定分枝杆菌药敏的方法,筛选新的药物.尽管Bactec系统可用于分枝杆菌药敏试验和MIC测定[1],但试剂和仪器昂贵.因此,我们采用快速变色液体培养基系统鉴定结核与非结核分枝杆菌,并测定了结核菌常规药物的敏感性和非结核分枝杆菌对9种药物的MIC,结果如下. 一、材料和方法 1.标本来源:128株结核菌,34株非结核分枝杆菌(其中15株龟分枝杆菌脓肿亚种、4株龟分枝杆菌龟亚种、14株偶发分枝杆菌和1株胞内分枝杆菌).上述菌株为深圳地区和广州地区分离株. 2.结核菌快速鉴定及药敏试剂、分枝杆菌MIC测定试剂和菌株鉴定试剂:对硝基苯甲酸(PNB)培养基、5%氯化钠耐受试验、芳香硫酸酯酶(3、14     

分枝杆菌及其L型液体鉴定培养基的研制与应用

目的研制用于鉴定培养结核与非结核分枝杆菌(包括细菌型和L型)的液体鉴定培养基.方法在92-3TBL液体培养基中分别加入不同浓度对硝基苯甲酸(PNB)和α-羧酸肼噻吩(T2H),接种分枝杆菌及其L型标准株进行试验,根据生长情况选择适宜浓度PNB和T2H制成液体鉴定培养基,并对48份分离自结核患者标本的分枝杆菌和L型进行了鉴定培养.结果加入0.25 mg/mlPNB的液体培养基可抑制人型和牛型结核杆菌及其L型的生长,加入2 5μg/ml T2H的液体培养基可抑制牛型结核杆菌及其L型的生长,而非结核分枝杆菌均不被抑制.即由92-3TBL培养基、0.25 mg/ml PNB培养基和2 5μg/ml T2H培养基各1管组成液体鉴定培养基.48份结核患者标本经鉴定培养,人型、牛型及非结核分枝杆菌及其L型分别占83.33%、4 17%和12.50%.结论该液体鉴定培养基既保持了液体培养检出率高、所需时间少的优势,又可使分离与鉴定一次完成,更为简便和节省时间,有利于临床早期诊治.