四逆汤不同配比甘草组方对胃癌细胞SGC-7901体外抑制作用的实验研究

目的:比较四逆汤不同配比甘草组方对胃癌细胞SGC-7901的体外抑制作用。方法:将不同配比甘草组方的四逆汤分别作用于对数生长期的胃癌细胞,体外培养24h,用MTT法检测抑制率,比较各实验组方对胃癌细胞的抑制率。结果:经不同配比甘草组方的四逆汤作用24h后,胃癌细胞SGC-7901生长受到不同程度的抑制,其中,以4倍炙甘草配比组方的四逆汤对胃癌细胞SGC-7901具有最强的抑制作用,无炙甘草的四逆汤,即附子干姜汤对胃癌细胞SGC-7901的抑制作用较弱。结论:一定浓度的四逆汤提取物对胃癌细胞SGC-7901有明显的抑制作用;炙甘草的配伍及用量变化对整方效果的影响体现了温阳法中土与火、甘与温的重要关系。     

马齿苋提取物对肝癌细胞HepG-2抑制作用的实验研究

目的观察马齿苋提取物对肝癌HepG-2的抑制作用。方法采用MTT比色法观察马齿苋提取物抑制肝癌HepG-2细胞增殖;采用流式细胞仪检测马齿苋对HepG-2细胞周期分布的影响。结果马齿苋提取物可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,其作用具有时间和浓度依赖性;可改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于S期,与对照组比较,细胞凋亡率差异有显著性(P<0.01)。结论马齿苋提取物可诱导肝癌HepG-2细胞凋亡,改变细胞周期分布,从而抑制细胞增殖。     

PKC的活化和Smac释放的改变在四逆汤预处理抑制心肌细胞凋亡中的作用

目的:观察四逆汤预处理24h后对心肌缺血再灌注(MI/R)后心肌细胞凋亡的影响,并以PKC和Smac为着眼点,探讨其可能的机制。方法:SD大鼠分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组、四逆汤预处理组,缺血再灌注组采用经典大鼠冠脉结扎,缺血1 h,再灌1 h;四逆汤预处理组给予四逆汤灌胃(5 g/kg.d)连续3d,末次灌药24h后心肌缺血1h,再灌1h。流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,免疫组织化学方法检测心肌PKC的表达,进行Smac的Western blotting分析并检测Caspase-3的活性。结果:四逆汤预处理24 h后可以减少MI/R后心肌细胞凋亡率,PKC发生转位且蛋白表达升高,Smac自线粒体的释放减少,Caspase-3的活性下降。结论:四逆汤预处理24 h后可以减少MI/R造成的细胞凋亡,机制可能与其活化PKC,保护线粒体,抑制Smac的释放,阻碍细胞凋亡的信号转导有关。     

甘草甜素对肝癌细胞株BEL-7321凋亡影响的体外研究

目的:探讨甘草甜素(GL)抗肿瘤的机制,为GL在抗肿瘤方面的应用提供理论依据。方法:采用流程式细胞仪检测肝癌细胞株BEL-7321凋亡。结果:50,100,200μmol/LGL能够诱导肝癌细胞BEL-7321凋亡,凋亡率与剂量呈正相关,BEL-7321的凋亡随药物浓度及作用时间变化,细胞周期分布呈现G1期细胞比例逐渐增高,并出现典型的凋亡峰。结论:GL能诱导肝癌细胞凋亡,并明显抑制癌细胞增殖,具有抗肿瘤作用。     

鲨鱼软骨制剂诱导人肝癌细胞凋亡及p21WAF1和PCNA表达调控的研究

目的：探讨鲨鱼软骨制剂（ＳＣＰ）能否诱导ＳＭＭＣ７７２１细胞凋亡及其机制。方法：以不同浓度ＳＣＰ加入体外培养的ＳＭＭＣ７７２１细胞中,用ＭＴＴ比色法,荧光显微镜,琼脂糖凝胶电泳和免疫细胞化学方法,观察ＳＭＭＣ７７２１细胞形态学,生化和基因表达的变化。结果：ＳＣＰ明显抑制ＳＭＭＣ７７２１细胞生长,ＩＣ５０值为１ｍｇ／ｍＬ,荧光显微镜下可见典型的凋亡细胞的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带（ＤＮＡ     

吴茱萸碱对小鼠肝癌细胞生长的抑制和诱导凋亡作用

目的探讨吴茱萸碱对小鼠肝癌细胞H22的生长抑制、诱导凋亡和对细胞周期的影响.方法体外试验MTT法测存活率,甲基绿-派诺宁联合染色观察细胞凋亡形态,流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察DNA损伤及细胞周期.结果吴茱萸碱0.5、1、2、4mg/L浓度组对小鼠肝癌细胞H22作用72h细胞存活率分别为60.3±6.6%、54.0±4.3%、40.7±4.8%、26.9±0.9%,作用24h、48h和72h的IC50依次为4.2、3.3和1.4mg/L.甲基绿-派诺宁染色后0.5、1mg/L吴茱萸碱组癌细胞均表现出凋亡特征;2mg/L吴茱萸碱组部分癌细胞开始出现坏死特征;4mg/L有较多癌细胞坏死.48h流式细胞仪检测表明1、2mg/L吴茱萸碱组出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期阻滞于G2期,4mg/L吴茱萸碱组亚二倍体凋亡峰不典型,出现坏死单峰.凋亡率对照组为1.2、1、2和4mg/L吴茱萸碱分别为6.4、9.1和11.2%.48h琼脂糖凝胶电泳表明,4mg/L吴茱萸碱组细胞DNA裂成大片段,DNA损伤呈凋亡特征.结论吴茱萸碱能诱导小鼠肝癌细胞H22的凋亡.     

加味茵陈四逆汤对实验性肝纤维化小鼠MMP1和TIMPs表达的影响

目的:观察预防性使用加味茵陈四逆汤对肝纤维化小鼠肝组织中基质金属蛋白酶-1(MMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP1)和基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP2)基因表达的影响。方法:将48只雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组。30%CCl4(1.5 mg/kg,溶解于橄榄油)腹腔注射建立肝纤维化模型,同时给予药物灌胃处理。用药14 d后,各组行HE染色,观察肝脏病理组织学改变。RT-q PCR法检测MMP1、TIMP1和TIMP2 mRNA表达。结果:(1)病理结果显示模型组肝纤维化明显,中药高、中、低剂量组较模型组纤维化减轻;(2)MMP1 mRNA模型组表达量与正常组比较明显减少(P0.05),与阳性药物组、中药中剂量和低剂量组相较表达量同样明显减少(P0.05);(3)TIMP1 mRNA、TIMP2 mRNA模型组表达量比正常组明显增多(P0.05),与阳性药物组和中药中、低剂量组相较均表达量减少(P0.05)。结论:加味茵陈四逆汤可上调肝纤维化小鼠MMP1表达,抑制TIMP1、TIMP2表达,发挥对肝纤维化的抑制作用。     

加味茵陈四逆汤含药血清影响肝星状细胞胶原蛋白表达的机制研究

目的:探讨加味茵陈四逆汤对大鼠肝星状细胞Collagen1及MMP-1/TIMP-1的影响。方法:以HSC-T6细胞株为主要研究对象,将其依据实验目的分为6组,分别为空白组,模型组,阳性药物组,中药高、中、低剂量组。除空白组无需特殊处理外,其余5组给予含药血清培养同时给予细胞因子TGF-β1促进细胞增殖,培养48h后收集细胞,提取蛋白,并采用Western blot方法检测各观察组细胞Collagen1及MMP-1/TIMP-1的表达,并比较其差异。结果:与空白组比较,模型组MMP-1/TIMP-1、Collagen1蛋白表达均升高(P0.05);与模型组比较,加味茵陈四逆汤中、低剂量组MMP-1蛋白表达升高(P0.05),而Collagen1在中药中、低剂量组表达明显降低(P0.05),TIMP-1在中药低剂量组明显降低(P0.05)。结论:加味茵陈四逆汤含药血清可能通过提高MMP-1的表达以及降低TIMP-1从而降低胶原蛋白表达,最终延缓肝纤维化的发生。     

芦荟多糖干预的PBMC对肝癌细胞生长的影响

目的:研究芦荟多糖(AP)干预的外周血单个核细胞(PBMC)对体外肝癌细胞(HepG2)生长的影响,从免疫学角度探讨AP的抗肿瘤机理。方法:Alamar Blue法检测AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2对体外培养的PBMC生长的影响;以各组干预后的PBMC为效应细胞,HepG2为靶细胞,MTT法观察各组效应细胞对靶细胞杀伤活性的影响;流式细胞术PI单染法检测各组效应细胞对靶细胞细胞周期及凋亡率的影响。结果:AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2可显著促进PBMC的增殖;各组效应细胞可显著抑制靶细胞的生长,降低S期比例,提高G1比例和凋亡率。其中AP联合Anti-CD3mAb与rhIL-2干预的PBMC对靶细胞生长的抑制率可达46.30%,靶细胞S期比例,G1期比例和凋亡率明分别为24.37%,75.63%和30.37%。结论:AP及其联合Anti-CD3mAb与rhIL-2可提高PBMC抑制肝癌细胞生长的活性。     

艾灸对HCC癌前病变大鼠细胞周期调控基因cyclinD1、cdk4影响的实验研究

目的:本文旨在研究艾灸对原发性肝细胞肝癌(HCC)癌前病变大鼠相关细胞周期调控基因cyclinD1、cdk4的影响。方法:将74只SD大鼠,分为3组,分别为空白组(20只)、模型组(27只)、艾灸组(27只),模型组用二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠逐步建立起HCC的模型,艾灸组从造模初期直至造模成功,全程给予足三里穴麦粒灸治疗,采用免疫组化检测方法观察对相关细胞周期调控基因cyclinD1、cdk4的影响。结果:艾灸对HCC癌前病变大鼠能较为明显抑制相关细胞周期调控基因cyclinD1c、dk4的过度表达。结论:艾灸可能对减缓HCC癌前病变的形成有一定作用,这种作用与抑制细胞周期调控基因cyclinD1c、dk4过度表达有关。     

蟛蜞菊提取物对鼻咽癌CNE-1细胞增殖和细胞周期的影响

目的 通过体外实验研究蟛蜞菊提取物(WE)对人鼻咽癌细胞株CNE-1细胞的增殖抑制作用,并进一步研究其作用机制.方法 蟛蜞菊70％乙醇提取物,通过硅胶柱梯度洗脱,100％甲醇洗脱部位即为WE.采用噻唑蓝(MTT)比色法测定WE对CNE-1细胞生长增殖的影响;采用Hoechst33528染色观察WE对细胞凋亡的影响;采用流式细胞仪技术检测WE对CNE-1细胞周期及细胞凋亡的影响;采用p38特异性抑制剂SB203580干预的方法检测p38活性与WE处理后CNE-1细胞周期变化的关系.结果 随着WE质量浓度的增加和作用时间的延长,CNE-1细胞存活率显著降低(P＜0.05).随着WE质量浓度的增加,CNE-1细胞出现明显的G2/M期阻滞.形态学观察可见WE处理CNE-1细胞48h后细胞数量减少,部分细胞细胞核发生皱缩.p38特异性抑制剂SB203580干预后,CNE-1细胞周期分布恢复正常.结论 WE通过p38蛋白使CNE-1细胞发生G2/M期阻滞,从而抑制CNE-1细胞的增殖.     

固本化痰通脉方含药血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖及细胞周期素D1的影响

目的：观察固本化痰通脉方对大鼠血管平滑肌细胞生长增殖、细胞周期及细胞周期素D1表达的影响，以探讨其作用机制。方法：血小板源生长因子BB（PDGF-BB）刺激体外培养的大鼠血管平滑肌细胞使其快速增殖生长，加入不同浓度的固本化痰通脉方含药血清作用一定时间后，通过MTT法测定其对血管平滑肌细胞生长的抑制率，流式细胞技术测定细胞周期及细胞周期素D1的表达。结果：固本化痰通脉方能明显抑制PDGF-BB刺激的血管平滑肌细胞增殖，还以浓度依赖方式减少S期细胞、阻滞细胞于G0／G1期，并下调细胞周期素D1的表达。结论：固本化痰通脉方能抑制血管平滑肌细胞的增殖生长，阻滞细胞周期的进行，因而可能具有抗动脉粥样硬化的作用，其作用机理可能与调控血管平滑肌细胞细胞周期素D1的活性有关。     

银屑灵对PCNA表达和角质形成细胞凋亡的影响

目的观察银屑灵对小鼠阴道上皮核细胞增殖抗原(PCNA)表达和角质形成细胞COLO-16凋亡的影响。方法70只雌性昆明小鼠,随机分为7组,银屑灵大中小剂量组、甲氨喋呤(MTX)组、迪银片组、生理盐水组和空白对照组,除空白对照组外,其余各组分别同时雌激素化3d后给药,连续给予受试药6d,每天2次,末次给药后6h后处死小鼠,光镜下观察小鼠阴道上皮PCNA表达的情况。另将COLO-16传代,二氧化碳培养箱中培养,将已长满瓶壁的COLO-16分为4组:对照组及不同浓度的银屑灵组,培养24h后用流式细胞仪检测角质形成细胞的凋亡情况。结果银屑灵大中小剂量组、MTX组和迪银片组对小鼠阴道上皮PCNA表达均有抑制作用,各组均优于生理盐水组及空白对照组,其中尤以银屑灵大剂量组作用更显著。银屑灵的药液浓度越高,对COLO-16凋亡的影响就越明显。结论银屑灵对小鼠阴道上皮PCNA表达的抑制作用和对角质形成细胞COLO-16凋亡的影响可能是其治疗银屑病的作用机制之一。     

钩吻生物碱单体对肝癌细胞体外抑制作用机制的初步研究

目的:探讨植物钩吻中生物碱单体对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,并探讨其相关机制。方法:MTT法观察3种生物碱单体对HepG2细胞的体外杀伤作用,选取活性最好的单体进一步行时效、量效关系的测定和细胞形态学观察;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率的变化;Capspase-3、Capspase-8、Capspase-9活性检测用分光光度法进行。结果:3种单体都显示出对HepG2细胞的增殖抑制活性,其中钩吻素己效果最好,呈时间及剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖;经钩吻素己处理48 h后的HepG2细胞变小变圆,正常贴壁细胞随着药物浓度的增加而减少;各浓度组钩吻素己可阻滞细胞于S期,并诱导细胞凋亡,且Capspase-3、Capspase-8、Capspase-9活性随着药物浓度的增高而增高。结论:3种钩吻生物碱单体中钩吻素己能显著抑制HepG2细胞体外增殖且细胞毒性较小,并通过影响细胞周期分布和激活Capspase-8、Capspase-9进而活化Capspase-3发挥抗肿瘤作用。     

八宝丹阻滞人结肠癌细胞周期抑制结肠癌细胞生长

目的 探究八宝丹（BBD）对结肠癌细胞HCT116生长及周期的影响。方法 体外培养结肠癌细胞HCT116，将细胞分为0 mg/mL组、0.5 mg/mL组、1 mg/mL组、2 mg/mL组，分别以不同浓度（0、0.5、1、2 mg/mL）BBD干预24 h。显微镜下观察细胞密度及形态；台盼蓝染色法检测细胞数量；MTT法检测细胞活力；集落实验检测细胞增殖能力；周期实验检测BBD对HCT116细胞周期的影响；Q-PCR法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)的mRNA水平；Western blot法检测Cyclin D1、CDK4的蛋白表达。结果 BBD抑制结肠癌细胞生长；BBD抑制结肠癌细胞的活力；BBD抑制结肠癌细胞增殖；BBD阻遏细胞周期于G0/G1期；BBD下调HCT116细胞当中CDK4和Cyclin D1的mRNA水平；BBD抑制CDK4和Cyclin D1的蛋白表达水平。结论 BBD下调HCT116细胞中Cyclin D1、CDK4的表达水平，阻滞细胞周期于G0/G1期，抑制结肠癌细胞生长。     

5F对肝癌细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响

目的调查半边旗(PsL)提取物Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人类肝癌细胞Hep3B的抗癌效果。方法在不同的时间段,采用5F(0～80μg/ml)处理Hep3B细胞。通过MTT法检测细胞毒性,通过Annexin V-EGFP染色及caspase-3活性检测细胞凋亡,通过碘化丙锭染色检测细胞周期。结果 5F以剂量、时间依赖方式抑制Hep3B细胞增殖,Hep3B细胞Annexin V-EGFP阳性染色及caspase-3活化确定了5F诱导的细胞凋亡,5F阻滞细胞于G2期。结论 5F抑制Hep3B细胞增殖与细胞G2期阻滞及细胞凋亡有关。     

复方犀黄丸含药血清对人肝癌细胞生长及其周期影响的实验研究

目的：探讨中药复方犀黄丸含药血清对人肝癌细胞系（bel-7402)生长及其细胞周期分布的影响。方法：应用MTT比色法检测肿瘤细胞活性。流式细胞仪分析细胞周期时相分布。结果：中药复方犀黄丸含药血清对人肝癌细胞系（bel-7402)有抑制作用。其抑制率与含药血清浓度呈直线相关;FAM结果显示含药血清处理24h,S期细胞比例增加,G2/M期细胞减少;处理48h后,G0/1期细胞增多,S期细胞减少。结论：中药复方犀黄丸含药血清可抑制人肝癌细胞系（bel-7402)细胞生长,并可干扰其细胞周期。     

天花粉对脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡的影响

目的研究天花粉对脑缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡的影响及其分子机制。方法雄性SD大鼠54只随机分为假手术组、模型组和天花粉组,采用Zea Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血3 h后再灌注。术后分12 h、24 h、48 h 3个时间点以TUNEL法观察凋亡的情况,免疫组化观察缺血周围区Cyclin D1表达强度。结果与模型组比较,天花粉组凋亡阳性细胞数和Cyclin D1免疫阳性细胞数显著均显著减少(P均<0.01)。结论天花粉可减轻大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,减少Cyclin D1的表达。     

双苓扶正抗癌胶囊对小鼠肝癌的影响

目的：研究双苓扶正抗癌胶囊对小鼠肝癌的抑制作用及作用机制。方法：建立小鼠肝癌（Heps）实体瘤及腹水癌模型，观察抑瘤率和生长延长率，并用流式细胞术（FCM）检测小鼠肝癌实体瘤的细胞周期及癌细胞凋亡率。结果：双苓扶正抗癌胶囊在15g和30g/kg剂量下，对小鼠肝癌实体瘤有显著抑制作用，也能延长荷腹水型肝癌小鼠的生存期；还可引起小鼠肝癌瘤细胞S期及G2-M期细胞减少，G0-G1期细胞及凋亡细胞增加。结论：双苓扶正抗癌胶囊对小鼠移植性肝癌具有抑制作用，其作用机制可能与抑制细胞周期中S期DNA合成、干扰细胞的分裂增殖速度及诱导癌细胞凋亡有关。